CN106011010B - 一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌 - Google Patents

一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌，其分类命名为斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri） NJtech 11‑1，已于2015年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为：CCTCC NO：M 2015742。本发明的菌株可用于发酵生产生物乳化剂，其生产的生物乳化剂是一种耐温、耐盐、耐酸碱和耐稀释的高效乳化剂，并对正己烷、辛烷、十六烷、甲苯、二甲苯、柴油、煤油、大豆油均有显著的乳化效果。

Description

一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌
技术领域
本发明属于生物技术领域或者农业微生物技术领域，具体涉及一株斯氏假单胞菌，由该菌产生的生物乳化剂及其在采油工业中的应用。
背景技术
生物乳化剂分为低分子量生物乳化剂和高分子量生物乳化剂。低分子量生物乳化剂主要是脂肪酸、糖脂类、环脂肽类和脂肽类。高分子量生物乳化剂通常是由多糖、蛋白、脂多糖、脂蛋白或者是这些高聚物的复杂混合物组成。生物乳化剂具有低毒性、易被生物降解性、耐高温、耐酸碱和耐盐，并具有很好的亲水亲油性能，使其在工业、农业、医疗等领域都有广泛的应用。
目前报道的斯氏假单胞菌所产生的生物乳化剂，对柴油的乳化效果不好且耐温耐酸碱范围较窄，不利于应用到石油开采中，因此，寻找一株乳化性能优良菌种，对于提高石油采收率很有必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一株产生物乳化剂的斯氏假单胞菌。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌，其分类命名为斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri） NJtech 11-1，已于2015年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为：CCTCC NO： M 2015742。
本发明所述的菌株具有以下特征：
菌株的菌落形态特征：菌落呈淡黄色，边缘不规则，表面光滑，湿润，半透明，易挑起。
菌体的形态特征：菌株是革兰氏阴性菌，短杆状，不形成芽孢。
本发明的菌株的16S rDNA基因序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
所述16S rDNA基因序列分析步骤具体如下：
用大连宝生物工程有限公司生产的DNA快速提取试剂盒提取菌株总DNA，采用大肠杆菌通用引物：
27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；
1492R：5'-CGGTTACCTTGTTACGACTT-3'，
对菌株 16S rDNA序列进行 PCR 扩增，反应体系 (100μL) 为：模板 DNA 1μL，mix50μL，引物各2μL，无菌水45μL。聚合酶链反应 (PCR) 条件为：于 94℃预热5min ；于 94℃变性45s，于55℃退火45s，于72℃延伸1.5min并循环30次；于 72℃延伸10min。PCR反应产物经0.8％琼脂糖凝胶电泳分离后，然后将电泳胶回收，得纯化后的DNA片段。将纯化后的DNA片段与 pMD18-T 载体连接，转化到大肠杆菌 DH5α 感受态细胞中，筛选阳性重组子送大连宝生物公司测序，序列如SEQ ID NO：1所示。将整个序列提交到NCBI数据库GenBank进行Blast 比对发现：NJtech 11-1与Pseudomonas stutzeri菌株的最高同源性为100％，鉴定该菌株为斯氏假单胞菌。
本发明还提供了所述斯氏假单胞菌NJtech 11-1在产生物乳化剂中的应用。
本发明同时提供了一种生物乳化剂，该生物乳化剂是一种糖蛋白类生物乳化剂，由菌株NJtech 11-1在30-37℃条件下发酵产生，生物乳化剂产量为0.6-1g/L。发酵条件为：将保藏于甘油管中的菌株NJtech 11-1活化，涂布LB平板，37℃培养12-24h。挑取单菌落，接种到LB液体培养基中，37℃，200rpm，培养12小时。再以2%接种量接种到产乳化剂的发酵培养基中，37℃，200rpm，培养48-72小时。
所述产乳化剂的发酵培养基配方为：葡萄糖或麦芽糖20-40g/L，酵母提取物0.5-1g/L，硝酸钠3-5g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾2g/L，氯化钙0.01g/L，七水硫酸镁0.3g/L。自来水调至1000mL。pH为7.4。
优选产乳化剂发酵培养基配方为：葡萄糖20-40g/L，酵母提取物0.5-1g/L，硝酸钠3-5g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾2g/L，氯化钙0.01g/L，七水硫酸镁0.3g/L。自来水1000调至mL。pH为7.4。
所述的发酵液于8000rpm，4℃离心20min除菌体后，乳化柴油。分别在pH8-9，温度45-95℃条件下，乳化指数达到100%，在盐浓度500g/L条件下，乳化指数达到80%，是一种耐温、耐盐、耐酸碱的高效乳化剂。
所述生物乳化剂的组成按质量比计为80%多糖和9%蛋白，该生物乳化剂对正己烷、辛烷、十六烷、甲苯、二甲苯、柴油、煤油、大豆油均有显著的乳化效果，是一种耐温、耐盐、耐酸碱和耐稀释的高效乳化剂。
附图说明
图1是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂在不同pH下乳化指数示意图。
图2是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂在不同温度下乳化指数示意图。
图3是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂在不同稀释度下乳化指数示意图。
图4是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂不同浓度下的乳化指数示意图。
图5是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂在不同温度下乳化指数示意图。
图6是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂在不同pH下乳化指数示意图。
图7是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂不同CaCl2盐浓度下乳化指数示意图。
图8是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂不同MgSO4盐浓度下乳化指数示意图。
图9是菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂对不同物质的乳化指数示意图。
本发明所述的生物材料，其分类命名为斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）NJtech 11-1，已于2015年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC，地址：中国. 武汉. 武汉大学），其保藏编号为：CCTCC NO：M 2015742。
具体实施方式
下面结合附图说明和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步描述。
实施例1
本实施例说明本发明菌株NJtech 11-1的获取方法。
从胜利油田提供的杂菌斜面上挑取一环细菌，接入LB液体培养基中，37℃，200rpm培养12小时得种子液。在超净工作台中用移液枪取种子液1 mL于1号9 mL无菌水的无菌试管中，充分震荡，使菌液均匀分散，即为10-1的样品稀释液；再取10-1的样品稀释液1 mL于2号9 mL无菌水的无菌试管中，以此类推，依次标记10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7和10-8。分别取10-7和10-8稀释度稀释液200μL使用无菌涂布棒均匀涂布平板上，平放静置20分钟，后倒置于37℃恒温培养箱培养12-24h，获得单菌落。分别对获得的单菌落进行发酵培养，并采用实施例2-4的方法进行发酵培养和乳化稳定性测试，最终获得一株乳化稳定性相对较好的菌株，对其进行鉴定，并命名为NJtech 11-1。
其中，种子液培养基组成为：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠10 g/L。
平板培养基组成为：酵母膏5 g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，琼脂2%。
实施例2
本实施例说明本发明提供的菌株NJtech 11-1利用葡萄糖为碳源生产乳化剂的方法。
将保藏于甘油管中的菌株NJtech 11-1活化，涂布LB平板，37℃培养12小时。挑取单菌落，接种到LB液体培养基中，37℃，200rpm，培养12小时。再以2%接种量接种到产乳化剂的发酵培养基中，37℃，200rpm，培养48小时。
所述产乳化剂的发酵培养基配方为：葡萄糖20g/L，酵母提取物0.5g/L，硝酸钠4g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾2g/L，氯化钙0.01g/L，七水硫酸镁0.3g/L。自来水调至1000mL。pH为7.4。
实施例3
将实施例2培养的发酵液于4℃，8000rpm，离心20分钟，收集上清。将收集的一部分发酵液上清直接用于乳化活性的测定；将收集的另一部分发酵液上清用于乳化剂的提取，具体方法如下：将发酵液上清预冷，然后在上清液中添加3倍体积的预冷丙酮，冰箱放置过夜。再将其8000rpm，4℃条件下离心10分钟，收集沉淀，再用适量的蒸馏水溶解，4℃透析48h，冷冻干燥，称重。
实施例4
本实施例说明本发明所述的菌株NJtech 11-1所产生生物乳化剂的乳化活性测定方法。
以0#柴油为乳化对象，在刻度试管中，将实施例3上清液或乳化剂样品溶液与柴油以1:1 体积比混合，剧烈震荡2分钟，静置24h。乳化指数 (Emulsification index，EI24)用乳化层的高度与测试烃的总高度之比，乘以100％来计算。如果EI24大于等于50％，则说明乳状液是稳定的。
实施例5
本实施例说明本发明所述的菌株NJtech 11-1所产发酵液的乳化稳定性检测。
将实施例3收集的发酵液上清，用HCl或NaOH将发酵液pH分别调至pH2、pH3、pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pH10、pH11、pH12，分别按照实施例4的方法测定乳化指数，检测该乳化剂的耐酸碱性能。结果如图1所示，在pH2-pH12范围内，对0#柴油的乳化指数分别为57.60%，57.60%，57.60%，57.60%，57.60%，66.70%，100.00%，100.00%，66.70%，48.50%，48.50%，并且在常温条件下可以长时间的保持乳化活性，表明该乳化剂可以耐受很宽的酸碱范围。
将实施例3收集的发酵液上清，分别置于35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、80℃、95℃水浴锅中水浴60min，冷却至室温，再分别按照实施例4的方法测定乳化指数，检测该乳化剂的耐热性能。结果如图2所示，在室温下放置24h后，EI24分别为57.60%，57.60%，100%，100%，100%，100%，100%，100%，100%，100%，表明高温可以提高该乳化剂的乳化活性。
将45℃-95℃温度下处理后的发酵液用蒸馏水稀释，再分别按照实施例4的方法测定乳化指数，检测该乳化剂的稀释性能。结果如图3所示，在45℃-85℃范围内，温度越高，越耐稀释，乳化层在室温下保存的时间越久，95℃处理后的发酵液乳化活性有所下降。
实施例6
本实施例说明本发明所述的菌株NJtech 11-1所产生物乳化剂精制冻干粉的乳化稳定性检测。
将实施例3提取的精制乳化剂冻干粉溶于20mM Tris-HCl（pH7.8，10mM MgSO4）溶液中制备成不同浓度的溶液，再分别按照实施例4的方法测定乳化指数，检测该乳化剂的稀释性能。该乳化剂浓度为0.2mg/mL时，对0#柴油的乳化能力可达 66.7％，说明乳化剂有较强的乳化能力，见图4。
将实施例3提取的乳化剂样品冻干粉制成浓度为0.6mg/mL的溶液，在不同温度15℃，35℃，45℃，55℃，65℃，75℃，85℃，95℃下水浴1h，冷却至室温，并在室温下放置 24h后，计算乳化层的高度，测定乳化剂的温度敏感性。EI24值分别为66.7%，66.7%，66.7%，66.7％，66.7％，66.7％，66.7％，66.7％，均大于50％，表明该乳化剂的耐热性能良好，见图5。
将实施例3提取的乳化剂样品冻干粉制成浓度为0.6mg/mL的溶液，分别用1M HCl和1M NaOH调不同pH2，pH3，pH4，pH5，pH6，pH7，pH8，pH9，pH10，pH11，pH12，放置 24h 后，计算乳化层的高度，测定乳化剂的温度敏感性。结果如图6所示，在常温下放置 24h 后，EI24值分别为66.7％，66.7％，66.7％，66.7％，66.7％，66.7%，66.7％，66.7％，66.7％，60.6%，60.6%均大于50％，表明该乳化剂的耐酸碱性能良好。
将实施例2提取的乳化剂样品冻干粉制备成摩尔浓度分别为10mM，50mM，100mM，200mM，500mM，1000mM的CaCl2溶液和MgSO4溶液，使乳化剂浓度均为0.6mg/mL，测定EI24，判定乳化剂的耐盐度。在不同的CaCl2和MgSO4浓度中，添加氯化钙可以提高乳化指数，当添加200mM的CaCl2，EI24最高达75.7%，见图7。当氯化镁添加量超过1000mM时，EI24略微降低，见图8。
将实施例3提取的乳化剂样品冻干粉制成浓度为0.6mg/mL的溶液，分别乳化正己烷、辛烷、十六烷、甲苯、二甲苯、柴油、煤油、大豆油，结果表明该乳化剂对均有很好的乳化作用，乳化指数分别为66.7%，66.7%，66.7%，66.7%，66.7%，66.7%，66.7%，60.6%，如图9所示。
实施例7
本发明提供的菌株产生的生物乳化剂的组分分析。
（1）糖组分定性
对实施例3中提取的乳化剂样品进行糖定性分析，检测样品中是否含有糖，具体实验如下：毛细管在硅胶板上点样，自然风干。在硅胶板上均匀喷一薄层α-萘酚，放入100℃烘箱加热2分钟，显色。进一步采用蒽酮-硫酸法检测样品中的总糖含量，用葡萄糖作为标准品制备标准曲线。称取样品10mg，蒸馏水定容至100mL，配制成0.1mg/mL的待测液，多次测定，计算糖含量平均值。结果表明，实施例3提取的乳化剂样品含有多糖量为80%。
（2）蛋白组分定性
将实施例2提取的乳化剂样品冻干粉制成浓度为0.6mg/mL的溶液，加入20mg/mL的蛋白酶K至终浓度10μg/mL，55℃水浴60min后，按照实施例4的方法测定乳化指数，结果表明，蛋白酶K处理之后的乳化剂溶液没有乳化活性，说明该乳化剂中起主要作用的物质是蛋白。
利用考马斯亮蓝染色确定样品中蛋白的含量，以结晶牛血清白蛋白 (BSA) 作为标准品制备标准曲线。称取10mg实施例3提取的乳化剂样品，蒸馏水定容至10mL，制成1.0mg/mL的待测液，多次测定，计算蛋白质含量的平均值。结果表明，实施例3提取的乳化剂样品的蛋白含量为9％。
序列表
<110> 南京工业大学
<120> 一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌
<130> xb16061601
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1407
<212> DNA
<213> Pseudomonas stutzeri
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1407)
<400> 1
cgt ggt acg tcc ccc gaa ggt tag act agc tac ttc tgg agc aac cca 48
Arg Gly Thr Ser Pro Glu Gly Thr Ser Tyr Phe Trp Ser Asn Pro
1 5 10 15
ctc cca tgg tgt gac ggg cgg tgt gta caa ggc ccg gga acg tat tca 96
Leu Pro Trp Cys Asp Gly Arg Cys Val Gln Gly Pro Gly Thr Tyr Ser
20 25 30
ccg tga cat tct gat tca cga tta cta gcg att ccg act tca cgc agt 144
Pro His Ser Asp Ser Arg Leu Leu Ala Ile Pro Thr Ser Arg Ser
35 40 45
cga gtt gca gac tgc gat ccg gac tac gat cgg ttt tat ggg att agc 192
Arg Val Ala Asp Cys Asp Pro Asp Tyr Asp Arg Phe Tyr Gly Ile Ser
50 55 60
tcc acc tcg cgg ctt ggc aac cct ttg tac cga cca ttg tag cac gtg 240
Ser Thr Ser Arg Leu Gly Asn Pro Leu Tyr Arg Pro Leu His Val
65 70 75
tgt agc cca ggc cgt aag ggc cat gat gac ttg acg tca tcc cca cct 288
Cys Ser Pro Gly Arg Lys Gly His Asp Asp Leu Thr Ser Ser Pro Pro
80 85 90
tcc tcc ggt ttg tca ccg gca gtc tcc tta gag tgc cca cct taa cgt 336
Ser Ser Gly Leu Ser Pro Ala Val Ser Leu Glu Cys Pro Pro Arg
95 100 105
gct ggt aac taa gga caa ggg ttg cgc tcg tta cgg gac tta acc caa 384
Ala Gly Asn Gly Gln Gly Leu Arg Ser Leu Arg Asp Leu Thr Gln
110 115 120
cat ctc acg aca cga gct gac gac agc cat gca gca cct gtg tca gag 432
His Leu Thr Thr Arg Ala Asp Asp Ser His Ala Ala Pro Val Ser Glu
125 130 135
ttc ccg aag gca cca atc cat ctc tgg aaa gtt ctc tgc atg tca agg 480
Phe Pro Lys Ala Pro Ile His Leu Trp Lys Val Leu Cys Met Ser Arg
140 145 150 155
cct ggt aag gtt ctt cgc gtt gct tcg aat taa acc aca tgc tcc acc 528
Pro Gly Lys Val Leu Arg Val Ala Ser Asn Thr Thr Cys Ser Thr
160 165 170
gct tgt gcg ggc ccc cgt caa ttc att tga gtt tta acc ttg cgg ccg 576
Ala Cys Ala Gly Pro Arg Gln Phe Ile Val Leu Thr Leu Arg Pro
175 180 185
tac tcc cca ggc ggt cga ctt aat gcg tta gct gcg cca cta aga tct 624
Tyr Ser Pro Gly Gly Arg Leu Asn Ala Leu Ala Ala Pro Leu Arg Ser
190 195 200
caa gga tcc caa cgg cta gtc gac atc gtt tac ggc gtg gac tac cag 672
Gln Gly Ser Gln Arg Leu Val Asp Ile Val Tyr Gly Val Asp Tyr Gln
205 210 215
ggt atc taa tcc tgt ttg ctc ccc acg ctt tcg cac ctc agt gtc agt 720
Gly Ile Ser Cys Leu Leu Pro Thr Leu Ser His Leu Ser Val Ser
220 225 230
att agc cca ggt ggt cgc ctt cgc cac tgg tgt tcc ttc cta tat cta 768
Ile Ser Pro Gly Gly Arg Leu Arg His Trp Cys Ser Phe Leu Tyr Leu
235 240 245
cgc att tca ccg cta cac agg aaa ttc cac cac cct ctg cca tac tct 816
Arg Ile Ser Pro Leu His Arg Lys Phe His His Pro Leu Pro Tyr Ser
250 255 260
agc tcg cca gtt ttg gat gca gtt ccc agg ttg agc ccg ggg ctt tca 864
Ser Ser Pro Val Leu Asp Ala Val Pro Arg Leu Ser Pro Gly Leu Ser
265 270 275 280
cat cca act taa cga acc acc tac gcg cgc ttt acg ccc agt aat tcc 912
His Pro Thr Arg Thr Thr Tyr Ala Arg Phe Thr Pro Ser Asn Ser
285 290 295
gat taa cgc ttg cac cct tcg tat tac cgc ggc tgc tgg cac gaa gtt 960
Asp Arg Leu His Pro Ser Tyr Tyr Arg Gly Cys Trp His Glu Val
300 305 310
agc cgg tgc tta ttc tgt tgg taa cgt caa aac agc aag gta tta act 1008
Ser Arg Cys Leu Phe Cys Trp Arg Gln Asn Ser Lys Val Leu Thr
315 320 325
tac tgc cct tcc tcc caa ctt aaa gtg ctt tac aat ccg aag acc ttc 1056
Tyr Cys Pro Ser Ser Gln Leu Lys Val Leu Tyr Asn Pro Lys Thr Phe
330 335 340
ttc aca cac gcg gca tgg ctg gat cag gct ttc gcc cat tgt cca ata 1104
Phe Thr His Ala Ala Trp Leu Asp Gln Ala Phe Ala His Cys Pro Ile
345 350 355
ttc ccc act gct gcc tcc cgt agg agt ctg gac cgt gtc tca gtt cca 1152
Phe Pro Thr Ala Ala Ser Arg Arg Ser Leu Asp Arg Val Ser Val Pro
360 365 370
gtg tga ctg atc atc ctc tca gac cag tta cgg atc gtc gcc ttg gtg 1200
Val Leu Ile Ile Leu Ser Asp Gln Leu Arg Ile Val Ala Leu Val
375 380 385
agc ctt tac ctc acc aac tag cta atc cga cct agg ctc atc tga tag 1248
Ser Leu Tyr Leu Thr Asn Leu Ile Arg Pro Arg Leu Ile
390 395 400
cgt gag gtc cga aga tcc ccc act ttc tcc cgt agg acg tat gcg gta 1296
Arg Glu Val Arg Arg Ser Pro Thr Phe Ser Arg Arg Thr Tyr Ala Val
405 410 415
tta gcg ttc ctt tcg aaa cgt tgt ccc cca cta cca ggc aga ttc cta 1344
Leu Ala Phe Leu Ser Lys Arg Cys Pro Pro Leu Pro Gly Arg Phe Leu
420 425 430
ggc att act cac ccg tcc gcc gct gaa tca tgg agc aag ctc cac tca 1392
Gly Ile Thr His Pro Ser Ala Ala Glu Ser Trp Ser Lys Leu His Ser
435 440 445
tcc gct cga ctt gca 1407
Ser Ala Arg Leu Ala
450
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 2
Arg Gly Thr Ser Pro Glu Gly
1 5
<210> 3
<211> 25
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 3
Thr Ser Tyr Phe Trp Ser Asn Pro Leu Pro Trp Cys Asp Gly Arg Cys
1 5 10 15
Val Gln Gly Pro Gly Thr Tyr Ser Pro
20 25
<210> 4
<211> 43
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 4
His Ser Asp Ser Arg Leu Leu Ala Ile Pro Thr Ser Arg Ser Arg Val
1 5 10 15
Ala Asp Cys Asp Pro Asp Tyr Asp Arg Phe Tyr Gly Ile Ser Ser Thr
20 25 30
Ser Arg Leu Gly Asn Pro Leu Tyr Arg Pro Leu
35 40
<210> 5
<211> 32
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 5
His Val Cys Ser Pro Gly Arg Lys Gly His Asp Asp Leu Thr Ser Ser
1 5 10 15
Pro Pro Ser Ser Gly Leu Ser Pro Ala Val Ser Leu Glu Cys Pro Pro
20 25 30
<210> 6
<211> 4
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 6
Arg Ala Gly Asn
1
<210> 7
<211> 54
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 7
Gly Gln Gly Leu Arg Ser Leu Arg Asp Leu Thr Gln His Leu Thr Thr
1 5 10 15
Arg Ala Asp Asp Ser His Ala Ala Pro Val Ser Glu Phe Pro Lys Ala
20 25 30
Pro Ile His Leu Trp Lys Val Leu Cys Met Ser Arg Pro Gly Lys Val
35 40 45
Leu Arg Val Ala Ser Asn
50
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 8
Thr Thr Cys Ser Thr Ala Cys Ala Gly Pro Arg Gln Phe Ile
1 5 10
<210> 9
<211> 40
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 9
Val Leu Thr Leu Arg Pro Tyr Ser Pro Gly Gly Arg Leu Asn Ala Leu
1 5 10 15
Ala Ala Pro Leu Arg Ser Gln Gly Ser Gln Arg Leu Val Asp Ile Val
20 25 30
Tyr Gly Val Asp Tyr Gln Gly Ile
35 40
<210> 10
<211> 64
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 10
Ser Cys Leu Leu Pro Thr Leu Ser His Leu Ser Val Ser Ile Ser Pro
1 5 10 15
Gly Gly Arg Leu Arg His Trp Cys Ser Phe Leu Tyr Leu Arg Ile Ser
20 25 30
Pro Leu His Arg Lys Phe His His Pro Leu Pro Tyr Ser Ser Ser Pro
35 40 45
Val Leu Asp Ala Val Pro Arg Leu Ser Pro Gly Leu Ser His Pro Thr
50 55 60
<210> 11
<211> 13
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 11
Arg Thr Thr Tyr Ala Arg Phe Thr Pro Ser Asn Ser Asp
1 5 10
<210> 12
<211> 21
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 12
Arg Leu His Pro Ser Tyr Tyr Arg Gly Cys Trp His Glu Val Ser Arg
1 5 10 15
Cys Leu Phe Cys Trp
20
<210> 13
<211> 57
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 13
Arg Gln Asn Ser Lys Val Leu Thr Tyr Cys Pro Ser Ser Gln Leu Lys
1 5 10 15
Val Leu Tyr Asn Pro Lys Thr Phe Phe Thr His Ala Ala Trp Leu Asp
20 25 30
Gln Ala Phe Ala His Cys Pro Ile Phe Pro Thr Ala Ala Ser Arg Arg
35 40 45
Ser Leu Asp Arg Val Ser Val Pro Val
50 55
<210> 14
<211> 20
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 14
Leu Ile Ile Leu Ser Asp Gln Leu Arg Ile Val Ala Leu Val Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Leu Thr Asn
20
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 15
Leu Ile Arg Pro Arg Leu Ile
1 5
<210> 16
<211> 53
<212> PRT
<213> Pseudomonas stutzeri
<400> 16
Arg Glu Val Arg Arg Ser Pro Thr Phe Ser Arg Arg Thr Tyr Ala Val
1 5 10 15
Leu Ala Phe Leu Ser Lys Arg Cys Pro Pro Leu Pro Gly Arg Phe Leu
20 25 30
Gly Ile Thr His Pro Ser Ala Ala Glu Ser Trp Ser Lys Leu His Ser
35 40 45
Ser Ala Arg Leu Ala
50

Claims (5)

1.一种产生物乳化剂的斯氏假单胞菌，其特征在于，其分类命名为斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri） NJtech 11-1，已于2015年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为：CCTCC NO： M 2015742。
2.根据权利要求1所述的斯氏假单胞菌，其特征在于，其16S rDNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
3.权利要求1所述斯氏假单胞菌在产生物乳化剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，具体步骤为：将菌株NJtech 11-1活化，涂布于LB平板，37℃培养12小时；挑取单菌落，接种到LB液体培养基中，37℃，200rpm，培养12小时；以2%接种量接种到产乳化剂的发酵培养基中，37℃，200rpm，培养48小时。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基配方为：葡萄糖20g/L，酵母提取物0.5g/L，硝酸钠4g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾2g/L，氯化钙0.01g/L，七水硫酸镁0.3g/L，pH为7.4。
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