CN106047835A

CN106047835A - 用于治疗酸性鞘磷脂酶缺乏的剂量递增酶替代疗法

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Publication number: CN106047835A
Application number: CN201610403228.4A
Authority: CN
Inventors: 爱德华·H·舒克曼; 罗伯特·J·德斯尼克; 杰拉尔德·F·考克斯; 劳拉·P·安德鲁斯; 詹姆斯·M·默里
Original assignee: Genzyme Corp; Mount Sinai School of Medicine
Current assignee: Genzyme Corp; Icahn School of Medicine at Mount Sinai
Priority date: 2009-08-28
Filing date: 2010-08-28
Publication date: 2016-10-26
Also published as: ES2738859T3; AU2010286550A1; SI2470199T1; WO2011025996A3; FR22C1062I2; FR22C1062I1; US20220305091A1; CL2012000495A1; BR112012004377A2; JP6251307B2; PL2470199T3; US20130078230A1; AU2024201085A1; US20130078231A1; DK3482767T3; KR102608546B1; AU2018204156B2; JP2020090513A; PT2470199T; AU2020256322A1

Abstract

本发明涉及使用酸性鞘磷脂酶(ASM)的剂量递增酶替代疗法，以用于治疗具有酸性鞘磷脂酶缺乏(ASMD)的人个体，和尤其是具有尼曼‑皮克二氏病(NPD)以及(在某些实施方案中)B型NPD的非神经学表现的患者。

Description

用于治疗酸性鞘磷脂酶缺乏的剂量递增酶替代疗法

本申请是申请日为2010年08月28日、申请号为201080043910.8、名称为“用于治疗酸性鞘磷脂酶缺乏的剂量递增酶替代疗法”的发明申请的分案。

本申请要求2009年8月28日提交的美国临时专利申请序列号61/238,113的优先权，其通过引用整体纳入本文。

1.前言

本发明涉及使用酸性鞘磷脂酶(ASM)的剂量递增酶替代疗法，以用于治疗患有酸性鞘磷脂酶缺乏(ASMD)尤其是患有尼曼-皮克二氏病(NPD)以及(在某些实施方案中)B型NPD的非神经学表现的人个体。

2.背景

酸性鞘磷脂酶(E.C.3.1.4.12，ASM)是一种溶酶体磷酸二酯酶，其将鞘磷脂(在脑、肝、肺、脾和淋巴结中发现的磷脂储存物质)水解为神经酰胺和磷酰胆碱。ASM活性的缺乏导致身体无法分解鞘磷脂，导致称为尼曼-皮克二氏病的溶酶体贮存病形式。

尼曼-皮克二氏病是一种遗传性常染色体隐性的脂质贮存障碍，其特征是鞘磷脂在诸如巨噬细胞和神经元等细胞的溶酶体中过量累积，损害正常的细胞功能。A型尼曼-皮克二氏病是一种在婴儿中快速发展的神经变性疾病，并通常导致婴儿在2至3岁内死亡。B型尼曼-皮克二氏病导致患者肝和脾增大以及呼吸窘迫，并且通常在成年早期死亡。这两种与ASM缺乏有关的尼曼-皮克二氏病形式在本文统称为尼曼-皮克二氏病或ASM缺乏(ASMD)。其它类型的尼曼-皮克二氏病(例如C型)不涉及ASM基因的突变，并且不直接归因于ASM的功能。作为A和B亚型的显著临床异质性的基础生化和分子缺陷的性质仍然不明。尽管两种亚型的患者具有残余的ASM活性(正常值的约1-10％)，生化分析不能可靠地区分2种表型。此外，B型NPD的临床过程是高度可变的，目前不可能将疾病严重性与残余的ASM活性水平相关联。

与一般群体相比，NPD更多见于德系犹太人(Ashkenazi Jewish)世系的个体中。据估计，A型疾病在德系犹太人中的发病率是约1/40,000，基因频率(q)为约1/200，杂合子载频(2pq)为1/100(Goodman,1979,“Genetic Disorders Among The Jewish People”,JohnHopkins Univ.Press,Baltimore,第96-100页)。B型NPD在德系犹太人群体中的杂合子载体发病率更低(Goodman,同上)。已经估测，在德系犹太人后代个体中，A和B型NPD的混合杂合子载频是约1/70。尽管酶促诊断可以可靠地诊断出具有A或B型NPD的受累患者(Spence和Callahan,同上)，已经证实肯定杂合子的酶促检测是有问题的，特别是当使用外周白细胞作为酶来源时。据推测，中性鞘磷脂酶在一些来源中的出现和/或由突变体等位基因导致的残余ASM活性的存在，已经导致不能可靠地辨别任一种疾病亚型的携带者。即使使用培养的皮肤成纤维细胞(其不表达中性鞘磷脂酶)，也不能提供杂合子的明确结果。在单个国家中进行的流行病学研究中，估测A和B型尼曼-皮克二氏病在世界上若干国家中的新生儿混合发病率是在1/167,000至1/250,000范围内(Miekle等人,1999JAMA 281(3):249-254；Poorthuis等人,1999Hum Genet 105:151-156；Pinto等人,2004Euro.J.Hum.Gene.12:87-92)。认为个体中的杂合子载体比例是在1/200至1/250范围内。

酶替代疗法已经被用于其它溶酶体贮存疾病。通过提供外源酶，酶替代疗法试图补充缺乏的酶活性。在将酶替代疗法用于尼曼-皮克二氏病的情况下，目的是使得受累个体能够加工鞘磷脂，并避免其在溶酶体内累积。为了有效，该疗法初始需要足够大量的替代酶以分解所累积的鞘磷脂，并且需要持续补给替代酶以避免鞘磷脂的进一步累积。

3.简介

本发明涉及剂量递增酶替代疗法，以用于治疗患有ASMD的人个体，尤其是患有NPD以及(在具体实施方案中)B型NPD的非神经学表现的个体。更具体地，初始时，将无毒低剂量将酶(ASM)施用给这样的患者，然后在以后的给药中增加剂量。然后可以将患者耐受的ASM最大剂量用作维持剂量。或者，可以将小于耐受的最大剂量的治疗有效剂量用作维持剂量。

本发明部分地基于下述发现，即清除人个体(即，ASMD患者或尼曼-皮克二氏患者)中累积的鞘磷脂底物所需的ASM剂量产生有毒副作用(包括中毒的临床迹象)。在不那么严重的ASMD形式(B型NPD患者，其缺少、但是具有至少一些酶活性)中，这是特别令人惊讶的。

更具体地，NPD的治疗需要足够大的剂量，以实现ASM酶在病理器官(例如，具体地，肝、脾、肺、心脏、肾和脑)中的充分分布。在ASM敲除小鼠模型(ASKMO小鼠)中的研究表明，大多数施用的重组人ASM(rhASM)分布至肝和脾(在这里其减少底物)，但是以远远更低的程度分布在肺、心脏和脑中(Miranda等人FASEB 2000,14:1988；也参见,He等人,1999,Biochimica et Biophsyica Acta 1432:251-264的图9B)。随后在ASMKO小鼠模型中使用更大剂量的rhASM的研究中，在≤3.0mg/kg的剂量，底物减少，且没有观察到毒性；实际上，在使用≥10mg/kg的剂量之前，没有观察到毒性的临床症状。参见，“Dose ResponsiveToxicological Findings Following Intravenous Administration of RecombinantHuman Acid Sphingomyelinase(rhASM)to Acid Sphingomyelinase Knock-out(ASMKO)Mice.”C.Nickerson,J.Murray,A.Vitsky,M.Hawes,S.Ryan,P.Ewing,B.Thurberg,L.Andrews.Dept Pharm/Tox,Pathology,Genzyme Corp.,Framingham,MA.,AmericanSociety of Human Genetics 2005；和“Elevations of Pro-Inflammatory Cytokinesand Decreases in Cardiovascular Hemodynamics Following IntravenousAdministration of Recombinant Human Acid Sphingomyelinase(rhASM)to AcidSphingomyelinase Knock-out(ASMKO)Mice.”J.Murray,A.M.D’Angona,C.Nickerson,A.Vitsky,M.Hawes,S.Ryan,P.Ewing,B.Thurberg,L.Andrews.Dept.Pharmacology/Toxicology&Pathology,Genzyme Corp.,Framingham,MA.,Society of Toxicology 2006。

基于这些ASKMO数据，我们用在下文的第6部分中所述的保守的最大剂量1.0mg/kgrhASM治疗无神经病的ASMD人个体。非常意外的是，使用低至0.3mg/kg的剂量，在人个体中观察到毒性，包括与临床症状有关的不利事件的发作。该结果是特别令人惊奇的，因为在敲除的小鼠模型中不存在ASM酶，与具有至少一些酶活性和相对温和的疾病的这些人个体相比，小鼠模型应当表现为更严重的病症。

尽管不希望受任何理论的约束，在ASM治疗中发生的有毒副作用可能源自：ASMD患者中储存的鞘磷脂底物的分解，以及产物神经酰胺的释放，所述神经酰胺是促细胞凋亡的，并诱导促炎症细胞因子应答和高胆红素血症。为了解决该问题，我们已经开发了一个方案，以允许安全地施用在病理器官中实现充分分布所需的大剂量的ASM酶。根据该方案，初始使用非常低的剂量治疗ASM，以实现储存底物的缓慢降解，这伴有的副作用较少。随着个体中的底物被消耗(随着贮存底物被“去堆积(debulked)”)，可以安全地增加剂量。

根据该方案，初始将无毒的低剂量的ASM酶施用给NPD病患者，并随时间增加剂量。随着ASM酶的剂量增加，可以监测患者的总胆红素浓度、急性期反应物的产生、炎症介质的产生、和有关不利事件。低剂量的ASM的施用和剂量的增加促进累积的鞘磷脂的去堆积(debulking)。一旦患者被去堆积，可以安全地给患者施用更大的剂量，以确保ASM酶在靶器官(例如，肝、脾、肺、心脏、肾、脑、骨髓、骨骼、关节等)的充分分布。在某些实施方案中，患者耐受的最大剂量可以用作维持剂量。在有些实施方案中，基于患者的病症，所述维持剂量可以随时间增加或减小。

在某些实施方案中，通过测量血浆鞘磷脂水平、血浆神经酰胺水平、“急性期反应物”和炎症介质(它们是炎症应答的度量)的产生、胆红素浓度(总的、直接的、和间接的)和/或其它生化标志物，监测患者的治疗，以确保在将剂量升高至下一个水平之前的稳定应答。这些标志物包括但不限于：C-反应蛋白(CRP)或高敏感性CRP(hs-CRP)、细胞因子(例如，IL-8、IL-6)、降钙素和铁蛋白。在具体实施方案中，可以监测患者的一个或多个有关不利事件，这可以包括但不限于：全身症状(例如，发热、恶心、呕吐、疼痛、肌痛)和黄疸。

小于1mg/kg的剂量对于起始治疗而言是优选的。连续地升高初始剂量，直到达到治疗剂量。这样的剂量递增可以用于测定最高耐受剂量。例如，一旦患者的累积鞘磷脂酶底物被去堆积，可以进一步增加剂量，直到观察到毒性。因此，可以调整维持剂量，且可以根据患者的状态不断地和定期地重新调整。

在一个具体的实施方案中，用于治疗具有酸性鞘磷脂酶缺乏的人个体的方法包括：(a)用于去堆积人个体中累积的鞘磷脂底物的方案，该方案包括：(i)将初始的无毒低剂量的ASM施用给所述人个体；(ii)将连续更大剂量的ASM施用给所述人个体，并在每个连续剂量以后监测所述个体的一种或多种不利副作用，如由升高的胆红素或有关不利事件所提示的副作用；和(b)维持方案，该方案包括：施用等于或小于个体耐受的最大剂量的剂量，作为所述个体的维持剂量。

在另一个具体实施方案中，用于治疗具有酸性鞘磷脂酶缺乏的人个体的方法包括，在递增给药方案中施用下述顺序剂量rhASM：0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.6mg/kg、和1.0mg/kg，其中rhASM的每个剂量施用至少2次，且每个剂量以2周间隔施用，且其中在升大剂量至下一水平之前，监测患者的有毒副作用。

在另一个具体实施方案中，本文描述了用于治疗人个体的酸性鞘磷脂酶缺乏的酸性鞘磷脂酶(ASM)，其准备如下施用：(a)在用于去堆积累积的鞘磷脂底物的方案中的施用，该方案包括：(i)施用初始的无毒低剂量的酸性鞘磷脂酶(ASM)；(ii)施用连续更大剂量的ASM，并在每个连续剂量以后监测所述个体的一种或多种不利副作用，如由升高的胆红素或有关不利事件所指示的副作用；和(b)在维持方案中的施用，该方案包括：施用等于或小于个体耐受的最大剂量的剂量，作为所述个体的维持剂量。

在另一个具体实施方案中，本文描述了用于治疗人个体的酸性鞘磷脂酶缺乏的重组人ASM，其准备在下述顺序剂量的递增给药方案中施用：0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.6mg/kg、和1.0mg/kg，其中每个剂量施用至少2次，且每个剂量以2周间隔施用，且其中在升大剂量至下一水平之前，监测患者的有毒副作用。

3.1.术语

在给定值的上下文中，本文使用的术语“约”和“大约”互换地用于表示在给定值附近的范围，其中得到的值与明确叙述的值基本上相同。在一个具体的实施方案中，“约”是指在给定的值或范围的10％、15％、25％内。

本文使用的术语“老年人”表示65岁或以上的人。

本文使用的术语“成年人”表示18岁或以上的人。

本文使用的术语“未成年人”表示1至18岁的人。

本文使用的术语“婴儿”表示新生儿至1岁的人。

本文使用的术语“幼儿”表示1至3岁的人。

本文使用的术语“不利事件”表示，在临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.l.l(Clinical Data Interchange Standards Consortium Study DataTabulation Model standard terminology v.3.l.l.)中定义的“在施用药物产品的患者或临床研究个体中的任何不利的医学事件”。“有关不利事件”是与治疗具有偶然联系的不利事件。

本文使用的术语“维持剂量”等表示，为了维持希望的治疗效果而施用于ASMD患者的剂量。在具体实施方案中，维持剂量维持1、2、3、4或更多种下述的希望的治疗效果：(i)脾体积减小，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估；(ii)肝鞘磷脂水平降低，这通过本领域已知的技术(例如，肝样品的生化分析和/或组织形态测定分析)来评估；(iii)运动能力增加，这通过本领域已知的技术(例如，周期测力法(cycle erogmetry)的最大工作负荷，包括预测的最大工作负荷百分比、氧耗量峰值和二氧化碳产量)来评估；(iv)肺功能增加，这通过本领域已知的技术来评估，例如，在美国胸科学会,1991,Am.Rev.Respir.Dis.144:1202-1218中所述的技术，诸如扩散能力(DL_CO)，通过例如肺量测定技术测得的预测用力肺活量百分比(FVC)，通过例如肺量测定技术测得的在1秒内的用力呼气体积(FEV₁)，以及总肺容量；(v)支气管肺泡灌洗(BAL)鞘磷脂减少；(vi)肝体积减小，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估；(vii)肺表象改善，这通过本领域已知的技术(例如，高分辨率计算机体层摄影术(CT)扫描或胸部X射线检查)来评估；(viii)肝、皮肤、血浆和干血斑(DBS)中鞘磷脂浓度降低，这通过例如串联质谱法来测量；(ix)ASMD和/或与其有关的症状的严重性的减轻或改善；(x)与ASMD有关的症状的持续时间减小；(xi)与ASMD有关的症状的复发的预防；(xii)个体住院治疗减少；(vi)住院治疗时间缩短；(xiii)个体的生存期增加；(xiv)死亡率降低；(xv)住院治疗率降低；(xvi)与ASMD有关的症状的数目减少；(xvii)ASMD患者的无症状存活期增加；(xviii)神经功能(例如，心理运动功能、社会反应性等)改善；(xix)肺清除改善，这通过例如BAL细胞计数和曲线来测量；(xx)壳三糖苷酶的血清水平降低；(xxi)趋化因子(c-c)基序配体18(CCL18)的血清水平降低；(xxii)脂质特性(例如，HDL、LDL、胆固醇、甘油三酯、和总胆固醇:HDL比)的改善；和(xxiii)提高的生活质量，这通过例如问卷法来评估。在某些实施方案中，所述维持剂量是患者耐受的最高或最大剂量。

在有些实施方案中，所述维持剂量是下述范围内的剂量：0.5mg/kg至1.5mg/kg、0.75mg/kg至1.25mg/kg、1mg/kg至2.5mg/kg、1mg/kg至2.75mg/kg、1.5mg/kg至2.5mg/kg、1.5mg/kg至2.75mg/kg、2mg/kg至2.5mg/kg、2mg/kg至2.75mg/kg、2.5mg/kg至2.75mg/kg、2.5mg/kg至3mg/kg、3mg/kg至4mg/kg、3mg/kg至5mg/kg、4mg/kg至5mg/kg、2mg/kg至5mg/kg或5mg/kg至10mg/kg的ASM。在某些实施方案中，所述维持剂量是下述范围内的剂量：5mg/kg至15mg/kg、10mg/kg至15mg/kg、10mg/kg至20mg/kg、15mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至30mg/kg、25mg/kg至50mg/kg、30mg/kg至40mg/kg、30mg/kg至45mg/kg或40mg/kg至50mg/kg的ASM。在有些实施方案中，所述维持剂量是0.75mg/kg、0.80mg/kg、0.85mg/kg、0.90mg/kg、0.95mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.25mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.75mg/kg、或2mg/kg的ASM。在某些实施方案中，所述维持剂量是2.5mg/kg、2.75mg/kg、3mg/kg、3.25mg/kg、3.5mg/kg、3.75mg/kg、4mg/kg、4.25mg/kg、4.5mg/kg、4.75mg/kg、5mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg、6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/kg或10mg/kg的ASM。在有些实施方案中，所述维持剂量是11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg或50mg/kg的ASM。在有些实施方案中，所述维持剂量是至少1mg/kg、至少2mg/kg、至少3mg/kg、至少4mg/kg、至少5mg/kg、至少6mg/kg、至少7mg/kg、至少8mg/kg的ASM，最大剂量是10mg/kg的ASM。在某些实施方案中，所述维持剂量是至少10mg/kg、至少15mg/kg、至少20mg/kg、至少25mg/kg、至少30mg/kg、或至少35mg/kg的ASM，最大剂量是50mg/kg。

本文使用的术语“无毒剂量”等表示，施用给ASMD患者不会产生下述情况中的1种、2种、3种或所有情形的剂量：(i)由临床症状确定的中等的或严重的有关不利事件，其干扰正常的日常功能，并需要额外的监测、干预、或治疗，或者，临床上关注的异常的实验室值或程序结果，其需要进一步监测、治疗、或研究。参见，例如，临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.1.1；(ii)在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素值大于1.5mg/dL、1.75mg/dL、2.0mg/dL、2.1mg/dL、2.2mg/dL、2.3mg/dL、2.4mg/dL、2.5mg/dL、2.6mg/dL、2.7mg/dL、2.75mg/dL、2.8mg/dL、2.9mg/dL、3.0mg/dL、3.1mg/dL、3.2mg/dL、3.3mg/dL、3.4mg/dL、3.5mg/dL、3.6mg/dL、3.7mg/dL、3.8mg/dL、3.9mg/dL或4mg/dL或在2.1mg/dL至2.5mg/dL、2.1mg/dL至3.0mg/dL、或2.1mg/dL至4mg/dL范围内，且持续超过18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周；(iii)在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于8.2μg/mL、8.3μg/mL、8.4μg/mL、8.5μg/mL、8.75μg/mL、9μg/mL、9.5μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL、或80μg/mL或在8.2μg/mL至10μg/mL、8.5μg/mL至10μg/mL、9μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至15μg/mL、10μg/mL至20μg/mL、15μg/mL至20μg/mL、或20μg/mL至30μg/mL范围内；或(iv)急性期应答/反应。ASM的“无毒剂量”可以随下述因素而异：例如，使用的酶的稳定性、使用的酶的活性、和/或酶的给药途径。例如，活性增加的修饰过的ASM酶的剂量可以低于未修饰的ASM的剂量。基于所述酶的稳定性、所述酶的活性、和/或所述酶的给药途径，本领域技术人员能够调整施用的酶的剂量。

急性期反应是施用ASM以后的早期反应(通常，例如，在12至72小时内)，其指示炎症应答。通过急性期反应物(例如，CRP/hs-CRP、铁蛋白、纤维蛋白原、铁或转铁蛋白)的浓度变化、嗜中性粒细胞百分比的变化、凝血酶原时间的变化、或部分促凝血酶原激酶时间的变化，可以评估急性期应答。在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的CRP/hs-CRP浓度相比，施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，CRP/hs-CRP浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆CRP/hs-CRP浓度的血浆CRP/hs-CRP浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约8.1mg/L、8.2mg/L、8.3mg/L、8.4mg/L、8.5mg/L、9mg/L、9.5mg/L、10mg/L、11mg/L、或12mg/L或在8.5mg/L至10mg/L、或8.5mg/dL至12mg/L、或10mg/L至12mg/L范围内的血浆CRP/hs-CRP浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的铁蛋白浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时铁蛋白浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时大于正常血浆铁蛋白浓度的血浆铁蛋白浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约300ng/mL、325ng/mL、350ng/mL、375ng/mL、400ng/mL、425ng/mL、450ng/mL、475ng/mL、500ng/mL、525ng/mL、550ng/mL、575ng/mL、600ng/mL、625ng/mL、650ng/mL、675ng/mL、700ng/mL、725ng/mL、750ng/mL、775ng/mL、800ng/mL、850ng/mL、900ng/mL、950ng/mL、1000ng/mL、1050ng/mL、1100ng/mL、1150ng/mL、或1200ng/mL或在600ng/mL至800ng/mL、650ng/mL至850ng/mL、600ng/mL至1000ng/mL、600ng/mL至1200ng/mL、800ng/mL至1000ng/mL、900ng/mL至1000ng/mL、或1000ng/mL至1200ng/mL范围内的血浆铁蛋白浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的IL-8浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时血浆或血清IL-8浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆IL-8浓度的血浆或血清IL-8浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约24pg/mL、50pg/mL、75pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、300pg/mL、400pg/mL、500pg/mL、600pg/mL、700pg/mL、800pg/mL、或900pg/mL的血浆IL-8浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的IL-6浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时血浆或血清IL-6浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆或血清IL-6浓度的血浆或血清IL-6浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约4.4pg/mL、6pg/mL、8pg/mL、10pg/mL、15pg/mL、20pg/mL、25pg/mL、或30pg/mL的血浆IL-6浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的降钙素浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时血浆或血清降钙素浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆降钙素浓度的血浆或血清降钙素浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约9.4pg/mL、20pg/mL、30pg/mL、40pg/mL、50pg/mL、75pg/mL、100pg/mL、150pg/mL、200pg/mL、或250pg/mL的血浆降钙素浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的纤维蛋白原浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时纤维蛋白原浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆纤维蛋白原浓度的血浆纤维蛋白原浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约350mg/dL、375mg/dL、400mg/dL、425mg/dL、或450mg/dL或在350mg/dL至400mg/dL、350mg/dL至450mg/dL或400mg/dL至450mg/dL范围内的血浆纤维蛋白原浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个实施方案中，与施用ASM之前患者的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于嗜中性粒细胞占总白血细胞浓度的正常百分比的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，是70％、75％、80％、85％、90％、95％或更大的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加，可以用作急性期应答的测量。

在初始剂量或施用给个体的剂量的背景下，本文使用的术语“无毒低剂量”等表示这样的剂量：它是施用给个体来治疗ASMD的ASM的第一无毒剂量。在某些实施方案中，无毒低剂量是这样的剂量：0.001mg/kg至0.01mg/kg、0.001mg/kg至0.01mg/kg、0.001mg/kg至0.05mg/kg、0.001mg/kg至0.1mg/kg、0.001mg/kg至0.5mg/kg、0.05mg/kg至0.275mg/kg、0.075mg/kg至0.275mg/kg、0.05mg/kg至0.2mg/kg、0.075mg/kg至0.2mg/kg、0.1mg/kg至0.275mg/kg、0.1mg/kg至0.25mg/kg、0.1mg/kg至1mg/kg、0.5mg/kg至1mg/kg、0.75mg/kg至1mg/kg、0.1mg/kg至2mg/kg、0.5mg/kg至2mg/kg、0.75mg/kg至2mg/kg、1mg/kg至2mg/kg或1.25mg/kg至2mg/kg、1.5mg/kg至2mg/kg或1.75mg/kg至2mg/kg的ASM。在一些具体的实施方案中，无毒低剂量是这样的剂量：0.001mg/kg、0.005mg/kg、0.0075mg/kg、0.01mg/kg、0.0125mg/kg、0.025mg/kg、0.05mg/kg、0.075mg/kg、0.1mg/kg、0.125mg/kg、0.15mg/kg、0.175mg/kg、0.2mg/kg、0.225mg/kg、0.25mg/kg、0.275mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.75mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg或1mg/kg的ASM。

术语“个体”和“患者”在本文中互换地用于表示人。在一个具体的实施方案中，所述人具有或已经被诊断为患有ASMD。

在给个体施用一定剂量的ASM的背景下，本文使用的术语“治疗上有效的”表示，产生有益效果或治疗效果的ASM的量。在具体实施方案中，在给个体施用一定剂量的ASM的背景下，术语“治疗上有效的”表示，足以实现至少1种、2种、3种、4种或更多种下述作用的ASM的量：(i)脾体积减小，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估；(ii)肝鞘磷脂水平降低，这通过本领域已知的技术(例如，肝样品的生化分析和/或组织形态测定分析)来评估；(iii)运动能力增加，这通过本领域已知的技术(例如，周期测力法的最大工作负荷，包括预测的最大工作负荷百分比、氧耗量峰值和二氧化碳产量)来评估；(iv)肺功能增加，这通过本领域已知的技术来评估，例如，在美国胸科学会,1991,Am.Rev.Respir.Dis.144:1202-1218中所述的技术，诸如扩散能力(DL_CO)，通过例如肺量测定技术测得的预测的用力肺活量百分比(FVC)，通过例如肺量测定技术测得的在1秒内的用力呼气体积(FEV₁)，以及总肺容量；(v)支气管肺泡灌洗(BAL)鞘磷脂减少；(vi)肝体积减小，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估；(vii)肺表象改善，这通过本领域已知的技术(例如，高分辨率CT扫描或胸部X射线检查)来评估；(viii)皮肤、血浆和干血斑(DBS)中鞘磷脂浓度降低，这通过例如串联质谱法来测量；(ix)ASMD和/或与其有关的症状的严重性的减轻或改善；(x)与ASMD有关的症状的持续时间减小；(xi)与ASMD有关的症状的复发的预防；(xii)个体住院治疗减少；(vi)住院治疗时间缩短；(xiii)个体的生存期增加；(xiv)死亡率降低；(xv)住院治疗率降低；(xvi)与ASMD有关的症状的数目减少；(xvii)ASMD患者的无症状存活期增加；(xviii)神经功能(例如，心理运动功能、社会反应性等)改善；(xix)肺清除改善，这通过例如BAL细胞计数和曲线来测量；(xx)壳三糖苷酶的血清水平降低；(xxi)CCL18的血清水平降低；(xxii)脂质特性(例如，HDL、LDL、胆固醇、甘油三酯、和总胆固醇:HDL比)的改善；和(xxiii)提高的生活质量，这通过例如问卷法来评估。

本文使用的术语“疗法”和“治疗”可以表示，可以用于治疗、控制、或改善ASMD或与其有关的病症或症状的任意方案、方法、组合物、制剂、和/或药剂。在某些实施方案中，术语“疗法”和“治疗”表示，可用于治疗、控制、预防、或改善ASMD或与其有关的病症或症状的生物疗法、支持疗法、和/或其它疗法。在实施方案中，术语“疗法”表示实现下述1项、2项或更多项的疗法：(i)增加ASM向病理部位的递送，(ii)增加ASM的活性，和(iii)增加ASM的稳定性。在某些实施方案中，术语“疗法”表示除了ASM以外的疗法。在具体实施方案中，“其它疗法”和“其它治疗”表示除了ASM以外的疗法。

本文使用的术语“毒效应”等表示，在施用一定剂量的ASM以后，下述的1项、2项、3项或全部：(i)由临床症状确定的中等的或严重的有关不利事件，其干扰正常的日常功能，并需要额外的监测、干预、或治疗，或者，临床上关注的异常的实验室值或程序结果，其需要进一步监测、治疗、或研究。参见，例如，临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.1.1；(ii)在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素值大于1.5mg/dL、1.75mg/dL、2.0mg/dL、2.1mg/dL、2.2mg/dL、2.3mg/dL、2.4mg/dL、2.5mg/dL、2.6mg/dL、2.7mg/dL、2.75mg/dL、2.8mg/dL、2.9mg/dL、3.0mg/dL、3.1mg/dL、3.2mg/dL、3.3mg/dL、3.4mg/dL、3.5mg/dL、3.6mg/dL、3.7mg/dL、3.8mg/dL、3.9mg/dL或4mg/dL或在2.1mg/dL至2.5mg/dL、2.1mg/dL至3.0mg/dL、或2.1mg/dL至4mg/dL范围内，且持续超过16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周；(iii)在施用所述剂量的ASM以后持续6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于8.2μg/mL、8.3μg/mL、8.4μg/mL、8.5μg/mL、8.75μg/mL、9μg/mL、9.5μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL、或80μg/mL或在8.2μg/mL至10μg/mL、8.5μg/mL至10μg/mL、9μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至15μg/mL、10μg/mL至20μg/mL、15μg/mL至20μg/mL、或20μg/mL至30μg/mL范围内；或(iv)急性期应答。

通过急性期反应物(例如，C-反应蛋白、铁蛋白、白蛋白、IL-8、Il-6、降钙素、纤维蛋白原、铁或转铁蛋白)的浓度变化、嗜中性粒细胞百分比的变化、凝血酶原时间的变化、或部分促凝血酶原激酶时间的变化，可以评估急性期应答。在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的CRP/hs-CRP浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时CRP/hs-CRP浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆CRP/hs-CRP浓度的血浆CRP/hs-CRP浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约8.1mg/L、8.2mg/L、8.3mg/L、8.4mg/L、8.5mg/L、8.6mg/L、8.7mg/L、8.8mg/L、8.9mg/L、9mg/L、9.5mg/L、10mg/L、11mg/L、或12mg/L或在8.5mg/L至10mg/L、或8.5mg/L至12mg/L、或10mg/L至12mg/L范围内的血浆CRP/hs-CRP浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的铁蛋白浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时铁蛋白浓度的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆铁蛋白浓度的血浆铁蛋白浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约600ng/mL、625ng/mL、650ng/mL、675ng/mL、700ng/mL、725ng/mL、750ng/mL、775ng/mL、800ng/mL、850ng/mL、900ng/mL、950ng/mL、1000ng/mL、1050ng/mL、1100ng/mL、1150ng/mL、或1200ng/mL或在600ng/mL至800ng/mL、650ng/mL至850ng/mL、600ng/mL至1000ng/mL、600ng/mL至1200ng/mL、800ng/mL至1000ng/mL、900ng/mL至1000ng/mL、或1000ng/mL至1200ng/mL范围内的血浆铁蛋白浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的白蛋白浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时白蛋白浓度的降低，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，从正常范围3.5至5.0g/dL降低0.2、0.4、0.6、1、1.5、2.0g/dL的白蛋白浓度量值，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的铁蛋白浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时铁蛋白浓度的降低，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，从正常范围60至170mcg/dL降低20、40、60、80、100、120、140、160mcg/dL的铁蛋白浓度量值，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的转铁蛋白浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时转铁蛋白浓度的降低，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，从正常范围202至336mg/dL降低20、40、60、80、100、120、140、160、180mg/dL的转铁蛋白浓度量值，可以用作急性期应答的测量。

在一个实施方案中，与施用ASM之前患者的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于嗜中性粒细胞占总白血细胞浓度的正常百分比的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，是70％、75％、80％、85％、90％、95％或更大的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加，可以用作急性期应答的测量。

4.附图说明

图1是方案设计的图解表示。

图2显示了在下述方案中登记的患者的人口统计和基线特征。

图3A、3B、和3C描绘了在施用不同剂量的rhASM的不同患者中，随时间变化的神经酰胺的血浆水平(图3A)和鞘磷脂的血浆水平(图3B)以及干血斑中的鞘磷脂水平(图3C)。图的右轴描绘了患者数目和rhASM的剂量。

图4描绘了在所述方案过程中在施用不同剂量的rhASM的不同患者中随时间测定的总胆红素水平。图的右轴描绘了患者数目和rhASM的剂量。

图5A-5G描绘了在所述方案过程中在施用不同剂量的rhASM的不同患者中随时间测定的CRP/hs-CRP的水平(图5A)、嗜中性粒细胞百分比(图5B)、纤维蛋白原(图5C)、铁蛋白(图5D)、IL-8(图5E)、IL-6(图5F)、和降钙素(图5G)。图的右轴描绘了患者数目和rhASM的剂量。

图6描绘了各自施用不同剂量rhASM的4位患者突然出现的治疗不利事件，所述事件被认为是治疗有关的(可能、很可能、或确定)。

图7显示了患有ASMD的患者的2阶段rhASM重复剂量方案的第一治疗期(由剂量递增期和剂量维持期组成)。

5.发明详述

本发明涉及剂量递增酶替代疗法，以用于治疗患有ASMD的人个体，尤其是患有非神经学表现的NPD以及在某些实施方案中B型NPD的个体。更具体地，初始将无毒低剂量酶(ASM)施用给这样的患者，然后在以后的给药中增加剂量。然后可以将患者耐受的ASM最大剂量用作维持剂量。或者，可以将小于耐受的最大剂量的治疗有效剂量用作维持剂量。

NPD的治疗需要足够大的剂量，以实现ASM酶在病理器官(例如，脾、肺、心脏、肾和脑)中的充分分布。在给ASMKO小鼠静脉内施用重组人ASM以后，大多数ASM活性分布至肝，在其它病理器官(诸如脾、心脏、肾和肺)中检测到小量ASM酶活性(参见，例如，He等人,1999,Biochimia et Biophsyica Acta 1432:251-264的图9B)。因而，需要非常大的剂量来确保施用的酶向患者与ASMD或尼曼-皮克二氏病相关的肺、心脏和肾的分布和递送。

在ASM敲除的小鼠模型(ASKMO小鼠)中的研究表明，大多数施用的rhASM分布至肝和脾(在这里其减少底物)，但是以远远更低的程度分布在肺、心脏和脑中(Miranda等人FASEB 2000,14:1988)。随后在ASMKO小鼠模型中使用更大剂量的rhASM的研究中，在≤3.0mg/kg的剂量，底物被减少，且没有观察到毒性；实际上，在使用≥10mg/kg的剂量之前，没有观察到毒性的临床症状。参见，“Dose Responsive Toxicological FindingsFollowing Intravenous Administration of Recombinant Human AcidSphingomyelinase(rhASM)to Acid Sphingomyelinase Knock-out(ASMKO)Mice.”C.Nickerson,J.Murray,A.Vitsky,M.Hawes,S.Ryan,P.Ewing,B.Thurberg,L.Andrews.Dept Pharm/Tox,Pathology,Genzyme Corp.,Framingham,MA.,AmericanSociety of Human Genetics 2005；和“Elevations of Pro-Inflammatory Cytokinesand Decreases in Cardiovascular Hemodynamics Following IntravenousAdministration of Recombinant Human Acid Sphingomyelinase(rhASM)to AcidSphingomyelinase Knock-out(ASMKO)Mice.”J.Murray,A.M.D’Angona,C.Nickerson,A.Vitsky,M.Hawes,S.Ryan,P.Ewing,B.Thurberg,L.Andrews.Dept.Pharmacology/Toxicology&Pathology,Genzyme Corp.,Framingham,MA.,Society of Toxicology 2006。

基于这些ASKMO数据，我们用在下文的第6部分中所述的保守的最大剂量1.0mg/kg治疗无神经病的ASMD人个体。非常意外的是，使用低至0.3mg/kg的剂量，观察到在人个体中的毒性，包括与临床症状有关不利事件的发生。该结果是特别令人惊奇的，因为在敲除的小鼠模型中不存在ASM酶，与具有至少一些酶活性和相对温和的疾病的人个体相比，小鼠应当反映更严重的病症。

不希望受任何理论的约束，将大剂量的ASM施用给NPD患者，可以导致大量鞘磷脂水解成高浓度的神经酰胺，后者可以产生在那些NPD患者中观察到的有毒副作用。ASM酶将鞘磷脂水解成神经酰胺和磷酰胆碱，所述鞘磷脂是细胞质膜的主要组分(参见，例如，Milaus等人,2010FEBS Letters 584:1887-1894)。已知神经酰胺在细胞死亡中起作用，且已知是促细胞凋亡剂(参见，例如，Smith和Schuchman,2008,FASEB 22:3419-3431)。

此外，不同于与特征性的溶酶体贮存疾病有关的其它溶酶体酶，ASM在中性pH(见于血浆中)和酸性pH(见于溶酶体中)水解鞘磷脂(参见，例如，Schissel等人,1998.J.Biol.Chem.273:2738-2746)。ASM酶在血浆中起作用的能力，可以导致在脂蛋白和细胞质膜中存在的鞘磷脂的水解，这可以增加分解产物神经酰胺的量，后者可能造成在施用大剂量的ASM酶的NPD患者中观察到的有毒副作用。

为了解决下述问题：实现ASM酶向病理器官的充分分布，同时避免与施用大剂量的酶有关的毒性或使所述毒性最小化，本发明人开发了本文所述的方案，其中初始将无毒低剂量的ASM酶施用给NPD患者，并随时间增加剂量。随着ASM酶剂量的增加，可以监测患者的总的/直接的/间接的胆红素浓度、急性期反应物的产生、炎症介质的产生、和有关不利事件。低剂量的ASM的施用和酶的增加促进累积的鞘磷脂的去堆积。一旦患者被去堆积，可以安全地给患者施用更大剂量的ASM酶，以确保ASM酶向靶器官(例如，肝、脾、肺、心脏、肾、脑、骨髓、骨骼、关节等)的充分分布。在某些实施方案中，患者耐受的最大剂量可以用作维持剂量。或者，小于耐受的最大剂量的治疗有效剂量可以用作维持剂量。在一些实施方案中，基于患者的病症，可以增加或减小维持剂量。

在某些实施方案中，通过测量血浆鞘磷脂水平、血浆神经酰胺水平、“急性期反应物”和炎症介质(它们是炎症应答的度量)的产生、胆红素浓度(总的、直接的和间接的)和/或其它生化标志物，可以监测患者的治疗，以确保在将剂量升高至下一个水平之前的稳定应答。这些标志物包括但不限于：CRP/hs-CRP、细胞因子(例如，IL-8、Il-6)、降钙素、和铁蛋白。在具体实施方案中，可以监测患者的一个或多个有关不利事件，这可以包括但不限于：全身症状(例如，发热、恶心、呕吐、疼痛、肌痛和黄疸)。

5.1.剂量递增方案

描述了用于治疗ASMD的方法，所述方法包括：给个体施用一次或多次初始的无毒低剂量的ASM，以减少在个体中已经累积的鞘磷脂的量。在特定时间段以后，可以增加ASM的剂量，直到达到个体耐受的治疗上有效的最大剂量。一旦鉴别出该剂量，它可以用作维持剂量来治疗个体。所述维持剂量可以每周、每2周、或每月施用给个体，以治疗ASMD。在一些实施方案中，每3个月、每6个月或每年监测接受维持剂量的个体的下述1项、2项、3项或全部：(i)有关不利事件；(ii)总的/直接的/间接的胆红素浓度；(iii)血浆神经酰胺浓度；或(iv)急性期应答。如果个体经历中等强度的有关不利事件(例如，有关的中等的不利事件)，总胆红素值大于没有ASMD的人(例如，健康人)的总胆红素浓度、血浆神经酰胺浓度大于没有ASMD的人(例如，健康人)的血浆神经酰胺浓度、或急性期应答，则可以由医师或其它医学专业人员评价施用给个体的剂量，以确定所述剂量是否应当调整。

在一个实施方案中，用于治疗具有酸性鞘磷脂酶缺乏的人个体的方法包括：(a)用于去堆积人个体中累积的鞘磷脂底物的方案，该方案包括：(i)将初始的无毒低剂量的ASM施用给所述人个体；(ii)将连续更大剂量的ASM施用给所述人个体，并在每个连续剂量以后监测所述个体的一种或多种不利副作用，如由升高的胆红素或有关不利事件所指示的；和(b)维持方案，该方案包括：施用等于或小于个体耐受的最大剂量的剂量，作为所述个体的维持剂量。在某些实施方案中，所述初始剂量范围是：0.1mg/kg至0.5mg/kg或0.1mg/kg至1mg/kg的ASM。在一些实施方案中，在前次剂量之后1、2、3或4周施用连续更大剂量。在某些实施方案中，连续更大剂量比前次剂量高大约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1mg/kg、1.2mg/kg、1.5mg/kg、1.75mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg或5mg/kg。在一些实施方案中，连续更大剂量比前次剂量高0.1至0.5mg/kg、0.1mg/kg至1mg/kg、0.5mg/kg至1mg/kg、0.5mg/kg至2mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或2mg/kg至5mg/kg。在某些实施方案中，个体耐受的最大剂量是1mg/kg至2.5mg/kg。在一些实施方案中，将最大剂量施用给人个体，作为维持剂量。

在某些实施方案中，用于治疗患有ASMD的人个体的方法包括：(a)去堆积ASM给药，以减少在人个体中已经累积的鞘磷脂的量，其中所述去堆积ASM给药包括：(i)将无毒低剂量的ASM施用给人个体；和(ii)如果所述人个体没有表现由升高的总胆红素浓度、升高的血浆神经酰胺浓度、急性期反应物的产生、炎症介质的产生、或不利事件指示的一种或多种不利副作用(例如，如临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.1.1所定义)，将连续更大剂量的ASM施用给所述人；和(b)维持ASM施用，其中所述维持ASM施用包括：将维持剂量的ASM重复施用给所述人个体。在一些实施方案中，在施用一定剂量的ASM以后，监测所述患者的一种或多种不利副作用或总胆红素一段时间(例如，6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、每周、或直到下一剂量)。在某些实施方案中，在患者的疗程期间，可以调整施用的维持剂量。在一些实施方案中，施用给个体的维持剂量是个体耐受的最大剂量。

在一个具体实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：给有此需要的个体施用初始的无毒低剂量的ASM(例如，剂量为0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1mg/kg、0.1mg/kg至0.5mg/kg、或0.5至1mg/kg的ASM)，且在特定时间段(例如，3天、1周、2周、或3周)以后，连续增加施用给个体的ASM的剂量，直到一个或多个病理器官中的ASM活性水平是没有ASMD的个体(例如，健康个体或5、10、15、20、30、40、50、75、100、150、175或更多个个体的群体)的对应器官中的ASM活性的至少5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、75％、80％、85％、90％、95％或更多，这通过本领域已知的技术来测量，例如，在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的技术。在另一个实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：给有此需要的个体施用剂量为0.1mg/kg的ASM，且在特定时间段(例如，3天、1周、2周、或3周)以后，连续增加施用给个体的ASM的剂量，直到一个或多个下述病理器官中的ASM活性水平是没有ASMD的个体(例如，健康个体或5、10、15、20、30、40、50、75、100、150、175或更多个个体的群体)的对应器官中的正常ASM活性的5％至10％、5％至15％、5％至20％、10％至15％、10％至20％、15％至20％、15％至25％、25％至50％、50％至75％、或75％至95％，这通过本领域已知的技术来测量，例如，在He等人,2003,AnalyticalBiochemistry 314:116-120中所述的技术。在某些实施方案中，如果总胆红素浓度小于或等于2.0mg/dL或2.1mg/dL，且所述个体没有经历中等的或严重的有关不利事件，则连续增加所述剂量。在具体实施方案中，使用在Horinouchi等人,1995,Nature Genetics 10:288-293(它通过引用整体纳入本文)中所述的试验，基于健康小鼠的类似器官中的ASM活性，估测正常健康个体的脑、心脏、肾、和肝中的ASM活性是大约20至40单位/mg蛋白质。在某些实施方案中，使用在Horinouchi等人,1995,Nature Genetics 10:288-293中所述的试验，基于健康小鼠的类似器官中的ASM活性，估测正常健康个体的肺中的ASM活性是大约15至25单位/mg蛋白质，脾中的ASM活性是大约10至15单位/mg蛋白质。在某些实施方案中，一旦一个或多个病理器官中的ASM活性达到正常值或正常值的特定百分比，可以将等于或小于个体耐受的最大剂量的剂量施用给个体，作为维持剂量。根据个体的健康，可以随时间调整维持剂量。根据个体的情况，可以增加或减小维持剂量。

在一个实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：(a)给有此需要的人施用初始的无毒低剂量的ASM；和(b)在施用一定剂量的ASM以后，如果所述人没有表现1、2、3或4种下述的副作用，则施用连续更大剂量的ASM：(i)严重的有关不利事件，例如，由临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.1.1定义的；(ii)在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素值大于1.5mg/dL、1.75mg/dL、2.0mg/dL、2.1mg/dL、2.2mg/dL、2.3mg/dL、2.4mg/dL、2.5mg/dL、2.6mg/dL、2.7mg/dL、2.75mg/dL、2.8mg/dL、2.9mg/dL、3.0mg/dL、3.1mg/dL、3.2mg/dL、3.3mg/dL、3.4mg/dL、3.5mg/dL、3.6mg/dL、3.7mg/dL、3.8mg/dL、3.9mg/dL或4mg/dL或在2.1mg/dL至2.5mg/dL、2.1mg/dL至3.0mg/dL、或2.1mg/dL至4mg/dL范围内，且持续大于18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周；(iii)在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于8.2μg/mL、8.3μg/mL、8.4μg/mL、8.5μg/mL、8.75μg/mL、9μg/mL、9.5μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL、或80μg/mL或在8.2μg/mL至10μg/mL、8.5μg/mL至10μg/mL、9μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至15μg/mL、10μg/mL至20μg/mL、15μg/mL至20μg/mL或20μg/mL至30μg/mL范围内；或(iv)急性期应答。根据该实施方案，可以给有此需要的人连续施用更大剂量的ASM，只要所述人没有表现项目(i)至(iv)中的任意一项或多项。在人表现项目(i)至(iv)中的任意一项或多项的情况下，则根据表现的严重性，可以重复产生项目(i)至(iv)的表现的相同剂量，或可以将剂量降低至前次剂量。

在另一个实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：(a)给有此需要的人施用初始剂量为0.1mg/kg的ASM；(b)在施用所述剂量的ASM以后，在所述人中监测下述一项或多项：(i)总胆红素浓度,(ii)有关不利事件的表现；(iii)急性期应答；或(iv)血浆神经酰胺浓度；(c)基于项目(i)至(iv)中的一项或多项，确定是否调整(例如，增加或减小)或维持ASM的剂量；和(d)在施用在前一步骤(c)中确定的剂量的ASM以后，重复步骤(b)和(c)。在另一个实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：(a)给有此需要的人施用2次初始剂量为0.1mg/kg的ASM，间隔2至4周；(b)在施用每个剂量的ASM以后，在所述人中监测下述一项或多项：(i)总胆红素浓度，(ii)有关不利事件的表现；(iii)急性期应答；或(iv)血浆神经酰胺浓度；(c)基于项目(i)至(iv)中的一项或多项，确定是否调整(例如，增加或减小)或维持ASM的剂量；和(d)在施用前一步骤(c)中确定的剂量的ASM以后，重复步骤(b)和(c)。根据这些实施方案，如果0.1mg/kg的初始剂量或在步骤(c)中确定的调整剂量导致下述情况，可以给人施用更大剂量的ASM 1次或多次，间隔2至4周：(i)在施用另一剂量ASM的截止时间之前，总胆红素浓度小于或等于2.0mg/dL；(ii)没有有关不利事件或仅轻度的有关不利事件；(iii)在施用最后一次剂量的ASM 6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、48小时、或72小时，血浆神经酰胺在正常范围内；或(iv)没有急性期应答或统计上不显著的急性期应答。但是，如果0.1mg/kg的初始剂量或在步骤(c)中确定的调整的剂量导致下述情况，可以维持或降低剂量：(i)在施用另一剂量ASM的截止时间之前，总胆红素浓度为2.1mg/dL或更大；(ii)有关不利事件；(iii)在施用最后一次剂量的ASM 6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、48小时、或72小时，血浆神经酰胺超过正常范围；或(iv)统计上显著的急性期应答。

在另一个实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：(A)给有此需要的人施用2次初始剂量0.1mg/kg，间隔2周；(B)在施用每个初始剂量的ASM以后，监测人的(i)总胆红素浓度、(ii)有关不利事件的表现、(iii)(i)和(ii)二者；(C)基于项目(i)至(iii)中的一项或多项，确定是否调整(例如，增加或减小)或维持ASM的剂量；和(d)在施用前一步骤(c)中确定的剂量的ASM以后，重复步骤(b)和(c)，其中(a)如果总胆红素浓度小于或等于2.0mg/dL或所述人呈现轻度的有关不利事件，则增加施用给人的剂量；(b)如果总胆红素浓度是2.1mg/dL至3.1mg/dL或所述人呈现中等的有关不利事件，则所述人继续接受当前剂量1至4次，间隔2至4周，如果在最后一次施用剂量以后总胆红素浓度维持大于2.0mg/dL，则维持该剂量；(c)如果总胆红素浓度大于3mg/dL或所述人呈现严重的有关不利事件，则降低施用给人的剂量，或不再施用ASM。

在另一个实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：(A)给有此需要的人施用2次初始剂量0.3mg/kg，间隔2周；(B)在施用每个剂量的ASM以后，监测人的(i)总胆红素浓度、(ii)有关不利事件的表现、(iii)(i)和(ii)二者；(C)基于项目(i)至(iii)中的一项或多项，确定是否调整(例如，增加或减小)或维持ASM的剂量；和(D)在施用前一步骤(C)中确定的剂量的ASM以后，重复步骤(B)和(C)，其中(a)如果总胆红素浓度小于或等于2.0mg/dL或所述人呈现轻度的有关不利事件，则增加施用给人的剂量；(b)如果总胆红素浓度是2.1mg/dL至3.1mg/dL或所述人呈现中等的有关不利事件，则所述人继续接受当前剂量1至4次，间隔2至4周，如果在最后一次施用剂量以后总胆红素浓度维持大于2.0mg/dL，则维持该剂量；(c)如果总胆红素浓度大于3mg/dL或所述人呈现严重的有关不利事件，则降低施用给人的剂量，或不再施用ASM。

在一个具体的实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：给有此需要的个体施用剂量为0.1mg/kg的ASM，并在2周以后，每2周施用剂量为0.3mg/kg的ASM。在另一个具体实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：给有此需要的个体施用剂量为0.1mg/kg的ASM，在施用0.1mg/kg剂量的ASM以后2周，施用剂量为0.3mg/kg的ASM，并在施用0.3mg/kg剂量的ASM以后2周，施用剂量为0.6mg/kg的ASM。在另一个具体实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：给有此需要的个体施用剂量为0.1mg/kg的ASM，在施用0.1mg/kg剂量的ASM以后2周，施用剂量为0.3mg/kg的ASM，在施用0.3mg/kg剂量的ASM以后2周，施用剂量为0.6mg/kg的ASM，并在施用0.6mg/kg剂量的ASM以后2周，施用剂量为1mg/kg的ASM。在某些实施方案中，可以重复每个剂量至少2次，优选2至4次，然后加大剂量至下一水平。根据这些实施方案，如果总胆红素值等于或小于2.0mg/dL和/或所述个体经历轻度的有关不利事件，增加剂量。如果总胆红素值是在2.1至3mg/dL和/或所述个体经历中等的有关不利事件，不增加剂量。如果总胆红素值大于3.0mg/dL总胆红素和/或所述个体经历严重的有关不利事件，将剂量降低至以前耐受的剂量。

在具体实施方案中，根据在下文第8部分或第9部分以及以后部分中所述的方案或类似方案，治疗患者的ASMD。

在一个具体的实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：给有此需要的个体施用剂量为0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg.、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1mg/kg、或0.1mg/kg至0.5mg/kg或0.1mg/kg至1mg/kg的ASM，且在特定时间段(例如，3天、1周、2周、3周或4周)以后，如果总胆红素浓度小于或等于2.1mg/dL且所述个体没有经历中等的或严重的有关不利事件，则连续增加施用给个体的ASM的剂量。在一些实施方案中，连接增加ASM的剂量，直到达到个体耐受的治疗上有效的最大或最大剂量。在某些实施方案中，施用这样的耐受的最高或最大剂量，直到诸如病理器官中的累积的鞘磷脂被去堆积的时间，此后给个体施用维持剂量，所述维持剂量低于耐受的最大剂量且仍然是治疗上有效的。在一些实施方案中，随着患者病症的改善，随时间减小所述维持剂量。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：1种、2种或更多种严重的有关不利事件或由例如临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.1.1定义的有关不利事件。在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的总胆红素浓度相比，总胆红素浓度增加，所述增加持续大于2天、3天、5天、1周、2周、或3周。在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素浓度大于正常总胆红素浓度，且持续大于18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常总胆红素浓度小于大约1.2mg/dL。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素浓度大于大约1.5mg/dL、1.75mg/dL、2.0mg/dL、2.1mg/dL、2.2mg/dL、2.3mg/dL、2.4mg/dL、2.5mg/dL、2.6mg/dL、2.7mg/dL、2.75mg/dL、2.8mg/dL、2.9mg/dL、3.0mg/dL、3.1mg/dL、3.2mg/dL、3.3mg/dL、3.4mg/dL、3.5mg/dL、3.6mg/dL、3.7mg/dL、3.8mg/dL、3.9mg/dL或4mg/dL或在2.1mg/dL至2.5mg/dL、2.1mg/dL至3.0mg/dL、或2.1mg/dL至4mg/dL范围内，且持续大于18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周。

在另一个实施方案中，所述耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于正常血浆神经酰胺浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆神经酰胺浓度是大约1.5-8μg/mL。在某些实施方案中，所述耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于大约8.2μg/mL、8.3μg/mL、8.4μg/mL、8.5μg/mL、8.75μg/mL、9μg/mL、9.5μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL、或80μg/mL或在8.2μg/mL至10μg/mL、8.5μg/mL至10μg/mL、9μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至15μg/mL、10μg/mL至20μg/mL、15μg/mL至20μg/mL、或20μg/mL至30μg/mL范围内。

在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成急性期应答的最大剂量。通过急性期反应物浓度的变化、凝血酶原时间的变化、部分促凝血酶原激酶时间的变化、或嗜中性粒细胞百分比的变化，可以评估急性期应答。例如，通过与给个体施用ASM之前的那些因素相比，或与没有ASMD的人(例如，健康人)中的那些因素相比，在给个体施用ASM以后下述因素中的一种或多种的增加，可以评估急性期应答：嗜中性粒细胞百分比、凝血酶原时间(PT)、部分促凝血酶原激酶时间(PTT)、总胆红素浓度、C-反应蛋白(CRP/hs-CRP)浓度、血清淀粉样蛋白A(SAA)、血清淀粉样蛋白P组分、血管紧张素转换酶(ACE)、铁蛋白浓度、IL-6浓度、IL-8浓度、降钙素浓度、白蛋白浓度、或纤维蛋白原浓度。通过与ASM施用之前个体中的铁浓度或白蛋白浓度相比，或与没有ASMD的人(例如，健康人)中的铁浓度或白蛋白浓度相比，在给个体施用ASM之后铁浓度或白蛋白浓度的降低，也可以评估急性期应答。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的CRP/hs-CRP浓度相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，CRP/hs-CRP浓度增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆CRP/hs-CRP浓度大于正常血浆CRP/hs-CRP浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆CRP/hs-CRP浓度小于大约8mg/dL。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆CRP/hs-CRP浓度大于大约8.1mg/L、8.2mg/L、8.3mg/L、8.4mg/L、8.5mg/L、8.6mg/L、8.7mg/L、8.8mg/L、8.9mg/L、9mg/L、9.5mg/L、10mg/L、11mg/L、或12mg/L或在8.5mg/L至10mg/L、或8.5mg/L至12mg/L、或10mg/L至12mg/L范围内。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的铁蛋白浓度相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，铁蛋白浓度增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆铁蛋白浓度大于正常血浆铁蛋白浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆铁蛋白浓度是10至30ng/mL。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆铁蛋白浓度大于大约300ng/mL、325ng/mL、350ng/mL、375ng/mL、400ng/mL、425ng/mL、450ng/mL、475ng/mL、500ng/mL、525ng/mL、550ng/mL、575ng/mL、600ng/mL、625ng/mL、650ng/mL、675ng/mL、700ng/mL、725ng/mL、750ng/mL、775ng/mL、800ng/mL、850ng/mL、900ng/mL、950ng/mL、1000ng/mL、1050ng/mL、1100ng/mL、1150ng/mL、或1200ng/mL或在600ng/mL至800ng/mL、650ng/mL至850ng/mL、600ng/mL至1000ng/mL、600ng/mL至1200ng/mL、800ng/mL至1000ng/mL、900ng/mL至1000ng/mL、或1000ng/mL、或1000ng/mL至1200ng/mL范围内，其可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的IL-8浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆或血清IL-8浓度增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆IL-8浓度的血浆或血清IL-8浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约24pg/mL、50pg/mL、75pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、300pg/mL、400pg/mL、500pg/mL、600pg/mL、700pg/mL、800pg/mL、或900pg/mL的血浆IL-8浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的IL-6浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆或血清IL-6浓度增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆或血清IL-6浓度的血浆或血清IL-6浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约4.4pg/mL、6pg/mL、8pg/mL、10pg/mL、15pg/mL、20pg/mL、25pg/mL、或30pg/mL的血浆IL-6浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，与施用ASM之前患者的降钙素浓度相比，在施用一定剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆或血清降钙素浓度增加，可以用作急性期应答的测量。在另一个具体实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于正常血浆降钙素浓度的血浆或血清降钙素浓度，可以用作急性期应答的测量。在某些实施方案中，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，大于大约9.4pg/mL、20pg/mL、30pg/mL、40pg/mL、50pg/mL、75pg/mL、100pg/mL、150pg/mL、200pg/mL、或250pg/mL的血浆降钙素浓度，可以用作急性期应答的测量。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的纤维蛋白原浓度相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，纤维蛋白原浓度增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆纤维蛋白原浓度大于正常血浆纤维蛋白原浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆纤维蛋白原浓度是150mg/dL至300mg/dL。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆纤维蛋白原浓度大于大约350mg/dL、375mg/dL、400mg/dL、425mg/dL、或450mg/dL或在350mg/dL至400mg/dL、350mg/dL至450mg/dL或400mg/dL至450mg/dL范围内。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比大于嗜中性粒细胞占总白血细胞浓度的正常百分比。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的嗜中性粒细胞占总白血细胞的正常百分比是45％至60％。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加是70％、75％、80％、85％、90％、95％或更大。

在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：针对施用的ASM的抗体增加。在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成超敏反应的最大剂量。在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成细胞因子释放综合征的最大剂量。

在某些实施方案中，所述治疗上有效的个体耐受的最大剂量是1mg/kg至2.5mg/kg、2mg/kg至3mg/kg、3mg/kg至5mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至15mg/kg、15mg/kg至20mg/kg、15mg/kg至25mg/kg、20mg/kg至30mg/kg、或25mg/kg至50mg/kg。在一些实施方案中，所述治疗上有效的个体耐受的最大剂量是1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、或15mg/kg。在某些实施方案中，所述治疗上有效的个体耐受的最大剂量是20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、或50mg/kg。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：1种、2种或更多种严重的有关不利事件或如例如临床数据交换标准联合研究数据列表模型标准术语v.3.1.1所定义的有关不利事件。在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的总胆红素浓度相比，总胆红素浓度增加，所述增加持续大于2天、3天、5天、1周、2周、或3周。在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素浓度大于正常总胆红素浓度，且持续大于18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常总胆红素浓度是小于大约1.2mg/dL。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后，总胆红素浓度大于大约1.5mg/dL、1.75mg/dL、2.0mg/dL、2.1mg/dL、2.2mg/dL、2.3mg/dL、2.4mg/dL、2.5mg/dL、2.6mg/dL、2.7mg/dL、2.75mg/dL、2.8mg/dL、2.9mg/dL、3.0mg/dL、3.1mg/dL、3.2mg/dL、3.3mg/dL、3.4mg/dL、3.5mg/dL、3.6mg/dL、3.7mg/dL、3.8mg/dL、3.9mg/dL或4mg/dL或在2.1mg/dL至2.5mg/dL、2.1mg/dL至3.0mg/dL、或2.1mg/dL至4mg/dL范围内，且持续大于18小时、24小时、36小时、48小时或72小时、5天、1周、2周或3周。

在另一个实施方案中，所述耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于正常血浆神经酰胺浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆神经酰胺浓度是大约1.5至8μg/dL。在某些实施方案中，所述耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆神经酰胺浓度大于大约8.2μg/mL、8.3μg/mL、8.4μg/mL、8.5μg/mL、8.75μg/mL、9μg/mL、9.5μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL、或80μg/mL或在8.2μg/mL至10μg/mL、8.5μg/mL至10μg/mL、9μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至12μg/mL、10μg/mL至15μg/mL、10μg/mL至20μg/mL、15μg/mL至20μg/mL、或20μg/mL至30μg/mL范围内。

在另一个实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成急性期应答的最大剂量。通过急性期反应物浓度的变化，凝血酶原时间的变化、部分促凝血酶原激酶时间的变化、或嗜中性粒细胞百分比的变化，可以评估急性期应答。例如，通过与给个体施用ASM之前的那些因素相比，或与没有ASMD的人(例如，健康人)中的那些因素相比，在给个体施用ASM以后下述因素中的一种或多种的增加，可以评估急性期应答：嗜中性粒细胞百分比、凝血酶原时间(PT)、部分促凝血酶原激酶时间(PTT)、总胆红素浓度、C-反应蛋白(CRP/hs-CRP)浓度、血清淀粉样蛋白A(SAA)、血清淀粉样蛋白P组分、血管紧张素转换酶(ACE)、铁蛋白浓度、白蛋白浓度或纤维蛋白原浓度。通过与ASM施用之前个体中的铁浓度或白蛋白浓度相比，或与没有ASMD的人(例如，健康人)中的铁浓度或白蛋白浓度相比，在给个体施用ASM之后铁浓度或白蛋白浓度的降低，也可以评估急性期应答。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的CRP/hs-CRP浓度相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，CRP/hs-CRP浓度增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆CRP/hs-CRP浓度大于正常血浆CRP/hs-CRP浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆CRP/hs-CRP浓度是小于大约8mg/L。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆CRP/hs-CRP浓度大于大约8.1mg/L、8.2mg/L、8.3mg/L、8.4mg/L、8.5mg/L、8.6mg/L、8.7mg/L、8.8mg/L、8.9mg/L、9mg/L、9.5mg/L、10mg/L、11mg/L、或12mg/L或在8.5mg/L至10mg/L、或8.5mg/L至12mg/L、或10mg/L至12mg/L范围内。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的铁蛋白浓度相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，铁蛋白浓度增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆铁蛋白浓度大于正常血浆铁蛋白浓度。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的正常血浆铁蛋白浓度是10至30ng/mL。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，血浆铁蛋白浓度大于大约600ng/mL、625ng/mL、650ng/mL、675ng/mL、700ng/mL、725ng/mL、750ng/mL、775ng/mL、800ng/mL、850ng/mL、900ng/mL、950ng/mL、1000ng/mL、1050ng/mL、1100ng/mL、1150ng/mL、或1200ng/mL或在600ng/mL至800ng/mL、650ng/mL至850ng/mL、600ng/mL至1000ng/mL、600ng/mL至1200ng/mL、800ng/mL至1000ng/mL、900ng/mL至1000ng/mL、或1000ng/mL至1200ng/mL范围内。

在一个具体的实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：与施用ASM之前患者的嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比相比，在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比增加。在另一个具体实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不导致下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比大于嗜中性粒细胞占总白血细胞浓度的正常百分比。在没有ASMD的人(例如，健康人)中的嗜中性粒细胞占总白血细胞的正常百分比是45％至60％。在某些实施方案中，所述治疗上有效的耐受的最大剂量是，有效地治疗ASMD且不造成下述情况的最大剂量：在施用所述剂量的ASM以后6小时、8小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时或72小时，嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比的增加是70％、75％、80％、85％、90％、95％或更大。

在某些实施方案中，每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每8天、每9天、每10天、每11天、每12天、每13天、每2周、每3周、每4周、或每5周给个体施用本文所述的ASM的剂量。在一些实施方案中，每3至5天、每3至7天、每5至7天、每5至10天、每5至14天、每7至14天、每2至4周、或每3至5周给个体施用本文所述的ASM的剂量。在某些实施方案中，ASM的剂量的施用频率随着剂量的调整而变化。例如，可以每周或每2周施用0.3mg/kg的剂量，且可以每2周或每3周施用1mg/kg的剂量。

在一些实施方案中，给个体施用一定剂量的ASM(例如，维持剂量)，且持续12周、20周、25周、30周、35周、40周、45周、50周、52周、1年、1.5年、2年、2.5年、3年、3.5年、4年的时间，或直到患者经历有关不利事件、总胆红素值大于没有ASMD的人(例如，健康人)的胆红素值、血浆神经酰胺浓度大于没有ASMD的人(例如，健康人)的血浆神经酰胺浓度、或急性期应答。

在某些实施方案中，每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每8天、每9天、每10天、每11天、每12天、每13天、每2周、每3周、每4周、或每5周给个体施用初始的无毒低剂量的ASM。在一些实施方案中，每3至5天、每3至7天、每5至7天、每5至10天、每5至14天、每7至14天、每2至4周、或每3至5周给个体施用本文所述的ASM的剂量。在某些实施方案中，施用所述初始的无毒低剂量的ASM 4周、6周、8周、12周、14周或更长的时段。

在某些实施方案中，ASM剂量的连续增加是，比前次剂量高大约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1mg/kg、1.2mg/kg、1.5mg/kg、1.75mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg或5mg/kg。在一些实施方案中，ASM剂量的连续增加是比前次剂量高0.1至0.5mg/kg、0.1mg/kg至1mg/kg、0.5mg/kg至1mg/kg、0.5mg/kg至2mg/kg、1mg/kg至2mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或2mg/kg至5mg/kg。

通过可用于实现治疗效果的任意途径，可以施用本文所述的ASM剂量。ASM剂量的具体给药途径包括但不限于：静脉内、心室内、真皮内、透皮、皮下、肌肉内、鼻内、吸入、肺内、表面、透粘膜、颅内、鞘内、硬膜外和滑膜内。在一个实施方案中，给有此需要的个体全身地(例如，肠胃外地)施用ASM剂量。在另一个实施方案中，给有此需要的个体局部地施用ASM剂量。

有效地治疗ASMD的身体(非中枢神经系统)表现的ASM酶的剂量不能有效地穿透血脑屏障。因而，在具体实施方案中，将ASM在心室内或鞘内施用给NPD患者的脑。关于溶酶体贮存酶向脑的心室内递送的方法，参见，例如，美国专利申请公开号2009/0130079和2009/0123451，它们通过引用整体纳入本文。在某些实施方案中，将ASM脑室内施用给患者。关于脑室内输注ASM的方法，参见，例如，Dodge等人,2009,Experimental Neurology 215:349-357，它通过引用整体纳入本文。在一些实施方案中，通过间接脑实质内注射，将ASM施用给患者。参见，例如，Yang等人,2007,Experimental Neurology 207:258-266。在一些实施方案中，将修饰形式的ASM(其使所述酶靶向脑，诸如在下文第5.2部分中所述)施用给患者，以治疗ASMD。

施用给患者的ASM酶中仅小部分到达肺。因而，在具体实施方案中，将ASM施用至患者的肺。在某些实施方案中，通过鼻内或吸入途径，将ASM施用给患者。关于ASM的鼻内施用的信息，参见，例如，Ziegler等人,2009,Molecular Genetics and Metabolism 97:35-42，它通过引用整体纳入本文。在一些实施方案中，将修饰形式的ASM(其使所述酶靶向肺，诸如在下文第5.2部分中所述)施用给患者，以治疗ASMD。在某些实施方案中，使用喷雾器，将ASM施用给患者。通过支气管镜、计量剂量吸入器、或喷雾器而进行肺内注射，可以将ASM递送至肺。

在某些实施方案中，将ASM酶全身地施用给患者，以及局部地施用给特定器官，诸如脑和肺。在一些实施方案中，所述ASM酶的局部施用补充所述酶的全身施用。在具体实施方案中，在已经通过全身施用(例如，静脉内施用)去堆积患者中累积的鞘磷脂以后，将ASM酶局部地施用至例如脑或肺。

在某些实施方案中，在施用ASM之前，测定患者的基因型。在一些实施方案中，在施用ASM之前，测定患者表达的ASM的糖基化模式。施用与患者内源表达的ASM类似/相容的ASM，可以减小免疫原性的潜力。

在某些实施方案中，在施用ASM之前，测定内源表达的ASM的活性。使用本领域技术人员已知的技术，可以在DBS中和在培养的成纤维细胞中测量内源表达的ASM的活性。

在一个具体的实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减小脾体积，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法降低肝鞘磷脂水平，这通过本领域已知的技术(例如，肝样品的生化分析和/或组织形态测定分析)来评估。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法增加运动能力，这通过本领域已知的技术来评估，例如，周期测力法的最大工作负荷，包括预测的最大工作负荷百分比、氧耗量峰值、和二氧化碳产量。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法增加肺功能，这通过本领域已知的技术来评估，例如，DL_CO、FVC、FEV、和/或TLC。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减少支气管肺泡灌洗(BAL)鞘磷脂。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减小肝体积，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法改善肺表象，这通过本领域已知的技术来评估，例如，高分辨率CT扫描或胸部X射线检查。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法改善肺清除。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法降低肝、皮肤、血浆和DBS中的鞘磷脂浓度。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法降低血清壳三糖苷酶水平。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法降低血清CCL18水平。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法改善患者的脂质特性(例如，降低胆固醇)。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减轻或改善ASMD和/或与其有关的症状的严重性。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减小与ASMD有关的症状的持续时间。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法预防与ASMD有关的症状的复发。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减少个体的住院治疗。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减小住院治疗时间。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法增加个体的存活期。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法降低个体的死亡率。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法降低个体的住院治疗率。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法减少与ASMD有关的症状的数目。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法增加ASMD患者的无症状存活期。在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法改善个体的神经功能(例如，心理运动功能、社会反应性等)。

在另一个具体实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法提高患者的生活质量。在某些具体实施方案中，如下评估本文提供的用于治疗ASMD的方法对患者生活质量的提高，例如，简单的疲劳清单(BFI；Mendoza等人,1999,Cancer 85(5):1186-1196)、简单的疼痛清单——简短形式(BPI-SF；Cleeland等人,1994,Ann Acad Med Singapore 23(2):129-138)、ASM-健康评估问卷法(它是BFI、BPI-SF、和简短形式-36健康测量的复合体)、用于评估呼吸困难和疲劳的自我管理标准化的慢性呼吸道疾病问卷法(CRQ-SAS；Schunemann等人,2005,Eur.Respir.J.25:31-40)、以及急性后护理的活性测量(AM-PAC)、评估功能能动性(例如，可动性、自我护理、和应用的认知)的计算机适应性测试。

酸性鞘磷脂酶

ASM表示保留将鞘磷脂水解成神经酰胺和磷酰胆碱的能力的酸性鞘磷脂酶的任意形式，所述能力通过本领域技术人员已知的技术来评估，所述技术诸如在美国专利号4,039,388、4,082,781、5,686,240、和7,563,591以及国际公开号WO 2007/078806和WO 2006/058385(它们通过引用整体纳入本文)中所述的那些。在一个具体的实施方案中，在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120所述的基于荧光的高效液相色谱测定法中，酸性鞘磷脂酶具有将鞘磷脂水解成神经酰胺和磷酰胆碱的能力。在一个具体的实施方案中，通过例如在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的试验测得，酸性鞘磷脂酶具有ASM-1(SEQ ID NO:1，下文)的活性的至少30％、35％、40％、45％、50％、75％、80％、85％、80％、90％、95％或98％或30％至50％、40％至50％、50％至75％、50％至90％、75％至80％、75％至90％、75％至95％、或85％至95％。

在一个具体的实施方案中，所述ASM是人ASM。人ASM存在由选择性剪接产生的不同同工型。人ASM同工型之一是人ASM同工型1(有时称作ASM-1)，其具有在UniProtKB/Swiss-Prot登记号P17405-1中发现的氨基酸序列。另一种人ASM同工型是人同工型2(有时称作ASM-2)，其具有在UniProtKB/Swiss-Prot.登记号P17405-2中发现的氨基酸序列。第三种人ASM同工型是人同工型3(有时称作ASM-3)，其具有在UniProtKB/Swiss-Prot.登记号P17405-3中发现的氨基酸序列。下面提供了ASM-1(它是最丰富的同工型)的氨基酸序列：

(SEQ ID NO:1)。ASM-2与ASM-1的差异之处在于，ASM-1的氨基酸残基363至374(即，IGGFYALSPYPG(SEQ ID NO:2))被替换为氨基酸YLSSVETQEGKR(SEQ ID NO:3)，且ASM-1的氨基酸残基375至418在ASM-2中缺失。ASM-3与ASM-1的差异之处在于，ASM-1的氨基酸残基363至418在ASM-3中缺失。由于ASM-2和ASM-3具有酶活性(例如通过在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的试验测得)，它们被包括在可施用给个体的ASM。在一个具体的实施方案中，由于ASM-2和ASM-3具有ASM-1活性的至少30％、35％、40％、45％、50％、75％、80％、85％、80％、90％、95％或98％或30％至50％、40％至50％、50％至75％、50％至90％、75％至80％、75％至90％、75％至95％、或85％至95％(例如通过在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的试验测得)，它们被包括在可施用给个体的ASM。

在一个具体的实施方案中，所述人ASM具有在上面SEQ ID NO:1中公开的人酸性鞘磷脂酶的氨基酸序列、在美国专利号6,541,218中公开的人酸性鞘磷脂酶的氨基酸序列(例如，美国专利号6,541,218中的SEQ ID NO:2)、或在Schuchman等人,1991,J.Biol.Chem.266:8531-8539的图3中公开的氨基酸序列，它们各自通过引用整体纳入本文。

在具体实施方案中，所述人ASM是加工过的成熟形式。在其它实施方案中，所述人ASM是未成熟的未加工形式。ASM-1未成熟形式的长度是629个氨基酸，且含有在氨基酸残基1至46处发现的信号肽。成熟形式的ASM-1缺少该信号肽，且是从氨基酸残基47至氨基酸残基629。人ASM-1含有氨基酸残基85至169的皂化蛋白B-型结构域。关于ASM-1，下述氨基酸残基被糖基化(具体地，N-连接的糖基化)：86、175、335、395、和520。

除了人ASM的同工型以外，人ASM具有天然存在的不同变体。例如，已经鉴别出这样的人ASM基因的天然存在的变体，其具有在编码ASM的假定信号肽的基因区域内存在的不同数目的六核苷酸重复单位。参见，例如，Wan和Schuchman,1995,Biochimica et BiophysicaActa 1270:207-210(它通过引用整体纳入本文)，该文献描述了与9、7、6、5和4个六核苷酸重复序列相对应的5个等位基因的鉴别。此外，已经鉴别出具有单个氨基酸变化的人ASM的天然存在的变体。关于单核苷酸多态性(single polymorphism)的信息，参见，例如，Schuchman等人,1991,J.of Biol.Chem 266:8531-8539和Schuchman等人,1991,NucleicAcids Research 19(11):3160，它们通过引用整体纳入本文。由于人ASM的任一种天然存在的变体都具有酶活性(例如通过在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的试验测得)，它们被包括为可施用给个体的ASM。在一个具体的实施方案中，由于人ASM的任一种天然存在的变体具有ASM-1活性的至少30％、35％、40％、45％、50％、75％、80％、85％、80％、90％、95％或98％或30％至50％、40％至50％、50％至75％、50％至90％、75％至80％、75％至90％、75％至95％、或85％至95％(例如通过在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的试验测得)，它们被包括为可施用给个体的ASM。

已经鉴别出编码人ASM基因的许多单核苷酸多态性(SNP)(关于SNP的实例，参见，例如，ncbi网站：ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/)。由于编码ASM的基因中的任一个SNP具有酶活性(例如通过在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120中所述的试验测得)，它们被包括为可施用给个体的ASM。在一个具体的实施方案中，由于编码ASM的基因中的任一个SNP具有ASM-1的至少30％、35％、40％、45％、50％、75％、80％、85％、80％、90％、95％或98％或30％至50％、40％至50％、50％至75％、50％至90％、75％至80％、75％至90％、75％至95％、或85％至95％(例如通过在He等人,2003,Analytical Biochemistry314:116-120中所述的试验测得)的活性，它们被包括为可施用给个体的ASM。在某些实施方案中，所述ASM是人ASM的修饰形式。在一个具体的实施方案中，所述人ASM的修饰形式是在美国专利号7,527,956(它通过引用整体纳入本文)中公开的修饰形式。在另一个实施方案中，所述人ASM的修饰形式是在国际公开号WO 2008/136451(它通过引用整体纳入本文)中公开的修饰形式。在一些具体的实施方案中，所述ASM具有1种、2种或更多种下述性质的人ASM的修饰形式：(i)与未修饰的人ASM相比，增加向病理部位(例如，肺和/或脑)的靶向，(ii)与未修饰的人ASM相比，增加稳定性，和(iii)与未修饰的人ASM相比，增加活性。可以使用本领域已知的技术来测量ASM的稳定性、活性和靶向。在一个具体的实施方案中，使用在Gamacho等人,2008,J.Pharmacol.Exp.Ther.325:400-408(它通过引用整体纳入本文)中所述的用于评估ASM的靶向的技术。在另一个具体实施方案中，使用在He等人,1999,Biochimica et Biophysica Acta 1432:251-264或Dhami等人,2001,Lab.Invest.81:987-999(它们通过引用整体纳入本文)中所述的用于评估ASM的稳定性的技术。在另一个具体实施方案中，使用在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120(它通过引用整体纳入本文)中所述的用于评估ASM活性的技术。

在一个实施方案中，所述ASM是与未修饰的人ASM(诸如ASM-1)相比具有增加的酶活性的人ASM的修饰形式。关于其酶活性比野生型重组人ASM(例如，ASM-1)的活性更高的重组人ASM的突变体形式，参见，例如，Qiu等人,2003,J.Biol.Chem.278(35):32744-32752和美国专利号7,527,956。在一些实施方案中，由于锌阳离子的添加，与未修饰的人ASM(例如，ASM-1)相比，所述ASM具有增加的酶活性。关于锌在ASM活性中的作用的讨论，参见，例如，Schissel等人,1998,J.Biol.Chem 273:18250-18259，它通过引用整体纳入本文。在另一个实施方案中，所述ASM是这样的人ASM的修饰形式：与未修饰的人ASM(例如，ASM-1)相比，其具有增加的对人ASM的天然受体(例如，甘露糖-6-磷酸或高甘露糖)的亲和力。在一个具体的实施方案中，所述ASM被缀合至寡糖上，诸如在美国专利号7,001,994和国际专利申请公开号WO 2010/075010和美国专利申请公开号2010/0173385(它们通过引用整体纳入本文)中所述，以增加酶对它的天然受体的靶向。在另一个实施方案中，所述ASM是这样的人ASM的修饰形式：其结合替代受体(例如，细胞间粘附分子(ICAM)-1，其可以增加向诸如肺等器官的靶向)，而不结合ASM的天然受体。在一个实施方案中，所述ASM是与未修饰的人ASM(例如，ASM-1)相比具有增加的稳定性的人ASM的修饰形式。

在一些实施方案中，所述ASM直接地或间接地缀合或融合至靶向部分上，所述靶向部分诸如胰岛素-样生长因子(IGF)-I、IGF-II、瘦蛋白、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、或结合人胰岛素受体(HIR)的人源化抗体。关于使用IGF-I作为溶酶体贮存酶的靶向部分的讨论，参见，例如，美国专利申请公开号2009/0029467和美国专利号7,560,424(它们通过引用整体纳入本文)；关于使用IGF-II作为溶酶体贮存酶的靶向部分的讨论，参见，例如，美国专利号7,396,811(它通过引用整体纳入本文)。靶向部分IGF-I和IGF-II可以促进ASM酶靶向溶酶体。关于使用激素(诸如G-CSF)和瘦蛋白作为靶向部分的讨论，参见，例如，国际专利申请公开号WO 2007/091250和美国专利申请公开号2010/0183577，它们通过引用整体纳入本文。关于结合与药剂(诸如酶)相连的人胰岛素受体(HIR)的人源化单克隆抗体的讨论，参见，例如，美国专利申请公开号2004/0101904，它通过引用整体纳入本文。靶向部分G-CSF、瘦蛋白和结合HIR的抗体，可以促进ASM酶靶向脑。

在某些实施方案中，与未修饰的ASM(例如，未修饰的人ASM，例如，ASM-1)相比，所述ASM是具有降低的活性的ASM修饰形式(例如，人ASM的修饰形式)。在一些实施方案中，与未修饰的ASM(诸如未修饰的人ASM，例如，ASM-1)相比，所述ASM是具有增加的向病理部位的靶向和降低的酶活性的ASM修饰形式(例如，人ASM的修饰形式)。

在某些实施方案中，所述ASM是ASM的高度磷酸化形式。关于用于制备溶酶体酶的高度磷酸化形式的技术的讨论，参见，例如，美国专利申请公开号2002/0150981，它通过引用并入本文。

通过本领域已知的任意方法，可以制备ASM酶，所述方法包括但不限于：重组DNA方法、DNA克隆(关于人ASM的cDNA克隆，参见，例如，Schuchman等人,1991,J.Biol.Chem 266:8531-8539和美国专利号5,773,278，它们通过引用整体纳入本文)、基因组克隆、基因活化(关于基因活化技术，参见，例如，美国专利号5,641,670，它通过引用整体纳入本文)或选择的制备高水平ASM酶的细胞系(例如，哺乳动物、酵母、原核、昆虫细胞(例如，Sf 9、Sf21、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)和家蚕蛾(Bombyxmori))和植物细胞)。ASM以及制备ASM的方法，描述在例如美国专利号5,773,278、6,541,218、5,686,240、和7,527,956中，它们各自通过引用整体纳入本文。

在一个具体的实施方案中，所述ASM是重组制备的ASM(例如，重组制备的人ASM)。具有进行适当加工(即，信号切割、糖基化、磷酸化和蛋白分选)的细胞机制和元件的细胞表达系统是优选的。例如，哺乳动物细胞表达系统优选地用于表达适当地折叠和加工的生物活性酶；当施用给人时，这样的表达产物应当表现出适当的组织靶向，且没有不利的免疫反应。

在某些实施方案中，通过在哺乳动物细胞中过表达ASM cDNA，制备ASM(例如，人ASM)。在一个具体的实施方案中，通过在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中过表达人ASM cDNA，制备人ASM。参见，例如，He等人,1999,Biochimia et Biophsyica Acta 1432:251-264(关于在CHO细胞中过表达人ASM cDNA的方法)和US 6,541,218，它们各自通过引用整体纳入本文。在某些实施方案中，通过在共表达α-2,6-唾液酸转移酶的CHO细胞中过表达人ASMcDNA，制备人ASM。参见，例如，美国专利号5,047,335(它通过引用整体纳入本文)，该专利描述了工程化成表达α2,6-唾液酸转移酶的CHO细胞。

在另一个具体实施方案中，所述哺乳动物细胞是人细胞。可以用于重组表达ASM(例如，人ASM)的人细胞的实例包括但不限于：Crucell Per.C6细胞、HT 1080细胞、HeLa细胞、HEK 293细胞、293T细胞、WI38细胞、HuT292细胞、LF 1043(HEL)细胞、MRC-5细胞、TMK-1细胞、BT483细胞、Hs578T细胞、HTB2细胞、HTB3细胞、HTB4细胞、BT 20细胞、T47D细胞.CRL7O3O细胞、HsS78Bst细胞、721细胞、A2780细胞、A172细胞.、A253细胞、COR-L23/R23细胞、COV-434细胞、DU145细胞、DuCaP细胞、EM2细胞、Saos-2细胞、U373细胞、WM39细胞、L132细胞、A-5489细胞、G-293细胞、G-401细胞、CAKI-1细胞、RD细胞、和YAR细胞。可以用于表达ASM的其它示例性的人细胞包括：在欧洲分子生物学实验室的免疫多态性数据库(ImmunoPolymorphism Database of the European Molecular Biology Laboratory)和美国国立卫生研究院(U.S.National Institutes of Health)的数据库中列出的那些人细胞系，以及那些可商业得到的形式，例如，弗吉尼亚州马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,Manassas,Virginia)和Lifeline CellTechnology,Walkersville,Maryland。当使用人细胞系进行制备时，使用cDNA、hASM的gDNA或通过基因活化技术(诸如在美国专利号5,641,670中所述的那些，该专利通过引用整体纳入本文)，可以制备rhASM。

可以用于制备ASM(例如，人ASM)的其它哺乳动物细胞的实例包括但不限于：Vero细胞、VERY细胞、BHK细胞、COS细胞、MDCK细胞、或3T3细胞。在某些实施方案中，骨髓瘤细胞被用于制备ASM(例如，人ASM)。骨髓瘤细胞的非限制性实例包括：NS0细胞、45.6TG1.7细胞、AF-2克隆9B5细胞、AF-2克隆9B5细胞、J558L细胞、MOPC 315细胞、MPC-11细胞、NCI-H929细胞、NP细胞、NS0/1细胞、P3NS1Ag4细胞、P3/NS1/1-Ag4-1细胞、P3U1细胞、P3X63Ag8细胞、P3X63Ag8.653细胞、P3X63Ag8U.1细胞、RPMI 8226细胞、Sp20-Ag14细胞、U266B1细胞、X63AG8.653细胞、Y3.Ag.1.2.3细胞、和YO细胞。

在一些实施方案中，植物细胞培养系统被用于表达ASM。关于使用植物细胞培养系统来制备蛋白质的植物细胞和方法，参见，例如，美国专利号5,929,304、7,504,560、6,770,799、6,551,820、6,136,320、6,034,298、5,914,935、5,612,487、和5,484,719、美国专利申请公开号2009/0208477、2009/0082548、2009/0053762、2008/0038232、2007/0275014和2006/0204487，和Shoji等人,2008,Vaccine,26(23):2930-2934，和D’Aoust等人,2008,J.Plant Biotechnology,6(9):930-940(它们通过引用整体纳入本文)。具体地，美国专利申请号2009/0208477、2008/0038232和2006/0204487描述了使用转基因植物根、尤其是胡萝卜细胞来表达和制备酶活性的高甘露糖溶酶体酶。在一个具体的实施方案中，将胡萝卜细胞工程化成表达ASM。在某些实施方案中，藻类(例如，莱氏衣藻(Chlamydomonasreinhardtii))可以被工程化成表达ASM(参见，例如，Rasala等人,2010,PlantBiotechnology Journal(2010年3月7日在线公开，它通过引用整体纳入本文)。

ASM的组织和细胞吸收由高甘露糖残基(例如，在巨噬细胞中)和由甘露糖-6-磷酸(例如，在肝中)介导。因而，可能希望制备具有改变的聚糖含量和/或磷酸化的ASM，以增强药物分布。例如，ASM可以由具有突变(例如，敲除了至少一个加工甘露糖苷酶的高尔基体)的细胞来制备。在一个实施方案中，所述突变减少所述基因的表达、降低蛋白质或活性水平、或改变甘露糖苷酶的分布或其它翻译后修饰，例如，糖链的加工。在一个具体的实施方案中，所述突变降低加工甘露糖苷酶活性的高尔基体的水平。所述突变可以是在加工甘露糖苷酶的第1类中、在加工甘露糖苷酶的第2类中、在加工甘露糖苷酶的第1类中和加工甘露糖苷酶的第2类中。加工甘露糖苷酶的第1类包括：高尔基体甘露糖苷酶IA、高尔基体甘露糖苷酶IB、高尔基体甘露糖苷酶IC。加工甘露糖苷酶的第2类包括：高尔基体甘露糖苷酶II。关于制备高甘露糖蛋白质的方法，参见，例如，国际专利申请公开号WO 02/15927和美国专利号7,138,262，它们通过引用整体纳入本文。

在某些实施方案中，在有甘露糖苷酶抑制剂存在下，培养表达ASM的细胞，所述抑制剂例如抗体、kifunensine、苦马豆素、制甘糖酶素、6-脱氧-1,4-二脱氧-1,4-亚氨基-D-甘露醇(6-脱氧-DIM)、或6-脱氧-6-氟-1,4-二脱氧-1,4-亚氨基-D-甘露醇(6-脱氧-6-氟-DIM)。在有这样的抑制剂存在下培养ASM，可以导致高甘露糖ASM的制备。在一些实施方案中，表达ASM的细胞包括这样的核酸序列(诸如反义分子或核酶)：其可以结合或灭活细胞甘露糖苷酶核酸序列(例如，mRNA)，并抑制蛋白质的表达。关于制备高甘露糖蛋白的方法，参见，例如，国际专利申请公开号WO 02/15927和美国专利号7,138,262，它们通过引用整体纳入本文。

在某些实施方案中，通过用不同的酶(诸如神经氨酸酶、半乳糖苷酶和β-N乙酰基氨基葡糖苷酶)相继处理，改造重组表达的ASM酶的糖链。关于改造溶酶体酶的糖链的方法，参见，例如，美国专利号5,549,892，它通过引用整体纳入本文。

通过修饰ASM以生成高度磷酸化的甘露糖残基和M6P，可以增强由甘露糖-6-磷酸(M6P)介导的ASM吸收。例如，通过重组技术，可以修饰ASM，以将额外的甘露糖-6-磷酸导入ASM中，用于增强细胞吸收。参见，例如，Matsuoka等人,2010Mole.Ther.18:1519-1526，它通过引用整体纳入本文。在其它实施方案中，可以将ASM偶联至含有甘露糖-6-磷酸(M6P)的高度磷酸化的寡糖衍生物上。参见，例如，美国专利号7,001,994、美国专利申请公开US2010/0173385和国际公开号WO2010/075010。在另一个方案中，酵母培养系统可以用于表达含有额外的高度磷酸化的甘露糖-6-磷酸残基的重组ASM。参见，例如，Akeboshi等人,2009Glycobiology 19(9):1002-1009，它通过引用整体纳入本文。

一旦已经制备出ASM，可以如下分离或纯化它：通过本领域已知的用于分离或纯化蛋白质的任意方法，例如，通过色谱法(例如，离子交换，高效液相色谱法，亲和力、尤其是通过对ASM的亲和力，通过蛋白质A，和尺寸柱色谱法)、离心、溶解度差异、或通过用于分离或纯化蛋白质的任意其它标准技术。在由培养的细胞分泌ASM酶的情况下，可以容易地从培养基回收ASM。关于纯化ASM的方法，参见，例如，He等人,1999,Biochimia et BiophsyicaActa 1432:251-264。

ASM酶可以配制成用于任意给药途径(例如，输注、皮下的、肌肉内的、鞘内的、心室内的、鼻内的、吸入或真皮内的)。ASM酶可以以冻干形式提供，其在使用之前重构，例如，使用无菌盐水(例如，0.9％氯化钠)或无菌水重构。或者，ASM酶可以以含水形式提供。在某些实施方案中，在包含锌的制剂中，将ASM施用给个体。在有些实施方案中，通过使用例如注射泵或具有泵的输注袋而进行输注，将ASM酶施用给患者。

在某些实施方案中，在载体(诸如脂质体或聚阳离子载体)中，将ASM施用给个体。关于可以用于施用ASM的载体，参见，例如，美国专利号5,716,614，它通过引用整体纳入本文。在一些实施方案中，在ICAM-1-靶向的纳米载体中，将ASM施用给个体。关于使用ICAM-1-靶向的纳米载体的ASM递送，参见，例如，Muro等人,2006,Mol.Ther.13(1):135-141，它通过引用并入本文。

患者群体

在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其具有或被诊断为具有编码酸性鞘磷脂酶的基因中的一个或多个突变。在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其具有或被诊断为具有尼曼-皮克二氏病(NPD)。在一个实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其具有或被诊断为具有A型NPD。在另一个具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其具有或被诊断为具有B型NPD。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD个体具有SMPD1基因中的一个或多个突变。在一些实施方案中，所述突变是错义突变。在其它实施方案中，所述突变是导致删除1个、2个或更多个氨基酸残基的缺失。在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗ASMD的个体具有一个或多个下述突变：

表1

关于酸性鞘磷脂酶基因(命名为SMPD1)中的突变，参见，例如，Simonaro等人,2002,Am.J.Hum.Genet.71:1413-1419，它通过引用并入本文。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体内源性表达这样的ASM：其具有正常人ASM(例如，ASM-1)的活性的2至5％、5至10％、5至15％、5至20％、5％至30％、或20％至30％。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体内源地表达这样的ASM：其具有正常人ASM(例如，ASM-1)的活性的小于30％、25％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％或1％。关于可以用于测量ASM活性的技术，参见，例如，美国专利号4.039,388、4,082,781、5,686,240、和7,563,591和国际公开号WO 2007/078806和WO 2006/058385，它们通过引用整体纳入本文。在一个具体的实施方案中，在He等人,2003,Analytical Biochemistry 314:116-120(它通过引用并入本文)中所述的基于荧光的高效液相色谱测定法被用于测量ASM活性。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体表现出一种或多种NPD症状。NPD的症状包括但不限于：腹胀、肝肿大、脾肿大、肝脾肿大、嗜中性粒细胞减少症、肺病、淋巴腺病、存在组织化学特征性NPD泡沫细胞、贫血(例如，小红细胞性贫血)、血小板减少症、再发性呕吐、慢性便秘、生长不足(例如，减小的直线性生长和体重)、青春期延迟、再发性碰伤、再发性出血、致动脉粥样化的脂质特性(高胆固醇、甘油三酯、LDL、和低HDL)、疼痛(头疼、背、四肢、腹部)、疲劳、饱满感过早、低忍耐力、骨质减少、神经学表现、和呼吸困难(例如，间质性肺病、呼吸短促)。NPD的神经学表现包括：樱桃红斑、张力过低、肌无力、精神运动性阻抑、痉挛状态、社会无应答性、应激性、和癫痫发作。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人个体：其表现出与非神经病性NPD一致的两种或更多种临床特征。在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗其ASM的个体是这样的人个体：其表现出与非神经病性NPD一致的2种或更多种临床特征：血小板减少症、贫血、嗜中性粒细胞减少症、肝肿大、脾肿大、和肺病。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人个体：其表现出与神经病性NPD一致的两种或更多种临床特征。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其脾体积是健康人脾体积的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12倍，这通过本领域已知的技术来评估，例如，磁共振成像(MRI)。在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其脾体积是健康人脾体积的8倍，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其脾体积是健康人脾体积的8至12、9至12、10至12、或12至14倍，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估。在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其脾体积≥正常值(MN)的8倍(即，体重的1.6％)，这通过本领域已知的技术(例如，MRI)来评估。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其扩散能力(DL_CO)是健康人的预测DL_CO的20％至80％、25％至80％、30％至80％、40％至80％、50％至80％、或60％至80％。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其DL_CO是健康人的预测DL_CO的20％至90％、25％至90％、30％至90％、40％至90％、50％至90％、60％至90％、或70％至90％。DL_CO测量扩散受限气体(例如，一氧化碳)每分钟穿过肺泡毛细管膜的扩散速率。通过对比在吸入已知量的一氧化碳以后所呼出的一氧化碳的量，可以计算DL_CO。本领域已知的技术可以用于评估DL_CO。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是婴儿。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其是2至3个月龄、2至6个月龄、3至6个月龄、4至6个月龄、5至8个月龄、或6至9个月龄。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是未成年人。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其是1至3岁、2至3岁、3至5岁、4至5岁、5至7岁、或6至9岁。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是成年人。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是老年人。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其是10至18岁、10至20岁、12至20岁、15至20岁、20至25岁、21至25岁、21至30岁、25至30岁、30至35岁、35至40岁、40至45岁、45至50岁、50至55岁、55至60岁、60至65岁、65至70岁、70至75岁、75至80岁、80至85岁、85至90岁、90至95岁或95至100岁。

在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是女人。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是男人。在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的女人：其没有怀孕，或未处于哺乳期。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的女人：其在怀孕中，或将要怀孕，或处于哺乳期。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其尚未进行重要器官移植(例如，肝或骨髓移植)。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其已经进行重要器官移植(例如，肝或骨髓移植)。在一些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其尚未进行全部或部分脾切除。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其已经进行全部或部分脾切除。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其不具有或尚未诊断出具有下述的一种或多种：活动性乙型肝炎、活动性丙型肝炎、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、肝硬化、或显著的心脏病(例如，中等的或严重的肺动脉高压或瓣膜功能障碍，或通过超声心动描记术测得小于50％、小于40％、小于30％或小于20％的左心室射血分数)。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其具有或已经被诊断出具有下述的一种或多种：活动性乙型肝炎、活动性丙型肝炎、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、肝硬化、或显著的心脏病(例如，中等的或严重的肺动脉高压或瓣膜功能障碍，或通过超声心动描记术测得小于50％、小于40％、小于30％或小于20％的左心室射血分数)。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其不具有下述的一种或多种：国际标准化比率(INR)大于1.25、1.5、1.75或2，血小板计数小于60x10³/μL，丙氨酸氨基转移酶(ALT)大于250IU/L，天冬氨酸氨基转移酶大于250IU/L，或总胆红素大于1.5mg/dL、1.75mg/dL或2mg/dL。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其具有下述的一种或多种：国际标准化比率(INR)大于1.25、1.5、1.75或2，血小板计数小于60x 10³/μL，丙氨酸氨基转移酶(ALT)大于250IU/L，天冬氨酸氨基转移酶大于250IU/L，或总胆红素大于1.5mg/dL、1.75mg/dL或2mg/dL。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其没有接受一种或多种下述药物：氯丙嗪、丙米嗪或地昔帕明。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其正在接受一种或多种下述药物：氯丙嗪、丙米嗪或地昔帕明。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其没有接受可能造成或延长出血(例如，抗凝血剂、布洛芬、阿司匹林、大蒜添加物、银杏、和人参)或具有潜在肝毒性(例如，3-羟基-3-甲基戊二酰基[HMG]-CoA还原酶抑制剂、红霉素、丙戊酸、抗抑郁药、卡瓦根(kava)和紫锥花属(echinaecea))的草药添加物或药物。在其它实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其正在接受一种或多种下述的草药添加物或药物：抗凝血剂、布洛芬、阿司匹林、大蒜添加物、银杏、人参、3-羟基-3-甲基戊二酰基[HMG]-CoA还原酶抑制剂、红霉素、丙戊酸、抗抑郁药、卡瓦根和紫锥花属。

在具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗的ASMD的个体是这样的人：其满足在第6部分、第8部分和第9部分以及以下部分中的工作实施例的个体标准中的一项、两项或更多项、或全部。

5.2.监测治疗

根据本文提供的方法，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以监测许多参数(例如，因子或标志物)。在某些实施方案中，在施用ASM之前，且在ASM疗程期间根据需要或推荐，进行体检。体检可以包括下述评估：一般表象、皮肤、头、耳、眼、鼻、和喉(HEENT)、淋巴结、心脏、肺、腹、四肢/关节、神经、精神状态、和反射。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以评估生命体征、连续心率、呼吸速率、温度和氧饱和度。从例如施用一定剂量的ASM之前6小时至施用一定剂量的ASM之后72小时，可以通过遥测连续监测心率。

在具体实施方案中，可以在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后的指定时间，进行完全血细胞计数、差别血尿素氮(BUN)、碳酸氢盐、肌酸酐、葡萄糖、尿酸、钙、磷酸盐、白蛋白、总蛋白质、钠、钾、氯化物、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、具有MB分数的肌酸激酶、和尿分析(包括尿颜色、外观、比重、pH、蛋白质、葡萄糖、酮、胆红素、血红蛋白，以及如果指示的话，显微镜检查)。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以进行肝检查、凝血研究、和/或禁食脂质特性。肝功能检查可以包括：评估丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(AP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)以及总胆红素和直接胆红素的浓度。凝血研究可以包括：评估凝血酶原时间(PT)、部分促凝血酶原激酶时间(PTT)、国际标准化比率(INR)、D-二聚体浓度和纤维蛋白原浓度。禁食脂质特性评估可以包括：评估总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和甘油三酯。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，进行皮肤活组织检查。在一些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，进行肝活组织检查。通过metamorph组织学分析，可以评估皮肤和肝活组织检查中的鞘磷脂水平。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，进行肺功能检查。根据美国胸科学会(American Thoracic Society，ATS)指南(ATS,1991,Am Rev RespirDis 144:1202-1218)，可以标准化肺功能检查设备校正和检查管理方案。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，评估预测的用力肺活量百分比(FVC)。FVC是用力操作过程中呼出的空气的总体积。使用标准的肺量测定技术，可以测量FVC。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以评估第一秒用力呼气体积(FEV1)。FEV1是在FVC的第一秒过程中呼出的空气的体积。使用标准的肺量测定技术，可以测量FEV1。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以评估总肺容量(TLC)。TLC是在最大吸气努力以后肺内的空气的总体积。使用全身体积描记术，可以测量TLC。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以评估DL_CO。DL_CO测量扩散受限气体(一氧化碳，CO)每分钟穿过肺泡毛细管膜的扩散速率。通过对比在吸入已知量的CO以后所呼出的一氧化碳的量，可以计算DL_CO。可以包括氦(其不会扩散穿过肺泡毛细管膜)作为吸入的CO的示踪剂，以控制空气滞留。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，可以进行胸部X-射线检查(后面-前面和侧面)。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，进行腹部MRI。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，收集血液样品，用于评估生物标志物、胆红素浓度、和嗜中性粒细胞占总白血细胞的百分比。在一个具体的实施方案中，使用本领域技术人员已知的技术，评估一种或多种下述生物标志物的浓度：CRP/hs-CRP浓度、鞘磷脂浓度、铁浓度、铁蛋白浓度、降钙素浓度、白蛋白浓度、SAA、血清淀粉样蛋白P组分、ACE、CCL18、壳三糖苷酶、转铁蛋白、纤维蛋白原浓度、和血浆鞘磷脂浓度、血浆神经酰胺浓度。在某些实施方案中，使用本领域技术人员已知的技术，评估一种或多种下述细胞因子的浓度：IL-6和IL-8。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，评估针对ASM的抗体(例如，抗-重组人ASM IgG和/或抗-重组人ASM IgE)的浓度。在一些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，评估1种、2种或更多种补体因子的浓度。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，评估血清类胰蛋白酶的浓度。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，评估皮肤试验，以测定IgE-介导的对ASM的反应。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，测量ASM的药代动力学特性。在一些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，测量BAL细胞计数。关于在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后可以评估的其它参数，参见下文第8部分以及以下部分。

在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前1周、72小时、48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时、30分钟或15分钟，评估本文所述的因子或标志物。在一些实施方案中，在施用一定剂量的ASM过程中，评估本文所述的因子或标志物。例如，在施用一定剂量的ASM过程中，评估本文所述的因子或标志物。在某些实施方案中，在施用一定剂量的ASM以后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、16小时、18小时、24小时、36小时、48小时、72小时、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月或更久，评估本文所述的因子或标志物。在某些实施方案中，在ASM给药特定次数以后数小时或数周，评估本文所述的因子或标志物。例如，在ASM给药特定次数以后，可以每4周、每个月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月或每6个月评估本文所述的因子或标志物。在某些实施方案中，每4周、每个月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月、每6个月、每7个月、每8个月、每9个月、每10个月、每11个月、或每12个月，评估因子或标志物。在一些实施方案中，每1至2个月、每1至4个月、每2个月至4个月、每2个月至4个月、每3个月至4个月、每2个月至5个月、每3个月至5个月、每4个月至5个月、每2个月至6个月、每3个月至6个月、每4个月至6个月、或每5个月至6个月，评估因子或标志物。在某些实施方案中，每6个月至8个月、每6个月至12个月、每8个月至12个月、每9个月至12个月、或每10个月至12个月，评估因子或标志物。在一些实施方案中，在施用一定剂量的ASM之前、过程中和/或之后，没有评估一种或多种本文所述的因子或标志物。

在某些实施方案中，评估一种或多种因子或标志物所得到的结果指示，应当调整ASM的剂量。

5.3.生物样品

根据本文所述的方法，在检测和/或测量细胞群体、因子或标志物(例如，生物标志物)之前，对生物样品进行一个或多个预处理步骤。在某些实施方案中，通过离心、过滤、沉淀、透析、或色谱法，或通过这些预处理步骤的组合，预处理生物流体。在其它实施方案中，通过冷冻、化学固定、石蜡包埋、脱水、透化、或匀浆化，随后离心、过滤、沉淀、透析、或色谱法，或通过这些预处理步骤的组合，预处理组织样品。在某些实施方案中，在根据本文所述的方法测定样品中特定细胞类型的数目或量之前，通过从样品去除特定类型的细胞，或从样品去除碎片，预处理样品。

所述生物样品可以是组织样品、生物流体、排泄物、或来自人个体的任意其它样品。在一些实施方案中，所述生物样品是血液样品或骨髓样品。在某些实施方案中，所述生物样品是组织样品(例如，肝、皮肤或肺活组织检查)。在一些实施方案中，所述生物样品是生物流体，诸如尿。在某些实施方案中，所述生物样品是痰或鼻涕样品。在有些实施方案中，所述生物样品是嘴拭子。

本领域已知的技术可以用于评估生物样品中存在的特定类型的细胞的存在、数量、量或百分比。例如，使用荧光激活细胞分选仪(FACS)，可以分选细胞。荧光激活细胞分选(FACS)是一种已知的基于颗粒的荧光性质来分离颗粒(包括细胞)的方法。参见，例如，Kamarch,1987,Methods Enzymol151:150-165。单个颗粒中荧光部分的激光激发产生小电荷，这允许从混合物中电磁分离出阳性和阴性颗粒。用荧光染料(诸如FITC或藻红蛋白)标记抗体或配体，所述抗体或配体用于检测在特定细胞的细胞表面上存在的抗原决定簇。用荧光标记的抗体或配体温育细胞足以使标记的抗体或配体结合细胞的时间段。通过细胞分选仪，处理细胞，这允许使目标细胞与其它细胞分离。FACS分选的颗粒可以直接沉积在微孔滴定板的单个孔中，以促进分离。

磁珠也可以用于分离细胞。例如，使用磁激活细胞分选(MACS)技术，即一种基于它们的结合磁珠(0.5-100μm直径)的能力来分离颗粒的方法，可以分选细胞。可以在磁性微球上进行多种有用的修饰，包括共价添加特异性地识别细胞-固相表面分子或半抗原的抗体。然后施加磁场，以物理地操纵选择的珠子。在一个具体的实施方案中，将针对血细胞表面标志物的抗体偶联至磁珠上。然后将珠子与血细胞培养物一起混合，以允许结合。然后使细胞穿过磁场，以分离出具有目标血细胞表面标志物的细胞。然后可以分离这些细胞。

在一些实施方案中，可以用抗体包被培养皿的表面，并用于通过称作淘选(panning)的方法分离细胞。可以用对特定细胞特异性的抗体，包被单独的培养皿。首先将细胞加入用血细胞特异性的目标抗体包被的培养皿中。彻底冲洗以后，剩下的结合培养皿的细胞是表达目标细胞标志物的细胞。细胞表面抗原决定簇或标志物的实例包括但不限于：CD2(对于T淋巴细胞和天然杀伤细胞)、CD3(对于T淋巴细胞)、CD11a(对于白细胞)、CD28(对于T淋巴细胞)、CD19(对于B淋巴细胞)、CD20(对于B淋巴细胞)、CD21(对于B淋巴细胞)、CD22(对于B淋巴细胞)、CD23(对于B淋巴细胞)、CD29(对于白细胞)、CD14(对于单核细胞)、CD41(对于血小板)、CD61(对于血小板)、CD66(对于粒细胞)、CD67(对于粒细胞)和CD68(对于单核细胞和巨噬细胞)。

使用本领域已知的技术，可以评估标志物(包括生物标志物)或因子的存在、浓度或量。使用本领域技术人员已知的技术，可以在蛋白质水平和/或RNA水平测量标志物(包括生物标志物)或因子的存在、浓度或量。在蛋白质水平，免疫测定法(诸如ELISA和免疫沉淀)和蛋白质印迹法可以用于测量标志物(包括生物标志物)或因子的存在、浓度或量。另外，FACS可以用于测量标志物(包括生物标志物)或因子的存在、浓度或量。在RNA水平，RT-PCR和RNA印迹法可以用于测量标志物(包括生物标志物)或因子的存在、浓度或量。

5.4.联合疗法

在一些实施方案中，用于治疗ASMD的方法包括：与一种或多种其它疗法联合施用ASM。在施用ASM的背景下，本文使用的术语“联合”是指，在施用一种或多种用于治疗ASMD的其它疗法(例如，药剂)之前、同时、或之后，施用一定剂量的ASM。术语“联合”的使用不限制给个体施用ASM和一种或多种其它疗法的次序。在具体实施方案中，施用一定剂量的ASM和施用一种或多种其它疗法之间的时间间隔可以是：约1-5分钟、1-30分钟、30分钟至60分钟、1小时、1-2小时、2-6小时、2-12小时、12-24小时、1-2天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、15周、20周、26周、52周、11-15周、15-20周、20-30周、30-40周、40-50周、1个月、2个月、3个月、4个月5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、或之间的任意时间段。在某些实施方案中，间隔小于1天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、6个月、1年、2年、或5年地施用一定剂量的ASM和一种或多种其它疗法。

在一些实施方案中，本文提供的联合治疗包括：每2至4周施用一定剂量的ASM，并以下述频率施用一种或多种其它疗法：每周1次、每2周1次、每3周1次、每4周1次、每月1次、每2个月(例如，大约8周)1次、每3个月(例如，大约12周)1次、或每4个月(例如，大约16周)1次。在某些实施方案中，给个体周期地施用ASM和一种或多种其它疗法。周期疗法包括：施用ASM一段时间，随后施用一种或多种其它疗法一段时间，并重复该相继施用。在某些实施方案中，周期疗法还可以包括休息期，其中ASM或其它疗法停用一段时间(例如，2天、3天、4天、5天、6天、7天、1周、2周、3周、4周、5周、10周、20周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、2年、或3年)。在一个实施方案中，施用的周期的数目是1至12个周期、2至10个周期、或2至8个周期。

在一些实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法包括：在与其它疗法联合施用ASM之前，施用ASM作为单一药剂一段时间。在某些实施方案中，本文提供的用于治疗ASMD的方法包括：在与其它疗法联合施用ASM之前，施用单独的其它疗法一段时间。

在一些实施方案中，与单独施用ASM或所述一种或多种其它疗法相比，根据本文提供的方法施用ASM和一种或多种其它疗法具有累加效应。在一些实施方案中，与单独施用ASM或所述一种或多种其它疗法相比，根据本文提供的方法施用ASM和一种或多种其它疗法具有协同效应。

本文使用的术语“协同的”表示，与一种或多种其它疗法(例如，药剂)联合施用一定剂量的ASM的效应，所述联合比任意2种或更多种单一疗法(例如，药剂)的累加效应更有效。在一个具体的实施方案中，联合治疗的协同效应允许使用更低剂量(例如，亚最佳剂量)的ASM或其它疗法，和/或给个体更低频率地施用ASM或其它疗法。在某些实施方案中，使用更低剂量的ASM或其它疗法和/或以更低频率施用ASM或所述其它疗法的能力，减少给个体施用ASM或所述其它疗法各自引起的毒性，而不降低ASM或所述其它疗法各自在治疗ASMD中的效能。在一些实施方案中，协同效应导致ASM和每种所述其它疗法在治疗ASMD中的提高的效能。在一些实施方案中，ASM和一种或多种其它疗法的组合的协同效应避免或减少与使用任一种单一疗法有关的不利的或不希望的副作用。

在具体实施方案中，与ASM联合施用一种或多种其它疗法给个体，以减少或改善与施用特定剂量的ASM可能有关的下述一项或多项：(i)有关不利事件，(ii)总胆红素值大于没有ASMD的人(例如，健康人)的胆红素值，(iii)血浆神经酰胺浓度大于没有ASMD的人(例如，健康人)的血浆神经酰胺浓度，或(iv)急性期应答。在具体实施方案中，与ASM联合施用一种或多种其它疗法给个体，以增加肺功能，同时使与施用特定剂量的ASM可能有关的下述一项或多项最小化：(i)有关不利事件,(ii)总胆红素值大于没有ASMD的人(例如，健康人)的胆红素值，(iii)血浆神经酰胺浓度大于没有ASMD的人(例如，健康人)的血浆神经酰胺浓度，或(iv)急性期应答。

在某些实施方案中，与ASM联合施用一种或多种其它疗法给个体，以控制或缓解与ASMD有关的症状。在一些实施方案中，与ASM联合施用给个体的一种或多种其它疗法是疼痛缓解剂。可以与ASM联合施用的疗法的具体实例包括但不限于：N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)、S-腺苷基-L-甲硫氨酸(SAM)、白介素(IL)-6抗体、IL-6受体抗体、地塞米松、L-Nil(可诱导的NOS的一种选择性的抑制剂)、L-NAME(NOS的一种选择性的抑制剂)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、丙米嗪(一种鞘磷脂酶抑制剂)、D609(一种鞘磷脂酶抑制剂)、和N-油酰基乙醇胺(NOE；一种神经酰胺抑制剂)。

在某些实施方案中，与ASM联合施用分子伴侣，诸如小分子的分子伴侣。关于可以与ASM联合施用给个体的药剂(例如，小分子)，参见，例如，美国专利号7,750,050和国际公开号WO 2004/045574和WO 2010/015816，它们通过引用并入本文。在一些实施方案中，所述分子伴侣(例如，小分子分子伴侣)实现下述的一项、两项或全部：增加ASM向病理部位的靶向、稳定ASM的活性、和增加ASM的活性。

在一些实施方案中，与ASM联合施用糖皮质类固醇，诸如地塞米松。关于可以与ASM联合施用的药剂(例如，糖皮质类固醇)，参见，例如，美国专利号7,658,916，它通过引用整体纳入本文。

在一些实施方案中，与ASM联合施用减少底物的分子给个体。在具体实施方案中，将减少鞘磷脂的量、降低鞘磷脂合成速率、或二者的分子(例如，小分子)与ASM联合施用给个体。关于鞘磷脂合酶抑制剂，诸如三环癸-9-基-黄原酸盐和鞘磷脂合酶siRNA，参见，例如，Li等人2007,Biochim Biophys Act 1771(9):1186-1194(它通过引用整体纳入本文)。

在一些实施方案中，将降低ASM的潜在免疫原性的疗法与ASM联合施用给个体。在某些实施方案中，与ASM联合施用benedryl给个体。

ASM和一种或多种其它疗法的组合可以在相同的药物组合物中施用给个体。或者，ASM和一种或多种其它疗法可以在分开的药物组合物中同时施用给个体。ASM和一种或多种其它疗法可以在分开的药物组合物中顺序施用给个体。ASM和一种或多种其它疗法也可以通过相同或不同的给药途径施用给个体。

5.5.药物产品

在一个方面，本文描述了完成的包装好且贴标签的药物产品。在一个实施方案中，药物产品包含在适当器皿或容器(例如，玻璃瓶或密封的其它容器)中的ASM的单位剂型。在一些实施方案中，所述单位剂型是ASM的冻干形式，且在那些情况下，所述药物产品可以包括第二容器，其装有用于重构ASM的冻干形式的无菌盐水或无菌水。在其它实施方案中，所述单位剂型是ASM的含水形式，其不需要在施用给个体之前重构。在具体实施方案中，ASM的单位剂型含有足以将无毒低剂量的酶施用给个体的量的ASM。在某些实施方案中，所述单位剂型适合选择的将ASM施用给个体的途径。在一个具体的实施方案中，所述单位剂型适合向个体静脉内递送。

在一个实施方案中，药物产品包含ASM的单位剂型，其在适当器皿或容器(例如，玻璃瓶或密封的其它容器)和用于将ASM施用给个体的输液泵或注射泵中。

与任意药物产品一样，将包装材料和容器设计成在贮存和运输过程中保护产品的稳定性。此外，药物产品包括使用说明书或其它信息材料，其建议医师、技术员或患者如何适当地治疗ASMD。换而言之，所述药物产品包括指导工具，其指示或提示给药方案，包括但不限于：实际剂量(例如，剂量递增方案)、监测程序、和其它监测信息。在某些实施方案中，所述药物产品包括用于给患者基因分型的工具(例如，SMPD1基因的PCR引物)。

6.实施例1：重组人酸性鞘磷脂酶(RHASM)酶替代疗法在具有ASM缺乏的成年人中的人体试验

6.1.前言

ASMD是一种常染色体隐性的溶酶体贮存障碍，其在鞘磷脂不能被正常地分解代谢成神经酰胺和磷酰胆碱时产生。结果，鞘磷脂在细胞(主要是网状内皮系统的细胞)内累积，导致肝脾肿大、贫血、血小板减少症、和间质性肺病。生长迟滞和致动脉粥样化的脂质特性也是常见的发现。具有极小量至没有残余ASM活性的患者表现出在婴儿期发作的最严重症状、无法成长、神经变性、和在3岁前死亡(A型尼曼-皮克二氏病，NPD A)。具有更高量的残余ASM活性的患者，具有可变的发作年龄、不同呈现和身体症状、极少至没有神经学牵连，且通常存活至成年期(NPD B)。目前，患有ASMD的患者没有疗法。

酶替代疗法(ERT)已经成功地用于治疗数种溶酶体贮存障碍，包括：戈谢病、I型、II型和VI型粘多糖贮积症、法布里病、和庞皮病。静脉内施用重组人溶酶体酶，并通过受体-介导的胞吞作用摄入细胞中，随后靶向溶酶体。Edward Schuchman博士的实验室(MountSinai Medical Center)在ASM敲除的小鼠(ASMKO)模型中证实了治疗ASMD的原理的证据，其中静脉内注射的重组人ASM(rhASM)有效地降低了肝和脾中的鞘磷脂水平，在肺中的降低程度更低(Miranda,等人,FASEB 2000；14:1988)。但是，因为rhASM不能穿过血脑屏障，脑中的鞘磷脂水平没有降低。由于事实上ASMKO小鼠不具有残余ASM活性或蛋白质，并发展快速且严重的神经学疾病，认为该动物是A型NPD的最合适的模型(参见，Buccinna等人,2009,J.Neurochem.109:105-115)。

其它研究证实，每2周剂量的rhASM以剂量-依赖性的方式(0.3-3mg/kg)降低ASMKO小鼠中的鞘磷脂水平。在ASMKO小鼠中，测得单次给药和重复给药的未观察到不利作用的水平(NOAEL)分别为0.3和3mg/kg。随后用更大剂量的rhASM减小肺中的鞘磷脂水平的尝试，导致意外的毒性。在≥10mg/kg的剂量，ASMKO小鼠(但是正常动物没有)表现出肝炎、肾上腺出血、心血管休克和死亡(在非常高的细胞因子水平的情况下)，这提示细胞因子释放综合征。通过用数个更低剂量的rhASM预先处理ASMKO小鼠，可以改善或预防使用大剂量的rhASM所观察到的毒性和细胞因子升高，这提示，鞘磷脂降解的速率和量起关键作用。

在ASMKO小鼠(A型NPD的一个模型)中，在≤0.3mg/kg rhASM的单次剂量和≤3.0mg/kg rhASM的重复剂量以后，没有观察到毒性；在施用≥10mg/kg rhASM的单次剂量之前，没有观察到严重毒性。因此，选择0.03mg/kg rhASM的保守起始剂量，用于人个体的单次剂量治疗，以确保相对于在ASMKO小鼠中观察到的单剂量NOAEL(0.3mg/kg)的10倍安全裕度。选择1.0mg/kg rhASM的最大剂量，用于人个体的单次剂量治疗，以确保相对于在ASMKO小鼠中观察到严重毒性时的剂量(10mg/kg)的10倍安全裕度。在结束下述的方案以后，意外地在低至0.3mg/kg rhASM的剂量观察到在人个体中的毒性。

6.2.材料和方法

6.2.1.人方案设计

该方案是单中心、单剂量、剂量递增1阶段试验。主要试验目的是，评价单次剂量的rhASM在具有无神经病的ASMD(B型尼曼-皮克二氏病)的成年人中的安全性和药代动力学。通过剂量组群，顺序地输注单次剂量的0.03、0.1、0.3、0.6和1.0mg/kg rhASM。初始试验设计使用最少15位患者(5个组群，各自3位患者)。由于难以招募患者，修改该方案，使得前2个组群各自招募3位患者，最后3个组群各自招募2位患者。独立的数据监测委员会监督试验的进行，所有方案规程得到了IRB批准。图1描绘了方案患者流。

6.2.2.患者

为了适合该方案，患者必须是18-65岁，且具有缺乏的ASM酶活性、≥2倍正常值的脾体积、≤250IU/L的AST和ALT、≤3.6mg/dL的胆红素、≤1.5的INR、>预测值的30％的DL_CO、和≥60,000/mL的血小板。如果他们具有肝硬化(通过肝活组织检查)、显著的心脏病、全脾切除，或者正在接受具有潜在肝毒性、促进出血、或抑制rhASM的药物或草药添加物，则排除患者。

共招募了13位患者，给11位患者输注rhASM。通过在中国仓鼠卵巢细胞中过表达ASM cDNA，制备rhASM。输注的患者的平均年龄是30.8岁，都是高加索人(非西班牙人/非拉丁美洲人)，平均脾体积是正常值的10.8倍。一位具有部分脾切除；剩余的患者在方案开始时具有完整脾。图2描绘了该方案中的患者的人口统计和基线特征。

在结束筛选并证实合格以后，患者进入心脏病监护病房(CCU)过夜，以进行基线遥测，并在次日早晨输注rhASM。在给药后监测患者72小时(在CCU中24小时和在一般临床研究中心中48小时)，同时进行遥测。在第14天，患者返回就诊过夜，在第28天，患者返回门诊就诊。

下面阐述在该方案过程中进行的医学评估：

·体检——第0、1、2、14、和28天

·化学、血液学、和尿分析——输注前，然后在24、48、72小时；第14、28天

·肝功能检查——输注前，然后在12小时至72小时，第14、28天，醛固酮、皮质醇、δ-4-雄烯二酮——输注前，然后在12小时至72小时

·ACTH刺激试验——筛选，第14天遥测——连续至72小时ECG，超声心动图——输注，输注结束和输注后，在1、2、6、12、和4小时、第14天

·心脏生物标志物(BNP、心肌肌钙蛋白-I、CPK-MB)——输注前，然后在2、6、12、24小时

·血浆中的鞘磷脂、神经酰胺水平——输注前，然后24、48、72小时；第14和28天

·肺功能检查和CXR——筛选，第14天

·通过MRI测定肝和脾体积——筛选，第14天

·肝和皮肤活组织检查——筛选，第14天

·生物标志物——给药前，第14、28天

·抗-rhASM IgG检测——输注前，第28天

·药代动力学——在输注前30分钟内，开始输注后15分钟，输注结束，和在输注后的下述时间点：15分钟、30分钟、45分钟；1小时、2、3、4、6、8、12、18、24、48、72小时。

·细胞因子(IL-1a、IL-1b、IL-6、G-CSF、GM-CSF、MIP-1a、TNF-

a)——药代动力学时间点(同上)+第14天

6.3.结果

如图3A和3B所示，在若干时间点分别测定血浆神经酰胺水平和血浆鞘磷脂水平。血浆神经酰胺水平在6小时之前表现出剂量-依赖性的升高，并在18-72小时达到峰值。血浆鞘磷脂水平在基线是正常的，并没有表现出随时间一致的趋势。在接受最大剂量(1mg/kg)的患者编号12112中，血浆鞘磷脂水平在给药后升高，并在72小时达到峰值。

图4描绘了在该方案期间在若干时间点测定的总胆红素水平。总胆红素在24小时之前表现出剂量相关的升高，并在48-60小时达到峰值。在接受最大剂量(1mg/kg)的患者编号12112中，最高总胆红素是4.7mg/dL。直接和间接胆红素存在成比例的增加。没有观察到ALT、AST、或碱性磷酸酶的增加。在接受最高(1mg/kg，患者编号12112)和最低(0.03mg/kg，患者编号10503)剂量的2位患者中，在72小时前存在GGT的轻度增加(未显示)。血红蛋白和血细胞比容水平在该方案中是稳定的，这指示溶血没有引起升高的胆红素水平。

图5A-5G描绘了在若干时间点测定的数位患者的急性期应答(炎症)标志物(分别是CRP/hs-CRP、嗜中性粒细胞百分比、纤维蛋白原、铁蛋白、IL-8、IL-6、和降钙素)的水平。CRP/hs-CRP在24小时之前表现出短暂的剂量相关的升高，在48-72小时达到峰值，并在第14天之前恢复正常。其它急性期反应物也表现出增加(嗜中性粒细胞百分比、纤维蛋白原、铁蛋白、PT和PTT)和降低(铁、白蛋白)。某些炎症生物标志物(例如，细胞因子IL-6和IL-8和降钙素)也表现出剂量依赖性的大幅升高，并在输注后48小时达到峰值。在这些炎症介质中，按照递减次序，发生最大变化的是：IL 8(峰33.8×正常值上限)、降钙素(峰33.4×正常值上限)、CRP(峰9.8×正常值上限)、和铁蛋白(3.9×正常值上限)。血小板计数或纤维蛋白-裂解产物水平没有趋势(未显示)。实验室急性期反应物的升高与一些患者中发热、恶心、呕吐、头痛、疼痛、和肌痛的体质临床症状相关。

图6描述是4位患者(各自施用不同剂量的rhASM)的突现不利事件的治疗，所述事件被认为与治疗有关(可能、很可能、或确定)。如图所示，患者编号11509(给其施用的剂量是0.3mg/kg rhASM)从第2天开始表现出中等严重的不利事件。

关于在方案中报告的有关不利事件，没有显著的心血管变化(通过遥测、ECG、超声心动图、或生物标志物(BNP、心肌肌钙蛋白-I、CPK-MB))或肾上腺激素功能障碍。一位患者(编号12112，1.0mg/kg组群)在给药后24小时早晨具有升高的皮质醇水平，这最可能代表对若干进行中的中等有关不利事件的正常生理应激应答。此外，接受≥0.3mg/kg rhASM的6位患者中的4位经历共19个临床和实验室的有关不利事件(评估为药物相关的)。有关不利事件的强度范围是轻度至严重，但是大多数是中等的，且不需要任何干预。它们包括：发热(n＝2)，疼痛(肌痛；腹、腿、和髋痛)(n＝2)，恶心(n＝2)，巩膜黄疸和尿胆素原(n＝1)，疲劳(n＝1)，呕吐(n＝1)，基于肝活组织检查的淋巴细胞浸润/肝细胞变性(n＝1)，急性期反应(n＝4)，升高的胆红素(n＝2)，和增加的纤维蛋白D-二聚体(n＝1)。除了一位患者的髋痛在72小时以后开始以外，临床症状的发作在输注后12小时开始，并在72小时之前消退。在第14天，一位患者(0.6mg/kg rhASM，患者编号12313)中的肝活组织检查表现出淋巴细胞浸润的2个新病灶:一个是很小的(0.1mm直径)，另一个是中等的(0.5mm直径)，且其与肝细胞变性有关。当组群5中的第一位患者(1mg/kg rhASM，患者编号12112)经历高胆红素血症的剂量限制性毒性(峰值4.7mg/dL)时，停止该方案。

该结果表明，在遭受ASMD的人中，0.3mg/kg和更高的rhASM剂量导致剂量相关的临床和实验室不利事件的发作是意外且延迟的。此外，考虑到该方案的结果，得到2个主要的安全性实验室观察结果。一个涉及高胆红素血症，其中观察到直接和间接胆红素与剂量相称的升高，且没有肝损伤的一致标志物(AST、ALT、AP)或溶血证据(血红蛋白和血细胞比容)。2位患者在48-72小时具有轻度升高的GGT，一位患者具有淋巴细胞浸润的2个新肝病灶，其中之一与肝细胞变性有关。

另一个观察结果涉及急性期应答，即炎症。结果显示增加rhASM剂量引起CRP/hs-CRP、嗜中性粒细胞百分比、铁蛋白、IL-6、IL-8、降钙素、纤维蛋白原、PT、PTT的增加，以及铁和白蛋白的降低。发热、恶心、呕吐、疼痛、和肌痛的体质临床症状最可能与急性期应答有关。结果没有证实与心血管变化有关的细胞因子释放综合征的证据，也没有证实肾上腺激素功能障碍的证据。

6.4.结论

上述方案是酶替代疗法在患有ASMD的成年人患者中的第一次体验。rhASM在人体内的生物活性剂量没有造成与心血管变化有关的细胞因子释放综合征，也没有造成肾上腺激素功能障碍。主要的安全性观察结果是剂量相关的高胆红素血症和急性期应答。两种不利事件都可能与鞘磷脂分解成神经酰胺和磷酰胆碱有关，但是确切的分子机制没有得到完全了解。鉴别了数种安全性生物标志物，包括胆红素、神经酰胺、CRP/hs-CRP、1L-8、1L-6、降钙素、和铁蛋白。此外，基于高胆红素血症发现，rhASM的最大耐受起始剂量是0.6mg/kg。

此外，由于在ASMKO小鼠中的NOAEL(“未观察到不利作用的水平”)是0.3mg/kg，令人惊奇的观察到，在低至0.3mg/kg的剂量下患者出现具有临床症状的不利事件。值得注意的是，在使用大于或等于10mg/kg的剂量之前，没有在ASMKO小鼠中观察到毒性的临床症状。

7.实施例2:在酸性鞘磷脂酶敲除的小鼠中，在去堆积阶段以后的重复剂量静脉内注射毒性方案

本实施例描述了在酸性鞘磷脂酶敲除的(ASMKO)小鼠中在去堆积阶段以后，重复静脉内施用重组人酸性鞘磷脂酶(rhASM)的潜在毒性的研究。已经确定，在10mg/kg rhASM的初始剂量，开始在ASMKO小鼠中观察到有毒副作用，设计下述研究来测定在ASMKO小鼠中施用递增剂量的重组人酸性鞘磷脂酶(rhASM)是否会充分去堆积累积的鞘磷脂，使得可以将更大剂量的rhASM施用给ASMKO小鼠来靶向病理部位(诸如肺和脑)，并具有微小的或没有可观察到的毒性。

在研究第1、3、5、7天(SD)(去堆积阶段)，给JK ASMKO小鼠施用3mg/kg rhASM。从SD9开始，并继续隔周施用，持续13周(7个剂量)，小鼠接受3、10、或30mg/kg rhASM的治疗剂量(治疗阶段)。

通过快速浓注，在雄性和雌性ASMKO小鼠的侧尾静脉中静脉内施用rhASM。组1-3在去堆积阶段(SD 1、3、5和7)期间接受3mg/kg rhASM。组1、2和3在治疗阶段(SD 9、23、37、51、65、79、和93)期间分别接受3、10和30mg/kg rhASM。在研究前，以及在治疗阶段剂量1、4、和7之后5分钟和4小时，对每组中的一个小鼠子集(组1中前2只小鼠/性别，和组2-3中的前4只小鼠/性别)采血，用于分析毒代动力学(TK)(5分钟)和神经酰胺水平(4小时)。在研究前，以及在治疗阶段剂量1、4、和7之后4和24小时，对每组中的其它小鼠子集(组1中最后2只小鼠/性别，和组2-3中的最后4只小鼠/性别)采血，用于分析啮齿动物多分析物特性(4小时)和急性期蛋白质/肝功能检查水平(24小时)。参见下文表2中的研究设计。

由于过敏反应可能从治疗阶段第一剂量和此后的每个剂量开始，在实验品施用以后，密切观察每只小鼠的过敏反应征象(例如，多动、咀嚼、摩面、荨麻疹、水肿、嗜睡、和毛肮脏)。在治疗阶段的第一剂量和此后的每个剂量之前，小鼠开始接受苯海拉明(DPH)。

通过用0.9％无菌盐水稀释50mg/mL购买的储备溶液，制备浓度为5mg/mL的DPH。基于最近的体重，以20mg/kg(4mL/kg)的剂量，在施用rhASM之前10-20分钟，腹膜内(IP)施用DPH，以预防可能的过敏反应。如果任何动物在实验品施用以后表现出超敏反应(尽管有DPH预处理)，以10mg/kg(2mL/kg)，腹膜内施用第二剂量的DPH。

在SD 100，通过CO2窒息，使所有小鼠安乐死。在安乐死以后，通过心脏穿刺，收集血液，用于临床病理学和免疫原性分析。在血液收集以后，对所有小鼠进行尸检。将所有组织保存在10％中性缓冲福尔马林(NBF)中，随后进行组织病理学分析。将肝、脾、肾、和肺的片保存在2％戊二醛/2％低聚甲醛中，用于分析鞘磷脂载量。还收集肝、脾、肾、和肺的片，并保存在≤-70℃，用于可能的将来分析。

尸检以后，将所有剩余的组织(包括尸体)置于10％NBF中。

表2:研究设计:

*在第1个治疗阶段剂量和此后的每个剂量之前，给所有小鼠施用苯海拉明。

生命观察：

研究的第1天视作SD1(给药的第1天)。在研究过程中，从SD-1开始，称量动物体重，每周1次，此后每周在星期一称量。在星期一至星期五，每天1次进行笼侧观察。记录任何异常和正常的观察结果。在即将施用每个剂量之前，以及施用之后10-20分钟和50-70分钟，得到给药后临床观察结果/评分。记录任何异常和正常的观察结果。在不良反应的情况下，咨询主治兽医和/或研究指导人员，并基于他们的推荐，采取适当的行为。

安乐死：

如果存在影响动物的健康和幸福的不良反应，则通过CO2窒息使动物安乐死，打开胸腔、腹腔和颅腔，并置于10％中性缓冲福尔马林(NBF)中，用于可能的将来分析。如果发现动物死亡，将整个尸体保存在10％NBF中，用于可能的将来分析。在研究结束时，通过CO2窒息，使所有存活的动物安乐死。

样品收集：

剂量分析：在每个给药当天在配制以后1-10分钟内，收集来自所有剂量水平的大约500微升(500μL)实验品，并在转移至冰箱(设置成维持≤-70℃的温度)之前，保存在干冰上。在SD 1、3、5、7、9、23、37、51、65、79、和93，转移剂量分析样品，并在分析之前保存在≤-70℃。通过A280试验，测量剂量分析样品。

血液收集：为了收集血液用于分析TK、啮齿动物多分析物特性、和急性期蛋白质/肝功能检查水平，用异氟烷和氧的混合物麻醉小鼠。根据血液收集表(参见下文的表4和5)和下文，在SD-1、9、51和93(分别是研究前和第1个、第4个、和第7个治疗阶段剂量)，进行血液收集。

rhASM毒代动力学：在研究前(SD-1)和第1个、第4个、和第7个治疗阶段剂量以后5分钟，采集组1的前2只小鼠/性别和组2-3的前4只小鼠/性别的血液样品，用于分析rhASM峰值水平。从无意识小鼠的眼球后丛，收集来自所有动物的血液。将大约60μL全血收集进血细胞比容试管中，并允许在室温凝结至少1分钟。通过在10,000转/分钟(RPM)离心5分钟，从这些样品制备血清。在离心以后，收集血清，并在转移至冰箱(设置成维持≤-70℃的温度)之前，保存在干冰上。转移以后，在分析之前将所有样品保存在≤-70℃。在SD 1、9、51、和93，转移TK样品。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)，测量TK样品。

神经酰胺水平的分析：在研究前(SD-1)和第1个、第4个、和第7个治疗阶段剂量以后4小时，采集组1的前2只小鼠/性别和组2-3的前4只小鼠/性别的血液样品，用于分析神经酰胺水平。从无意识小鼠的眼球后丛，收集来自这些动物的血液。将大约240μL全血收集进钾EDTA试管中，并放置在Nutator振荡器上最多30分钟，以防止形成凝块。通过在10,000RPM离心5分钟，从这些样品制备血浆。在离心以后，收集血浆，并在转移至冰箱(设置成维持≤-70℃的温度)之前，保存在干冰上。转移以后，在质谱组分析之前将所有样品保存在≤-70℃。在SD 94之前，转移神经酰胺样品。通过质谱法测量神经酰胺样品。

啮齿动物多分析物特性(MAP)的分析：在研究前(SD-1)和第1个、第4个、和第7个治疗阶段剂量以后4小时，采集组1的最后2只小鼠/性别和组2-3的最后4只小鼠/性别的血液样品，用于分析啮齿动物多分析物特性。从无意识小鼠的眼球后丛，收集来自这些动物的血液。将大约150μL全血收集进血清分离器试管中，并允许凝结至少30分钟。通过在10,000RPM离心5分钟，从这些样品制备血清。在离心以后，收集血清，并在转移至冰箱(设置成维持≤-70℃的温度)之前，保存在干冰上。转移以后，将所有样品保存在≤-70℃，直到在SD 94之前运输，用于分析啮齿动物多分析物特性。在干冰上运输样品至Rules Based Medicine。啮齿动物多分析物特性表(参见下文表3)列出了测量的分析物。

表3:啮齿动物多分析物特性:

急性期蛋白质/肝功能检查水平的分析：在研究前(SD-1)和第1个、第4个、和第7个治疗阶段剂量以后24小时，采集组1的最后2只小鼠/性别和组2-3的最后4只小鼠/性别的血液样品，用于分析急性期蛋白质(血清淀粉样蛋白-A和血清淀粉样蛋白-P)和肝功能(胆红素和丙氨酸氨基转移酶(ALT))水平。从无意识小鼠的眼球后丛，收集来自这些动物的血液。将大约150μL全血收集进血清分离器试管中，并允许凝结至少30分钟。通过在10,000RPM离心5分钟，从这些样品制备血清。在离心以后，收集血清，并在转移至冰箱(设置成维持≤-70℃的温度)之前，保存在干冰上。转移以后，将所有样品保存在≤-70℃，直到在SD94之前运输，用于分析急性期蛋白质/肝功能检查分析。在干冰上运输样品至Analytics。

表4:研究前(SD-1)血液收集表

表5:SD 9、51、和93的血液收集表

尸检

末期血液收集用于分析临床病理学和免疫原性：在安乐死以后，对所有动物进行心脏穿刺，以从所有主要研究动物收集全血(大约≥500μL)，用于临床病理学和免疫原性分析。将大约150μL全血放在钾EDTA试管中，并轻轻倒置，用于分析血液学参数。在轻轻倒置以后，将所有样品在室温振荡下保存在Nutator振荡器上，直到将样品保存在2-10℃等待分析。将剩余的血液(来自心脏穿刺，在取出150μL用于血液学分析以后)放在血清分离器试管中，允许在室温凝结至少30分钟，在离心机中在10,000RPM旋转5分钟，收集血清。将大约30μL血清放在埃彭道夫管中，用于免疫原性分析，同时将剩余的血清放在埃彭道夫管中，用于临床化学分析。在将它们保存在冰箱(设置成维持≤-70℃的温度)中之前，将免疫原性样品保存在干冰上。通过ELISA，测量免疫原性样品。将临床化学样品放在干冰上，直到所有样品保存在≤-20℃等待分析。血液学和临床化学分析物表(参见下文表6)列出了测量的分析物。

表6:血液学和临床化学分析物表:

由有资格的病理学家委员会，解释来自所有动物的血液学分析和临床化学分析的结果。

组织收集：在SD 100安乐死以后，对所有动物进行尸检，用于组织收集。尸检包括：检查尸体的外部特征、外部身体孔口、腹腔和胸腔、器官、和组织。记录肉眼所见。组织收集表(参见下文表7)列出了收集在10％NBF中的组织。也收集了肉眼所见的病灶，并保存在10％NBF中。将剩余的尸体保存在10％NBF中。

表7:组织收集表：

对粗体显示的样品称重

器官重量：在尸检时，对上面粗体显示的器官称重；成对的器官一起称重。将重量记录在器官重量表格上。基于在尸检之前采集的体重，计算出器官占体重的百分比以及器官与脑重量之比。

组织病理学：将来自所有动物的样品以及来自研究中任意动物的肉眼所见的病灶进行组织学处理。将上面列出的来自每只动物的保存组织包埋在石蜡中。将所有组织切片，用苏木精和曙红染色，并用显微镜检查。用显微镜检查所有组织切片，由有资格的病理学家委员会评价组织学变化。

收集来自所有动物的肝、脾、肾、和肺的样品，在2％戊二醛/2％低聚甲醛中固定，用于分析鞘磷脂载量。在重铬酸钾/四氧化锇中后固定这些组织，并包埋在epon中。用鞣酸和甲苯胺蓝对1微米切片染色，用于光学显微镜检查。有资格的病理学家委员会使用MetaMorph软件，通过计算机形态计量法，定量每个样品中的鞘磷脂载量。

收集来自所有动物的肝、脾、肾、和肺的样品，在液氮中冷冻，并在≤-70℃冷冻保存，用于可能的将来分析。

样品分析：

通过A280分析和毒代动力学进行剂量分析，并通过ELISA来分析免疫原性样品。

通过质谱法进行神经酰胺分析。

分别使用Sysmex XTV 2000IV血液学分析仪和Radnox Daytona临床化学分析仪，测量血液学和临床病理学样品。

处理组织样品，并由有资格的病理学家委员会根据SOP来解释组织病理学分析。由有资格的病理学家委员会根据SOP来解释临床病理学分析结果。

8.实施例3:重组人酸性鞘磷脂酶(RHASM)酶替代疗法的递增剂量

8.1.前言

下述方案利用在患者内的剂量递增作为实现rhASM的更高重复剂量的选择。评价了以0.3、0.6、和1.0mg/kg的剂量(每2周(q2w)施用，持续40周)施用的rhASM输注的安全性、效能和药代动力学(PK)，以及rhASM输注的长期安全性和效能。

8.2.材料和方法

8.2.1.方案设计

12位待治疗的B型NP患者是任一种性别。患者初始接受至少1剂量的0.1mg/kgrhASM。然后每2周给耐受0.1mg/kg rhASM输注的患者施用0.3mg/kg、0.6mg/kg、和1mg/kg的递增剂量，只要耐受。然后根据脾体积(与正常值相比<12倍或≥12倍)，将耐受1.0mg/kg的患者分级，并随机化以接受2个靶剂量之一：1.0mg/kg rhASM或3.0mg/kg；随机化至3.0mg/kg组的患者将增加至2.0mg/kg，然后增加至3.0mg/kg，只要耐受。替换不耐受0.1mg/kg剂量的rhASM的患者。不能耐受在更大剂量的增加的患者保持在他们的最高耐受剂量，持续26周维持剂量期。

所有患者的剂量从0.1mg/kg增加至他们的靶剂量。在增加阶段期间，以每2周间隔进行剂量调整，直到达到靶剂量(如果耐受的话)。在初次输注(0.1mg/kg rhASM)以及随后剂量以后，评论患者结果，即：不利事件(AE)发生/严重性和血清胆红素、hsCRP、和其它急性期应答蛋白质和神经酰胺。下述标准将决定在剂量递增阶段期间施用的下一剂量：

1.总胆红素值≤2.0mg/dL或轻度AE→增加至下一剂量(如果适用的话)，

2.总胆红素值＝2.1-3.0mg/dL或中等的AE→不增加剂量；重复当前剂量，

3.总胆红素值>3.0mg/dL或严重的AE→降低剂量至以前施用的/耐受的剂量。

在下一计划剂量之前据判断与rhASM有关的任何严重不利事件(SAE)、不降低至<2.0mg/dL的胆红素值，或在施用的剂量引起关于rhASM的安全性的关注的任何AE，可以视作剂量限制毒性(DLT)。如果患者经历DLT，应当暂时停止患者的后续剂量。可以重复挑战患者，以接受导致DLT的剂量，且如果耐受的话，按照初始的计划继续进行治疗。

如果患者不能耐受2个剂量的0.1mg/kg(即，初次输注和1个重复挑战剂量)，则不用递增剂量处理他们，并在研究中停止和替换该患者。耐受0.3mg/kg剂量的患者将接受初次的rhASM输注(0.1mg/kg)，并在2周以后，接受0.3mg/kg rhASM(假如在0.1mg/kg剂量以后，满足剂量递增标准)。在剂量递增阶段期间q2w施用后续rhASM剂量，持续最多18周。如果患者成功地增加至0.3mg/kg并随后满足标准#2或#3(上面)，可以重新挑战患者2次。如果重新挑战没有成功(即，无法达到靶剂量)，则患者在40周治疗期的剩余时间继续0.1mg/kg的rhASM剂量。

要用0.6mg/kg给药方案治疗的患者将接受初次的rhASM输注(0.1mg/kg)，随后接受1剂量的0.3mg/kg rhASM，随后在40-周治疗期的剩余时间q2w接受0.6mg/kg rhASM(假如以前的0.1mg/kg和0.3mg/kg的rhASM输注被良好耐受)。要用1.0mg/kg方案治疗的患者将接受初次的rhASM输注(0.1mg/kg)，随后接受1剂量的0.3mg/kg rhASM，随后接受1剂量的0.6mg/kg rhASM，随后在40周治疗期的剩余时间q2w接受1.0mg/kg rhASM(假如以前的0.1mg/kg、0.3mg/kg、和0.6mg/kg的rhASM输注被良好耐受)。如果患者成功地从0.3增加至0.6mg/kg或从0.6增加至1.0mg/kg并随后满足标准#2或#3(上面)，可以重新挑战患者2次。如果重新挑战没有成功(即，无法达到靶剂量)，则患者在40-周治疗期的剩余时间继续更低的耐受剂量。

在40周治疗期以后，可以允许患者在他们的维持剂量水平继续他们的治疗。

8.2.2.患者

要根据这些方案进行治疗，每位患者应当满足下述的选择标准：

1.已经记载的与尼曼-皮克二氏(N-P)病一致的ASM缺乏；

2.扩散能力(DLCO)>预测正常值的20％，且≤预测正常值的80％；

3.脾体积≥正常值的8倍(≥体重的1.6％)；

4.具有分娩可能的女性患者必须具有β-hCG的血清妊娠试验阴性，且同意在方案持续期间使用医学上可接受的生育控制方法。

8.2.3.治疗

患者将在大约35分钟时间段内接受单次静脉内(IV)0.1mg/kg rhASM。施用指南总结在下面的表8中。对于耐受初次的0.1mg/kg rhASM输注的患者，增加剂量至靶治疗剂量(rhASM 0.3、0.6或1.0mg/kg)。将所有患者的剂量从0.1mg/kg增加至他们的靶剂量。在增加阶段期间，以每2周间隔进行剂量调整，直到达到靶剂量。

表8:rhASM的施用

可以以正常值的倍数(x正常值)记录每位患者在基线时的脾肿大程度，作为疾病严重性的指标。正常脾体积等于体重的0.2％。

在每次就诊时，应当评价患者的新的或正在出现的不利事件(AE)。

可以将临床终点测量为：从基线至维持剂量阶段第26周的变化百分比。第一效能终点是通过MRI测得的脾体积的减小。第二效能终点包括：肝鞘磷脂水平的降低；运动能力增加，如通过周期测力法测得的预测最大工作负荷百分比所测定的；增加的肺功能，作为预测的DL_CO百分比；增加的肺清除(其可以通过支气管肺泡灌洗(BAL)细胞计数和特性来测定)、鞘磷脂、神经酰胺、细胞因子和壳三糖苷酶水平。第三效能终点可以包括：肝体积减小，如通过MRI所测量的；增加的肺功能，其可以通过预测的FVC、FEV1、TLC百分比来测定；改善的肺表象，这通过高分辨率CT扫描、胸部X射线检查来测定；改善的脂质特性，这通过HDL、LDL、总胆固醇、甘油三酯水平和总胆固醇:HDL胆固醇比来测定；提高的血小板计数；血红蛋白；降低的皮肤、血浆、DBS中的鞘磷脂水平；和诸如CCL18、ACE等其它生物标志物的改善。

9.实施例4:重组人酸性鞘磷脂酶(RHASM)酶替代疗法的递增剂量

9.1.前言

下述方案利用重复剂量的剂量对比，以评价重组人酸性鞘磷脂酶(rhASM)在患有ASMD的成年患者中的安全性、效能和药代动力学。该方案的目的包括：(i)评价剂量递增的rhASM的安全性；(ii)评价最大耐受的或随机化的剂量的rhASM(每2周静脉内施用，持续26周)的安全性、效能和药代动力学；和(iii)评价rhASM输注(每2周静脉内施用，从第26周至方案结束(持续至少182周))的长期安全性和效能。

9.2.材料和方法

9.2.1.患者

1.已经记载的与尼曼-皮克二氏病(NPD)一致的酸性鞘磷脂酶(ASM)缺乏；

2.有2个或更多个特征性临床特征，包括血小板减少症、贫血、嗜中性粒细胞减少症、肝肿大、脾肿大、和与无神经病的NPD一致的肺病；

3.一氧化碳的扩散能力(DLCO)>预测正常值的20％，且≤预测正常值的80％；

4.脾体积≥8倍正常值(MN)(即≥体重的1.6％)。如果在离筛选/基线≥1年进行，且剩余脾体积≥8MN，可以允许部分脾切除；

5.具有分娩可能的女性患者必须具有β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的阴性血清妊娠试验，且同意在方案持续期间使用医学上可接受的避孕方法。

9.2.2.方案设计

可以在该方案中募集能够耐受0.1mg/kg rhASM的患者。对于每位患者，方案参与可以由3个阶段组成：

1.筛选/基线(-60至-1天)。

2.第一治疗期(大约32-46周)。

剂量递增(DE)期(第一DE——大约6-16周)。

—在安全地从0.1至0.3增加至0.6至1.0mg/kg rhASM以后，根据脾体积(<12和≥12MN)将患者分级，并随机化以继续施用1.0mg/kg的剂量，或继续剂量递增至2.0和3.0mg/kg，然后在该方案的剩余时间接受3.0mg/kg rhASM或最高耐受剂量(第二DE——4周)。

—未随机化的患者可以保持在他们的最高耐受剂量(<1.0mg/kg rhASM)。

剂量维持(DM)期(26周，在最大耐受的或随机化的剂量)。

3.长期治疗期(至少182周，在最大耐受的或随机化的剂量)

筛选/基线评估可以在初次输注rhASM以前至少24小时结束。招募进该方案中取决于患者能够耐受2次剂量的0.1mg/kg rhASM。初始，所有合格的患者可以在剂量递增(DE)第1天接受单次剂量的0.1mg/kg rhASM。在2周以后，重新挑战不能耐受该剂量的患者。停止和替换不能耐受2个剂量的0.1mg/kg rhASM(即，初次剂量和重复挑战剂量)的患者，以确保招募大约12位患者(他们可以耐受0.1mg/kg rhASM)。

在第一DE期过程中，可以每2周增加rhASM的剂量，从0.1至0.3增加至0.6至1.0mg/kg。在第一DE期过程中，患者的rhASM剂量可以每2周从0.1mg/kg安全地增加至1.0mg/kg(如图7所示)。

在第一和第二DE期过程中，下述剂量递增标准可以决定要施用的下一rhASM剂量：

1.如果总胆红素(在下一计划的rhASM剂量之前的最高值，且包括输注前抽血)≤2.0mg/dL，或没有/轻度的有关不利事件(AE)→增加至下一剂量。

2.如果总胆红素>2.0但是<3.0mg/dL，或中等的有关AE→重复相同剂量。

·如果在即将开始下一剂量之前，总胆红素保持>2.0mg/dL→暂时停止患者的其它给药(潜在剂量限制毒性[DLT])。

3.如果总胆红素≥3.0mg/dL或严重的有关AE→降低剂量。

·如果在即将开始下一剂量之前，总胆红素保持>2.0mg/dL→暂时停止患者的其它给药(潜在DLT)。

4.可以仅在第一DE期中根据需要重复挑战(在特定剂量水平)患者多次(在第二DE期中禁止重复挑战)，然后随机化或停留在他们的最高耐受剂量，直到16-周第一DE期结束。

5.如果他们不能增加至1.0mg/kg剂量并随机化，或者不能耐受他们的靶随机化剂量(即，1.0或3.0mg/kg rhASM)，可以不替换招募的患者(即，可以耐受0.1mg/kg rhASM的那些)。这些患者可以在该方案中继续他们的最高耐受剂量。

如果错过输注，患者可以接受与以前的输注相同的剂量。如果超过±5天的就诊窗，不能进行该输注，患者应当在该输注的计划时间接受下一次输注。

为了该方案的目的，如果满足下述标准中的任一项，可以认为结果指示给定剂量的rhASM具有潜在剂量限制毒性(DLT)：

·医师判断任何严重的不利事件(SAE)与rhASM有关，或

·在即将开始下一剂量之前，总胆红素保持>2.0mg/dL，或

·根据医师的判断，引起关于施用剂量的rhASM的安全性的关注的任何不利事件(AE)。

有关不利事件的严重性由医师评估。轻度的有关不利事件通常是暂时的，且可能仅需要微小的治疗或治疗性干预。中等的有关不利事件通常随着额外的特定治疗性干预而减轻。该事件干扰日常生活的惯常活动，造成不适，但是对个体不产生显著的或永久性的损害危险。严重的不利事件中断日常生活的惯常活动，或显著影响临床状态，或可能需要集中的治疗性干预。

根据脾体积(<12和≥12MN)，可以将在第16周之前增加剂量并安全地耐受1.0mg/kg rhASM的所有患者分级，并以1:1的比例随机化至：

·继续每2周接受1.0mg/kg rhASM(或最高耐受剂量)，持续26周，或者

·继续剂量递增(DE)至2.0和3.0mg/kg，然后每2周接受3.0mg/kg rhASM(或最高耐受剂量)，持续26周。

在第二DE期过程中，随机化至3.0mg/kg组的患者可以仅使用4周来使他们的rhASM剂量增加至3.0mg/kg，然后开始在3.0mg/kg(或最高耐受剂量；参见图7)的26-周DM期。

每位患者中的第一DE期持续时间可以是在大约6至16周范围内。这可以取决于在rhASM的剂量递增过程中患者遇到的单个患者耐受性问题(如果存在的话)。在第一DE期过程中，每位患者可以使他们的rhASM剂量每2周从0.1mg/kg增加至1.0mg/kg(如图7所示)。

当患者接受并耐受1.0mg/kg剂量的rhASM或达到第16周(以先到者为准)时，可以结束第一DE期。如果没有满足导致剂量重复挑战或剂量降低的标准，患者可以接受每个剂量的单次输注(即，共4次输注rhASM)，产生6周的第一DE期。但是，如果满足导致剂量重复挑战或剂量降低的标准，第一DE期的持续时间可以长于6周，但是不会超过16周。

在第16周之前增加剂量并安全地耐受1.0mg/kg的患者，可以分配至2个靶剂量组之一(即，1.0或3.0mg/kg rhASM)。

随机化至3.0mg/kg rhASM的患者可以进入由2次输注组成的第二DE期(参见图7)：第一次输注(即，2.0mg/kg)是在第一个耐受剂量1.0mg/kg以后2周，第二次输注(即，3.0mg/kg或最高耐受剂量)是在第一个耐受剂量1.0mg/kg以后4周。因此，第二DE期可以在第一个耐受剂量1.0mg/kg以后4周结束。不允许重复挑战剂量。如果患者不能耐受第一剂量2.0mg/kg，第二rhASM剂量可以降低至最高耐受剂量(即，1.0mg/kg)，或在潜在剂量限制毒性(DLT)的情况下暂停。

在第一治疗期的26周DM期过程中，患者可以继续接受每2周静脉内施用的最大耐受的或随机化的剂量的rhASM。这可以包括随机化的和未随机化的患者。

如图7所示，在1.0mg/kg剂量组中的患者可以在随机化以后从他们的第一剂量1.0mg/kg开始DM期，而在3.0mg/kg组中的患者可以在随机化以后从他们的第三剂量rhASM开始DM期。对于所有随机化的患者，可以每2周静脉内施用随后的rhASM剂量，持续DM期中的26周。

未随机化的患者可以在他们的16周DE期以后2周，从他们的第一剂量rhASM开始DM期。这些患者可以继续他们的rhASM最高耐受剂量(<1.0mg/kg)，每2周施用，持续共26周。

如果随机化的患者在DM期输注期间经历中等/严重的有关AE(即，输注有关的反应(IAR))，患者可以停止和重启(即，间断)rhASM输注，或减慢输注速率。条件是，潜在DLT没有发生，患者可以在DM期的剩余时间继续该剂量的rhASM。

在所有26周方案评估已经结束以后，所有患者(包括未随机化的患者)可以进入长期治疗期，并继续rhASM治疗(在DM期过程中施用的rhASM剂量)，每2周静脉内施用，持续至少182周[3.5年]，或直到方案结束。长期治疗期包括方案结束(或患者撤出/中断)就诊和安全性随访电话访问(在rhASM的最后一次剂量以后30至37天)。在长期治疗期中，可以基于第一治疗期分析的结果，调整单个患者的rhASM剂量。如前所述，可以进行任何需要的剂量递增。

9.3.治疗

在第一DE期过程中，患者每2周接受0.1、0.3、0.6和1.0mg/kg的rhASM的静脉内输注。在第二DE期过程中，随机化至3.0mg/kg rhASM的患者接受2.0mg/kg，然后在2周以后接受3.0mg/kg(或最高耐受剂量)。在26周DM期过程中，在DE期以后，每2周给患者施用1.0或3.0mg/kg(或最高耐受剂量)的rhASM。在长期治疗期过程中，每2周静脉内施用在DM期过程中施用的rhASM剂量。

根据剂量(参见下面表9)，在大约35至135分钟(min)的时间段内，患者接受每次静脉内输注rhASM。使用标准的可编程的输液泵和0.22微米低蛋白质结合线内过滤器，输注方案治疗(rhASM)。为了以mg/kg来计算剂量，对于人体质量指数(BMI)≤30(体重，kg)/(身高，米)的患者，使用实际重量；对于BMI>30的患者，使用患者身高计算出与BMI 30相对应的重量。

表9:rhASM的施用

hr＝小时；IAR＝输注相关的反应；min＝分钟

可以将临床终点测量为，接受最大耐受的或随机化的rhASM剂量26周以后，脾体积离开基线的变化百分比(％)，相对于正常值的倍数(通过磁共振成像来测量)。第二效能终点包括：肝体积(通过MRI测量)；肺成像(通过高分辨率计算机体层摄影术扫描和胸部X射线检查)；肺功能检查，包括预测的一氧化碳扩散能力百分比、预测的用力肺活量百分比、第一秒用力呼气体积，和总肺容量；通过周期测力法(包括预测的最大工作负荷百分比、氧耗量峰值、和二氧化碳产量)测定的运动能力；医师对变化的总评估；效能生物标志物诸如血清壳三糖苷酶、CCL18、和ACE；和血液学参数诸如血小板计数、血红蛋白水平。效能评估也可以包括禁食脂质、凝血研究、疾病有关的生物标志物、健康结果测量、和患者照片。

在剂量施用之前、过程中和/或之后，可以进行安全性评估。可以进行的安全性评估包括：具有神经学评估的体检、生命体征(例如，心脏收缩和心脏舒张血压、温度、心率、呼吸速率和氧饱和度)、ECG、使用多普勒(Doppler)的CHO、血液化学(例如，钠、钾、钙、氯化物、血尿素氮、肌酸酐、尿酸、ALT、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、乳酸脱氢酶、碱性磷酸盐、总蛋白质、白蛋白、葡萄糖、胆固醇等)、血液学(例如，完全血细胞计数)、尿分析、与癌症有关的生物标志物的生物标志物分析、激素、细胞因子(例如，IL-8和IL-6)、心血管风险、急性期反应物和其它细胞过程、血清抗-rhASM IgG浓度、血清抗-rhASM IgE浓度、血清类胰蛋白酶活性、和超敏反应的皮肤试验。此外，在剂量施用之前、过程中和/或之后，可以进行药代动力学和药效动力学评估。例如，可以评估在肝和皮肤中(通过活组织检查)和在血浆和DBS中(通过串联质谱法)的鞘磷脂水平。

在本文中引用的所有参考文献，都为了所有目的通过引用整体纳入本文，其程度如同明确地且单个地指出每篇单独的出版物或专利或专利申请为了所有目的通过引用整体并入。

本发明的范围不受本文所述的具体实施方案的限制。实际上，除了描述的那些以外，本领域技术人员从前面的描述和附图显而易见本发明的不同修饰。这样的修饰意图落入所附权利要求书的范围内。

Claims

1.一种用于治疗人个体的酸性鞘磷脂酶缺乏的酸性鞘磷脂酶(ASM)，所述酸性鞘磷脂酶准备如下施用：

(a)在用于去堆积累积的鞘磷脂底物的方案中，所述方案包括：

(i)施用初始的无毒低剂量的酸性鞘磷脂酶(ASM)；

(ii)施用连续更大剂量的ASM，并在每个连续剂量以后监测所述个体的一种或多种不利副作用，如由升高的胆红素或有关不利事件所指示的；和

(b)在维持方案中，所述维持方案包括：施用等于或小于所述个体耐受的最大剂量的剂量，作为所述个体的维持剂量。

2.如权利要求1所述的ASM，它是重组人ASM(rhASM)。

3.如权利要求2所述的rhASM，其中所述初始剂量范围是0.1mg/kg至1mg/kg的rhASM。

4.如权利要求1所述的ASM，其中在所述前次剂量之后1、2、3或4周施用所述连续更大剂量。

5.如权利要求1所述的ASM，其中给所述人个体施用所述耐受的最大剂量作为维持剂量。

6.如权利要求1所述的ASM，其中所述维持剂量是小于所述耐受的最大剂量的治疗有效剂量。

7.如权利要求1所述的ASM，其中每2至4周给所述个体施用所述维持剂量。

8.一种用于治疗人个体的酸性鞘磷脂酶缺乏的rhASM，所述rhASM准备以下述顺序剂量在递增给药方案中施用：

(a)0.1mg/kg，

(b)0.3mg/kg，和

(c)0.6mg/kg；

其中每个rhASM剂量施用至少2次，且每个剂量以2周间隔施用，且其中在升高所述剂量至下一水平之前，监测所述个体的有毒副作用。

9.如权利要求1或8所述的方法，其中所述酸性鞘磷脂酶缺乏是A型尼曼-皮克二氏病(NPD)。

10.如权利要求1或8所述的方法，其中所述酸性鞘磷脂酶缺乏是B型NPD。