CN106075582A - 一种组织工程血管化支架及其构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于组织工程领域，公开了一种组织工程血管化支架及其构建方法。该方法包括以下步骤：(1)将脱细胞基质进行预处理以洗去脱细胞过程以及保存过程中可能引入的杂质；(2)使用组织工程支架成型方法，制备脱细胞基质/合成材料复合支架；(3)将步骤(2)制备的脱细胞基质/合成材料复合支架进行后期处理，除去制备处理过程中的残留物质，获得组织工程血管化支架。该方法基于生物体血管化过程的基本原理，契合内皮细胞迁移、增殖特点，最大程度地模拟生物体血管化生成的微环境，构建脱细胞基质/合成材料复合支架，协同发挥脱细胞基质材料和合成材料的优点，构造出可以满足组织工程血管化要求的支架产品。

Description

一种组织工程血管化支架及其构建方法

技术领域

本发明属于组织工程领域，特别涉及一种组织工程血管化支架及其构建方法。

背景技术

在生物体内，几乎所有的组织都是通过血液循环系统精细分支网络实现营养、氧气以及代谢产物的交换。组织工程支架植入生物体后，粘附在支架材料内部的细胞失去营养和氧气供应将大量死亡，导致种子细胞的存活率，影响组织工程产品的应用范围。组织工程血管化，就是针对组织工程产品植入后无营养代谢的局限性，进行植入前的程序性血管构建，以期解决植入后组织工程产品营养代谢的问题。

组织工程血管化作为组织工程研究的热点，目前主要从支架材料结构、细胞因子、构建方法进行设计。其中支架材料作为细胞吸附和增殖的载体，起到细胞外基质的作用，在组织工程血管化中具有重要的意义。

目前用于组织工程血管化的支架材料主体为可降解的高分子材料，其设计原则就是基于仿生原理，最大限度地在体外模拟目标组织或器官的细胞外基质的组成、结构和功能，增进细胞的增殖和分化，实现组织修复。最初所用的材料主要包括聚乳酸(PLA)、聚乙交酯(PGA)、乳酸与乙交酯共聚物(PLGA)、聚ε-己内酯(PCL)、聚羟基丁酸酯(PHB)和聚氨基酸等。优点是可以根据具体的组织和器官特点设计适宜结构的支架，并通过对孔径、孔隙率和连通率等因素的控制，增进内皮细胞的增殖和生长，适于大规模生产。但生物识别点匮乏，降解速率和降解产物的毒性也限制了其应用。为弥补其的不足，研究者通过材料进行改性，并引入胶原、明胶、蚕丝蛋白、糖蛋白、糖胺聚糖等，增加支架材料的细胞识别位点，提高支架的生物活性，促进细胞吸附的能力。

近年来随着脱细胞技术的发展，脱细胞基质材料也被研究用于组织工程血管化。脱细胞基质材料的优点是具有良好的生物识别性和生物相容性，但机械强度、来源批次间的差异性、结构相容性等限制了其发展和应用，且单位时间内可长入的细胞量较少。

总之，目前的复合材料支架依然未能很好地实现组织的血管生成。主要原因：1.血管生成时间较长，高分子支架材料的降解需要时间，所具有的空间仅能满足内皮细胞的增殖和迁移，后期支架材料本身将阻碍细胞的迁移，而脱细胞基质具有致密结构，单位时间内长入的细胞数量较少；2.现有的支架材料仅能实现种子细胞的单向长入，新生血管杂乱无章，血流混乱，限制新鲜血液流入新生组织。

总之，现有的组织工程血管化支架材料尚不能最大限度的模拟生物体血管生成所需要微环境，得到成熟的血管网络。因此，构建一种更贴近细胞外基质的支架材料用于组织工程的血管化具有十分重要的意义。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种组织工程血管化支架的构建方法。该方法基于生物体血管化过程的基本原理，契合内皮细胞迁移、增殖特点，最大程度地模拟生物体血管化生成的微环境，构建脱细胞基质/合成材料复合支架，协同发挥脱细胞基质材料和合成材料的优点，构造出可以满足组织工程血管化要求的支架产品。

本发明的另一目的在于提供上述方法构建的组织工程血管化支架。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种组织工程血管化支架的构建方法，其主要包括以下步骤：

(1)将脱细胞基质进行预处理以洗去脱细胞过程以及保存过程中可能引入的杂质；

(2)使用组织工程支架成型方法，制备脱细胞基质/合成材料复合支架；

(3)将步骤(2)制备的脱细胞基质/合成材料复合支架进行后期处理，除去制备处理过程中的残留物质，获得组织工程血管化支架。

步骤(1)中所述的脱细胞基质可为未改性的或改性的脱细胞心包膜、脱细胞软骨、脱细胞真皮、脱细胞羊膜、脱细胞膀胱、脱细胞小肠粘膜下基质、脱细胞肾脏、脱细胞血管中的至少一种。

步骤(1)中的改性是指引入血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、音猬因子(SHH)、锶离子(Sr²⁺)、铜离子(Cu²⁺)中的一种或一种以上。

优选的，当进行改性时，可采用以下步骤：

(1)将脱细胞基质浸入MES(2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物)缓冲液(pH＝5.60)预置0.5h；

(2)将EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)溶于含有2％(W/V)Hep(肝素钠盐)的0.05mol/LMES缓冲液中作用10min，其中EDC:NHS:Hep摩尔比为7.5:12.5:1；

(3)将步骤(1)中预置好的基质放入步骤(2)中的溶液，震荡并室温反应24h，然后将基质进行清洗、冷冻干燥即得肝素化的脱细胞基质；

(4)将肝素化的脱细胞基质浸泡在含有血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、音猬因子(SHH)、锶离子(Sr²⁺)、铜离子(Cu²⁺)中的一种或一种以上的PBS溶液中，4℃孵育过夜，即得改性的脱细胞基质。

更优选的，当用锶离子进行改性时，也可将脱细胞基质直接浸入氯化锶的PBS溶液中，4℃孵育过夜，得锶离子改性的脱细胞基质。

步骤(1)中所述的预处理包括如下的步骤A，或步骤A和步骤B，或步骤A～C：

A、使用生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或超纯水浸泡脱细胞基质；

B、对脱细胞基质进行适度裁剪，得到面积为0.01mm²～4cm²，厚度为0.01mm～1cm的脱细胞基质块，并用去离子水清洗浸泡后的脱细胞角膜基质；

C、风干或冷冻干燥后，在干燥器中保存备用。

步骤(2)中所述的合成材料为可降解合成材料，可为医用级聚乳酸(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚乳酸-羟基乙酸酯(PLGA)、聚ε-己内酯(PCL)、聚羟基丁酸酯(PHB)和聚氨基酸中的至少一种。

步骤(2)中所述的成型方法包括冷冻干燥法、静电纺丝法、3D打印法等。

步骤(2)中所用的脱细胞基质与合成材料的质量比为1:1000～3:1。

步骤(2)中所述的组织工程支架成型方法中，所用的合成材料以溶液形式存在，溶液浓度为0.01wt％～30wt％，溶剂可为二甲基亚砜、1,4二氧六环、二氯甲烷中的至少一种。

步骤(3)中所述的后处理是指用去离子水、生理盐水或磷酸盐缓冲溶液冲洗步骤(2)制备的组织工程血管化支架，再用截留分子量为100～200000Da的透析装置进行透析，透析液为生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或超纯水，最后经过灭菌即可。

一种由上述方法构建得到的组织工程血管化支架。

本发明的机理为：

生物体内血管的生长作为机体生长发育、创伤愈合和组织再生的重要环节，主要有三种形式：血管发生、血管形成、动脉生长。血管发生，胚胎发育时多能干细胞分化为内皮细胞，增殖聚集成内皮细胞管，周皮细胞环绕分化，分化为平滑肌细胞，加固初级血管网，并赋予其一定的功能，最终形成成熟的血管。血管形成，已生成的血管在周边因素的刺激下，分泌基质金属蛋白酶降解周边的细胞外基质，内皮细胞增殖再次形成管腔，重现血管发生的过程。动脉生长，毛细血管网转变为大的传输性动脉的过程，在动脉发生闭塞时也有此模式。

在组织工程产品构建过程中，本发明构建的组织工程血管化支架的生长因子诱导刺激内皮细胞和种子细胞迁入支架内部；支架的多孔结构和生物位点为细胞的大量增殖提供3维环境，形成“内皮细胞库”，为血管化提供大量的内皮细胞；内皮细胞可以通过分泌金属基质蛋白酶长入脱细胞基质，无需等待合成材料的降解，减少血管化形成的时间；脱细胞基质的多层立体结构设计，使得内皮细胞可以“多向”长入脱细胞基质内部。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

1、缩短血管化的时间。支架的多孔性和生物位点为内皮细胞提供大量增殖的3维微环境，且内皮细胞在此过程中可以直接长入脱细胞基质材料内部，缩短血管化时间，这是单独使用合成材料或脱细胞基质无法实现的。

2、实现种子细胞和内皮细胞的“多向”生长。支架提供的3维微环境以及内皮细胞可以长入脱细胞基质材料，可以实现种子细胞和内皮细胞的“多向”生长，这也是单独使用合成材料或脱细胞基质无法实现的。

3、通过对脱细胞材料的分布设计，可以在1和2的优势的基础上，得到近似生理的网状血管网结构，有利于新鲜血液流入新生组织。

4、与胶原等天然物质构成的支架相比，脱细胞基质内具有多种类型的胶原，且胶原比例与细胞外基质相同，同时还保留脱细胞基质中的糖胺聚糖等成分，更加近似生理环境，具有更好的生物相容性；具有多种血管生成相关生长因子连接位点，有利于负载生长因子诱导内皮细胞长入脱细胞基质。

5、单独使用胶原、明胶等天然分子与合成材料复合构成的支架，仅能发挥其细胞识别功能。本发明构建的复合支架中包含均匀分布的脱细胞基质，不仅使支架具备细胞识别功能，而且内皮细胞还可以通过分泌基质金属蛋白酶长入脱细胞基质，增殖，逐步完成后期的组织血管化。

6、相比于单独使用脱细胞基质，复合支架的连通多孔结构可以为细胞生长增殖提供了必需的空间。体外构建时，内皮细胞等种子细胞可以在支架材料内大量扩增，为支架材料血管化提供细胞支持。

附图说明

图1为实施例1和3中使用冷冻干燥法制备组织工程血管化支架的模型图；

图2为实施例1中的组织工程血管化支架扫描电镜图；

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例中如没有特殊说明，所用试剂均可从市场常规购得。

实施例1

本实施例的组织工程血管化支架由以下方法制备得到：

(1)接枝VEGF的猪脱细胞心包膜的制备

参考专利CN101274106 B(一种制备脱细胞基质的方法)制备猪脱细胞心包膜，具体步骤如下：将猪心包膜组织预处理，然后将预处理后的猪心包膜组织加入到含有磷脂酶的溶液中，通过低渗或等渗透浸泡制备猪脱细胞心包膜，然后洗涤即得猪脱细胞心包膜。其中，磷脂酶的浓度小于10000U/mL，溶液的温度范围为0～56℃，pH值范围为5～12。

将1g干重脱细胞心包膜浸入5mL0.05mol/L MES(2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物)缓冲液(pH＝5.60)预置0.5h；将EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)溶于188.3mL含有2％(W/V)Hep(肝素钠盐)的0.05mol/LMES缓冲液中作用10min，EDC:NHS:Hep摩尔比＝7.5:12.5:1，然后将预置好的基质放入此溶液，轻微震荡，室温反应24h。然后基质在0.1mol/L Na₂HPO₄溶液中清洗2h，4mol/LNaCl溶液中清洗24h(每6h更换一次NaCl溶液)，蒸馏水清洗24h(每6h更换一次蒸馏水)，冷冻干燥后4℃保存待用即得肝素化的脱细胞基质；

配置浓度为1000ng/mL的VEGF的PBS(pH＝7.2)溶液，将1g肝素化的脱细胞基质浸泡在1mLVEGF的PBS溶液中，4℃孵育过夜，室温下PBS漂洗4次，每次10min，即得接枝VEGF的猪脱细胞心包膜。

(2)接枝VEGF的猪脱细胞心包膜的预处理

取步骤(1)制备的接枝VEGF的猪脱细胞心包膜浸入5mL生理盐水中，2h后使用眼科环钻裁剪成直径为1mm的心包膜片，用去离子水冲洗3次后在4℃冰箱静置过夜，用去离子水冲洗3次后，在-20℃冰箱冷冻4h，冷冻干燥。

(3)猪脱细胞心包膜/PLGA复合支架制备

使用350μm直径的针灸针将步骤(2)的猪脱细胞心包膜按照图1所示的模型(直径1.5cm)排列(5×8)，针间距为1mm。浇铸3mL10wt％PLGA的1,4二氧六环溶液(脱细胞基质和PLGA的质量比为1:3)，然后移入冰盒中保持2h后，取出后依次置于-20℃和-80℃冰箱中保持4h，再移入液氮罐中保持8h，最后移除细针，冷冻干燥。

(4)猪脱细胞心包膜/PLGA复合支架的后期处理

将步骤(3)得到的猪脱细胞心包膜/PLGA复合支架用去离子水冲洗6次后，使用超纯水在截留分子量为5000Da的透析装置中反复透析6次，每次4h。干燥后，使用钴60(15KyG)照射灭菌15min，得到用于组织工程血管化的脱细胞心包膜基质/PLGA复合支架。

将本实施例制备得到的组织工程血管化支架进行如下性能检测：

(1)支架形貌观察

将实施例1得到的支架分别裁成薄片，使用扫描电子显微镜(Philips XL-30ESEM)对材料形貌进行观察，加速电压20KV，样品干燥后喷金处理。实验结果如图2所示，从图2中的a可见支架大孔直径为370±4.7μm，有利于细胞长入和增殖；从图2中的b可见小孔直径为50±11μm，可实现营养物质和代谢废物的渗透。从图2中的c可见，猪脱细胞心包膜层叠分布于支架内部，内皮细胞可以借助基质金属蛋白酶降解心包膜后形成的空间长入，并诱导支架内部血管网络的形成。

(2)支架降解性能测定

将复合支架真空干燥至恒重(Wo)后放入盛有人工降解液(Hank溶液，pH＝7.4)的密闭试管中(固液比为1:20)，37℃条件下进行降解。试样分别于第1周、第2周、第3周、第4周取出，蒸馏水清洗并干燥至恒重(Wt)，然后测定降解试样的降解率(d)。计算公式:d＝(Wo-Wt)/Wo×100％。

结果表明，本实施例制备的组织工程血管化支架4周后的降解率为15％。

(3)支架孔隙率测试

应用排液法测定孔隙率，即分析天平称重后放入盛有无水乙醇的量筒中，初始体积为V1，然后密封量筒，静置5～10min，使试样被无水乙醇完全浸透且试样表面无明显气泡，此时的总体积为V2；取出试样，量筒中无水乙醇的容积为V3。试样的体积(V)及孔隙率(K)，按下列公式计算：V＝(V2-V1)+(V1-V3)＝V2-V3；K＝(V1-V2)/(V2-V3)。

结果表明，本实施例1制备的组织工程血管化支架的孔隙率为90％。

(4)大鼠股骨缺损模型检测

取20只5周龄的大鼠，分为两组，腹腔注射麻醉后，在其左侧下肢股骨干中段骨处切除1.5mm长度的骨干和骨膜缺损，制备骨缺损模型。向实验组植入本实施例1制备的支架，使用钢板固定，对照组仅用钢板固定。术后使用生理盐水冲洗伤口，缝合肌膜和皮肤，连续3天碘伏消毒切口，每天肌注青霉素20万U。右侧下肢不予固定，可自由活动。

84天后，脱颈处死，取出支架部位股骨。脱钙处理后，石蜡包埋，5μm连续切片，HE染色，结果表明，支架内部有新血管形成，并有成纤维细胞支持；使用micro-CT扫描，结果表明支架内部有血管网络形成。

实施例2

本实施例的组织工程血管化支架由以下方法制备得到：

(1)负载锶离子的狗脱细胞膀胱的制备

参考专利CN 101274106 B(一种制备脱细胞基质的方法)制备狗脱细胞膀胱，然后将2g干重狗脱细胞膀胱浸入50mL0.05mol/L氯化锶的PBS(pH＝7.2)溶液，4℃孵育过夜，室温下PBS漂洗4次，每次10min，即得负载锶离子的狗脱细胞膀胱。

(2)负载锶离子的狗脱细胞膀胱的预处理

取步骤(1)制备的负载锶离子的狗脱细胞膀胱浸入5mL生理盐水中，在4℃冰箱静置过夜，裁剪成直径为1mm的膜片，用去离子水冲洗3次后，在-20℃冰箱中冷冻4h，然后冷冻干燥。

(3)负载锶离子的狗脱细胞膀胱/PLA复合支架制备

使用CAD软件设计模型，细柱高度和宽度均为500μm，细柱间距为50μm。以可溶性蜡材料为原料使用3D打印机制备出模型样品，加入裁剪后的脱细胞膜片。浇铸3mL8％PLA的二甲基亚砜溶液(脱细胞基质与PLA的质量比为1:900)，依次移入-20℃和-80℃的冰箱中保持4h，然后冷冻干燥。固化后使用60％乙醇4℃下洗去蜡制模具。

(4)负载锶离子的狗脱细胞膀胱/PLA复合支架的后期处理

将步骤(3)得到的脱细胞膀胱基质/PLA复合支架用去离子水冲洗6次后，使用生理盐水在截留分子量为500Da的透析装置中反复透析8次，每次4h。干燥后，使用钴60(15KyG)照射灭菌15min，得到用于组织工程血管化的脱细胞心包膜基质/PLGA复合支架。

将本实施例制备得到的组织工程血管化支架进行如下性能检测：

(1)支架形貌观察

测试方法同实施例1，结果显示本实施例2制备的支架孔径为500±8μm。

(2)支架降解性能测定

测试方法同实施例1，结果显示本实施例2制备的支架4周后降解率为30％。

(3)支架孔隙率测试

测试方法同实施例1，结果显示本实施例2制备的支架孔隙率为60％。

实施例3

本实施例的组织工程血管化支架由以下方法制备得到：

(1)脱细胞基质的预处理

参考专利CN 101274106 B(一种制备脱细胞基质的方法)制备脱细胞羊膜，具体步骤如实施例1，区别仅在于将实施例1中的猪心包膜组织替换为羊膜组织；

取干重0.4g脱细胞羊膜浸入5mL生理盐水中，4h后使用眼科环钻裁剪成直径为1cm的膜片，在4℃冰箱中静置过夜，用去离子水冲洗3次后，在-20℃冰箱冷冻4h，然后实施冷冻干燥。

(2)脱细胞羊膜/PLGA复合支架制备

使用500μm直径的针灸针将步骤(1)的细胞羊膜按照图1所示模型(直径1.5cm)排列(5×8)，针间距为1.5mm。浇铸2mL6％PCL的1,4二氧六环溶液(脱细胞基质与PCL的质量比为1:20)，将模具移入冰盒中保持2h后，依次移入-20℃和-80℃冰箱保持4h，移除针后，冷冻干燥。

(3)脱细胞羊膜/PCL复合支架的后期处理

将步骤(2)得到的脱细胞羊膜基质/PCL复合支架用去离子水冲洗6次后，使用PBS在截留分子量为8000Da的透析装置中反复透析6次，每次4h。干燥后，使用环氧乙烷灭菌，得到用于组织工程血管化的脱细胞羊膜基质/PCL复合支架。

将本实施例制备得到的组织工程血管化支架进行如下性能检测：

(1)支架形貌观察

测试方法同实施例1，结果显示本实施例3制备的支架孔径为537±5μm。

(2)支架降解性能测定

测试方法同实施例1，结果显示本实施例3制备的支架4周后降解率为9％。

(3)支架孔隙率测试

测试方法同实施例1，结果显示本实施例3制备的支架孔隙率为93％。

实施例4

本实施例的组织工程血管化支架由以下方法制备得到：

(1)接枝PDGF的猪脱细胞真皮的制备

接枝PDGF的猪脱细胞真皮方法同实施例1步骤(1)，区别仅在于：将其中的“猪心包膜组织”替换为“猪真皮组织”；“1000ng/mL的VEGF的PBS(pH＝7.2)溶液”替换为“1000ng/mL的PDGF的PBS(pH＝7.2)溶液”。

(2)接枝PDGF的猪脱细胞真皮的预处理

取步骤(1)制备的接枝PDGF的猪脱细胞真皮浸入5mL生理盐水中，置于4℃冰箱静置过夜，用去离子水冲洗3次后，裁剪成直径为1mm的膜片，在-20℃冰箱冷冻4h，然后冷冻干燥。

(3)猪脱细胞真皮/PCL复合支架制备

配置8％PCL的二氯甲烷溶液，使用北京富有马公司的FM-10静电纺丝机纺织人工血管，收丝过程中加入猪脱细胞真皮膜片(脱细胞基质和PCL的质量比为1:300)。取下支架，干燥保存备用。

(4)猪脱细胞真皮/PCL复合支架的后期处理

将步骤(3)得到的脱细胞真皮/PCL复合支架用去离子水冲洗6次后，使用PBS在截留分子量为15000Da的透析装置中反复透析6次，每次8h。干燥后，使用钴60(15KyG)照射灭菌15min，得到用于组织工程血管化的脱细胞真皮基质/PCL复合支架。

将本实施例4制备得到的组织工程血管化支架进行如下性能检测：

(1)支架降解性能测定

测试方法同实施例1，结果显示本实施例4制备的支架4周后降解率为11％。

(2)支架孔隙率测试

测试方法同实施例1，结果显示本实施例4制备的支架孔隙率为76％。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将脱细胞基质进行预处理；

(2)使用组织工程支架成型方法，制备脱细胞基质/合成材料复合支架；

(3)将步骤(2)制备的脱细胞基质/合成材料复合支架进行后期处理，除去制备处理过程中的残留物质，获得组织工程血管化支架。

2.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的脱细胞基质为未改性的或改性的脱细胞心包膜、脱细胞软骨、脱细胞真皮、脱细胞羊膜、脱细胞膀胱、脱细胞小肠粘膜下基质、脱细胞肾脏、脱细胞血管中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

所述的改性指引入血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、音猬因子、锶离子、铜离子中的一种或一种以上。

4.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的预处理包括如下的步骤A，或步骤A和步骤B，或步骤A～C：

A、使用生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或超纯水浸泡脱细胞基质；

B、对脱细胞基质进行适度裁剪，得到面积为0.01mm²～4cm²，厚度为0.01mm～1cm的脱细胞基质块，并用去离子水清洗浸泡后的脱细胞角膜基质；

C、风干或冷冻干燥后，在干燥器中保存备用。

5.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的合成材料为可降解合成材料。

6.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的合成材料为医用级聚乳酸、聚乙交酯、聚乳酸-羟基乙酸酯、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸酯和聚氨基酸中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的成型方法包括冷冻干燥法、静电纺丝法、3D打印法。

8.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(2)中所用的脱细胞基质与合成材料的质量比为1:1000～3:1；

步骤(2)中所述的组织工程支架成型方法中，所用的合成材料以溶液形式存在，溶液浓度为0.01wt％～30wt％，溶剂为二甲基亚砜、1,4二氧六环、二氯甲烷中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的组织工程血管化支架的构建方法，其特征在于：

步骤(3)中所述的后处理是指用去离子水、生理盐水或磷酸盐缓冲溶液冲洗步骤(2)制备的组织工程血管化支架，再用截留分子量为100～200000Da的透析装置进行透析，透析液为生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或超纯水，最后经过灭菌即可。

10.根据权利要求1～9任一项所述的方法构建得到的组织工程血管化支架。