CN106138145A - 咖喱草提取物及其制备与在制备药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种咖喱草提取物及其制备与在制备药物中的应用，提取物中绿原酸含量1％～5％，木犀草苷含量0.8％～3％，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量2.5％～6％。本发明人将所述咖喱草提取物进行了家兔皮肤创伤愈合、结果显示家兔皮肤创面组织愈合良好，无明显疤痕。又进行了鸡胚诱导血管增生试验，观察鸡胚微血管形成情况，结果表明咖喱草提取物实验组毛细血管形成数量与血管状态优于空白组，说明咖喱草提取物可用于制备促进损伤细胞恢复和诱导血管增生药物，有较大的临床应用价值。本发明提供了咖喱草提取物制备方法，操作简单，宜于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取物。具体涉及植物提取物及其制备与应用。尤其涉及咖喱草提取物及其制备在制备药物中的应用。
背景技术
咖喱草又名意大利蜡菊，原产地在地中海东部地区，归属于菊科的一种，花朵呈黄色小簇状。另有一个浪漫的名字叫做意大利永久花，花朵可以萃取出的原精可以制成精油，本身还带有一定的药用价值。目前对其的研究甚少，至今其被发现的功能有治疗昏睡、抑郁症及抗细菌、真菌等功效。尚无报道其它功效。本发明人经研究后，发现咖喱草提取物具有使受损细胞恢复以及诱导毛细血管增生的新功能，利用咖喱草的这些特性，可以促进损伤细胞恢复和诱导血管增生。因此，宜进一步开发，研究创伤修复的药物，为该治疗领域提供一个新的发展方向。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于进一步研究咖喱草提取物，设计咖喱草提取物制备，及其促进损伤细胞恢复和诱导血管增生的药物，
本发明提供了一种咖喱草提取物，提取物中绿原酸含量1％～5％，木犀草苷含量0.8％～3％，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量2.5％～6％。
本发明的另一目的是提供了所述咖喱草提取物的提取方法，该方法包括下列步骤：
(1)咖喱草，置于2～3倍重量的有机溶剂中，，25℃～35℃浸提18～24h浸提，优选24h，得浸提液，用纯化水洗涤，每次为溶剂重量的1/3，收集浸提液；
(2)浸提液经活性炭脱色，脱色温度在25℃～35℃，优选30℃得纯化的淡黄色浸提液；
(3)浸提液经旋转蒸发仪，500～1000转/min，在0.1mpa压力下，除去溶剂得浸膏，含水3.5％～5％；
(4)浸膏经冷冻干燥,2-3h得淡黄色固体粉末。
按照苏州瑞美科生物技术有限公司相关企业标准规定：提取物中绿原酸含量1％～5％，木犀草苷含量0.8％～3％，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量2.5％～6％。
本发明方法所述步骤(1)有机溶剂选自乙醇、石油醚、乙酸乙酯，优选乙酸乙酯。
本发明人将所述咖喱草提取物进行了家兔皮肤创伤愈合、结果显示家兔皮肤创面组织愈合良好，无明显疤痕。又进行了鸡胚诱导血管增生试验，观察鸡胚微血管形成情况，结果表明咖喱草提取物实验组毛细血管形成数量与血管状态优于空白组。说明咖喱草提取物可用于制备促进损伤细胞恢复和诱导血管增生药物。
本发明的又一目的是提供了咖喱草提取物在制备促进损伤细胞恢复和诱导血管增生药物中的应用。
所述药物为咖喱草提取物与药用辅料组成的药物组合物。
本发明所述药物组合物中咖喱草提取物的含量为0.5％-10％。
所述药用辅料为抛射剂、乳化剂、凝胶剂、油剂中的一种或几种。
所述抛射剂选自氮气、二氧化碳或氟利昂，优选氮气；乳化剂选自乙二醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、油酸或蓖麻油，优选蓖麻油；凝胶剂选自卡波姆、芦荟胶或羧甲基纤维素钠，优选卡波姆；油剂选自甘油、丙二醇或聚乙二醇，优选甘油。
所述药物组合物为水剂、凝胶剂或乳胶剂。
所述水剂包括：口腔溃疡喷雾剂、伤口愈合喷雾剂或皮肤瘙痒喷雾剂；凝胶剂包括：烧烫伤凝胶剂、妇科炎症凝胶剂；乳胶剂包括：跌打扭伤乳胶剂、冻疮修复乳胶剂。
所述咖喱草提取物具有消炎、促进伤口愈合、诱导毛细血管增生。
所述咖喱草提取物能够诱导毛细血管的增生，在鸡胚实验(诱导毛细血管增生的实验中)本发明人明显观察到用药组的毛细血管生长优于对照组。同时其促进伤口愈合和炎症控制方面在实验数据中也优于目前重组人表皮生长因子衍生物，有较大的临床应用价值。本发明提供了咖喱草提取物制备方法，操作简单，宜于工业化生产。
附图说明
图1实施例7诱导血管增生试验，空白组毛细血管形成数量与血管状态
图2实施例7诱导血管增生试验，空白组毛细血管形成数量与血 管状态
具体实施方式
以下实施例使用的咖喱草以及其它试剂通过市售得到。
实施例1咖喱草提取物的制备：
咖喱草200g，置于450ml的乙酸乙酯中，30℃浸提24h，得450ml浸提液，用纯化水洗涤，反复5次，每次40ml。
(1)浸提液经45g活性炭脱色，温度30℃得淡黄色浸提液，通过旋转蒸发仪，在500转/min，0.1mpa压力下除去溶剂得浸膏，含水3.0％。
(2)浸膏经冷冻干燥，在-44℃条件下干燥3h，得淡黄色固体粉末15g。
制得产品按照苏州瑞美科生物技术有限公司企业标准(标准备案号：Q/320581GHL 01-201411)检测：提取物中绿原酸含量0.216g(1.4％)，木犀草苷含量0.135g(0.9％)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量0.425g(2.8％)。
检测方法：HPLC标准对照法。
仪器设备：高效液相色谱仪
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2000。
紫外吸收检测器
条件：流动相：甲醇:水:冰醋酸＝15:85:1，检测波长：324nm， 柱温：室温。
实施例2咖喱草提取物的制备
(1)咖喱草200g，置于475ml的乙酸乙酯中，30℃浸提24h，得475ml浸提液，用纯化水洗涤，反复5次，每次45ml。
(2)浸提液经48g活性炭脱色，温度30℃得淡黄色浸提液，通过旋转蒸发仪，在500转/min，0.1mpa压力下除去溶剂得浸膏，含水3.5％。
(3)浸膏经冷冻干燥，在-44℃条件下干燥3h，得淡黄色固体粉末16g。
制得产品按照苏州瑞美科生物技术有限公司企业标准(标准备案号：Q/320581GHL 01-201411)检测：提取物中绿原酸含量0.231g(1.4％)，木犀草苷含量0.145g(0.91％)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量0.396g(2.3％)。
实施例3咖喱草提取物的制备
(1)咖喱草200g，置于450ml的乙酸乙酯中，30℃浸提12h，得450ml浸提液，用纯化水洗涤，反复5次，每次45ml。
(2)浸提液经45g活性炭脱色，温度30℃得淡黄色浸提液，通过旋转蒸发仪，在500转/min，0.1mpa压力下除去溶剂得浸膏，含水3.2％。
(3)浸膏经冷冻干燥，在-44℃条件下干燥3h，得淡黄色固体 粉末12g。
制得产品按照苏州瑞美科生物技术有限公司企业标准(标准备案号：Q/320581GHL 01-201411)检测：提取物中绿原酸含量0.178g(1.4％)，木犀草苷含量0.115g(0.96％)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量0.346g(2.9％)。
实施例4
咖喱草乙醇提取物：制备方法同实施例1，溶剂为无水乙醇，得到咖喱草提取物18g。
制得提取物中绿原酸含量0.38g(2.1％)，木犀草苷含量具体含量0.36g(2.0％)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸具体含量0.43g(2.6％)。
实施例5
咖喱草石油醚提取物：制备方法同实施例1，溶剂为石油醚，得到咖喱草提取物16g，制得提取物中绿原酸具体含量0.108g(0.68％)，木犀草苷含量具体含量0.45g(2.8％)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸具体含量0.18g(1.1％)。
实施例6
咖喱草提取物(实施例1制得)家兔皮肤创伤愈合试验
材料
新西兰白兔,体重2.2～2.5kg,♂♀各半,由上海斯莱克实验 动物有限责任公司提供。许可证号：沪ICP备14053905号。致病性金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌由武汉大学中南医院临床分离并保种。咖喱草提取物：由苏州瑞生物技术优选公司提供。对照物：重组人表皮生长因子衍生物，由深圳华生元基因有限公司提供，批准文号国药准字S20010038。
家兔皮肤创伤模型：取健康家兔,脱毛,以硫喷妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉,以碘酒消毒皮肤后用面积3cm2钢质打孔器在家兔背部脊柱两侧各2cm处,自上而下切割6个圆形创面,孔间距离2.5cm,深至皮下,止血后备用。
实验分组：将6只家兔分成2大组，分别是咖喱草乙醇提取物组(简称：乙醇组)、咖喱草石油醚提取物组(简称：石油醚组)、咖喱草乙酸乙酯提取物组(简称：乙酸乙酯组)和重组人表皮因子衍生物组(简称：基因组)每个大组按剂量再分3组，分别为1％、2％与5％浓度，每组1只家兔。
给药方式：取面积为4cm2医用灭菌纱布浸润上述浓度的咖喱草提取液与重组人表皮生长因子衍生物，覆盖于圆形创面，每8小时换药一次。
2.5结果评定
创面愈合的测定：采用透明膜描记法计算创面愈合百分率[3]。
创面愈合百分率＝(同组d0创面面积-同组dn时创面面积)/(同组d0创面面积)×100％(n为用药后测量时间)
菌感染组于d3,d5,d7，d14观察创面愈合情况、与感染情况。
实验结果：咖喱草提取物组整体修复速度优于重组人表皮因子衍生物组(基因组)，并且最后的修复状况也优于重组人表皮因子衍生物组(基因组)，炎症控制良好，无明显疤痕。
上表中小组1、2、5是表示料液中含咖喱草提取物与重组人表皮因子衍生物的含量分别是1％、2％、3％。
实施例7咖喱草提取物(实施例1制得)诱导血管增生试验
材料：鸡胚购自苏州市孵化场
实验方法：将孵育8d的生长状态良好的鸡胚随机分成空白组、实验组并进行微血管形成实验。实验时，先用碘酒棉球擦拭鸡胚的气室端蛋壳，并用无菌镊子扎一小孔和撕掉内壳膜，暴露CAM(鸡胚绒毛尿囊膜)。空白组CAM膜给予纯化水，实验组CAM膜给予咖喱草乙 酸乙酯提取物，继续孵育3d后，剪取经丙酮固定的CAM。观察CAM膜上血管形成情况，并记录。结果见图1、图2。从图中情况对比，说明咖喱草提取物(实施例1制得)毛细血管形成数量与血管状态明显优于空白组，咖喱草乙酸乙酯提取物具有诱导毛细血管增生的效果。
实施例8咖喱草提取物口腔溃疡喷雾剂
步骤：将2g咖喱草提取物(实施例1制得)先溶于10ml纯化水，再加入5ml甘油助溶，再加入0.06g薄荷脑、0.5g三氯生，最后定容至100ml，然后上喷雾剂灌装机，单瓶种注入20％的氮气。
实施例9咖喱草提取物咽喉炎喷雾剂
步骤：将4g咖喱草提取物(实施例1制得)先溶于10ml纯化水，再加入5ml甘油助溶，再加入0.08g薄荷脑、0.5g三氯生，最后定容至100ml，然后上喷雾剂灌装机，单瓶种注入20％的氮气。
实施例10咖喱草提取物伤口愈合喷雾剂
步骤：将3g咖喱草提取物(实施例1制得)先溶于10ml纯化水，再加入5ml甘油助溶与1Gl-精氨酸，再加入0.3g聚六亚甲基单胍，最后定容至100ml，然后上喷雾剂灌装机，单瓶种注入20％的氮气。
实施例11咖喱草提取物瘙痒喷雾剂
步骤：将3g咖喱草提取物(实施例1制得)先溶于10ml纯化水，再加入5ml甘油助溶，加入0.05g薄荷脑，再加入0.5g聚六亚甲基单胍，最后定容至100ml，然后上喷雾剂灌装机，单瓶种注入20％的氮气。
实施例12跌打扭伤乳胶剂
步骤：水相：将0.3g卡波姆至于30ml水中搅拌溶胀
5h，再想其中加入3％咖喱草提取物(实施例1制得)、3g甘油，加水至92ml。
油相：将2g红花油、5g甘油、1g蓖麻油混合适量的
三乙醇胺。
将油相与水相混合搅拌均匀，最后乳胶成乳白色，PH
值7.0-8.0,粘度不小于5000mpa.s。
实施例13烧烫伤凝胶
步骤：将0.25g卡波姆至于20ml水中搅拌溶胀5h，再向其中加入2g咖喱草提取物(实施例1制得)、1.5g精氨酸与5g甘油，然后加入0.5g三氯生，加水至100ml，最后用三乙醇胺进行中和，至凝胶PH为7.0-8.0，粘度不小于5000mpa.s。
实施例14咖喱草提取物妇科炎症凝胶剂
将0.4g卡波姆至于40ml水中搅拌溶胀5h，再向其中加入3g咖 喱草提取物(实施例1制得)、0.05g薄荷脑与5g甘油，然后加入0.6％的新洁尔灭(3％新洁尔灭2ml)，加水至100ml，最后用三乙醇胺进行中和，至凝胶PH为7.0-8.0，粘度不小于8000mpa.s。
实施例15咖喱草提取物冻疮修复乳胶剂
步骤：水相：将0.3g卡波姆至于30ml水中搅拌溶胀
5h，再想其中加入3％咖喱草提取物(实施例1制得)、0.03g薄荷脑、3g甘油及0.5g三氯生，加水至92ml。
油相：5g甘油、1g蓖麻油混合适量的三乙醇胺。
将油相与水相混合搅拌均匀，最后乳胶成乳白色，PH值7.0-8.0,粘度不小于5000mpa.s。
实施例16咖喱草提取物的选择溶剂实验
通过对家兔皮肤创伤愈合进行咖喱草提取物的溶剂优选实验
2.1材料
新西兰白兔,体重2.2～2.5kg,♂♀各半,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。许可证号：沪ICP14053905号。致病性金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌由武汉大学中南医院临床分离并保种。
2.2试剂
咖喱草乙醇提取物：实施例4制得
咖喱草石油醚提取物：实施例5制得
对照物：重组人表皮生长因子衍生物，由深圳华生元基因有限公 司提供。供,批准文号国药准字S20010038。
2.3家兔皮肤创伤模型
取健康家兔,脱毛,以硫喷妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉,以碘酒消毒皮肤后用面积3cm2钢质打孔器在家兔背部脊柱两侧各2cm处,自上而下切割6个圆形创面,孔间距离2.5cm,深至皮下,止血后备用。
2.4实验分组
将12只家兔分成4大组，分别是咖喱草乙醇提取物组(简称：乙醇组)、咖喱草石油醚提取物组(简称：石油醚组)、咖喱草乙酸乙酯提取物组(简称：乙酸乙酯组)和重组人表皮因子衍生物组(简称：基因组)，每个大组按剂量再分3组，每组1只家兔。
给药方式：取面积为4cm2医用灭菌纱布浸润上述浓度的咖喱草提取液与重组人表皮生长因子衍生物，覆盖于圆形创面，每8小时换药一次。
2.5结果评定
创面愈合的测定：采用透明膜描记法计算创面愈合百分率[3]。
创面愈合百分率＝(同组d0创面面积-同组dn时创面面积)/(同组d0创面面积)×100％(n为用药后测量时间)
菌感染组于d3,d5,d7，d14观察创面愈合情况、与感染情况。
实验结果：
实验结果显示：相对于重组人表皮因子衍生物组及其它提取物组，乙酸乙酯组具有最好的愈合情况，因此选择咖喱草乙酸乙酯为优选提取溶剂。
上表中小组1、2、5是表示料液中含咖喱草提取物与重组人表皮因子衍生物的含量分别是1％、2％、3％。
Claims (10)
1.一种咖喱草提取物，其特征在于，所述提取物中绿原酸含量1％～5％，木犀草苷含量0.8％～3％，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量2.5％～6％。
2.如权利要求1所述咖喱草提取物的制备方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：
(1)咖喱草，置于2～3倍重量的有机溶剂中，25℃～35℃浸提18～24h，优选24h，得浸提液，用纯化水洗涤，每次为溶剂重量的1/3，收集浸提液；
(2)浸提液经活性炭脱色，脱色温度在25℃～35℃，优选30℃得纯化的淡黄色浸提液；
(3)浸提液经旋转蒸发仪，500～1000转/min，在0.1mpa压力下，除去溶剂得浸膏，含水3.5％～5％；
(4)浸膏经冷冻干燥,2-3h得淡黄色固体粉末。
3.根据权利要求2所述咖喱草提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)有机溶剂选自乙醇、石油醚、乙酸乙酯，优选乙酸乙酯。
4.如权利要求1所述咖喱草提取物在制备药物中的应用。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为在制备促进损伤细胞恢复和诱导血管增生药物中的应用。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述药物为咖喱草提取物与药用辅料组成的药物组合物；所述药物组合物中咖喱草提取物的含量为0.5％-10％。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药用辅料为抛射剂、乳化剂、凝胶剂、油剂中的一种或几种。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述表抛射剂选自氮气、二氧化碳或氟利昂，优选氮气；乳化剂选自乙二醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、油酸或蓖麻油，优选蓖麻油；凝胶剂选自卡波姆、芦荟胶或羧甲基纤维素钠，优选卡波姆；油剂选自甘油、丙二醇或聚乙二醇，优选甘油。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物组合物为水剂、凝胶剂或乳胶剂。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述水剂为口腔溃疡喷雾剂、咽喉炎喷雾剂、伤口愈合喷雾剂或皮肤瘙痒喷雾剂；凝胶剂为烧烫伤凝胶剂或妇科炎症凝胶剂；乳胶剂为跌打扭伤乳胶剂、冻疮修复乳胶剂。
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2015
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20161123 |