CN106083720A - 一种取代的杂芳基化合物及包含该化合物的组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种取代的杂芳基化合物及包含该化合物的组合物及其用途，本发明公开了如式（I）所示的杂芳基化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、前药，立体异构体、水合物或溶剂化合物。本发明所的杂芳基述化合物及包含该化合物的组合物可用于调节缺氧诱导因子（HIF）和/ 或内源性促红细胞生成素（EPO），同时具有更好的药代动力学参数特性，能够提高化合物在动物体内的药物浓度，以提高药物疗效和安全性。

Description

一种取代的杂芳基化合物及包含该化合物的组合物及其用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种取代的杂芳基化合物及包含该化合物的组合物，以及能够调节缺氧诱导因子(HIF)亚单位的稳定性和增加体外及体内内源性促红细胞生成素的方法和化合物。
背景技术
缺氧诱导因子(HIF)是一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)PAS(Per/Arnt/Sim)转录激活剂，其调控随细胞氧浓度改变的基因表达的改变。HIF是一种含有一个氧调节α亚单位(HIFα)和一个组成性表达β亚单位(HIFβ)的杂二聚体，也被称为芳香烃受体核转运蛋白(ARNT)。在氧合(常氧)细胞中，HIFα亚单位通过涉及视网膜血管瘤抑制蛋白(pVHL)E3连接酶复合物泛素化的机制迅速降解。在缺氧条件下，HIFα不降解，且一种活性HIFα/β复合物在细胞核中累积并激活若干基因的表达，包括糖酵解酶、葡萄糖转运蛋白(GLUT)-1、促红细胞生成素(EPO)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)。(Maxwell等人，自然，1999，399，271-275)。
促红细胞生成素(EPO)是随HIFα而产生的一种自然存在的激素，其刺激运载氧气贯穿全身的红细胞的产生。EPO通常由肾分泌，且内源性EPO在氧减少(缺氧)的条件下增加。所有类型贫血的特征在于血液运载氧的能力减少，并因而伴有类似体征与症状，包括皮肤及粘膜苍白、虚弱、头晕、易疲劳和嗜睡，导致生活质量的下降。具有严重贫血情况的受试者表现出难以呼吸及心脏畸形。贫血通常与红细胞中或血红蛋白中血液缺乏有关。
局部缺血和缺氧病症是发病和死亡的主要原因。心血管病每年引起至少一千五百万的死亡且是造成全世界30％死亡的原因。在多种心血管病中，缺血性心脏病和脑血管病引起约17％的死亡。每年报道有一百三十万非致命性急性心肌梗塞的病例，构成大约每100,000人中300人的发病率。另一方面，估计每年有五百万美国人患有静脉血栓症，且约600,000这些病例导致肺栓塞。约三分之一的肺栓塞患者最终死亡，使得肺栓塞成为美国人死亡的第三个最普遍原因。
当前，局部缺血和缺氧病症的治疗集中在症状的减轻和致病性病症的治疗上。例如，心肌梗塞的治疗包括用以控制疼痛和减轻心脏工作负荷的硝酸甘油和镇痛药。使用其它药物，包括地高辛(digoxin)、利尿剂、氨利酮(amrinone)、β-阻断剂、降脂剂和血管紧张素转换酶抑制剂来稳定病况，但这些疗法中没有一个可直接作用于由局部缺血和缺氧产生的组织损坏。
由于当前治疗中及生产和使用重组EPO中的不足，所以依然需要有效治疗以下疾病的化合物：促红细胞生成素相关病况，例如贫血，包括与糖尿病、贫血、溃疡、肾衰竭、癌症、感染、透析、手术和化学疗法相关的贫血和涉及局部缺血和缺氧的病况，例如动脉闭塞性疾病、心绞痛、肠梗塞、肺梗塞、脑局部缺血和心肌梗塞。也需要有效预防由局部缺血引起的组织损坏的化合物，所述局部缺血由于例如动脉粥样硬化、糖尿病和例如肺栓塞及其类似病症的肺部病症而发生。总之，在此项技术中需要调节HIF和/或内源性促红细胞生成素，且可用于治疗和预防HIF相关和EPO相关病症的方法和化合物，所述病症包括涉及贫血、局部缺血和缺氧的病况。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种化合物及包含该化合物的组合物，其可用于调节缺氧诱导因子(HIF)和/或内源性促红细胞生成素(EPO)和/或具有更好药效学/药代动力学性能。
对此，本发明采用的技术方案为：
本发明的目的是提供一类新型可用于调节缺氧诱导因子(HIF)和/或内源性促红细胞生成素(EPO)的和/或具有更好药效学/药代动力学性能的化合物。
本发明的第一方面中，提供了一种式(I)所示的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物。
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13各自独立地为氢、氘、卤素；
附加条件是R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12和R13中至少一个是氘代的或氘。
在另一优选例中，R1和R2各自独立地为氘或氢。
在另一优选例中，R1、R2是氘。
在另一优选例中，R3、R4和R5各自独立地为氘或氢。
在另一优选例中，R6、R7、R8各自独立地为氘或氢。
在另一优选例中，R9、R10、R11、R12和R13各自独立地为氘或氢。
在另一选例中，所述化合物可选自下组化合物或其药学上可接受的盐，但不局限于如下化合物：
在另一优选例中，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量(0.015％)，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
具体地说，在本发明中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12和R13各氘代位置中氘同位素含量至少是5％，较佳地大于10％，更佳地大于15％，更佳地大于20％，更佳地大于25％，更佳地大于30％，更佳地大于35％，更佳地大于40％，更佳地大于45％，更佳地大于50％，更佳地大于55％，更佳地大于60％，更佳地大于65％，更佳地大于70％，更佳地大于75％，更佳地大于80％，更佳地大于85％，更佳地大于90％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
在另一优选例中，式(I)中化合物的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12和R13，至少其中一个R含氘，更佳地两个R含氘，更佳地三个R含氘，更佳地四个R含氘，更佳地五个R含氘，更佳地六个R含氘，更佳地七个R含氘，更佳地八个R含氘，更佳地九个R含氘，更佳地十个R含氘，更佳地十一个R含氘，更佳地十二个R含氘，更佳地十三个R含氘。
在另一优选例中，所述化合物不包括非氘代化合物。
在本发明的第二方面中，提供了一种制备药物组合物的方法，包括步骤：将药学上可接受的载体与本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，从而形成药物组合物。
在本发明的第三方面中，提供了一种药物组合物，它含有药学上可接受的载体和本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
可用于本发明药物组合物中的药学上可接受的载体包括但不限于任何助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、崩解剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
本发明药物组合物可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本发明药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。优选口服给药或注射给药。
本发明的药物组合物可以采用本领域周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本文中，如无特别说明，“卤素”指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤原子选自F、Cl和Br。
本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。
本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％)的化合物。
本发明还包括同位素标记的化合物，等同于原始化合物在此公开。可以列为本发明的化合物同位素的例子包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟和氯同位素，分别如2H，3H，13C，14C，15N，17O，18O，31P，32P，35S，18F以及36Cl。本发明中的化合物，或对映体，非对映体，异构体，或药学上可接受的盐或溶剂化物，其中含有上述化合物的同位素或其他其他同位素原子都在本发明的范围之内。本发明中某些同位素标记化合物，例如3H和14C的放射性同位素也在其中，在药物和底物的组织分布实验中是有用的。氚，即3H和碳-14，即14C，它们的制备和检测比较容易，是同位素中的首选。同位素标记的化合物可以用一般的方法，通过用易得的同位素标记试剂替换为非同位素的试剂，用示例中的方案可以制备。
药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
本发明提供调节HIF和/或EPO的方法，其通过抑制HIFα羟基化从而稳定HIF和激活HIF调控基因的表达。所述方法也可应用于预防、预先治疗或治疗HIF和/或EPO相关病况，包括贫血、局部缺血和缺氧病况。
局部缺血和缺氧是两种与HIF有关的病况并包括(但不限于)心肌梗塞、肝局部缺血、肾局部缺血和中风；周围血管病症、溃疡、烧伤和慢性伤口；肺栓塞；和缺血-再灌注损伤，包括例如与手术和器官移植相关的缺血-再灌注损伤。
本发明的一个方面提供用于治疗多种局部缺血和缺氧病况的方法，特别是使用本文中所描述的化合物。在一个实施例中，当在局部缺血或缺氧后投予时，本发明的方法产生治疗益处。例如，在心肌梗塞之后，本发明的方法使得发病率和死亡率惊人的降低，并且显著改善心脏结构和性能。另一方面，当在肝中毒性-局部缺血性损伤之后投予时，本发明的方法改善肝功能。缺氧是肝脏疾病的一个重要组成部分，尤其在与肝毒性化合物，例如乙醇有关的慢性肝病中。另外，已知由HIFα诱导的基因表达在酒精性肝病中增加，例如一氧化氮合成酶和葡萄糖转运体-1。
因此，本发明提供治疗局部缺血或缺氧相关病况的方法，所述方法包含将治疗有效量的化合物或其医药上可接受的盐单独或与医药上可接受的赋形剂组合投予受试者。在一个实施例中，在产生局部缺血的病况之后立即投予所述化合物，例如心肌梗塞、肺栓塞、肠梗塞、缺血性中风和肾缺血-再灌注损伤。在另一个实施例中，将所述化合物投予诊断为与慢性局部缺血的发生相关的病况的患者，例如心原性肝硬化、黄斑变性、肺栓塞、急性呼吸衰竭、新生儿呼吸窘迫综合症和充血性心力衰竭。
本发明的另一方面提供使用本文中所描述的化合物治疗有发生局部缺血或缺氧病况危险的患者的方法，例如动脉粥样硬化高危个体。动脉粥样硬化的危险因素包括，例如高脂血症、吸烟、高血压、糖尿病、高胰岛素血症和腹部肥胖。因此，本发明提供预防局部缺血性组织损伤的方法，所述方法包含将治疗有效量的化合物或其医药上可接受的盐单独或与医药上可接受的赋形剂组合投予需要的患者。在一个实施例中，可基于素因性病况投予所述化合物，例如高血压、糖尿病、动脉闭塞性疾病、慢性静脉机能不全、雷诺氏病、慢性皮肤溃疡、硬化、充血性心力衰竭和系统性硬化。
在一个特定实施例中，将所述方法用于增加受损组织、伤口和溃疡中的血管形成和/或肉芽组织形成。例如，本发明的化合物已经显示在伤口愈合中可有效刺激肉芽组织形成。肉芽组织含有新形成的渗漏血管和临时血浆蛋白基质，例如纤维蛋白原和血浆纤维结合蛋白。来自炎性细胞、血小板和激活内皮的生长因子的释放刺激成纤维细胞和内皮细胞在肉芽组织中的迁移和增殖。若血管形成或神经刺激削弱，则可发生溃疡。本发明的方法有效促进肉芽组织的形成。因而，本发明提供用于治疗具有由于例如梗塞造成的组织损坏、具有由例如创伤或损伤诱导的伤口或具有由于某种病症(例如糖尿病)而产生的慢性伤口或溃疡的患者的方法。所述方法包含将治疗有效量的化合物或其医药上可接受的盐单独或与医药上可接受的赋形剂组合投予需要的患者。
发明的另一方面提供使用所述化合物预先治疗受试者以减少或预防与局部缺血或缺氧相关的组织损坏发生的方法。当在涉及局部缺血或缺氧的病况之前立即投予时，本发明的方法产生治疗益处。例如，在诱导心肌梗塞之前应用本发明的方法显示心脏结构和性能得到在统计学上有显著意义的改善。另一方面，当在缺血-再灌注损伤之前和之间立即投予时，本发明的方法产生治疗益处，显著减少与肾衰竭相关的诊断参数。
因此，本发明提供预先治疗受试者以减少或预防与局部缺血或缺氧相关的组织损坏的方法，所述方法包含将治疗有效量的化合物或其医药上可接受的盐单独或与医药上可接受的赋形剂组合投予具有局部缺血病症病史的患者，例如心肌梗塞，或具有迫近局部缺血症状的患者，例如心绞痛。在另一个实施例中，可基于暗示可能局部缺血的物理参数投予所述化合物，例如对于处于全身麻醉下或暂时在高海拔下工作的个体。在又一实施例中，可将所述化合物用于器官移植中，用以预先治疗器官供体或在移植入受体之前，用以维持自身体移除的器官。
先前研究已经显示，在本发明的方法中使用的某些化合物是溶胶原脯氨酰4-羟化酶的有效抑制剂。尽管认识到最初梗塞或伤口的恢复需要结缔组织在坏死区域内沉积，但是本发明证明对于瘢痕形成的治疗无副作用。因而，基于本发明的某些化合物在治疗和预防缺氧组织损坏和纤维化上所提供的益处，本发明涵盖一种治疗或预防涉及局部缺血或缺氧病况的“双重治疗”方法，包括与并发反应性纤维化相关的局部缺血或缺氧，例如心肌梗塞和随之而来的充血性心力衰竭。所述方法可使用一种化合物，其抑制一种以上具有相同特异性或不同特异性的2-酮戊二酸双加氧酶，例如HIF脯氨酰羟化酶和溶胶原脯氨酰4-羟化酶。或者，所述方法可使用化合物的组合，其中每一化合物特异抑制仅一种2-酮戊二酸双加氧酶，例如一种化合物特异抑制HIF脯氨酰羟化酶且第二种化合物特异抑制溶胶原脯氨酰4-羟化酶。
在一个方面，本发明的化合物抑制一种或一种以上2-酮戊二酸双加氧酶。在一个实施例中，所述化合物抑制至少两种具有相同特异性或不同特异性的2-酮戊二酸双加氧酶家族成员，例如HIF脯氨酰羟化酶和HIF天冬酰胺-羟化酶(FIH-1)。在另一实施例中，所述化合物对于一种2-酮戊二酸双加氧酶具有特异性，例如HIF脯氨酰羟化酶，并且对于其它家族成员显示出很少的特异性或不显示特异性。
所述化合物可与多种其它治疗方法组合投予。在一个实施例中，所述化合物和另一种2-酮戊二酸双加氧酶抑制剂一起投予，其中这两种化合物对于个别的2-酮戊二酸双加氧酶家族成员具有不同的特异性。所述两种化合物可同时以一个相对于另一个的比例投予。对于适于给定治疗过程或特定受试者的比例的测定在所述领域的技术水平之内。或者，所述两种化合物可在治疗时程中连续投予，例如在心肌梗塞之后。在一个特定实施例中，一种化合物特异抑制HIF脯氨酰羟化酶的活性，且第二种化合物特异抑制溶胶原脯氨酰4-羟化酶的活性。在另一特定实施例中，一种化合物特异抑制HIF脯氨酰羟化酶的活性，且第二种化合物特异抑制HIF天冬酰胺酰-羟化酶的活性。在另一实施例中，所述化合物与另一具有不同作用模式的治疗剂一起投予，例如ACE抑制剂(ACEI)、血管紧张素-II受体阻断剂(ARB)、抑制素、利尿剂、地高辛、肉毒碱等。
本发明提供增加内源性促红细胞生成素(EPO)的方法。这些方法可在体内应用，例如血浆中，或在体外应用，例如在经调节的细胞培养基中。本发明进一步提供增加内源性EPO含量的方法，用以预防、预先治疗或治疗EPO相关病况，包括例如与贫血和神经系统紊乱相关的病况。贫血相关病况包括例如急性或慢性肾脏疾病、糖尿病、癌症、溃疡、病毒感染(例如HIV、细菌或寄生虫)、炎症等的病症。贫血病况可进一步包括与程序或治疗相关的病况，所述程序或治疗包括例如放射治疗、化学治疗、透析和手术。贫血相关病症另外包括异常血红蛋白和/或红血球，例如发现于如小红细胞性贫血、低血色素贫血症、再生障碍性贫血等病症中。
本发明可用于预防性或同时增加经历特定治疗或程序的受试者中的内源性EPO，例如正以叠氮胸苷(齐多夫定)或其它逆转录酶抑制剂治疗的感染HIV贫血患者、接受含环顺氯氨铂或不含顺氯氨铂的循环化学疗法的贫血癌症患者、或计划经历手术的贫血或非贫血患者。增加内源性EPO的方法也可用于预防、预先治疗或治疗与神经损坏或神经组织退化相关的EPO相关病况，包括(但不限于)中风、创伤、癫痫、脊髓损伤和神经变性病症。
另外，所述方法可用于增加计划经历手术的贫血或非贫血患者中的内源性EPO含量，用以减少对外源输血的需要或用以便于手术前血液的储存。通常在手术前自体供血后发生的血液血细胞比容的少量减少并不刺激内源性EPO或补偿性红血球生成的增加。然而，内源性EPO的手术前刺激将有效增加红血球质量和自体供血体积，同时维持更高的血细胞比容水平，并且所述方法特异性的涵盖于本文中。在一些手术人群中，特别是手术失血超过2升的个体，可应用本发明的方法来减少异源血液曝露。
本发明的方法也可用于增强运动性能、改善锻炼能力和促进或增强有氧调节。例如，运动员可使用所述方法以促进训练且士兵可使用所述方法以改善例如持久力和忍耐力。
本发明的方法已显示可增加体外治疗培养细胞的培养基中和体内治疗的动物血浆中的内源性促红细胞生成素含量。尽管肾是体内促红细胞生成素的主要来源，但一经适当刺激，其它器官，包括大脑、肝和骨髓可且确能合成促红细胞生成素。使用本发明的方法可增加多个身体器官中内源性促红细胞生成素的表达，包括大脑、肾和肝。实际上，本发明的方法甚至增加在经历双测肾切除术的动物中内源性促红细胞生成素的含量。
本发明的方法证明即使当肾功能损害时，也可增加促红细胞生成素的含量。尽管本发明并不为促红细胞生成素产生的机制所限制，但通常在肾衰竭过程中可见的促红细胞生成素分泌的减少可归因于肾组织中流动/灌注增加所致的高氧症。
另一方面，本发明的方法增加体内治疗的动物中血细胞比容和血液血红蛋白水平。随着化合物在本发明的方法中使用而产生的血浆EPO、血细胞比容和血液血红蛋白的增加具有剂量敏感性，然而可确定剂量方案以产生恒定、可控的本发明化合物的响应水平。另一方面，使用本发明化合物的治疗可医治贫血，例如由毒性化合物，例如化学治疗剂顺氯氨铂诱导的贫血，或由于失血所致的贫血，例如创伤、损伤、寄生虫或手术。
用本发明的化合物治疗的动物中，在血细胞比容和血液血红蛋白增加之前是血液中循环未成熟红细胞(网织红细胞)百分率的增加。因而，本发明涵盖本发明化合物在增加动物血液中网织红细胞的含量从而产生无细胞网织红细胞溶菌产物的方法(如Pelham和Jackson在《欧洲生物化学杂志》(Eur.J.Biochem.)67:247-256(1976)中所描述)中的用途。通过用本发明的化合物单独治疗或与另一种化合物，例如乙酰苯肼等组合治疗，动物(例如兔子等)中循环网织红细胞的含量增加。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明化合物可用于调节缺氧诱导因子(HIF)和/或内源性促红细胞生成素(EPO)。通过氘化这一技术改变化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性。用氘取代化合物中的氢原子，由于其氘同位素效应，能够提高化合物在动物体内的药物浓度，以提高药物疗效。用氘取代化合物中的氢原子，由于某些代谢产物被抑制，可能提高化合物的安全性。
具体实施方式
下面更具体地描述本发明式I结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度(如0℃～100℃，优选0℃～80℃)下进行。反应时间通常为0.1小时-60小时，较佳地为0.5-24小时。
实施例1制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]-2,2-d 2 -甘氨酸 (化合物11)
步骤1：4-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(化合物2)的合成。
冰浴下，将二氯亚砜(5.50mL,70.00mmol)滴加到4-溴-2-甲基苯甲酸(5.00g,23.2mmol)的甲醇(60mL)溶液中，滴加完毕后，反应液回流搅拌反应5小时。冷却至室温，减压浓缩反应液。浓缩液用饱和的碳酸氢钠溶液调至中性，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到4.3g淡黄色油状物，收率：81.1％。1H NMR(300MHz,CDCl3)(δ/ppm)7.79(d,J＝8.3Hz,1H),7.45–7.35(m,2H),3.89(s,3H),2.58(s,3H)。
步骤2：2-甲基-4-苯氧基苯甲酸甲酯(化合物3)的合成。
氮气保护下，将1,4-二氧六环(30mL)加入到4-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(4.30g,18.80mmol),苯酚(1.90g,20.00mmol),Cs2CO3(18.40g,56.40mmol),碘化亚铜(716mg，3.76mmol)，NN-二甲基甘氨酸(775mg，7.52mmol)的混合中，反应液在100℃下搅拌反应过夜。冷却至室温，过滤，减压浓缩。浓缩液用乙酸乙酯(100mL)和水(60mL)，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩,浓缩液进行柱分离得到3.60g棕色油状物，收率：79.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm)7.97–7.93(m,1H),7.44–7.37(m,2H),7.20(dd,J＝10.7,4.2Hz,1H),7.08(dd,J＝8.5,0.9Hz,2H),6.88–6.79(m,2H),3.89(s,3H),2.60(s,3H)。
步骤3：2-(溴甲基)-4-苯氧基苯甲酸甲酯(化合物4)的合成。
氮气保护下将过氧化苯甲酰(BPO,638mg,2.60mmol)加入到2-甲基-4-苯氧基苯甲酸甲酯(9.10g,37.60mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS,7.02g,39.5mmol)的四氯化碳(160mL)溶液中，反应回流搅拌6小时。冷却至室温，过滤，滤液分别用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到10.9g棕色油状物，收率：90.3％。
步骤4：2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-苯氧基苯甲酸甲酯(化合物5)的合成
室温下将碘化钠(10.40g,69.50mmol)，碳酸钠(9.60g,69.50mmol)加入到2-(溴甲基)-4-苯氧基苯甲酸甲酯(14.90mg,46.00mmol)和对甲苯磺酰甘氨酸甲酯(12.40g,51.00mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(118mL)，反应在室温下反应过夜。加水(100mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，有机相分别用水(100mL)和饱和食盐水(100mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到18.9g棕色油状物，收率：85.0％。LC-MS(APCI):m/z＝:484.1(M+1)。
步骤5：4-羟基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物6)的合成
冰浴下，将甲醇钠(12.70g.234.60mmol)的甲醇(40mL)溶液滴加到2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-苯氧基苯甲酸甲酯(18.90g,39.10mmol)的二甲亚砜(82mL)溶液中，滴加完毕后，反应液在室温下搅拌2小时。减压除去甲醇，加水(50mL)稀释浓缩液，用1N的稀盐酸将pH值调至pH＝10左右。乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机层用分别用水(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到9.1g白色固体，收率：78.8％。LC-MS(APCI):m/z＝296.1(M+1)。
步骤6：1-((二甲基氨)甲基)-4-羟基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物8)的合成。
室温下，将N,N,N',N'-四甲基甲二胺(1.08g,10.60mmol)缓慢滴加到4-羟基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(2.60g.8.80mmol)的乙酸(4mL)溶液中，反应升温至55℃搅拌反应6小时。冷却至室温，直接用于下一步反应。LC-MS(APCI):m/z＝353.1(M+1)。
步骤7：1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物9)的合成。
室温下，将醋酸酐(2.50g,24.60mmol)缓慢滴加到上述的反应中，此间保持温度不超过50℃。滴加完毕后，反应液升温至100℃搅拌反应过夜。冷却至60℃，缓慢加入20mL的水后，降温至室温，固体过滤，用水洗涤滤饼。将滤饼溶于20mL的二氯甲烷和10mL的水，搅拌5分钟，分出有机相。将吗啡啉(0.80g,8.80mmol)在冰浴下加入到有机相中，搅拌反应2小时。减压浓缩反应液，加入丙酮(2mL)和甲醇(2mL)混合溶剂中，冰浴下析出固体，固体过滤，用甲醇(冷，1mL)洗涤，真空干燥得到1.80g白色固体，收率：55.7％。LC-MS(APCI):m/z＝367.1(M+1)。
步骤8：4-羟基-1-甲基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物10)的合成
将1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(1.30g,3.50mmol)溶于无水乙酸乙酯(26mL)中，加入碳酸钠(186mg，1.80mmol)和Pd/C(10％，170mg)，反应液在氢气下80℃下搅拌过夜。冷却至室温，硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗品进行柱分离得到600mg白色固体，收率：55.4％。LC-MS(APCI):m/z＝310.1(M+1)。
步骤9：N-[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]-2,2-d2-甘氨酸(化合物11)的合成
室温下，将甲醇钠(220mg,4.00mmol)加入到4-羟基-1-甲基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯((120mg，0.39mmol)和氘代甘氨酸-d5(100mg,1.20mmol)的氘代甲醇-d4(3mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，10mL)洗涤，固体干燥。固体溶于5mL的水中，用乙酸乙酯(5mL)萃取。水相用0.5mL的乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x 1mL)，丙酮(冷，2x 0.5mL)洗涤，真空干燥得到60mg米白色固体，收率：45.2％，LC-MS(APCI):m/z＝355.2(M+1)；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.32(s,1H),12.80(s,1H),9.10(s,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(d,J＝2.2Hz,1H),7.50(m,3H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.17(d,J＝7.7Hz,2H),2.70(s,3H)。
实施例2制备N-[(4-羟基-1-d-甲基-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化合物 13)
步骤1：4-羟基-1-(d-甲基)-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物12)的合成。
将1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(250mg,0.68mmol)溶于无水乙酸乙酯(5mL)中，加入碳酸钠(40mg，0.34mmol)和Pd/C(50％in D2O，30mg)，反应液在氢气下80℃下搅拌过夜。冷却至室温，硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗品进行柱分离得到130mg白色固体，收率：61.6％。LC-MS(APCI):m/z＝311.1(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)11.50(s,1H),8.34(m,1H),7.60(d,J＝2.1Hz,1H),7.51(m,3H),7.26(t,J＝7.4Hz,1H),7.19(m,2H),3.95(s,3H),2.63(d,J＝5.3Hz,2H)。
步骤2：N-[(4-羟基-1-(-d-甲基)-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化合物13)的合成。
室温下，将甲醇钠(226.8mg,4.20mmol)加入到4-羟基-1-(甲基-d)-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯((130mg，0.42mmol)和甘氨酸(94.5mg,1.30mmol)的氘代甲醇-d(3mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，1mL)洗涤，固体干燥。固体溶于3mL的水中，用乙酸乙酯(3mL)萃取。水相用乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x1mL)，丙酮(冷，2x0.5mL)洗涤，真空干燥得到29mg白色固体，收率：19.5％，LC-MS(APCI):m/z＝354.1(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.32(s,1H),12.79(s,1H),9.11(t,J＝6.1Hz,1H),8.30(m,1H),7.62(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(m,3H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),7.18(d,J＝7.8Hz,2H),4.04(d,J＝6.1Hz,2H),2.69(s,2H)。
实施例3制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-(2,4,6-d 3 -苯氧基))--3-异喹啉基)羰基]甘 氨酸(化合物23)
步骤1：2,4,6-d3-苯酚(化合物15)的合成。
室温下将NaOD(40％in D2O,3.00g,30.00mmol)加入到苯酚(2.80g,30.30mmol)的重水(44mL)中，微波180℃下反应45分钟。冷却至室温，加入HCl(0.5M aq,60mL)，用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取，有机层用饱和的食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到2.9g棕色油状物，收率：100％。LC-MS(APCI):m/z＝96.1(M-1)；1H NMR(300MHz,CDCl3)(δ/ppm)7.26(s,2H),6.85(s,1H)。
步骤2：2-甲基-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物16)的合成。
氮气保护下，将1,4-二氧六环(37mL)加入到4-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(5.40g,23.6mmol，2,4,6-d3-苯酚(2.30g,23.6mmol)，Cs2CO3(23.1g,70.80mmol)，碘化亚铜(900mg，4.70mmol)，N,N-二甲基甘氨酸(1.20g,16.80mmol)的混合中，反应液在100℃下搅拌反应过夜。冷却至室温，过滤，减压浓缩。浓缩液用乙酸乙酯(100mL)和水(60mL)，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩,浓缩液进行柱分离得到3.40g棕色油状物，收率：58.7％。
步骤3：2-(溴甲基)-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物17)的合成。
氮气保护下将过氧化苯甲酰(BPO,170.8mg,0.70mmol)加入到2-甲基-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲酯(3.40g,14.10mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS,2.38g,13.40mmol)的四氯化碳(58mL)溶液中，反应回流搅拌过夜。冷却至室温，过滤，滤液分别用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到2.90g棕色油状物，收率：63.5％。
步骤4：2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物18)的合成。
室温下将碘化钠(2.00g,13.40mmol),碳酸钾(1.85g,13.40mmol)加入到2-(溴甲基)-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲酯(2.90g,8.95mmol)和对甲苯磺酰甘氨酸甲酯(2.40g,9.85mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(23mL)，反应在室温下反应6小时。加水(50mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离，得到4.20g黄色固体，收率：96.4％。LC-MS(APCI):m/z＝487.1(M+1)。
步骤5：4-羟基-7-(2,4,6-d3-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物19)的合成。
冰浴下，将甲醇钠(3.02g.55.90mmol)的甲醇-d(9mL)溶液滴加到2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-(2,4,6-d3-苯氧基)-苯甲酸甲酯(4.20g,8.60mmol)的二甲亚砜(18mL)溶液中，滴加完毕后，反应液在室温下搅拌2hrs。减压除去甲醇，加水(50mL)稀释浓缩液，用1N的稀盐酸将pH值调至pH＝10左右。乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机层用分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到2.50g白色固体，收率：96.6％。LC-MS(APCI):m/z＝299.1(M+1)。
步骤6：1-((二甲基氨)甲基)-4-羟基-7-(2,4,6-d3-苯氧基)-喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物20)的合成。
室温下，将N,N,N',N'-四甲基甲二胺(830mg,7.80mmol)缓慢滴加到4-羟基-7-(2,4,6-d3-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(2.00g,6.70mmol)的乙酸(4mL)溶液中，反应升温至55℃搅拌反应6小时。冷却至室温，直接用于下一步反应。LC-MS(APCI):m/z＝356.2(M+1)。
步骤7：1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-((2,4,6-d3-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物21)的合成
室温下，将醋酸酐(1.80g,16.50mmol)缓慢滴加到上述的反应中，此间保持温度不超过50℃。滴加完毕后，反应液升温至100℃搅拌反应过夜。冷却至60℃，缓慢加入25mL的水后，降温至室温，固体过滤，用水洗涤滤饼。将滤饼溶于25mL的二氯甲烷和12mL的水，搅拌5分钟，分出有机相。将吗啡啉(0.90g)在冰浴下加入到有机相中，搅拌反应2小时。减压浓缩反应液，加入丙酮(2mL)和甲醇(2mL)混合溶剂中，冰浴下析出固体，固体过滤，用甲醇(冷，1mL)洗涤，真空干燥得到1.20g白色固体，收率：55.9％。LC-MS(APCI):m/z＝370.1(M+1)。
步骤8：4-羟基-1-甲基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物22)的合成
将1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(300mg,0.81mmol)溶于无水乙酸乙酯(6mL)中，加入碳酸钠(53mg，0.40mmol)和Pd/C(10％，45mg)，反应液在氢气下80℃下搅拌过夜。冷却至室温，硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗品进行柱分离得到220mg白色固体，收率：86.90％。LC-MS(APCI):m/z＝313.1(M+1)。
步骤9：N-[(4-羟基-1-甲基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基)--3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化合物23)的合成
室温下，将甲醇钠(383.8g,7.10mmol)加入到4-羟基-1-甲基-7-(苯-2,4,6-d3-氧基-异喹啉基-3-羧酸甲酯(220mg，0.70mmol)和氘代甘氨酸-d5(169.2mg,2.12mmol)的氘代甲醇-d(4.8mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，3mL)洗涤，固体干燥。固体溶于3mL的水中，用乙酸乙酯(3mL)萃取。水相用乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x 2mL)，丙酮(冷，2x2mL)洗涤，真空干燥得到126mg白色固体，收率：49.7％，LC-MS(APCI):m/z＝356.2(M+1)；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.34(s,1H),9.07(s,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.62(d,J＝2.3Hz,1H),7.53(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.48(d,J＝4.0Hz,2H),4.04(d,J＝6.1Hz,2H),2.70(s,3H)。
实施例4制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-(d 5 -苯氧基)-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸
步骤1：d5-苯酚(化合物24)的合成。
室温下将5％Pt/C(600mg)加入到苯酚(3.00g,31.90mmol)的重水(100mL)中，H2置换反应体系的空气，封管室温反应48小时。硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯(100mL)萃取，有机层用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得到3.0g棕色油状物，不纯化直接用于下一步反应。LC-MS(APCI):m/z＝98.1(M-1)；1H NMR(300MHz,CDCl3)(δ/ppm)7.26(s,0.06H,97％D),6.94(s,0.03H,97％D),6.86(s,0.06H,97％D),5.58(s,1H)。
步骤2：2-甲基-4-(d5-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物25)的合成。
氮气保护下，将1,4-二氧六环(50mL)加入到4-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(7.60g,33.3mmol)，d5-苯酚(3.00g,30.3mmol)，Cs2CO3(29.60g,100mmol)，碘化亚铜(1.30g，6.66mmol)，N,N-二甲基甘氨酸(1.70g,16.50mmol)的混合中，反应液在100℃下搅拌反应过夜。冷却至室温，过滤，减压浓缩。浓缩液用乙酸乙酯(100mL)和水(60mL)，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩,浓缩液进行柱分离得到4.30g棕色油状物，收率：68.7％。
步骤3：2-(溴甲基)-4-(苯-d5-氧基)-苯甲酸甲酯(化合物26)的合成。
氮气保护下将过氧化苯甲酰(BPO,296mg,1.23mmol)加入到2-甲基-4-(d5-苯氧基)-苯甲酸甲酯(4.30g,17.50mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS,3.27g,18.30mmol)的四氯化碳(75mL)溶液中，反应回流搅拌过夜。冷却至室温，过滤，滤液分别用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到4.10g棕色油状物，收率：71.8％。
步骤4：2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-(苯-d5-氧基)-苯甲酸甲酯(化合物27)的合成。
室温下将碘化钠(2.80g,18.90mmol),碳酸钾(2.60g,18.90mmol)加入到2-(溴甲基)-4-(苯-d5-氧基)-苯甲酸甲酯(4.10g,12.60mmol)和对甲苯磺酰甘氨酸甲酯(3.37g,13.90mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(35mL)，反应在室温下反应过夜。加水(50mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到5.4g黄色固体，收率：87.7％。LC-MS(APCI):m/z＝489.1(M+1)。
步骤5：4-羟基-7-(苯-d5-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物28)的合成。
冰浴下，将甲醇钠(3.90g.71.90mmol)的甲醇(11mL)溶液滴加到2-2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-(苯-d5-氧基)-苯甲酸甲酯(5.40g,11.1mmol)的二甲亚砜(23mL)溶液中，滴加完毕后，反应液在室温下搅拌2hrs。减压除去甲醇，加水(50mL)稀释浓缩液，用1N的稀盐酸将pH值调至pH＝10左右。乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机层用分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离(淋洗剂：石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得到3.00g白色固体，收率：90.2％。LC-MS(APCI):m/z＝301.1(M+1)。
步骤6：1-((二甲基氨)甲基)-4-羟基-7-(苯-d5-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物29)的合成。
室温下，将N,N,N',N'-四甲基甲二胺(1.23g,12.00mmol)缓慢滴加到4-羟基-7-(d5-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(3.00g,10.00mmol)的乙酸(5mL)溶液中，反应升温至55℃搅拌反应6小时。冷却至室温，直接用于下一步反应。LC-MS(APCI):m/z＝358.1(M+1)。
步骤7：1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-(苯-d5-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物30)的合成。
室温下，将醋酸酐(2.50g,24.60mmol)缓慢滴加到上述的反应中，此间保持温度不超过50℃。滴加完毕后，反应液升温至100℃搅拌反应过夜。冷却至60℃，缓慢加入25mL的水后，降温至室温，固体过滤，用水洗涤滤饼。将滤饼溶于25mL的二氯甲烷和12mL的水，搅拌5分钟，分出有机相。将吗啡啉(0.90g)在冰浴下加入到有机相中，搅拌反应2小时。减压浓缩反应液，加入丙酮(2mL)和甲醇(2mL)混合溶剂中，冰浴下析出固体，固体过滤，用甲醇(冷，1mL)洗涤，真空干燥得到2.08g白色固体，收率：55.9％。LC-MS(APCI):m/z＝372.1(M+1)。
步骤8：4-羟基-1-甲基-7-(苯-d5-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物31)的合成。
将1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-(d5-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(500mg,1.34mmol)溶于无水乙酸乙酯(10mL)中，加入碳酸钠(75mg，0.70mmol)和Pd/C(10％，75mg)，反应液在氢气下80℃下搅拌过夜。冷却至室温，硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗品进行柱分离得到400mg白色固体，收率：94.70％。LC-MS(APCI):m/z＝315.1(M+1)。
步骤9：N-[(4-羟基-1-甲基-7-(d5-苯氧基)--3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化合物32)的合成。
室温下，将甲醇钠(1.05g,19.4mmol)加入到4-羟基-1-甲基-7-(苯-d5-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(200mg，0.64mmol)和氘代甘氨酸-d5(154mg,1.92mmol)的氘代甲醇-d(4.5mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，5mL)洗涤，固体干燥。固体溶于5mL的水中，用乙酸乙酯(5mL)萃取。水相用乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x 2mL)，丙酮(冷，2x 2mL)洗涤，真空干燥得到150mg白色固体，收率：65.2％，LC-MS(APCI):m/z＝358.1(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.33(s,1H),12.88(s,1H),9.08(s,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(d,J＝2.0Hz,1H),7.52(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),4.04(d,J＝6.1Hz,2H),2.70(s,3H)。
实施例5制备N-[(4-羟基-1-(d-甲基)-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]-2，2-d 2 -甘 氨酸
室温下，将甲醇钠(243mg,4.5mmol)加入到4-羟基-1-(d-甲基)-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(130mg，0.42mmol)和氘代d5-甘氨酸(108mg,1.35mmol)的氘代甲醇-d(3mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，1mL)洗涤，固体干燥。固体溶于3mL的水中，用乙酸乙酯(3mL)萃取。水相用乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x1mL)，丙酮(冷，2x0.5mL)洗涤，真空干燥得到66mg米白色固体，收率：41.2％，LC-MS(APCI):m/z＝356.2(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.35(s,1H),9.07(s,1H),8.29(m,1H),7.62(d,J＝1.9Hz,1H),7.51(m,3H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.17(d,J＝7.7Hz,2H),2.69(d,J＝5.2Hz,2H)。
实施例6制备N-[(4-羟基-1-(d 3 -甲基)-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]-2,2-d 2 -甘 氨酸(化合物36)
步骤1：N-[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化合物35)的合成。
室温下，将甲醇钠(1.05g,19.4mmol)加入到4-羟基-1-甲基-7-苯氧基异喹啉基-3-羧酸甲酯(600mg，1.94mmol)和甘氨酸(437mg,5.80mmol)的甲醇(4mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，5mL)洗涤，固体干燥。固体溶于5mL的水中，用乙酸乙酯(5mL)萃取。水相用乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x2mL)，丙酮(冷，2x 2mL)洗涤，真空干燥得到125mg白色固体，收率：18.3％，LC-MS(APCI):m/z＝353.1(M+1)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.31(s,1H),9.09(s,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(d,J＝2.2Hz,1H),7.53(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),7.47(t,J＝7.9Hz,2H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),7.17(d,J＝7.9Hz,2H),4.03(d,J＝6.1Hz,2H),2.70(s,3H)。
步骤2：化合物N-[(4-羟基-1-(d3-甲基)-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]-2,2-d2-甘氨酸(化合物36)的合成。
将40％氘氧化钠的重水溶液(0.20mL)加入到N-[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(100mg，0.25mmol)的重水(3mL)，氮气保护下封管140℃反应8hrs。冷却至室温，用3N的盐酸溶液将体系的pH调至4左右，用乙酸乙酯萃取(20mLx 4)，有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，浓缩液进行制备薄层色谱分离得到灰色固体15mg，收率30.0％，LC-MS(APCI):m/z＝358.2(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.43(s,1H),9.01(s,1H),8.30(d,J＝9.0Hz,1H),7.62(d,J＝2.2Hz,1H),7.52(m,3H),7.26(t,J＝7.4Hz,1H),7.18(d,J＝7.7Hz,2H)。
实施例7制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化 合物46)
步骤1：3-d-苯酚(化合物38)的合成。
室温下Pd/C(50％in D2O,1.00g)加入到间溴苯酚(3.50g,20.00mmol)的氘代甲醇-d(20mL)中，D2置换空气，氘气气球下反应过夜。硅藻土过滤，滤液减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到2.8g棕色油状物，收率：52.0％，LC-MS(APCI):m/z＝94.1(M-1)；1H NMR(300MHz,CDCl3)(δ/ppm)7.26(s,2H),6.85(s,1H)。
步骤2：2-甲基-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物39)的合成。
氮气保护下，将1,4-二氧六环(35mL)加入到4-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(4.50g,19.80mmol)，苯-3-d-酚(1.80g,18.90mmol)，Cs2CO3(19.40g,59.4mmol)，碘化亚铜(754mg，3.96mmol)，N,N-二甲基甘氨酸(815mg,7.90mmol)的混合中，反应液在100℃下搅拌反应过夜。冷却至室温，过滤，减压浓缩。浓缩液用乙酸乙酯(100mL)和水(60mL)，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩,浓缩液进行柱分离得到2.44g棕色油状物，收率：58.9％。
步骤3：2-(溴甲基)-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物40)的合成。
氮气保护下将过氧化苯甲酰(BPO,170.8mg,0.70mmol)加入到2-甲基-4-(苯-3-d-氧基)-苯甲酸甲酯(2.40g，10.00mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS，1.87g，10.5mmol)的四氯化碳(43mL)溶液中，反应回流搅拌过夜。冷却至室温，过滤，滤液分别用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离，得到2.00g棕色油状物，收率：62.1％。
步骤4：2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲酯(化合物41)的合成。
室温下将碘化钠(1.39g,9.30mmol),碳酸钾(1.28g,9.30mmol)加入到2-(溴甲基)-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲酯(2.00g,6.20mmol)和对甲苯磺酰甘氨酸甲酯(1.66g,6.80mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(16mL)，反应在室温下反应4hrs。加水(50mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机相分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得到3.70g黄色固体，不纯化直接用于下一步反应，收率：100％，LC-MS(APCI):m/z＝485.1(M+1)。
步骤5：4-羟基-7-(3-d-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物42)的合成。
冰浴下，将甲醇钠(4.10g.76.00mmol)的甲醇-d(8mL)溶液滴加到2-(((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)-4-甲基苯基)磺酰氨)甲基)-4-(3-d-苯氧基)-苯甲酸甲酯(3.70g,7.60mmol)的二甲亚砜(16mL)溶液中，滴加完毕后，反应液在室温下搅拌1小时。减压除去甲醇，加水(50mL)稀释浓缩液，用1N的稀盐酸将pH值调至pH＝10左右。乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，有机层用分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液进行柱分离得到1.10g白色固体，两步收率：59.9％。LC-MS(APCI):m/z＝297.1(M+1)。
步骤6：1-((二甲基氨)甲基)-4-羟基-7-(3-d-苯氧基)-喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物43)的合成。
室温下，将N,N,N',N'-四甲基甲二胺(460mg,4.50mmol)缓慢滴加到4-羟基-7-(苯-3-d-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(1.10g,3.70mmol)的乙酸(2mL)溶液中，反应升温至55℃搅拌反应6小时。冷却至室温，直接用于下一步反应。LC-MS(APCI):m/z＝354.2(M+1)。
步骤7：1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-(苯-3-d-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物44)的合成。
室温下，将醋酸酐(1.10g,10.4mmol)缓慢滴加到上述的反应中，此间保持温度不超过50℃。滴加完毕后，反应液升温至100℃搅拌反应过夜。冷却至60℃，缓慢加入10mL的水后，降温至室温，固体过滤，用水洗涤滤饼。将滤饼溶于10mL的二氯甲烷和5mL的水，搅拌5分钟，分出有机相。将吗啡啉(322mg,3.70mmol)在冰浴下加入到有机相中，搅拌反应2小时。减压浓缩反应液，加入丙酮(1mL)和甲醇(1mL)混合溶剂中，冰浴下析出固体，固体过滤，用甲醇(冷，1mL)洗涤，真空干燥得到920mg白色固体，收率：67.6％。LC-MS(APCI):m/z＝368.1(M+1)。
步骤8：4-羟基-1-甲基-7-(3-d苯-氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(化合物45)的合成
将1-((乙酰氧基甲基)甲基)-4-羟基-7-(3-d-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(920mg,2.50mmol)溶于无水乙酸乙酯(18mL)中，加入碳酸钠(132mg，1.25mmol)和Pd/C(10％，140mg)，反应液在氢气下80℃下搅拌过夜。冷却至室温，硅藻土过滤，滤液减压浓缩。粗品进行柱分离得到570mg白色固体，收率：73.50％。LC-MS(APCI):m/z＝:311.1(M+1)。
步骤9：N-[(4-羟基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-3-异喹啉基)羰基]甘氨酸(化合物46)的合成
室温下，将甲醇钠(351g,6.50mmol)加入到4-羟基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-异喹啉基-3-羧酸甲酯(200mg，0.65mmol)和甘氨酸(170mg,2.12mmol)的氘代甲醇-d(4.5mL)溶液，反应液封管110℃反应过夜。反应液冷却至室温，固体过滤，甲醇(冷，3mL)洗涤，固体干燥。固体溶于2mL的水中，用乙酸乙酯(3mL)萃取。水相用乙酸将pH至调至酸性，悬浊液在室温下搅拌至有大量固体析出，过滤。滤饼分别用水(3x 2mL)，丙酮(冷，2x 1mL)洗涤，真空干燥得到137mg白色固体，收率：59.6％，LC-MS(APCI):m/z＝355.2(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.31(s,1H),12.83(s,1H),9.10(t,J＝5.8Hz,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(s,1H),7.56–7.44(m,2H),4.03(d,J＝6.1Hz,2H),2.70(s,3H)。
实施例8制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-(2,4,6-d 3 -苯氧基))--3-异喹啉基)羰基]- 2,2-d 2 -甘氨酸(化合物47)
合成方法与实施例3类似，不同之处在于用氘代甘氨酸替代甘氨酸，氘代甲醇替代甲醇，得最终产物化合物47。LC-MS(APCI):m/z＝358.4(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.34(s,1H),9.07(s,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.62(d,J＝2.3Hz,1H),7.53(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.48(d,J＝4.0Hz,2H),2.70(s,3H)。
实施例9制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-(d 5 -苯氧基))--3-异喹啉基)羰基]-2,2-d 2 - 甘氨酸(化合物48)
合成方法与实施例4类似，不同之处在于用氘代甘氨酸替代甘氨酸，氘代甲醇替代甲醇，得最终产物化合物48。LC-MS(APCI):m/z＝360.1(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.33(s,1H),12.88(s,1H),9.08(s,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(d,J＝2.0Hz,1H),7.52(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),2.70(s,3H)。
实施例10制备N-[(4-羟基-1-甲基-7-(3-d-苯氧基)-3-异喹啉基)羰基]-2,2-d 2 - 甘氨酸(化合物49)
合成方法与实施例7类似，不同之处在于用氘代甘氨酸替代甘氨酸，氘代甲醇替代甲醇，得最终产物化合物49。
LC-MS(APCI):m/z＝355.2(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)(δ/ppm)13.31(s,1H),12.83(s,1H),9.10(t,J＝5.8Hz,1H),8.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.61(s,1H),7.56–7.44(m,2H),2.70(s,3H)。
生物活性测试。
代谢稳定性评价。
微粒体实验：人肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；大鼠肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；辅酶(NADPH/NADH)：1mM，Sigma Life Science；氯化镁：5mM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH为7.4)。
储备液的配制：精密称取一定量的化合物实施例1-7粉末，并用DMSO分别溶解至5mM。
磷酸盐缓冲液(100mM，pH7.4)的配制：取预先配好的0.5M磷酸二氢钾150mL和700mL的0.5M磷酸氢二钾溶液混合，再用0.5M磷酸氢二钾溶液调节混合液pH值至7.4，使用前用超纯水稀释5倍，加入氯化镁，得到磷酸盐缓冲液(100mM)，其中含100mM磷酸钾，3.3mM氯化镁，pH为7.4。
配制NADPH再生系统溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM氯化镁)，使用前置于湿冰上。
配制终止液：含有50ng/mL盐酸普萘洛尔和200ng/mL甲苯磺丁脲(内标)的乙腈溶液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL人肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL SD大鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。
样品的孵育：用含70％乙腈的水溶液将相应化合物的储备液分别稀释至0.25mM，作为工作液，备用。分别取398μL的人肝微粒体或者大鼠肝微粒体稀释液加入96孔孵育板中(N＝2)，分别加入2μL0.25mM的的工作液中，混匀。
代谢稳定性的测定：在96孔深孔板的每孔中加入300μL预冷的终止液，并置于冰上，作为终止板。将96孔孵育板和NADPH再生系统置于37℃水浴箱中，100转/分钟震荡，预孵5min。从孵育板每孔取出80μL孵育液加入终止板，混匀，补充20μLNADPH再生系统溶液，作为0min样品。再向孵育板每孔加入80μL的NADPH再生系统溶液，启动反应，开始计时。相应化合物的反应浓度为1μM，蛋白浓度为0.5mg/mL。分别于反应10、30、90min时，各取100μL反应液，加入终止板中，涡旋3min终止反应。将终止板于5000×g，4℃条件下离心10min。取100μL上清液至预先加入100μL蒸馏水的96孔板中，混匀，采用LC-MS/MS进行样品分析。
数据分析：通过LC-MS/MS系统检测相应化合物及内标的峰面积，计算化合物与内标峰面积比值。通过化合物剩余量的百分率的自然对数与时间作图测得斜率，并根据以下公式计算t1/2和CLint，其中V/M即等于1/蛋白浓度。
实验结果如下表2所示，同FG4592相比，本发明化合物在人肝微粒体与大鼠肝微粒体实验中都表现出优异的代谢稳定性。
表1实施例1-10化合物的肝微粒代谢评价
大鼠中的药代动力学评价。
6只雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周龄，体重约210g，分成2组，每组3只，经静脉或口服单个剂量的化合物(经静脉3mg/kg，口服10mg/kg)，比较其药代动力学差异。
大鼠采用标准饲料饲养，给予水。试验前16小时开始禁食。药物用PEG400和二甲亚砜溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后0.083小时，0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时和24小时。
大鼠吸入乙醚后短暂麻醉，眼眶采集300μL血样于试管。试管内有30μL1％肝素盐溶液。使用前，试管于60℃烘干过夜。在随后一个时间点血样采集完成之后，大鼠乙醚麻醉后处死。
血样采集后，立即温和地颠倒试管至5次，保证混合充分后放置于冰上。血样在4℃5000rpm离心5分钟，将血浆与红细胞分离。用移液器吸出100μL血浆到干净的塑料离心管中，表明化合物的名称和时间点。血浆在进行分析前保存在-80℃。用LC-MS/MS测定血浆中本发明化合物的浓度。药代动力学参数基于每只动物在不同时间点的血药浓度进计算。
实验结果如下表3所示，相对于对照化合物FG-4592，本发明化合物11、化合物32、化合物49的口服利用率大幅度提高，说明其在动物体内具有更好的药物动力学，因而具有更好的药效学和治疗效果。
表2大鼠药代动力学实验
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种取代的杂芳基化合物，其特征在于：如式(I)所示的杂芳基化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13各自独立地为氢、氘、卤素；
附加条件是R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12和R13中至少一个是氘代的或氘。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R1和R2各自独立地为氘或氢。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R3、R4和R5各自独立地为氘或氢。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R6、R7、R8各自独立地为氘或氢。
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R9、R10、R11、R12和R13各自独立地为氘或氢。
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物选自下组化合物或其药学上可接受的盐：
7.一种药物组合物，其特征在于：其含有药学上可接受的载体和如权利要求1～6任意一项所述的取代的杂芳基化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物、立体异构体、前药或同位素变体的药物组合物。
8.一种如权利要求1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物的用途，其特征在于：制备预防和治疗慢性疾病性贫血、葡萄糖耐受不良和/或肾病相关贫血，以及癌症贫血或血细胞相关病症药物中的用途。
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