CN103830178B - 一种蒜氨酸微乳及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
一种蒜氨酸微乳及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域，其目的在于解决蒜氨酸因不稳定和不溶于油类物质而影响其使用的技术问题。本发明的蒜氨酸微乳由以下组分组成：质量分数为1%的蒜氨酸水溶液：油类物质：表面活性剂：助剂﹦1：89：8：2。其是一种油包水形微乳，该微乳中的蒜氨酸性质稳定，不易被空气氧化，且在油性容易中易溶，可广泛应用于生物医药领域作为杀菌、抗癌、预防和治疗心脑血管疾病等的特效药，还可用作油类物质的防腐杀菌剂和抗氧化剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种以蒜氨酸为活性成分的微乳。
背景技术
现代医学研究证实，以蒜氨酸为代表的大蒜含硫氨基酸具有独特的药理活性，其在降血脂、提高身体免疫力、杀菌、抑菌、抗感冒、抗衰老、促进血液循环、防癌抗癌等方面功效显著，有着“天然抗生素”、“抗癌之王”、“地里长出的青霉素”之称。它对危害人类的多种病原菌有抑杀作用；对不少细菌性、真菌性和原虫性感染，均有治疗和预防价值，在生物医药研究开发方面具有很大的作用，被世界医学界称为“二十一世纪在天然食药物领域中的最伟大神奇发现之一”。随着科学研究的深入，近年来更是发现蒜氨酸对心脑血管疾病患者具有很高的药用和保健价值，被世界医学家、科学家誉为“植物黄金”。
但是，蒜氨酸分子本身易受外界因素如湿度、光、热等的影响，使用时不稳定，也极其容易被空气氧化变质。另外，蒜氨酸是水溶性物质，在水/油介质中溶解性不够理想，从而制约了其的广泛应用。
发明内容
针对上述背景技术中提到的蒜氨酸因不稳定和不溶于油类物质而影响其使用的技术问题，本发明的第一个目的是提供一种性质稳定的、可加入油类物质中使用的以蒜氨酸为活性成分的物质。
为实现上述目的，本发明提供了一种蒜氨酸微乳，其特征在于由以下重量份组分组成：质量分数为1%的蒜氨酸水溶液：油类物质：表面活性剂：助剂﹦1：89：8：2，所述表面活性剂为卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯或者吐温80，所述助剂为丙二醇，所述蒜氨酸微乳的粒径为100-200nm。
优选地，所述油类物质为大豆油、花生油或者玉米油。
本发明的第二个目的是提供上述蒜氨酸微乳的制备方法，其特征在于包含以下步骤：
A、配置质量分数为1%的蒜氨酸水溶液；
B、按配比将上述配置好的1%蒜氨酸水溶液与油类物质、表面活性剂和助剂室温下搅拌混合，并用均质机均质，得均质液，均质压力为200-250bar，流速为10dm3/h；
C、将上述均质液送入微射流仪中，控制压力为1350-1400bar，流速为40ml/min，制备得到粒径为100-200nm的蒜氨酸微乳；
D、上述制备得到的蒜氨酸微乳采用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，得到目的蒜氨酸微乳。
本发明的第三个目的是提供上述蒜氨酸微乳在制备以蒜氨酸为活性成分的临床上可接受的剂型的药物中的应用。
进一步地，所述临床上可接受的剂型为搽剂。
本发明的第四个目的是提供上述蒜氨酸微乳作为油类物质的防腐杀菌剂和抗氧化剂的应用。
有益效果：
本发明提供的蒜氨酸微乳是一种油包水形微乳，该微乳中的蒜氨酸性质稳定，不易被空气氧化，可广泛应用于生物医药领域作为杀菌、抗癌、预防和治疗心脑血管疾病等的特效药。经试验证实，采用该蒜氨酸微乳制成的外用搽剂，其透皮吸收度较蒜氨酸水溶液大大提高。本发明提供的蒜氨酸微乳在油性溶液中易溶，可添加到日常食用油中，经试验证实，其对油类物质的防腐杀菌和抗氧化效果显著，是一种纯天然的油类杀菌防腐剂和抗氧化剂，对人体无危害，进一步拓宽了蒜氨酸的应用范围。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释，本发明并不局限于以下实施例。
实施例1
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、大豆油89g、卵磷脂8g、丙二醇2g。
实施例2
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、大豆油89g、单硬脂酸甘油酯8g、丙二醇2g。
实施例3
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、大豆油89g、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯8g、丙二醇2g。
实施例4
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、大豆油89g、吐温808g、丙二醇2g。
实施例5
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、花生油89g、单硬脂酸甘油酯8g、丙二醇2g。
实施例6
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、玉米油89g、单硬脂酸甘油酯8g、丙二醇2g。
实施例7
蒜氨酸微乳的组分如下：
质量分数为1%的蒜氨酸水溶液1g、玉米油89g、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯8g、丙二醇2g。
以上实施例1-7中的蒜氨酸微乳均采用下述方法制备：
A、配置质量分数为1%的蒜氨酸水溶液；
B、按配比将上述配置好的1%蒜氨酸水溶液与油类物质、表面活性剂和助剂室温下搅拌混合，并用均质机均质5min，得均质液，所使用的均质机的型号为ATS EngineeringInc NANO HOMOGENIZE MACHINE，均质压力为200-250bar，流速为10dm3/h；
C、将上述均质液送入微射流仪中，所使用的微射流仪为B.E.E INTERNATIONALINC公司生产的型号为Nano DeBEE45的仪器，控制压力为1350-1400bar，流速为40ml/min，制备得到粒径为100-200nm的蒜氨酸微乳；
D、上述制备得到的蒜氨酸微乳采用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，得到目的蒜氨酸微乳。
上述采用微孔滤膜过滤除菌的详细操作如下：
（1）组装、灭菌将0.22μm孔径的滤膜装入清洗干净的塑料滤器中，旋紧压平，包装灭菌后待用(0.lMPa，121.5℃灭菌20min)；
（2）连接将灭菌滤器的入口在无菌条件下，以无菌操作方式连接于装有待滤溶液的注射器上，将针头与出口处连接并插入带橡皮塞的无菌试管中；
（3）压滤将注射器中的待滤溶液加压缓缓挤入过滤到无菌试管中，滤毕，将针头拨出；压滤时，用力要适当，不可太猛太快，以免细菌被挤压通过淀胶；
（4）无菌检查无菌操作吸取除菌滤液0.1ml于肉汤蛋白胨平板上，涂布均匀，置37℃温室中培养24h，检查是否有菌生长；
（5）清洗弃去塑料滤器上的微孔滤膜，将塑料滤器清洗干净，并换上一张新的微孔滤膜，组装包扎，再经无菌后使用。
整个过程应在无菌条件下严格无菌操作，以防污染，过滤时应避免各连接处出现渗漏现象。
对本发明制备得到的蒜氨酸微乳进行稳定性测定，稳定性测试条件为温度25度，湿度70%，恒温恒湿箱。蒜氨酸含量分析方法：取待检样品1ml，向其中加入破乳剂十二烷基磺酸钠1克，加热至60-80℃，用10ml水反复萃取三次，合并萃取液。利用高效液相分析含量，采用外标法。色谱条件：安捷伦1260高效液相色谱仪;色谱柱:广州菲罗门公司SynergiTM（4μ150X4.6mm）;流动相：甲醇/20mm磷酸钾（30：70）；流速：1.0ml/min；进样量：10μL。检测波长220nm。测定结果见表1，其中蒜氨酸微乳一栏中的数据为上述实施例1-7中制备得到的蒜氨酸微乳的平均值。
表1蒜氨酸微乳稳定性测试表
结果表明：本发明提供的蒜氨酸微乳的稳定性极好。
应用实施例1
将上述实施例1-7中制备得到的蒜氨酸微乳添加到油脂生产工艺中，以检测蒜氨酸微乳添加量对油脂物理形态的影响，检测结果见表2。实验结果表明，本发明的蒜氨酸微乳的使用，可相对延长油脂的质保期限，可替代现在使用的化学合成类抗氧化剂叔丁基对苯二酚。
表2蒜氨酸微乳添加量对油脂物理形态的影响
按GB/T5009.37-2003《食用植物油卫生标准的分析方法》对油脂过氧化值（peroxide value,POV）进行测定。通过保护系数（protection factor,PF）来评定本发明的蒜氨酸微乳的抗氧化活性。按食用油卫生标准规定，油脂中POV值达到11.8mmol/kg时所需的时间为诱导时间，即活性氧法（active oxygen method,AOM）值。计算保护系数PF（PF=添加蒜氨酸微乳的AOM÷未添加蒜氨酸微乳的AOM值），实验结果见表3。
表3不同添加量蒜氨酸微乳对猪油的抗氧化作用
应用实施例2
本发明的蒜氨酸微乳液皮肤外搽试验
将健康日本大耳兔18只随机分为9个组，将试验兔的背部裸露相同的区域，相等的面积（4×4cm），在裸露区域分别涂搽实验品1g，第一组涂搽水，作为空白对照组，第二组涂搽质量分数为1%的蒜氨酸水溶液组，第三组至第九组分别涂搽上述实施例1-7中制备得到的蒜氨酸微乳，每天两次，连续3天。在每天第二次给药的半小时后，耳静脉取血2ml，按常规方法分离血清。采用HPLC的方法测定血清中蒜氨酸的含量，测定结果见表4。
表4空白组与蒜氨酸微乳组皮肤通透性的比较
Claims (5)
1.一种蒜氨酸微乳制备方法，其特征在于由以下重量份组分组成：质量分数为1%的蒜氨酸水溶液：油类物质：表面活性剂：助剂﹦1：89：8：2，所述表面活性剂为单硬脂酸甘油酯和15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯，所述助剂为丙二醇，所述蒜氨酸微乳的粒径为100-200nm，
所述的制备方法包括以下步骤：
A、配置质量分数为1%的蒜氨酸水溶液；
B、按配比将上述配置好的1%蒜氨酸水溶液与油类物质、表面活性剂和助剂室温下搅拌混合，并用均质机均质，得均质液，均质压力为200-250bar，流速为10 dm3/h；
C、将上述均质液送入微射流仪中，控制压力为1350-1400bar，流速为40ml/min，制备得到粒径为100-200nm的蒜氨酸微乳；
D、上述制备得到的蒜氨酸微乳采用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，得到目的蒜氨酸微乳。
2.根据权利要求1所述的蒜氨酸微乳制备方法，其特征在于：所述油类物质为大豆油、花生油或者玉米油。
3.如权利要求1或2所述的方法制得的蒜氨酸微乳在制备以蒜氨酸为活性成分的临床上可接受的剂型的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的临床上可接受的剂型为搽剂。
5.如权利要求1或2所述的方法制得的蒜氨酸微乳作为油类物质的防腐杀菌剂和抗氧化剂的应用。
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