ES2828299T3 - Compuesto de heteroarilo sustituído, composición que contiene el mismo y aplicación del mismo - Google Patents

Abstract

Un compuesto representado por la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, **(Ver fórmula)** en donde R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 son, cada uno independientemente, hidrógeno o deuterio; y R1 y R2 son deuterio.

Description

DESCRIPCIÓN

Compuesto de heteroarilo sustituido, composición que contiene el mismo y aplicación del mismo

Campo de la presente invención

La presente descripción pertenece al campo farmacéutico y, en particular, se refiere a un compuesto de heteroarilo sustituido y una composición que comprende el mismo, así como a un método y compuesto capaz de regular la estabilidad de las subunidades del hypoxia inducible factor (factor inducible por hipoxia - HIF) y aumentar la eritropoyetina endógena in vitro e in vivo.

Antecedentes de la presente invención

El hypoxia inducible factor (factor inducible por hipoxia - HIF) es un activador de transcripción de PAS (Per/Arnt/Sim) basic helix-loop-helix (básico de hélice-giro-hélice [bHLH]) que regula los cambios en la expresión génica en respuesta a los cambios en la concentración de oxígeno celular. El HIF es un heterodímero que contiene una subunidad alfa regulada por oxígeno (HIFa) y una subunidad beta expresada constitutivamente (HIFp), también conocido como aromatic hydrocarbon receptor nuclear transporter (transportador nuclear del receptor de hidrocarburo aromático - ARNT). En las células oxigenadas (normóxicas), la subunidad HIFa se degrada rápidamente mediante un mecanismo que implica la ubiquitinación del complejo de ligasa E3 del supresor de tumor de VonHipple-Lindau (pVHL). En condiciones hipóxicas, el HIFa no se degrada y un complejo de HIFa/p activo se acumula en el núcleo y activa la expresión de varios genes, incluidas las enzimas glucolíticas, el transportador de glucosa (GLUT)-1, la eritropoyetina (EPO) y el vascular endothelial growth factor (factor de crecimiento endotelial vascular - VEGF). (Maxwell y col, Nature, 1999, 399, 271-275).

La eritropoyetina (EPO) es una hormona de origen natural producida en respuesta a1HIFa, que estimula la producción de glóbulos rojos que transportan oxígeno por todo el cuerpo. La EPO usualmente es secretada por los riñones y la EPO endógena aumenta en condiciones de oxígeno reducido (hipoxia). Todos los tipos de anemia se caracterizan por una capacidad reducida de la sangre para transportar oxígeno y, por lo tanto, se acompañan de signos y síntomas similares, incluidos palidez de la piel y las membranas mucosas, debilidad, mareos, fatiga y somnolencia, lo que da como resultado una disminución de la calidad de vida. Los sujetos con anemia grave mostraron dificultad para respirar y anomalías cardíacas. La anemia usualmente se asocia a una afección en la que la sangre tiene deficiencia de glóbulos rojos o de hemoglobina.

Las condiciones isquémicas e hipóxicas son las principales causas de morbilidad y mortalidad. Las enfermedades cardiovasculares causan al menos 15 millones de fallecimientos cada año y son la causa del 30 % de los fallecimientos en el mundo. Entre las diversas enfermedades cardiovasculares, la cardiopatía isquémica y la enfermedad cerebrovascular causan aproximadamente el 17 % de los fallecimientos. Cada año, se notifican 1,3 millones de casos de infarto agudo de miocardio no mortal, lo que constituye una incidencia de aproximadamente 300 por cada 100.000 personas. Por otro lado, se estima que 5 millones de estadounidenses padecen flebotrombosis venosa cada año y aproximadamente 600.000 de estos casos provocan embolia pulmonar. Aproximadamente un tercio de los pacientes con embolia pulmonar finalmente fallecen, lo que convierte a la embolia pulmonar en la tercera causa más frecuente de fallecimiento en los Estados Unidos.

Actualmente, el tratamiento de las afecciones isquémicas e hipóxicas se centra en el alivio de los síntomas y el tratamiento de las afecciones patológicas. Por ejemplo, el tratamiento del infarto de miocardio incluye nitroglicerina y analgésicos para controlar el dolor y aliviar la carga de trabajo del corazón. Se usan otros medicamentos, incluidos digoxina, diuréticos, amrinona, betabloqueantes, agentes hipolipemiantes e inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, para estabilizar la afección, pero ninguna de estas terapias puede actuar directamente sobre el daño tisular causado por la isquemia y la hipoxia. En EP-2357175 se describen compuestos de isoquinolina para su uso en la mediación del factor inducible por hipoxia y para el tratamiento de afecciones asociadas a eritropoyetina mediante el aumento de la eritropoyetina endógena.

Debido a las deficiencias actuales en el tratamiento y en la producción y el uso de la EPO recombinante, todavía existe una necesidad de compuestos que sean eficaces en el tratamiento de afecciones relacionadas con la eritropoyetina, tales como anemia, incluidos anemia asociada a diabetes, anemia, úlceras, insuficiencia renal, cáncer, infecciones, diálisis, cirugía y quimioterapia, y afecciones que implican isquemia e hipoxia, tales como enfermedad arterial oclusiva, angina de pecho, infarto intestinal, infarto pulmonar, isquemia cerebral e infarto de miocardio. También existe la necesidad de compuestos que prevengan eficazmente el daño tisular causado por la isquemia, que se produce debido, por ejemplo, a ateroesclerosis, diabetes y trastornos pulmonares, tales como embolia pulmonar y similares. En resumen, existe la necesidad, en la técnica, de métodos y compuestos que modulen el HIF y/o la eritropoyetina endógena y que puedan usarse para tratar y prevenir trastornos asociados al HIF y asociados a la EPO, incluidas las afecciones asociadas a anemia, isquemia e hipoxia.

Resumen de la presente invención

En vista de los problemas técnicos anteriores, en la presente memoria, se describen un compuesto y una composición que comprende el mismo, que se pueden usar para regular el hypoxia inducible factor (factor inducible por hipoxia - HIF) y/o la endogenous erythropoietin (eritropoyetina endógena - EPO) y/o tener mejores propiedades farmacodinámicas/farmacocinéticas.

El objeto de la presente descripción es proporcionar una nueva clase de compuestos que se puedan usar para modular el hypoxia inducible factor (factor inducible por hipoxia - HIF) y/o la endogenous erythropoietin (eritropoyetina endógena - EPO) y/o tener mejores propiedades farmacodinámicas/farmacocinéticas.

En un primer aspecto, la presente invención se refiere a los compuestos presentados en las reivindicaciones adjuntas. También se presenta en la presente memoria un compuesto representado por la Fórmula (I), o una forma cristalina, una sal farmacéuticamente aceptable, un hidrato o un solvato del mismo,

Fórmula (I)

en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 son, cada uno independientemente, hidrógeno o deuterio; con la condición de que al menos uno de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 sea deuterio.

En una realización, R1 y R2 son deuterio.

En otra realización, R3, R4 y R5 son, cada uno, hidrógeno.

En otra realización, R6, R7 y R8 son, cada uno, hidrógeno.

En otra realización, R9, R10, R11, R12 y R13 son, cada uno, hidrógeno.

En otra realización, R9, R10, R11, R12 y R13 son, cada uno, deuterio.

En la presente memoria, se proporcionan compuestos seleccionados de, aunque no de forma limitativa, el grupo que consiste en los siguientes compuestos, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos:

En otra realización, el contenido del isótopo de deuterio en la posición deuterada es al menos mayor que el contenido natural del isótopo de deuterio (0,015 %), preferiblemente mayor de 30 %, más preferiblemente mayor de 50 %, más preferiblemente mayor de 75 %, más preferiblemente mayor de 95 % y más preferiblemente mayor de 99 %.

Específicamente, en la presente descripción, el contenido del isótopo de deuterio en cada posición deuterada de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 es de al menos 5 %, preferiblemente mayor de 10 %, más preferiblemente mayor de 15 %, más preferiblemente mayor de 20 %, más preferiblemente mayor de 25 %, más preferiblemente mayor de 30 %, más preferiblemente mayor de 35 %, más preferiblemente mayor de 40 %, más preferiblemente mayor de 45 %, más preferiblemente mayor de 50 %, más preferiblemente mayor de 55 %, más preferiblemente mayor de 60 %, más preferiblemente mayor de 65 %, más preferiblemente mayor de 70 %, más preferiblemente mayor de 75 %, más preferiblemente mayor de 80 %, más preferiblemente mayor de 85 %, más preferiblemente mayor de 90 %, más preferiblemente mayor de 95 % e incluso más preferiblemente mayor de 99 %.

En otra realización, en R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 del compuesto de Fórmula (I), al menos una R contiene deuterio y más preferiblemente dos R, más preferiblemente tres R, más preferiblemente cuatro R, más preferiblemente cinco R, más preferiblemente seis R, más preferiblemente siete R, más preferiblemente ocho R, más preferiblemente nueve R, más preferiblemente diez R, más preferiblemente once R, más preferiblemente doce R y más preferiblemente trece R contienen deuterio.

En otra realización, el compuesto no incluye un compuesto no deuterado.

También se presenta en la presente memoria un método para preparar una composición farmacéutica que comprende la etapa de: mezclar un vehículo farmacéuticamente aceptable y el compuesto, o una forma cristalina, una sal farmacéuticamente aceptable, un hidrato o un solvato del mismo, como se describe en el primer aspecto descrito en la presente memoria para formar una composición farmacéutica.

En un segundo aspecto, se proporciona en la presente memoria una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se describe en el primer aspecto descrito en la presente memoria.

Los vehículos farmacéuticamente aceptables que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria incluyen, aunque no de forma limitativa, agentes deslizantes, edulcorantes, diluyentes, conservantes, tintes/colorantes, potenciadores del sabor, tensioactivos, agentes hidratantes, dispersantes, disgregantes, agentes de suspensión, estabilizadores, agentes isotónicos, disolventes o emulsionantes.

La composición farmacéutica descrita en la presente memoria se puede formular en formulaciones sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimidos, pastillas, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, emulsiones, suspensiones, soluciones, supositorios, inyecciones, medicamentos inhalatorios, geles, microesferas, aerosoles y similares.

Las vías de administración típicas de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria incluyen, aunque no de forma limitativa, administración oral, rectal, transmucosa, entérica, tópica, transdérmica, por inhalación, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea e intravenosa. Se prefiere la administración oral o la administración por inyección.

La composición farmacéutica descrita en la presente memoria se puede fabricar mediante métodos conocidos en la técnica, tales como métodos de mezclado convencionales, métodos de disolución, métodos de granulación, métodos de preparación de pastillas recubiertas de azúcar, métodos de trituración fina, métodos de emulsificación, métodos de liofilización y similares.

Debe entenderse que, dentro del alcance de la presente descripción, las características técnicas anteriores descritas en la presente memoria y las características técnicas descritas específicamente a continuación (tales como los Ejemplos) se pueden combinar entre sí para constituir una solución técnica nueva o preferida. Debido a las limitaciones de espacio, estas no se repetirán aquí de forma exhaustiva.

Como se usa en la presente memoria, “ halógeno” significa F, Cl, Br e I, salvo que se indique lo contrario. Con mayor preferencia, un átomo de halógeno se selecciona de F, Cl y Br.

Como se usa en la presente memoria, salvo que se indique lo contrario, “deuterado” significa que uno o más hidrógenos en un compuesto o grupo se reemplaza/reemplazan por deuterio; deuterado puede ser monosustituido, disustituido, multisustituido o completamente sustituido por deuterio. Las expresiones “ sustituido con uno o más deuterios” y “deuterado una o más veces” se usan indistintamente.

Como se usa en la presente memoria, salvo que se indique lo contrario, “compuesto no deuterado” significa un compuesto que contiene deuterio en una relación atómica que no es superior al contenido natural de un isótopo de deuterio (0,015 %).

También se describen en la presente memoria compuestos isotópicamente marcados en la medida de los compuestos originales descritos en la presente memoria. Los ejemplos que se pueden enumerar como isótopos de los compuestos descritos en la presente memoria incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente. Los compuestos, o enantiómeros, diastereómeros, isómeros, o sales o solvatos farmacéuticamente aceptables descritos en la presente memoria, en los que están contenidos los isótopos anteriores o los isótopos de otro tipo, se encuentran dentro del alcance de la presente descripción. Ciertos compuestos isotópicamente marcados descritos en la presente memoria, tales como los radioisótopos de 3H y 14C también están entre ellos, y son útiles en los experimentos de distribución en tejidos de fármacos y sustratos. El tritio, es decir, 3H, y el carbono-14, es decir, 14C, son más fáciles de preparar y detectar y son la primera opción de los isótopos. Los compuestos isotópicamente marcados se pueden preparar usando los esquemas mostrados en los Ejemplos mediante métodos convencionales mediante el reemplazo de reactivos no isotópicos con reactivos isotópicamente marcados fácilmente disponibles.

Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales orgánicas e inorgánicas. Una clase preferida de sales es la sal formada por el compuesto descrito en la presente memoria con un ácido. Los ácidos adecuados para la formación de sales incluyen, aunque no de forma limitativa: ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fluorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico; ácidos orgánicos tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido pícrico, ácido benzoico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido P-toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalensulfónico; aminoácidos tales como prolina, fenilalanina, ácido aspártico y ácido glutámico. Otra clase preferida de sal es una sal de un compuesto descrito en la presente memoria con una base tal como una sal de metal alcalino (p. ej., sal de sodio o potasio), una sal de metal alcalinotérreo (p. ej., sal de magnesio o sal de calcio), una sal de amonio, (p. ej., sal de alcanolamonio inferior y otras sales farmacéuticamente aceptables de amina) tales como sal de metilamina, sal de etilamina, sal de propilamina, sal de dimetilamina, sal de trimetilamina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de terc-butilamina, sal de etilendiamina, sal de hidroxietilamina, sal de dihidroxietilamina, sal de trietanolamina y sales de amina formadas a partir de morfolina, piperazina y lisina, respectivamente.

El término “ solvato” se refiere a un complejo en el que un compuesto descrito en la presente memoria se coordina con una molécula de disolvente en una relación particular. “ Hidrato” se refiere a un complejo formado por coordinación de un compuesto descrito en la presente memoria con agua.

En la presente memoria, se describe un método para modular el HIF y/o la EPO que comprende estabilizar e1HIF y activar la expresión de genes regulados por HIF mediante la inhibición de la hidroxilación de HIFa. El método también se puede aplicar para prevenir, pretratar o tratar afecciones relacionadas con HIF y/o EPO, incluidos anemia, isquemia y afecciones hipóxicas.

La isquemia y la hipoxia son dos afecciones asociadas al HIF e incluyen, aunque no de forma limitativa, infarto de miocardio, isquemia hepática, isquemia renal y accidente cerebrovascular; trastornos vasculares periféricos, úlceras, quemaduras y heridas crónicas; embolia pulmonar; y lesión por isquemia-reperfusión, incluida, por ejemplo, lesión por isquemia-reperfusión asociada a cirugía y trasplante de órganos.

En la presente memoria, se describen métodos para tratar diversas afecciones de isquemia e hipoxia, particularmente usando los compuestos descritos en la presente memoria. En una realización, el método descrito en la presente memoria produce un beneficio terapéutico cuando se administra después de la isquemia o hipoxia. Por ejemplo, después de un infarto de miocardio, los métodos descritos en la presente memoria reducen drásticamente la morbilidad y la mortalidad y mejoran significativamente la estructura y el rendimiento cardíacos. Por otro lado, el método descrito en la presente memoria mejora la función hepática cuando se administra después de una lesión hepatotóxica-isquémica. La hipoxia es un componente importante de la enfermedad hepática, especialmente en una enfermedad hepática crónica asociada a compuestos hepatotóxicos, tales como etanol. Además, se sabe que la expresión génica inducida por HIFa aumenta en la enfermedad hepática alcohólica, tal como la sintasa de óxido nítrico y el transportador de glucosa-1.

Por consiguiente, en la presente memoria, se describe un método para tratar una afección asociada a isquemia o hipoxia, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de manera individual o en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En una realización, el compuesto se administra inmediatamente después de la afección isquémica, tal como infarto de miocardio, embolia pulmonar, infarto intestinal, accidente cerebrovascular y lesión renal por isquemiareperfusión. En otra realización, el compuesto se administra a un paciente al que le han diagnosticado una afección asociada al desarrollo de isquemia crónica, tal como cirrosis cardiógena, degeneración macular, embolia pulmonar, insuficiencia respiratoria aguda, síntomas de dificultad respiratoria neonatal e insuficiencia cardíaca congestiva.

También se describen en la presente memoria métodos para tratar pacientes que tienen riesgo de desarrollar afecciones isquémicas o hipóxicas usando los compuestos descritos en la presente memoria, tales como los individuos con alto riesgo de ateroesclerosis. Los factores de riesgo de la ateroesclerosis incluyen, por ejemplo, hiperlipidemia, tabaquismo, hipertensión, diabetes, hiperinsulinemia y obesidad abdominal. Por consiguiente, en la presente memoria, se describe un método para prevenir el daño tisular isquémico, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de manera individual o en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En una realización, los compuestos pueden administrarse basándose en afecciones predisponentes, tales como hipertensión, diabetes, enfermedad arterial oclusiva, insuficiencia venosa crónica, enfermedad de Raynaud, úlceras cutáneas crónicas, esclerosis, insuficiencia cardíaca congestiva y esclerosis sistémica.

En una realización particular, el método se usa para aumentar la formación de vasos sanguíneos y/o la formación de tejido de granulación en tejido dañado, heridas y úlceras. Por ejemplo, se ha demostrado que los compuestos descritos en la presente memoria son eficaces para estimular la formación de tejido de granulación durante la cicatrización de heridas. El tejido de granulación contiene vasos sanguíneos permeables recién formados y una matriz de proteína en plasma temporal, tal como fibrinógeno y fibronectina en plasma. La liberación de los factores de crecimiento de células inflamatorias, plaquetas y células endoteliales activadas estimula la migración y proliferación de fibroblastos y células endoteliales en el tejido de granulación. Se puede producir una úlcera si se ve afectada la vascularización o la estimulación nerviosa. El método descrito en la presente memoria promueve eficazmente la formación de tejido de granulación. Por tanto, se describe en la presente memoria un método para tratar un paciente que tiene daño tisular debido, por ejemplo, a un infarto, que tiene una herida inducida, por ejemplo, por trauma o lesión, o que tiene una herida crónica o úlcera debido a una cierta afección (p. ej., diabetes), que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de manera individual o en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

También se describe en la presente memoria un método para pretratar un sujeto con el compuesto descrito en la presente memoria para reducir o prevenir la aparición de daño tisular asociado a isquemia o hipoxia. Cuando se administra inmediatamente antes de una afección que implica isquemia o hipoxia, los métodos descritos en la presente memoria producen una ventaja terapéutica. Por ejemplo, el método descrito en la presente memoria se aplicó antes de la inducción del infarto de miocardio para mostrar una mejora estadísticamente significativa en la estructura y el rendimiento cardíacos. Por otro lado, cuando se administra inmediatamente antes y durante la lesión por isquemia-reperfusión, el método descrito en la presente memoria produce una ventaja terapéutica, reduciendo significativamente los parámetros de diagnóstico asociados a la insuficiencia renal.

Por lo tanto, en la presente memoria, se describe un método para pretratar un sujeto para reducir o prevenir el daño tisular asociado a isquemia o hipoxia, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de manera individual o con un excipiente farmacéuticamente aceptable, a un paciente con antecedentes de una afección isquémica, tal como un infarto de miocardio, o un paciente con una afección isquémica inminente, tal como una angina de pecho. En otra realización, el compuesto puede administrarse sobre la base de parámetros físicos que sugieran una posible isquemia, p. ej., para individuos con anestesia general o que trabajan temporalmente a grandes altitudes. En otra realización más, el compuesto se puede usar en el trasplante de órganos para pretratar los donantes de órganos o para mantener un órgano extirpado antes del trasplante en un sujeto.

Los estudios anteriores han demostrado que ciertos compuestos usados en los métodos descritos en la presente memoria son potentes inhibidores de la procolágeno prolil 4-hidroxilasa. Aunque se reconoce que el infarto inicial o la recuperación de la herida requiere la deposición de tejido conjuntivo dentro del área de necrosis, la presente descripción no demuestra efectos secundarios en el tratamiento de la cicatrización. Por tanto, basándose en los beneficios proporcionados por ciertos compuestos descritos en la presente memoria en el tratamiento y la prevención del daño tisular hipóxico y la fibrosis, la presente descripción abarca un método de “terapia dual” para tratar o prevenir afecciones que implican isquemia o hipoxia, incluidas isquemia o hipoxia asociadas a fibrosis reactiva concomitante, tal como infarto de miocardio e insuficiencia cardíaca congestiva consiguiente. El método puede usar un compuesto que inhiba más de una 2-oxoglutarato dioxigenasa que tenga la misma especificidad o diferentes especificidades, tal como HIF prolil hidroxilasa y procolágeno prolil 4-hidroxilasa. Alternativamente, el método puede usar una combinación de compuestos en donde cada compuesto inhiba específicamente solo una 2-oxoglutarato dioxigenasa, p. ej., un compuesto inhibe específicamente la HIF prolil hidroxilasa y el segundo compuesto inhibe específicamente la procolágeno prolil 4-hidroxilasa.

Los compuestos descritos en la presente memoria pueden inhibir una o más 2-oxoglutarato dioxigenasas. En una realización, el compuesto inhibe al menos dos elementos de la familia de la 2-oxoglutarato dioxigenasa que tienen las mismas o diferentes especificidades, tales como HIF prolil hidroxilasa y HIF asparagina-hidroxilasa. En otra realización, el compuesto es específico para una 2-oxoglutarato dioxigenasa, tal como HIF prolil hidroxilasa, y muestra poca o ninguna especificidad para otros elementos de la familia.

El compuesto se puede administrar en combinación con una diversidad de otros métodos terapéuticos. En una realización, el compuesto se administra con otro inhibidor de la 2-oxoglutarato dioxigenasa, en donde ambos compuestos tienen diferentes especificidades para los elementos individuales de la familia de la 2-oxoglutarato dioxigenasa. Los dos compuestos se pueden administrar al mismo tiempo en una relación entre sí. La determinación de la proporción adecuada para un transcurso de tratamiento dado o un sujeto particular se encuentra dentro del conocimiento de la técnica. Alternativamente, los dos compuestos se pueden administrar de forma continua durante el transcurso del tratamiento, por ejemplo, después de un infarto de miocardio. En una realización particular, un compuesto inhibe específicamente la actividad de la HIF prolil hidroxilasa y el segundo compuesto inhibe específicamente la actividad de la procolágeno prolil 4-hidroxilasa. En otra realización particular, un compuesto inhibe específicamente la actividad de la HIF prolil hidroxilasa y el segundo compuesto inhibe específicamente la actividad de la HIF asparaginil-hidroxilasa. En otra realización, el compuesto se administra con otro agente terapéutico que tiene un modo de acción diferente, tal como un ACE inhibitor (inhibidor de la ACE - ACEI)), un angiotensin-II receptor blocker (bloqueante del receptor de la angiotensina-II - ARB), estatina, agentes diuréticos, digoxina, carnitina, etc.

En la presente memoria, se describen métodos para aumentar la eritropoyetina endógena (EPO). Estos métodos pueden aplicarse in vivo, tal como en plasma, o in vitro, por ejemplo, en un medio de cultivo celular acondicionado. La presente descripción proporciona además métodos para aumentar los niveles de la EPO endógena para prevenir, pretratar o tratar afecciones relacionadas con la EPO, incluidas, por ejemplo, afecciones asociadas a anemia y trastornos neurológicos. Las afecciones relacionadas con la anemia incluyen, por ejemplo, enfermedad renal aguda o crónica, diabetes, cáncer, úlceras, infecciones víricas (p. ej., VIH, bacterias o parásitos), inflamación y similares. Las afecciones de anemia pueden incluir, además, afecciones asociadas a procedimientos o tratamientos que incluyen, por ejemplo, radioterapia, quimioterapia, diálisis y cirugía. Los trastornos relacionados con la anemia incluyen, de forma adicional, anomalías de hemoglobina y/o eritrocitos, que se encuentran, por ejemplo, en afecciones, tales como anemia microcítica, anemia hipocrómica, anemia aplásica y similares.

La presente descripción se puede usar para aumentar profiláctica o simultáneamente la EPO endógena en un sujeto que se someta a un tratamiento o procedimiento particular, tal como los pacientes anémicos infectados por VIH que reciben tratamiento con azidotimidina (zidovudina) u otros inhibidores de la transcriptasa inversa, los pacientes con cáncer anémico que reciben productos quimioterapéuticos cíclicos que contienen cisplatino o que no contienen cisplatino o los pacientes anémicos o no anémicos que tienen programada una cirugía. Los métodos para aumentar la EPO endógena también se pueden usar para prevenir, pretratar o tratar afecciones relacionadas con la EPO asociadas a daño nervioso o degeneración del tejido nervioso, incluidos, aunque no de forma limitativa, accidente cerebrovascular, trauma, epilepsia, lesión de la médula espinal, y trastornos neurodegenerativos.

Además, el método puede usarse para aumentar los niveles de EPO endógena en pacientes anémicos o no anémicos que tienen programada una cirugía para reducir la necesidad de transfusiones de sangre exógena o para facilitar el almacenamiento de sangre antes de la cirugía. Una pequeña reducción en el hematocrito de la sangre que se produce típicamente después de la donación de sangre autógena antes de la cirugía no estimula el aumento de la EPO endógena o la eritropoyesis compensatoria. Sin embargo, la estimulación preoperatoria de la EPO endógena aumentará eficazmente la masa de glóbulos rojos y el volumen de sangre autógena, al tiempo que mantendrá los niveles de hematocrito superiores, y el método se incluye específicamente en la presente memoria. En algunas poblaciones quirúrgicas, particularmente en individuos con una pérdida de sangre quirúrgica mayor de 2 litros, el método descrito en la presente memoria puede aplicarse para reducir la exposición a sangre alógena.

Los métodos descritos en la presente memoria también pueden usarse para potenciar el rendimiento atlético, mejorar la capacidad de ejercicio y promover o potenciar el acondicionamiento aeróbico. Por ejemplo, un atleta puede usar el método para promover el entrenamiento y el soldado puede usar el método para mejorar, por ejemplo, la resistencia y la paciencia.

Se ha demostrado que los métodos descritos en la presente memoria aumentan el contenido de eritropoyetina endógena en el medio de cultivo en el que se cultivan las células in vitro y en el plasma de animales tratados in vivo. Aunque el riñón es una fuente importante de eritropoyetina en el cuerpo, otros órganos, inluidos el cerebro, el hígado y la médula ósea, pueden sintetizar y sintetizan la eritropoyetina con una estimulación adecuada. El uso de los métodos descritos en la presente memoria puede aumentar la expresión de la eritropoyetina endógena en múltiples órganos corporales, incluidos el cerebro, el riñón y el hígado. De hecho, el método descrito en la presente memoria incluso aumenta el contenido de eritropoyetina endógena en animales que se someten a nefrectomía bilateral.

El método descrito en la presente memoria demuestra que el contenido de eritropoyetina puede aumentarse incluso cuando la función renal se ve afectada. Aunque la presente descripción no está limitada por el mecanismo de producción de eritropoyetina, la disminución en la secreción de eritropoyetina que se observa típicamente durante la insuficiencia renal puede atribuirse a la hiperoxia causada por un aumento de flujo/perfusión en el tejido renal.

Los métodos descritos en la presente memoria pueden aumentar los niveles de hematocrito y hemoglobina en sangre en un animal tratado in vivo. Dado que el aumento de la EPO en plasma, el hematocrito y la hemoglobina en sangre producidos por los compuestos usados en los métodos descritos en la presente memoria es sensible a la dosis, se puede determinar que la pauta posológica produce un nivel de respuesta constante y controlado de los compuestos descritos en la presente memoria. Por otro lado, el tratamiento con los compuestos descritos en la presente memoria puede tratar la anemia, tal como la anemia inducida por compuestos tóxicos, tales como el agente quimioterapéutico cisplatino, o la anemia debida a la pérdida de sangre, tal como traumatismo, lesión, parásito o cirugía.

En los animales tratados con los compuestos descritos en la presente memoria, hay un aumento en el porcentaje de glóbulos rojos inmaduros circulantes (reticulocitos) en la sangre antes de que aumenten el hematocrito y la hemoglobina en sangre. Por lo tanto, la presente descripción abarca el uso de un compuesto de la presente descripción en un método para aumentar el contenido de reticulocitos en la sangre de un animal para producir un lisado de reticulocitos acelular (como se describe por Pelham y Jackson en Eur. J. Biochem. 1976, 67, 247-256). Al tratar con el compuesto descrito en la presente memoria de manera individual o en combinación con otro compuesto, tal como acetilfenilhidrazina o similares, aumenta el contenido de reticulocitos circulantes en los animales (p. ej., conejos, etc.).

En comparación con la técnica anterior, los efectos beneficiosos de la presente descripción son que los compuestos descritos en la presente memoria pueden usarse para modular el hypoxia inducible factor (factor inducible por hipoxia - HIF) y/o la endogenous erythropoietin (eritropoyetina endógena - EPO). El metabolismo del compuesto en el organismo se altera mediante técnicas de deuteración para dar al compuesto mejores características de parámetros farmacocinéticos. En este caso, la dosis puede cambiarse y puede formarse una formulación de acción prolongada para mejorar la aplicabilidad. El uso de deuterio para reemplazar los átomos de hidrógeno en el compuesto puede aumentar la concentración de fármaco del compuesto en los animales debido al efecto de su isotópico de deuterio, para mejorar la eficacia del fármaco. La sustitución de átomos de hidrógeno en compuestos por deuterio puede aumentar la seguridad de los compuestos debido a la inhibición de ciertos metabolitos.

Descripción detallada de las realizaciones

El método para preparar los compuestos de Fórmula (I) según la presente descripción se describirá más específicamente a continuación, pero estos métodos específicos no imponen ninguna limitación sobre la presente descripción. Los compuestos descritos en la presente memoria también se pueden preparar por comodidad de uso combinando varios métodos de síntesis descritos en esta memoria descriptiva o conocidos en la técnica, y dichas combinaciones pueden ser realizadas fácilmente por el experto en la técnica a la que pertenece la presente descripción.

En general, en un proceso de preparación, cada reacción se lleva a cabo, usualmente, en un disolvente inerte de temperatura ambiente a temperatura de reflujo (p. ej., 0 °C a 100 °C, preferiblemente 0 °C a 80 °C). El tiempo de reacción es habitualmente de 0,1 a 60 horas, preferiblemente de 0,5 a 24 horas.

Ejemplo 1: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-fenoxi-3-isoquinolinil)carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 11)

Etapa 1: Síntesis de 4-bromo-2-metilbenzoato de metilo (Compuesto 2).

En un baño de hielo, se añadió gota a gota cloruro de tionilo (5,50 ml, 70,00 mmol) a una solución de ácido 4-bromo-2-metilbenzoico (5,00 g, 23,2 mmol) en metanol (60 ml). Después de completar la adición, la solución de reacción se agitó a reflujo durante 5 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El concentrado se ajustó a neutro con una solución saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentró a presión reducida para dar 4,3 g de un aceite de color amarillo claro. Rendimiento: 81,1 %. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) (5/ppm) 7,79 (d, J=8,3 Hz, 1 H), 7,45-7,35 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,58 (s, 3H).

Etapa 2: Síntesis de 2-metil-4-fenoxibenzoato de metilo (Compuesto 3).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió 1,4-dioxano (30 ml) a una mezcla de 4-bromo-2-metilbenzoato de metilo (4,30 g, 18,80 mmol), fenol (1,90 g, 20,00 mmol), Cs2CO3 (18,40 g, 56,40 mmol), yoduro de cobre (716 mg, 3,76 mmol) y N,N-dimetilglicina (775 mg, 7,52 mmol) y la solución de reacción se agitó a 100 °C durante la noche, se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró a presión reducida. El concentrado se lavó con acetato de etilo (100 ml) y agua (60 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El concentrado se sometió a separación en columna para obtener 3,60 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 79,1 %. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) (5/ppm) 7,97-7,93 (m, 1H), 7,44-7,37 (m, 2H), 7,20 (dd, J=10,7, 4,2 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=8,5, 0,9 Hz, 2H), 6,88-6,79 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,60 (s, 3H).

Etapa 3: Síntesis de 2-(bromometil)-4-fenoxibenzoato de metilo (Compuesto 4).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió peróxido de benzoílo (BPO, 638 mg, 2,60 mmol) a una solución de 2-metil-4-fenoxibenzoato de metilo (9,10 g, 37,60 mmol) y N-bromosuccinimida (NBS, 7,02 g, 39,5 mmol) en tetracloruro de carbono (160 ml). La reacción se agitó a reflujo durante 6 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera, respectivamente, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La mezcla se concentró a presión reducida y el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 10,9 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 90,3 %.

Etapa 4: Síntesis de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino) metil)-4-fenoxibenzoato de metilo (Compuesto 5)

Se añadieron yoduro de sodio (10,40 g, 69,50 mmol) y carbonato de sodio (9,60 g, 69,50 mmol) a una solución de 2-(bromometil)-4-fenoxibenzoato de metilo (14,90 mg, 46,00 mmol) y p-tosilglicina metil éster (12,40 g, 51,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (118 ml) a temperatura ambiente y se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se interrumpió con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó, respectivamente, con agua (100 ml) y salmuera (100 ml x 2) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la concentración a presión reducida, el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 18,9 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 85,0 %. LC-MS (APCI): m/z = 484,1 (M+1).

Etapa 5: Síntesis de 4-hidroxi-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 6)

En un baño de hielo, una solución de metóxido de sodio (12,70 g. 234,60 mmol) en metanol (40 ml) se añadió gota a gota a una solución de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino)metil)-4-fenoxibenzoato de metilo (18,90 g, 39,10 mmol) en dimetilsulfóxido (82 ml). Después de completar la adición, la solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El metanol se retiró a presión reducida, el concentrado se diluyó con agua (50 ml) y el pH se ajustó a aproximadamente pH 10 con ácido clorhídrico diluido 1 N. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3) y la capa orgánica se lavó con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), respectivamente, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la concentración a presión reducida, el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 9,1 g de un sólido de color blanco. Rendimiento: 78,8 %. LC-MS (APCI): m/z = 296,1 (M+1).

Etapa 6: Síntesis de 1-((dimetilamino)metil)-4-hidroxi-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 8).

A temperatura ambiente, se añadió lentamente gota a gota N,N,N',N'-tetrametilmetilendiamina (1,08 g, 10,60 mmol) a una solución de 4-hidroxi-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (2,60 g, 8,80 mmol) en ácido acético (4 ml). La reacción se calentó hasta 55 °C y se agitó durante 6 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se usó directamente para la siguiente reacción. LC-MS (APCI): m/z = 353,1 (M+1).

Etapa 7: Síntesis de 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 9).

Se añadió lentamente gota a gota anhídrido acético (2,50 g, 24,60 mmol) a la solución de reacción anterior a temperatura ambiente, mientras se mantuvo la temperatura a 50 °C o menos. Después de completar la adición, la solución de reacción se calentó hasta 100 0C y se agitó durante la noche. Después del enfriamiento hasta 60 0C, se añadió lentamente 20 ml de agua y, después, se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró y la torta se lavó con agua. La torta de filtro se disolvió en 20 ml de diclorometano y 10 ml de agua, y se agitó durante 5 minutos y la fase orgánica se separó. Se añadió morfolina (0,80 g, 8,80 mmol) a la fase orgánica en un baño de hielo y la reacción se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se mezcló con acetona (2 ml) y metanol (2 ml) y el sólido precipitó en un baño de hielo. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 1 ml) y se secó al vacío para dar 1,80 g de un sólido de color blanco. Rendimiento: 55,7 %. lC-MS (APCI): m/z = 367,1 (M+1).

Etapa 8: Síntesis de 4-hidroxi-1-metil-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 10)

Se disolvió 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-fenoxiisoquinolin-3- carboxilato de metilo (1,30 g, 3,50 mmol) en acetato de etilo anhidro (26 ml). Se añadieron carbonato de sodio (186 mg, 1,80 mmol) y Pd/C (10 %, 170 mg) y la solución de reacción se agitó en una atmósfera de hidrógeno a 80 °C durante la noche. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto en bruto se separó en columna para dar 600 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 55,4 %. LC-MS (APCI): m/z = 310,1 (M+1).

Etapa 9: Síntesis de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-fenoxi-3-isoquinolinil)carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 11)

Se añadió metóxido de sodio (220 mg, 4,00 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-metil-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (120 mg, 0,39 mmol) y glicina-d5 deuterada (100 mg, 1,20 mmol) en metanol-d4 deuterado (3 ml) a temperatura ambiente y la solución de reacción se selló en un tubo para reaccionar a 110 °C durante la noche. La solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 10 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 5 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (5 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con 0,5 ml de ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó con agua (3 x 1 ml) y acetona (fría, 2 x 0,5 ml) y se secó al vacío para proporcionar 60 mg de un sólido de color blanquecino. Rendimiento: 45,2 %, LC-MS (APCI): m/z = 355,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) (5/ppm) 13,32 (s, 1H), 12,80 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,25 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,70 (s, 3H).

Referencia

Ejemplo 2: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-d-metil-7-fenoxi-3-isoquinolinil)carbonil] glicina (Compuesto 13)

Etapa 1: Síntesis de 4-hidroxi-1-(d-metil)-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 12).

Se disolvió 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-fenoxiisoquinolin-3- carboxilato de metilo (250 mg, 0,68 mmol) en acetato de etilo seco (5 ml). Se añadieron carbonato de sodio (40 mg, 0,34 mmol) y Pd/C (50 % en D2O, 30 mg) y la solución de reacción se agitó en una atmósfera de hidrógeno a 80 °C durante la noche. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto en bruto se separó en columna para dar 130 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 61,6 %. LC-MS (APCI): m/z = 311,1 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) (5/ppm) 11,50 (s, 1H), 8,34 (m, 1H), 7,60 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,51 (m, 3H), 7,26 (t, J=7,4 Hz, 1 H), 7,19 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 2,63 (d, J= 5,3 Hz, 2H).

Etapa 2: Síntesis de N-[(4-hidroxi-1-(-d-metil)-7-fenoxi-3-isoquinolinil)carbonil] glicina (Compuesto 13).

Se añadió metóxido de sodio (226,8 mg, 4,20 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-(metil-d)-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (130 mg, 0,42 mmol) y glicina (94,5 mg, 1,30 mmol) en metanol deuterado (3 ml) a temperatura ambiente. La solución de reacción se selló en un tubo para reaccionar a 110 °C durante la noche. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 1 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 3 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (3 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó, respectivamente, con agua (3 x 1 ml) y acetona (fría, 2 x 0,5 ml) y se secó al vacío para dar 29 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 19,5 %, LC-MS (APCI): m/z = 354,1 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) (5/ppm) 13,32 (s, 1H), 12,79 (s, 1H), 9,11 (t, J=6,1 Hz, 1H), 8,30 (m, 1H)), 7,62 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,51 (m, 3H), 7,25 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,18 (d, J=7,8 Hz, 2H), 4,04 (d, J) =6,1 Hz, 2H), 2,69 (s, 2H).

Referencia

Ejemplo 3: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(2,4,6-d3-fenoxi))-3-isoquinolinil) carbonil]glicina (Compuesto 23)

Etapa 1: Síntesis de 2,4,6-d3-fenol (Compuesto 15).

Se añadió NaOD (40 % en D2O, 3,00 g, 30,00 mmol) a fenol (2,80 g, 30,30 mmol) en agua deuterada (44 ml) a temperatura ambiente y se sometió a microondas a 180 °C durante 45 minutos. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, se añadió HCl (0,5 M, 60 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 2). La capa orgánica se lavó con salmuera (50 ml) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la concentración a presión reducida, el concentrado se sometió a separación en columna para dar 2,9 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 100 %. LC-MS (APCI): m/z = 96,1 (M-1); 1H RMN (300 MHz, CDG3) (5/ppm) 7,26 (s, 2H), 6,85 (s, 1H).

Etapa 2: Síntesis de 2-metil-4-(2,4,6-d3-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 16).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió 1,4-dioxano (37 ml) a una mezcla de 4-bromo-2-metilbenzoato de metilo (5,40 g, 23,6 mmol), 2,4,6<Menol (2,30 g, 23,6 mmol), Cs2CO3 (23,1 g, 70,80 mmol), yoduro de cobre (CuI, 900 mg, 4,70 mmol) y N,N-dimetil glicina (1,20 g, 16,80 mmol). La solución de reacción se agitó a 100 0C durante la noche, se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró a presión reducida. El concentrado se lavó con acetato de etilo (100 ml) y agua (60 ml) y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El concentrado se sometió a separación en columna para obtener 3,40 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 58,7 %.

Etapa 3: Síntesis de 2-(bromometil)-4-(2,4,6-d3-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 17).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió peróxido de benzoílo (BPO, 170,8 mg, 0,70 mmol) a una solución de 2-metil-4-(2,4,6-d3-fenoxi)-benzoato de metilo (3,40 g, 14,10 mmol) y N-bromosuccinimida (NBS, 2,38 g, 13,40 mmol) en tetracloruro de carbono (58 ml) y se agitó a reflujo durante la noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se lavó, respectivamente, con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la concentración a presión reducida, el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 2,90 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 63,5 %.

Etapa 4: Síntesis de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino) metil)-4-(2,4,6-d3-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 18).

Se añadió yoduro de sodio (2,00 g, 13,40 mmol) y carbonato de potasio (1,85 g, 13,40 mmol) a 2-(bromometil)-4-(2,4,6-d3-fenoxi)-benzoato de metilo (2,90 g, 8,95 mmol) y p-toluenosulfonil glicina metil éster (2,40 g, 9,85 mmol) en N,N-dimetilformamida (23 ml) a temperatura ambiente y se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 6 horas. La reacción se interrumpió con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). La fase orgánica se lavó, respectivamente, con agua (50 ml) y salmuera (50 ml x 2) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La mezcla se concentró a presión reducida y el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 4,20 g de un sólido de color amarillo. Rendimiento: 96,4 %. LC-MS (APCI): m/z = 487,1 (M+1).

Etapa 5: Síntesis de 4-hidroxi-7-(2,4,6-d3-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 19).

En un baño de hielo, una solución de metóxido de sodio (3,02 g, 55,90 mmol) en metanol-d (9 ml) se añadió gota a gota a una solución de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino)metil)-4-(2,4,6-d3-fenoxi)-benzoato de metilo (4,20 g, 8,60 mmol) en dimetilsulfóxido (18 ml). Después de completar la adición, la solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El metanol se retiró a presión reducida, el concentrado se diluyó con agua (50 ml) y el pH se ajustó a aproximadamente pH 10 con ácido clorhídrico diluido 1 N. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3) y la capa orgánica se lavó con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), respectivamente, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la concentración a presión reducida, el concentrado se separó en columna para dar 2,50 g de un sólido de color blanco. Rendimiento: 96,6 %. LC-MS (a Pc I): m/z = 299,1 (M+1).

Etapa 6: Síntesis de 1-((dimetilamino)metil)-4-hidroxi-7-(2,4,6-d3-fenoxi)-quinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 20).

A temperatura ambiente, se añadió lentamente gota a gota N,N,N',N'-tetrametilmetilendiamina (830 mg, 7,80 mmol) a una solución de 4-hidroxi-7-(2,4,6-d3-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (2,00 g, 6,70 mmol) en ácido acético (4 ml). La reacción se calentó hasta 55 °C y se agitó durante 6 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se usó directamente para la siguiente reacción. LC-MS (APCI): m/z = 356,2 (M+1).

Etapa 7: Síntesis de 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-((2,4,6-d3-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 21).

Se añadió lentamente gota a gota anhídrido acético (1,80 g, 16,50 mmol) a la reacción anterior a temperatura ambiente, mientras se mantuvo la temperatura a 50 °C o menos. Después de completar la adición, la solución de reacción se calentó hasta 100 0C y se agitó durante la noche. Después del enfriamiento hasta 60 0C, se añadió lentamente 25 ml de agua y la temperatura se redujo hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró y la torta se lavó con agua. La torta de filtro se disolvió en 25 ml de diclorometano y 12 ml de agua, se agitó durante 5 minutos y la fase orgánica se separó. Se añadió morfolina (0,90 g) a la fase orgánica en un baño de hielo y se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se mezcló con acetona (2 ml) y metanol (2 ml) y el sólido precipitó en un baño de hielo. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 1 ml) y se secó al vacío para dar 1,20 g de un sólido de color blanco. Rendimiento: 55,9 %. LC-MS (APCI): m/z = 370,1 (M+1).

Etapa 8: Síntesis de 4-hidroxi-1-metil-7-(2,4,6-d3-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 22).

Se disolvió 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-(fenil-2,4,6-d3-oxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (300 mg, 0,81 mmol) en acetato de etilo anhidro (6 ml). Se añadieron carbonato de sodio (53 mg, 0,40 mmol) y Pd/C (10 %, 45 mg) y la reacción se agitó en una atmósfera de hidrógeno a 80 °C durante la noche. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto en bruto se separó en columna para dar 220 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 86,90 %. LC-MS (APCI): m/z = 313,1 (M+1).

Etapa 9: Síntesis de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(2,4,6-d3-fenoxi)-3-(3-isoquinolinil) carboniljglicina (Compuesto 23). Se añadió metóxido de sodio (383,8 mg, 7,10 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-metil-7-(2,4,6-d3-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (220 mg, 0,70 mmol) y glicina-d5 deuterada (169,2 mg, 2,12 mmol) en metanold deuterado (4,8 ml) a temperatura ambiente y se selló en un tubo para reaccionar a 110 °C durante la noche. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 3 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 3 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (3 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó, respectivamente, con agua (3 x 2 ml) y acetona (fría, 2 x 2 ml) y se secó al vacío para dar 126 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 49,7 %, LC-MS (APCI): m/z = 356,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) (5/ppm) 13,34 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J=2,3 Hz, 1H), 7,53 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,48 (d, J=4,0 Hz, 2H), 4,04 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,70 (s, 3H).

Ejemplo 4: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(d5-fenoxi)-3-isoquinolinil) carboniljglicina

Etapa 1: Síntesis de d5-fenol (Compuesto 24).

Se añadió Pt/C al 5 % (600 mg) a fenol (3,00 g, 31,90 mmol) en agua pesada (100 ml) a temperatura ambiente. Se usó H2 para desplazar el aire del sistema de reacción, y la reacción se selló en un tubo para reaccionar a temperatura ambiente durante 48 horas. La mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La concentración a presión reducida dio 3,0 g de un aceite de color pardo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación. LC-MS (APCI): m/z = 98,1 (M-1). Etapa 2: Síntesis de 2-metil-4-(d5-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 25).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió 1,4-dioxano (50 ml) a una mezcla de 4-bromo-2-metilbenzoato de metilo (7,60 g, 33,3 mmol), ds-fenol (3,00 g, 30,3 mmol), Cs2CO3 (29,60 g, 100 mmol), yoduro de cobre (1,30 g, 6,66 mmol) y N,N-dimetilglicina (1,70 g, 16,50 mmol) y la reacción se agitó a 100 °C durante la noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró a presión reducida. El concentrado se lavó con acetato de etilo (100 ml) y agua (60 ml) y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El concentrado se sometió a separación en columna para obtener 4,30 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 68,7 %.

Etapa 3: Síntesis de 2-(bromometil)-4-(d5-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 26).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió peróxido de benzoílo (BPO, 296 mg, 1,23 mmol) a una solución de 2-metil-4-(d5-fenoxi)-benzoato de metilo (4,30 g, 17,50 mmol) y N-bromosuccinimida (NBS, 3,27 g, 18,30 mmol) en tetracloruro de carbono (75 ml) y se agitó a reflujo durante la noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se lavó, respectivamente, con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La mezcla se concentró a presión reducida y el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 4,10 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 71,8 %.

Etapa 4: Síntesis de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino) metil)-4-(d5-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 27).

Se añadió yoduro de sodio (2,80 g, 18,90 mmol) y carbonato de potasio (2,60 g, 18,90 mmol) a 2-(bromometil)-4-(d5-fenoxi)-benzoato de metilo (4,10 g, 12,60 mmol) y p-toluenosulfonil glicina metil éster (3,37 g, 13,90 mmol) en N,N-dimetilformamida (35 ml) a temperatura ambiente. La reacción se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se interrumpió con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). La fase orgánica se lavó, respectivamente, con agua (50 ml) y salmuera (50 ml x 2) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La mezcla se concentró a presión reducida y el concentrado se sometió a separación en columna para dar 5,4 g de un sólido de color amarillo. Rendimiento: 87,7 %. LC-MS (APCI): m/z = 489,1 (M+1).

Etapa 5: Síntesis de 4-hidroxi-7-(d5-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 28).

En un baño de hielo, una solución de metóxido de sodio (3,90 g. 71,90 mmol) en metanol (11 ml) se añadió gota a gota a una solución de 2-2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino)metil)-4-(d5-fenoxi)-benzoato de metilo (5,40 g, 11,1 mmol) en dimetilsulfóxido (23 ml). Después de completar la adición, la solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El metanol se retiró a presión reducida, el concentrado se diluyó con agua (50 ml) y el pH se ajustó a aproximadamente pH 10 con ácido clorhídrico diluido 1 N. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3) y la capa orgánica se lavó con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), respectivamente, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la concentración a presión reducida, el concentrado se separó en columna para dar 3,00 g de un sólido de color blanco. Rendimiento: 90,2 %. LC-MS (APCI): m/z = 301,1 (M+1).

Etapa 6: Síntesis de 1 -((dimetilamino)metil)-4-hidroxi-7-(d5-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 29).

A temperatura ambiente, se añadió lentamente gota a gota N,N,N',N'-tetrametilmetilendiamina (1,23 g, 12,00 mmol) a una solución de 4-hidroxi-7-(d5-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (3,00 g, 10,00 mmol) en ácido acético (5 ml), la reacción se calentó hasta 55 °C y la solución de reacción se agitó durante 6 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se usó directamente para la siguiente reacción. LC-MS (APCI): m/z = 358,1 (M+1).

Etapa 7: Síntesis de 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-(d5-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 30).

Se añadió lentamente gota a gota anhídrido acético (2,50 g, 24,60 mmol) a la reacción anterior a temperatura ambiente, mientras se mantuvo la temperatura a 50 0C o menos. Después de completar la adición, la solución de reacción se calentó hasta 100 0C y se agitó durante la noche. Después del enfriamiento hasta 60 0C, se añadió lentamente 25 ml de agua y la temperatura se redujo hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró y la torta de filtro se lavó con agua. La torta se disolvió en 25 ml de diclorometano y 12 ml de agua, se agitó durante 5 minutos y la fase orgánica se separó. Se añadió morfolina (0,90 g) a la fase orgánica en un baño de hielo y la reacción se agitó durante 2 horas. La solución de reacción se concentró a presión reducida, se mezcló con acetona (2 ml) y metanol (2 ml) y el sólido precipitó en un baño de hielo. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 1 ml) y se secó al vacío para dar 2,08 g de un sólido de color blanco. Rendimiento: 55,9 %. LC-MS (APCI): m/z = 372,1 (M+1).

Etapa 8: Síntesis de 4-hidroxi-1-metil-7-(fenil-d5-oxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 31).

Se disolvió 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-(d5-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (500 mg, 1,34 mmol) en acetato de etilo anhidro (10 ml), se añadieron carbonato de sodio (75 mg, 0,70 mmol) y Pd/C (10 %, 75 mg) y la reacción se agitó en una atmósfera de hidrógeno a 80 °C durante la noche. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. La cromatografía en columna del producto en bruto dio 400 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 94,70 %. LC-MS (APCI): m/z = 315,1 (M+1).

Etapa 9: Síntesis de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(d5-fenoxi)-3-isoquinolinil)carbonil] glicina (Compuesto 32).

Se añadió metóxido de sodio (1,05 g, 19,4 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-metil-7-(d5-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (200 mg, 0,64 mmol) y glicina-ds deuterada (154 mg, 1,92 mmol) en metanol-d deuterado (4,5 ml) a temperatura ambiente y la solución de reacción se selló en un tubo para reaccionar a 110 0C durante la noche. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 5 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 5 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (5 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó, respectivamente, con agua (3 x 2 ml) y acetona (fría, 2 x 2 ml) y se secó al vacío para dar 150 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 65,2 %. LC-MS (APCI): m/z = 358,1 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) (5/ppm) 13,33 (s, 1H), 12,88 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,61 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,52 (dd, J=9,0, 2,2 Hz, 1 H), 4,04 (d, J= 6,1 Hz, 2H), 2,70 (s, 3H).

Ejemplo 5: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-(d-metil)-7-fenoxi-3-isoquinolinil) carbonil]-2,2-d2-glicina

Se añadió metóxido de sodio (243 mg, 4,5 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-(d-metil)-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (130 mg, 0,42 mmol) y d5-glicina deuterada (108 mg, 1,35 mmol) en metanol-d deuterado (3 ml) a temperatura ambiente y la solución de reacción se selló en un tubo para reaccionar a 110 °C durante la noche. La solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 1 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 3 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (3 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó, respectivamente, con agua (3 x 1 ml) y acetona (fría, 2 x 0,5 ml) y se secó al vacío para dar 66 mg de un sólido de color blanquecino. Rendimiento: 41,2 %, LC-MS (APCI): m/z = 356,2 (M+ 1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) (5/ppm) 13,35 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,29 (m, 1H), 7,62 (d, J=1,9 Hz, 1 H), 7,51 (m, 3H), 7,25 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,69 (d, J = 5,2 Hz, 2H).

Ejemplo 6: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-(d3-metil)-7-fenoxi-3-isoquinolinil) carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 36)

Etapa 1: Síntesis de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-fenoxi-3-isoquinolinil)carbonil]glicina (Compuesto 35).

Se añadió metóxido de sodio (1,05 g, 19,4 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-metil-7-fenoxiisoquinolin-3-carboxilato de metilo (600 mg, 1,94 mmol) y glicina (437 mg, 5,80 mmol) en metanol (4 ml) a temperatura ambiente. La solución de reacción se selló en un tubo para reaccionar a 110 °C durante la noche. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 5 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 5 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (5 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó, respectivamente, con agua (3 x 2 ml) y acetona (fría, 2 x 2 ml) y se secó al vacío para dar 125 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 18,3 %, l C-MS (APCl): m/z = 353,1 (M+1); 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) (5/ppm) 13,31 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,61 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,53 (dd, J=9,0, 2,2 Hz, 1H), 7,47 (t, J=7,9 Hz, 2H), 7,25 (t, J=7,4 Hz, 1H), 7,17 (d, J= 7,9 Hz, 2H), 4,03 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,70 (s, 3H).

Etapa 2: Síntesis del compuesto N-[(4-hidroxi-1-(d3-metil)-7-fenoxi-3-isoquinolinil) carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 36).

Se añadió una solución al 40 % de deuteróxido de sodio en agua pesada (0,20 ml) a N-[(4-hidroxi-1-metil-7-fenoxi-3-isoquinolinil)carbonil]glicina (100 mg, 0,25 mmol) en agua pesada (3 ml). La mezcla se selló en un tubo en una atmósfera de protección de nitrógeno y se hizo reaccionar a 140 °C durante 8 horas. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, el sistema se ajustó a aproximadamente pH 4 con una solución 3 N de ácido clorhídrico y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 4). La fase orgánica se lavó con salmuera (15 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El concentrado se sometió a cromatografía de capa fina preparativa para dar 15 mg de un sólido de color gris. Rendimiento: 30,0 %, LC-MS (APCI): m/z = 358,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) (5/ppm) 13,43 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,30 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,52 (m, 3H), 7,26 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 7,7 Hz, 2H).

Referencia

Ejemplo 7: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(3-d-fenoxi)-3-isoquinolinil) carboniljglicina (Compuesto 46)

Etapa 1: Síntesis de 3-d-fenol (Compuesto 38).

Se añadió Pd/C (50 % en D2O, 1,00 g) a m-bromofenol (3,50 g, 20,00 mmol) en metanol-d deuterado (20 ml) a temperatura ambiente. El aire se reemplazó por D2 y la mezcla se hizo reaccionar en un globo de gas deuterio durante la noche. La mezcla se filtró a través de celite. El filtrado se concentró a presión reducida y el concentrado se sometió a separación en columna para obtener 2,8 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 52,0 %, LC-MS (APCI): m/z=94,1 (M-1); 1H RMN (300 MHz, CDG3) (5/ppm) 7,26 (s, 2H), 6,85 (s, 1H).

Etapa 2: Síntesis de 2-metil-4-(3-d-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 39).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió 1,4-dioxano (35 ml) a una mezcla de 4-bromo-2-metilbenzoato de metilo (4,50 g, 19,80 mmol), 3-d-fenol (1,80 g, 18,90 mmol), Cs2CO3 (19,40 g, 59,4 mmol), yoduro de cobre (754 mg, 3,96 mmol) y N,N-dimetilglicina (815 mg, 7,90 mmol) y la reacción se agitó a 100 °C durante la noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró a presión reducida. El concentrado se lavó con acetato de etilo (100 ml) y agua (60 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El concentrado se sometió a separación en columna para dar 2,44 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 58,9 %.

Etapa 3: Síntesis de 2-(bromometil)-4-(3-d-fenoxi)-benzoato de metilo (Compuesto 40).

En una atmósfera de protección de nitrógeno, se añadió peróxido de benzoílo (BPO, 170,8 mg, 0,70 mmol) a una solución de 2-metil-4-(3-d-fenoxi)-benzoato de metilo (2,40 g, 10,00 mmol) y N-bromosuccinimida (NBS, 1,87 g, 10,5 mmol) en tetracloruro de carbono (43 ml) y la reacción se agitó a reflujo durante la noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se lavó, respectivamente, con bicarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La mezcla se concentró a presión reducida y el concentrado se sometió a separación en columna para dar 2,00 g de un aceite de color pardo. Rendimiento: 62,1 %. Etapa 4: Síntesis de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino) metil)-4-(3-d-fenoxi)benzoato de metilo (Compuesto 41).

Se añadió yoduro de sodio (1,39 g, 9,30 mmol) y carbonato de potasio (1,28 g, 9,30 mmol) a 2-(bromometil)-4-(3-d-fenoxi)-benzoato de metilo (2,00 g, 6,20 mmol) y p-toluenosulfonil glicina metil éster (1,66 g, 6,80 mmol) en N,N-dimetilformamida (16 ml) a temperatura ambiente y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción se interrumpió con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). La fase orgánica se lavó, respectivamente, con agua (50 ml) y salmuera (50 ml x 2) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La concentración a presión reducida proporcionó 3,70 g de un sólido de color amarillo, que se usó en la siguiente reacción sin purificación. Rendimiento: 100 %. LC-MS (APCI): m/z = 485,1 (M+1).

Etapa 5: Síntesis de 4-hidroxi-7-(3-d-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 42).

En un baño de hielo, una solución de metóxido de sodio (4,10 g. 76,00 mmol) en metanol-d (8 ml) se añadió gota a gota a una solución de 2-(((N-(2-metoxi-2-oxoetil)-4-metilfenil)sulfonilamino)metil)-4-(3-d-fenoxi)-benzoato de metilo (3,70 g, 7,60 mmol) en dimetilsulfóxido (16 ml). Después de completar la adición, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El metanol se retiró a presión reducida, el concentrado se diluyó con agua (50 ml) y el pH se ajustó a aproximadamente pH 10 con ácido clorhídrico diluido 1 N. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3) y la capa orgánica se lavó con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), respectivamente, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La mezcla se concentró a presión reducida y el concentrado se separó en columna para dar 1,10 g de un sólido de color blanco. Rendimiento en dos etapas: 59,9 %. LC-MS (APCI): m/z = 297,1 (M+1).

Etapa 6: Síntesis de 1-((dimetilamino)metil)-4-hidroxi-7-(3-d-fenoxi)-quinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 43).

Se añadió lentamente gota a gota N,N,N',N'-tetrametilmetilendiamina (460 mg, 4,50 mmol) a una solución de 4-hidroxi-7-(3-d-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (1,10 g, 3,70 mmol) en ácido acético (2 ml) a temperatura ambiente y la reacción se calentó hasta 55 °C y se agitó durante 6 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se usó directamente para la siguiente reacción. LC-MS (APCI): m/z = 354,2 (M+1).

Etapa 7: Síntesis de 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-(3-d-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 44).

Se añadió lentamente gota a gota anhídrido acético (1,10 g, 10,4 mmol) a la reacción anterior a temperatura ambiente, mientras se mantuvo la temperatura a 50 °C o menos. Después de completar la adición, la solución de reacción se calentó hasta 100 °C y se agitó durante la noche. Después del enfriamiento hasta 60 °C, se añadió lentamente 10 ml de agua y la temperatura se redujo hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró y la torta de filtro se lavó con agua. La torta se disolvió en 10 ml de diclorometano y 5 ml de agua, se agitó durante 5 minutos y la fase orgánica se separó. Se añadió morfolina (322 mg, 3,70 mmol) a la fase orgánica en un baño de hielo y la reacción se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se mezcló con acetona (1 ml) y metanol (1 ml) y el sólido precipitó en un baño de hielo. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 1 ml) y se secó al vacío para dar 920 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 67,6 %. LC-MS (APCI): m/z = 368,1 (M+1).

Etapa 8: Síntesis de 4-hidroxi-1-metil-7-(3-d-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (Compuesto 45)

Se disolvió 1-((acetoximetil)metil)-4-hidroxi-7-(3-d-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (920 mg, 2,50 mmol) en acetato de etilo anhidro (18 ml). Se añadieron carbonato de sodio (132 mg, 1,25 mmol) y Pd/C (10 %, 140 mg) y la reacción se agitó en una atmósfera de hidrógeno a 80 °C durante la noche. Después del enfriamiento hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto en bruto se sometió a separación en columna para dar 570 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 73,50 %. LC-MS (APCI): m/z =: 311,1 (M+1).

Etapa 9: Síntesis de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(3-d-fenoxi)-3-isoquinolinil)carbonil] glicina (Compuesto 46)

Se añadió metóxido de sodio (351 mg, 6,50 mmol) a una solución de 4-hidroxi-1-metil-7-(3-d-fenoxi)-isoquinolin-3-carboxilato de metilo (200 mg, 0,65 mmol) y glicina (170 mg, 2,12 mmol) en metanol-d deuterado (4,5 ml) a temperatura ambiente y la solución de reacción se selló en un tubo para reaccionar a 110 °C durante la noche. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. El sólido se filtró, se lavó con metanol (frío, 3 ml) y se secó. El sólido se disolvió en 2 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (3 ml). La fase acuosa se ajustó a pH ácido con ácido acético y la suspensión se agitó a temperatura ambiente hasta que precipitó una cantidad grande de sólido. El sólido se filtró. La torta se lavó, respectivamente, con agua (3 x 2 ml) y acetona (fría, 2 x 1 ml) y se secó al vacío para dar 137 mg de un sólido de color blanco. Rendimiento: 59,6 %, LC-MS (APCI): m/z = 355,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) (5/ppm) 13,31 (s, 1H), 12,83 (s, 1H), 9,10 (t, J=5,8 Hz, 1H), 8,29 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,56-7,44 (m, 2H), 4,03 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,70 (s, 3H).

Ejemplo 8: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(2,4,6-d3-fenoxi))-3-isoquinolil) carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 47)

El método de síntesis es similar al del Ejemplo 3, excepto que la glicina se reemplaza por glicina deuterada y el metanol se reemplaza por metanol deuterado para obtener el producto final del Compuesto 47. LC-MS (APCI): m/z = 358,4 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) (5/ppm) 13,34 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 7,53 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,48 (d, J=4,0 Hz, 2H), 2,70 (s, 3H).

Ejemplo 9: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(d5-fenoxi))-3-(3-isoquinolinil) carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 48)

El método de síntesis es similar al del Ejemplo 4, excepto que la glicina se reemplaza por glicina deuterada y el metanol se reemplaza por metanol deuterado para obtener el producto final del Compuesto 48. LC-MS (APCI): m/z = 360,1 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) (5/ppm) 13,33 (s, 1H), 12,88 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1 H), 7,61 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,52 (dd, J=9,0, 2,2 Hz, 1 H), 2,70 (s, 3H).

Ejemplo 10: Preparación de N-[(4-hidroxi-1-metil-7-(3-d-fenoxi)-3-isoquinolinil) carbonil]-2,2-d2-glicina (Compuesto 49)

El método de síntesis es similar al del Ejemplo 7, excepto que la glicina se reemplaza por glicina deuterada y el metanol se reemplaza por metanol deuterado para obtener el producto final del Compuesto 49. LC-MS (APCI): m/z = 355,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-de) (5/ppm) 13,31 (s, 1H), 12,83 (s, 1H), 9,10 (t, J=5,8 Hz, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1 H), 7,61 (s, 1 H), 7,56-7,44 (m, 2H), 2,70 (s, 3H).

Prueba de actividad biológica.

Evaluación de la estabilidad metabólica.

Experimentos en microsomas: Microsomas de hígado humano: 0,5 mg/ml, Xenotech; Microsomas de hígado de rata: 0,5 mg/ml, Xenotech; Coenzima (NADPH/NADH): 1 mM, Sigma Life Science; Cloruro de magnesio: 5 mM, tampón fosfato 100 mM (pH 7,4).

Preparación de solución madre: El polvo de los Compuestos de los Ejemplos 1-7 se pesó con exactitud y se disolvió en DMSO hasta 5 mM. Preparación de tampón fosfato (100 mM, pH 7,4): Un dihidrógeno fosfato potásico 0,5 M preformulado (150 ml) se mezcló con fosfato de potasio dibásico 0,5 M (700 ml). El pH de la mezcla se ajustó a 7,4 con solución de fosfato de potasio dibásico 0,5 M. La mezcla se diluyó 5 veces con agua ultrapura antes del uso, y se añadió cloruro de magnesio para obtener un tampón fosfato (100 mM) que contenía fosfato potásico 100 mM, cloruro de magnesio 3,3 mM, pH 7,4. Se preparó una solución del sistema de regeneración de NADPH (que contenía NADP 6,5 mM, G-6-P 16,5 mM, G-6-PD, 3 U/ml, cloruro de magnesio 3,3 mM) y se puso sobre hielo húmedo antes del uso. Preparación de solución de terminación: solución de acetonitrilo que contiene 50 ng/ml de clorhidrato de propranolol y 200 ng/ml de tolbutamida (patrón interno). 25057,5 pl de tampón fosfato (pH 7,4) se tomaron en un tubo de centrífuga de 50 ml, al que se añadieron 812,5 pl de microsomas de hígado humano y se mezclaron para obtener una solución de dilución de hígado de microsomas de hígado humano con una concentración de proteínas de 0,625 mg/ml. 25057,5 pl de tampón fosfato (pH 7,4) se tomaron en un tubo de centrífuga de 50 ml, al que se añadieron 812,5 pl de microsomas de hígado de rata SD y se mezclaron para obtener una solución de dilución de hígado de microsomas de hígado humano con una concentración de proteínas de 0,625 mg/ml.

Incubación de las muestras: La solución madre del compuesto respectivo se diluyó, respectivamente, a 0,25 mM con una solución acuosa que contenía 70 % de acetonitrilo y se usó como solución de trabajo, lista para usar. Se añadieron 398 pl de la solución de dilución de microsomas de hígado humano o microsomas de hígado de rata a una placa de 96 pocillos (N=2), respectivamente, y se añadió 2 pl de solución de trabajo 0,25 mM y se mezcló.

Ensayo de la estabilidad metabólica: Se añadió 300 pl de solución de terminación previamente enfriada a cada pocillo de una placa de 96 pocillos profundos y se puso sobre hielo como placa de tope. La placa de incubación de 96 pocillos y el sistema de regeneración de NADPH se introdujeron en una caja de baño de agua a 37 °C, se agitaron a 100 rpm y se preincubaron durante 5 min. Se tomaron 80 pl de la solución de incubación de cada pocillo de la placa de incubación y se agregaron a la placa de detención, se mezclaron y se rellenaron con 20 pl de solución del sistema de regeneración NADPH como muestra a 0 min. 80 pl de solución del sistema de regeneración NADPH se añadió a cada pocillo de la placa de incubación para comenzar la reacción e iniciar el recuento. El compuesto correspondiente tenía una concentración de reacción de 1 pM y la concentración de proteína fue de 0,5 mg/ml. Por separado, se tomó 100 pl de la solución de reacción a tiempos de reacción de 10, 30, y 90 min, respectivamente, se añadieron a la placa de detención y se sometió a vortización durante 3 minutos para terminar la reacción. La placa de detención se centrifugó a 5000 xg a 4 °C durante 4 min. Se añadió 100 pl del sobrenadante a una placa de 96 pocilios a la que previamente se había añadido 100 pl de agua destilada, se mezcló y se analizó mediante LC-MS/MS.

Análisis de datos: Las áreas de pico del compuesto correspondiente y el patrón interno se detectaron por medio del sistema LC-MS/MS, y se calculó la relación del área de pico del compuesto con respecto al patrón interno. La pendiente se midió representando el logaritmo natural del porcentaje de compuesto restante en función del tiempo y 11 /2 y CLint se calcularon según la Fórmula, donde V/M es igual a 1/concentración de proteína.

t1/2 = -0,693/Pendiente, CLint = 0,693/t1/2 • V/M

Los resultados experimentales se mostraron en la Tabla 1, a continuación. En comparación con FG4592 (FG-4592 es un compuesto oral desarrollado por FibroGen, una empresa biofarmacéutica de EE. UU., que se encuentra en ensayos clínicos de última fase y puede usarse para tratar la anemia asociada a una chronic kidney disease (enfermedad renal crónica - CKD) y una end-stage renal disease (enfermedad renal terminal - ESRD )), los compuestos descritos en la presente memoria presentan una excelente estabilidad metabólica en experimentos tanto en microsomas hepáticos humanos como en microsomas hepáticos de rata.

Tabla 1. Evaluación del metabolismo en microsomas hepáticos para los Compuestos de los Ejemplos 1-10

Evaluación farmacocinética en ratas.

6 ratas macho Sprague-Dawley (de 7-8 semanas de edad y que pesaban aproximadamente 210 g) se dividieron en 2 grupos con 3 ratas en cada grupo. A las ratas se les administró por vía intravenosa u oral una dosis individual de compuesto (3 mg/kg por vía intravenosa, 10 mg/kg por vía oral) para comparar las diferencias farmacocinéticas.

Las ratas se criaron con comida y agua estándar. El ayuno se inició 16 horas antes de la prueba. El fármaco se disolvió con PEG400 y dimetilsulfóxido. Las muestras de sangre se recogieron de los párpados en los puntos temporales de 0,083 horas, 0,25 horas, 0,5 horas, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas y 24 horas después de la administración.

Se anestesiaron brevemente a las ratas después de la inhalación de éter dietílico y se recogieron 300 pl de muestra de sangre de los párpados en tubos de prueba. Había 30 pl de solución salina de heparina al 1 % en el tubo de prueba. Los tubos se secaron a 60 0C durante la noche antes de su uso. Después de recogerse la muestra de sangre en un punto temporal posterior, las ratas se sacrificaron después de la anestesia con éter.

Inmediatamente después de la recogida de la muestra de sangre, el tubo de prueba se invirtió suavemente al menos 5 veces para asegurar un mezclado suficiente y, a continuación, se colocó en hielo. La muestra de sangre se centrifugó a 5000 rpm a 4 0C durante 5 minutos para separar el plasma de los glóbulos rojos. Se aspiraron 100 pl de plasma en un tubo de centrífuga de plástico limpio con una pipeta, marcando con el nombre del compuesto y el punto temporal. El plasma se almacenó a -80 0C antes del análisis. La concentración del compuesto de la presente descripción en plasma se determinó mediante LC-MS/MS. Los parámetros farmacocinéticos se calcularon basándose en la concentración en sangre de cada animal en diferentes puntos temporales.

Los resultados del experimento se mostraron en la Tabla 2, a continuación. En comparación con el compuesto de control FG-4592, la disponibilidad oral del Compuesto 11, el Compuesto 32 y el Compuesto 49 descritos en la presente memoria aumentó considerablemente, lo que indica que la administración oral tiene una mejor farmacocinética en animales y, por tanto, tiene mejores efectos farmacodinámicos y terapéuticos.

Tabla 2. Experimento de farmacocinética en ratas

Debe entenderse que estos ejemplos solo tienen el fin de ilustrar la presente descripción y no pretenden limitar el alcance descrito en la presente memoria. Los métodos experimentales que no especifican condiciones específicas en los ejemplos se basan generalmente en condiciones convencionales o en condiciones recomendadas por el fabricante. Partes y porcentajes son partes en peso y porcentajes en peso, salvo que se indique lo contrario.

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES

   i . Un compuesto representado por la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

   

   Fórmula (I)

   en donde R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 y R13 son, cada uno independientemente, hidrógeno o deuterio; y

   R1 y R2 son deuterio.
2. 2. El compuesto según la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R3, R4 y R5 son cada uno hidrógeno.
3. 3. El compuesto según la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R6, R7 y R8 son cada uno hidrógeno.
4. 4. El compuesto según la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R9, R10, R11, R12 y R13 son cada uno hidrógeno.
5. 5. Un compuesto representado por la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

   

   Fórmula (I)

   ^ 9 Q 4 ^ R 7 o

   en donde R , R , R , R , R , R , R y R son cada uno independientemente hidrógeno, o deuterio; R9, R10, R11, R12 y R13 son cada uno deuterio.
6. 6. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en los siguientes compuestos:

   

   
7. 7. Una composición farmacéutica caracterizada por que esta comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y el compuesto de heteroarilo sustituido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. 8. Un compuesto de Fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento y/o la prevención de anemia por enfermedad crónica, intolerancia a la glucosa y/o anemia asociada a enfermedad renal, así como anemia por cáncer o afecciones asociadas a los glóbulos sanguíneos.