CN106008475A - 一种香豆素类nedd8激活酶抑制剂 - Google Patents
一种香豆素类nedd8激活酶抑制剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了两种具有不同通式的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，及其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、代谢产物和前药。本发明还公开了前述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。药理结果显示，该化合物具有良好的NEDD8抑制活性、抗肿瘤细胞增殖作用、促进肿瘤细胞凋亡作用，是临床上可用于制备治疗肿瘤的药物。
Description
技术领域
本发明属于生物化学领域，具体涉及一种香豆素类NEDD8激活酶抑制剂。
背景技术
恶性肿瘤是一大类严重危害人类健康的常见多发疾病，其致死率高，仅次于心脑血管疾病。据世界卫生组织统计，2012年全世界约有820万人死于癌症，预计2030年因癌症死亡的人数将超过1100万。中国是癌症发病率和病死率较高的国家，每年因此造成的经济损失高达数千亿元，并且随着人口老龄化、生态及生活环境的恶化，这种趋势更有可能加剧。因此，寻找治疗肿瘤的有效药物备受关注。
在真核细胞中，泛素蛋白酶体系统(UPS)负责蛋白质的降解，并在维持细胞内蛋白质动态平衡中担当重要角色。UPS的底物蛋白参与诸如细胞周期调节、细胞生长及增殖、信号传导、DNA修复及细胞凋亡信号传导过程。因此，UPS失调则会导致一些信号通路的异常激活或抑制，进而可能发展成为肿瘤或其他相关疾病。在UPS中，泛素首先由泛素激活酶(E1)ATP依赖性激活；其次通过转硫醇作用转移至泛素结合酶(E2)上，形成泛素-E2复合物；然后在泛素连接酶(E3)的作用下转移至待降解底物的赖氨酸残基上；最后底物蛋白被多个泛素修饰后，经蛋白酶体26S识别并降解。
泛素化过程的3个酶中，E3具有严格的底物特异性。目前已知RING-finger E3s(CRLs)是UPS E3中最大的一个蛋白家族。它的底物蛋白包括很多与肿瘤相关的细胞调控蛋白,如Cdt-1,p27,pIκBα,NRF2,HIF-1α,CyclinE,c-Jun,J-catenin,Cdc25A,Emi1,c-Myc,mTOR,BimEL等(Genes&Cancer.2012,1:708–716)。经研究发现只有当CRLs被一个类泛素NEDD8修饰后才具有催化活性(Mol Cell Biol 2000,20:2326–2333)。
NEDD8是由81个氨基酸残基组成的蛋白质，与泛素有60％的一致性和80％同源性。它通过级联酶促反应特异性与待修饰蛋白结合的过程被称为Neddylation。该过程与UPS类似：首先，成熟的NEDD8在NEDD8激活酶(E1)催化下，ATP依赖性激活；然后被转移至NEDD8结合酶(E2)；最后在NEDD8连接酶(E3)作用下，共价连接于被修饰蛋白上。NEDD8激活酶为NEDD8通路中的限速酶，因此可以通过调节NEDD8激活酶的活性，来调节NEDD8通路以及泛素蛋白酶体通路活性，从而达到治疗肿瘤的目的。由于NEDD8通路处于泛素蛋白酶体通路的上游，通过抑制NEDD8激活酶，降低Neddylation活性，特异性下调泛素蛋白酶体通路中相关E3(CRLs)的活性，从而特异性减少细胞内与肿瘤相关蛋白的降解。
WO2007092213A2公开了第一个NEDD8激活酶抑制剂MLN4924的结构、制备方法及其作为抗肿瘤药物的应用。MLN4924目前正处于一期临床研究。MLN4924在NEDD8激活酶催化下，与NEDD8形成NEDD8-MLN4924复合物，并由该复合物选择性抑制NEDD8激活酶活性，从而抑制NEDD8通路(Mol.Cell,2010,37:102-111)。除MLN4924以外，目前没有其他NEDD8激活酶抑制剂进入临床实验，更无NEDD8激活酶抑制剂药物上市，因此寻找及开发新型NEDD8激活酶抑制剂将对癌症治疗具有十分重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，以解决现有技术存在的同类产品缺失的问题。
本发明还要解决的技术问题是提供上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的应用。
本发明还要解决的技技术问题是提供上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的中间体。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明主题作任何限制。在本发明中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用"或"、"或者"表示"和/或"。此外，所用术语"包括"以及其它形式，例如"包含"、"含"和"含有"并非限制性。
可在参考文献(包括Carey and Sundberg“ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4THED.”Vols,A(2000)and B(2001),P1enum Press,New York)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UVMs光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域己知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-CH2O-等同于-OCH2。本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本发明中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。在本文中定义的某些化学基团前面通过简化符号来表示该基团中存在的碳原子总数。例如，Cl-6烷基是指具有总共1至6个碳原子的如下文所定义的烷基。简化符号中的碳原子总数不包括可能存在于所述基团的取代基中的碳。除前述以外，当用于本发明的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
在本发明中，术语"卤素"是指氟、氯、溴或碘。
“羟基”是指-OH基团。
“羟基烷基”是指被羟基(-OH)取代的如下文所定义的烷基。
“羰基”是指-C(＝O)-基团。
“硝基”是指-NO2。
“氰基”是指-CN。
“氨基”是指-NH2。
“取代的氨基”是指被一个或两个如下文所定义的烷基、烷基羰基、芳烷基、杂芳烷基取代的氨基，例如，单烷基氨基、二烷基氨基、烷基酰胺基、芳烷基氨基、杂芳烷基氨基。
“羧基“是指-COOH。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分(例如用在卤素取代的烷基等基团中)，术语“烷基”意指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和键、具有例如l至12个(优选为1至8个，更优选为1至6个)碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2.2-二甲基丙基、正己基、庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、辛基、主基和类基等。
在本发明中，术语“烷氧基”是指式-ORa基团，其中Ra为如上文所定义的烷基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。
在本发明中，术语“烷基碳基”是指-C(O)-Ra基团，其中Ra为如上文所定义的烷基。
在本发明中，术语“烷氧基碳基”是指-C(O)O-Ra基团，其中Ra为如上文所定义的烷基。
在本发明中，术语“单烷基氨基”是指式-NHRa基团，其中Ra为如上文所定义的烷基。单烷基氨基的实例包括但不限于甲氨基、乙氨基、异丙氨基等。
在本发明中，术语“二烷基氨基”是指式-NRaRb基团，其中Ra和Rb各自独立地为如上文所定义的烷基。二烷基氨基的实例包括但不限于二甲氧基、二乙氨基、二丙氨基、甲基乙基氨基等。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“烯基”意指仅由碳原子和氢原子组成、含有至少一个双键、具有例如2至14个(优选为2至10个，更优选为2至6个)碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团，例如但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“炔基”意指仅由碳原子和氢原子组成、含有至少一个三键和任选的一个或多个键、具有例如2至14个(优选为2至10个，更优选为2至6个)碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的经烃链基团，例如但不限于乙炔基、丙-1-炔基、丁-1-炔基、戊-1-烯-4-炔基等。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分，术语"环烷基"意指仅由碳原子和氢原子组成的稳定的非芳香族单环或多环烃基，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系，具有3至15个碳原子，优选具有3至10个碳原子，更优选具有3至8个碳原子，且其为饱和或不饱和并可经由任何适宜的碳原子通过单键与分子的其余部分连接。除非本说明书中另外特别指明，环烷基中的碳原子可以任选地被氧化。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、1H-茚基、2,3-二氢化茚基、1,2,3,4-四氢-萘基、5,6,7,8-四氢-萘基、8,9-二氢-7H-苯并环庚烯-6-基、6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚烯基、5,6,7,8,9,10-六氢-苯并环辛烯基、二环[2.2.1]庚基、7,7-二甲基-二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.1.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛烯基、二环[3.2.1]辛烯基、金刚烷基、和八氢-4,7-亚甲基-lH-茚基等。
在本发明中，术语“环烷基氧基”是指式-Rc基团，其中Rc为如上文所定义的环烷基。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂环基”意指由2至14个碳原子以及1至6个选自氮、氧和硫的杂原子组成的稳定的3元至20元非芳香族环状基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂环基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系，其杂环基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化；且杂环基可为部分或完全饱和。杂环基可以经由碳原子或者杂原子并通过单键与分子其余部分连接。在包含稠环的杂环基中，一个或多个环可以是下文所定义的芳基或杂芳基，条件是与分子其余部分的连接点为非芳香族环原子。就本发明的目的而言，杂环基优选为包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至11元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团，更优选为包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至8元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团。杂环基的实例包括但不限于：吡咯烷基、吗琳基、哌嗪基、哌啶基、硫代吗琳基、2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-7-基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚炕-6-基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-基、氮杂环丁烷基、吡喃基、四氢吡喃基、四氢异喹啉基、十氢异喹啉基、二氧环戊基、咪唑啉基、咪唑烷基、喹嗪基、噻唑烷基、异噻唑烷基、二氢吲哚基、吡咯烷基、吡唑烷基、邻苯二甲酰亚氨基等。
在本发明中，术语"杂环基氧基"是指式-ORd基团，其中Rd为如上文所定义的杂环基。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“芳香基”意指具有6至18个碳原子(优选具有6至10个碳原子)的共轭烃环体系基团。就本发明的目的而言，芳基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。芳基的实例包括但不限于苯基、荼基、惠基、菲基、蒽基、2,3-二氢-lH-异吲哚基、2-苯井噁唑啉酮等。
在本发明中，术语“芳基烷基”是指被上文所定义的芳基所取代的上文所定义的烷基。
在本发明中，作为基团或是其它基团的一部分，术语"杂环芳香基"意指环内具有1至15个碳原子(优选具有1至10个碳原子)和1至6个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至16元共轭环系基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂芳基可为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是杂芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。杂芳基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化。就本发明的目的而言，杂芳基优选为包含1至5个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至12元芳香性基团，更优选为包含1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至10元芳香性基团或者包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至6元芳香性基团。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、恶唑基、恶二唑基、异恶唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吲哚基、呋喃基、吡咯基、三唑基、三嗪基、吲嗪基、异吲哚基、吲唑基、异吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氮萘基、萘啶基、喹噁唑啉基、蝶啶基、咔唑基、咔啉基、菲啶基、菲咯啉基、吖啶基、吩嗪基、异噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯硫基、中氮茚基、邻二氮杂菲基、异恶唑基、吩恶嗪基、吩噻嗪基、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩基、萘并吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶、[1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,2-a]吡嗪等。
在本发明中，术语“杂芳基烷基”文所定义的杂芳基所取代的土文所定义的烷基。
在本发明中“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。
在本发明中，当某一基团被描述为"任选地取代"时，该基团可任选地在一个或多个适当的位置被下列基团取代：烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、氰基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、三甲基甲硅烷基、-ORl0、-C(O)-Rl0、-C(O)O-Rl0、-OC(O)-Rl0、-N(RlO)2、-C(O)N(Rl0)2、-N(Rl0)C(O)Rl1、-N(Rl0)C(O)ORl1、-N(Rl0)S(O)tRl1(其中t为1或2)、-S(O)tO(Rl1)(其中t为1或2)、-S(O)tRl1(其中t为0、l或2)、-S(O)tN(R10)2(其中t为l或2)，其中各RlO独立地为氢、烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；且各Rl1独立地为烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。
本文所用术语“部分”、“结构部分”、“化学部分”、“基团”、“化学基团”是指分子中的特定片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加到分子上的化学实体。
“互变异构体”是指质子从分子的一个原子转移至相同分子的另一个原子而形成的异构体。本发明的化合物的所有互变异构形式也将包含在本发明的范围内。
在本发明中，术语"药学上可接受的盐"包括药学上可接受的酸加成盐
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2.2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、荼二磺酸盐等。这些盐可通过本专业己知的方法制备。
“多晶型物”是指本发明的某些化合物在固体状态下由于存在两种或两种以上不同分子排列而产生的不同固体结晶相。本发明的某些化合物可以存在多于一种晶型，本发明旨在包括各种晶型及其混合物。
通常，结晶化作用会产生本发明化合物的溶剂化物。本发明中使用的术语“溶剂化物”是指包含一个或多个本发明化合物分子与一个或多个溶剂分子的聚集体。溶剂可以是水，该情况下的溶剂化物为水合物。或者，溶剂可以是有机溶剂。因此，本发明的化合物可以以水合物存在，包括单水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等，以及相应的溶剂化形式。本发明化合物可形成真实的溶剂化物，但在某些情况下，也可以仅保留不定的水或者水加上部分不定溶剂的混合物。本发明的化合物可以在溶剂中反应或者从溶剂中沉淀析出或结晶出来。本发明化合物的溶剂化物也包含在本发明的范围之内。
本发明中“代谢产物”是指药物被机体吸收后，在酶的作用下经过体内的官能团化反应(I相生物转化反应，包括氧化、还原、水解等)和结合反应(II相生物转化反应)等生物转化而产生的化合物。
本发明还包括上述化合物的前药。在本发明中，术语“前药”表示可在生理学条件下或通过溶剂分解而被转化成本发明的生物活性化合物的化合物。因此，术语“前药”是指本发明的化合物的药学上可接受的代谢前体。当被给予有需要的个体时，前药可以不具有活性，但在体内被转化成本发明的活性化合物。前药通常在体内迅速转化，而产生本发明的母体化合物，例如通过在血液中水解来实现。前药化合物通常在哺乳动物生物体内提供溶解度、组织相容性或缓释的优点。前药包括己知的氨基保护基和羧基保护基。具体的前药制备方法可参照Saulnier,M.G.,et a1.,Bioorg.Med.Chem.Lett.1994,4,1985-1990；Greenwald.R.B.,et a1.,J Med.Chem.2000.43.475。
在本发明中“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。
在本发明中“药学上可接受的载体”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料、着色剂、矫昧剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
本文所用的有关术语“受试者”、“患者”或"个体"是指患有疾病或病症等的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啃齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟类和鱼类等。在本文提供的一个有关方法和组合物的实施方案中，所述哺乳动物为人。
本文所用术语“预防的”、“预防”和“防止”包括使病患减少疾病或病症的发生或恶化的可能性。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
1、预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为己患有该疾病或病症时；
2、抑制疾病或病症，即遏制其发展；
3、缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者减轻该疾病或病症所造成的症状。
本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物系统的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。
本文所用术语“服用”、“施用”、“给药”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、局部给药和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在Goodman and Gilman,ThePharmacological Basis of Therapeutics,current ed.；Pergβmon；and Remington's,Pharmaceutical Sciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pa中讨论的那些。
本文所使用术语“药物组合”、“药物联用”、“联合用药”、“施用其它治疗”、“施用其它治疗剂”等是指通过混合或组合不止一种活性成分而获得的药物治疗，其包括活性成分的固定和不固定组合。术语“固定组合”是指以单个实体或单个剂型的形式向患者同时施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同药剂。术语“不固定组合”是指以单独实体的形式向患者同时施用、合用或以可变的间隔时间顺次施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同制剂。这些也应用到鸡尾酒疗法中，例如施用三种或更多种活性成分。
一种由下述通式Ⅲ表示的中间体：
上述中间体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)NaH溶于甲苯后在氮气保护下冰浴搅拌4～6min，并在冰浴条件下向其中滴加4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液，滴加完毕后继续冰浴搅拌15～25min；冰浴搅拌完成后，向其中加入碳酸二乙酯并在110～125℃下加热回流搅拌8～16h；加热回流搅拌完成后，用盐酸水溶液调节混合体系pH至4～6后，过滤，滤液经柱层析纯化后得到1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯；
(2)将步骤(1)中制备得到的1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯溶于甲苯后在110～125℃下加热回流搅拌18～30h后，过滤，滤液经甲苯洗涤并浓缩后，与甲苯混合后继续在110～125℃下加热回流搅拌18～30h；加热回流搅拌完成后过滤，取固体部分用甲苯洗涤，干燥后，得到4-羟基-7-溴香豆素；
(3)将碳酸钾、溴化苄和步骤(2)中制备得到的4-羟基-7-溴香豆素溶于乙腈后在氮气保护下75～81℃加热回流搅拌4～8h，过滤，滤液降至室温后静置0.5～1.5h后，过滤，取固体部分用4℃的乙腈洗涤，干燥后，得到4-苄氧基-7-溴香豆素；
(4)将氯化钯、联萘二苯磷、碳酸铯和4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶和步骤(3)中制备得到的4-苄氧基-7-溴香豆素溶于1,4-二氧六环后，在氮气保护下，80～100℃下加热搅拌8～16h后，过滤，取滤液经柱层析纯化后得到7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素；
(5)将步骤(4)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素和10％钯碳溶于四氢呋喃后在室温下搅拌6～12h后，加入氨气饱和的甲醇溶液,，搅拌4～6min后，过滤，滤液经氨气饱和的甲醇溶液洗涤并浓缩后得到黄色油状粗品；将黄色油状粗品溶于混合溶液中，搅拌0.5～1.5h后，过滤，取固体部分用混合溶液洗涤后，干燥，得到7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素；
(6)将步骤(5)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素和三乙胺溶于二氯甲烷后冰浴搅拌5～15min，滴加三氟甲磺酸酐，滴加完成后在室温下搅拌1～3h后，经100～200目硅胶制砂柱层析纯化，得到三氟甲磺酸7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基香豆素-4-酯，即得所需制备的中间体。
步骤(1)中，4-溴-2-羟基苯乙酮、NaH和碳酸二乙酯的摩尔比为1：2.1～2.4：1.1～1.4；4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液中，溶质4-溴-2-羟基苯乙酮的浓度为100～300g/L；盐酸水溶液中，溶质HCl的质量百分比为37～40％。
步骤(2)中，1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯和溶解其所用甲苯的固液比为1g：5～10mL。
步骤(3)中，碳酸钾、溴化苄和步骤(2)中制备得到的4-羟基-7-溴香豆素的摩尔比为0.5～1：1.8～2.2：1。
步骤(4)中，氯化钯、联萘二苯磷、碳酸铯、4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶和步骤(3)中制备得到的4-苄氧基-7-溴香豆素的摩尔比0.005～0.01：0.08～0.1：1～1.1：1～1.2：1。
步骤(5)中，步骤(4)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素和10％钯碳的质量比为1:0.01～0.05；所述的混合溶液由石油醚和乙酸乙酯以3：1的体积比混合而成；氨气饱和的甲醇溶液与四氢呋喃的体积比为1：3～5；黄色油状粗品和溶解其所用混合溶液的质量比为1：3～5。
步骤(6)中，步骤(5)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素、三乙胺和三氟甲磺酸酐的摩尔比为1：1.1～1.5：1.1～1.3。
上述中间体Ⅲ在制备香豆素类NEDD8激活酶抑制剂中的应用也在本发明的保护范围之内。
一种由下述通式Ⅰ表示的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，及其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、代谢产物和前药：
其中，
环A为芳香基，碳数为6～10；其中环A优选苯基、喹啉基、嘧啶基或1,2,3-三氮唑基；
p为环A上取代基Rt的数目，取值为0、1、2、3、4、或5，优选0、1或2；
Rt各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基或杂环芳香基，且Rt上的H原子任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-R1、-OR1、-C(O)-R1、-C(O)-OR1、-OC(O)-R1、-C(O)N(R1)2、-S(O)x-R1、-NH2、-NHR1、-N(R1)2、-NHC(O)R1、-NHC(O)OR1或-NR2C(O)R1的基团取代；其中，x为0、1或2；所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
R1和R2各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基或杂环芳香基，且R1和R2上的H原子任选地被一个或多个选自-OH、-CN、-NH2、烷基、单烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、杂环基、烷基杂环基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基、羟基烷氧基烷基、烷基羰基烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基羰基氨基烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、烷基环烷基取代、环烷基羰基、烷氧基羰基、烷氧基羰基杂环基、(烷氧羰基)(烷基)氨基、(烷氧基烷基)(烷基)氨基或(烷基羰基)(烷基)氨基的基团取代。
优选的，本发明的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅰ)结构式如下：
上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅰ)在制备抗肿瘤药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
其中，所述的肿瘤为白血病、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌、鼻咽癌、脑癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌或口腔癌。
上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅰ)的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：
将上述中间体Ⅲ、碳酸钠、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅳ溶于四氢呋喃后，在氮气保护下60～65℃加热回流搅拌1～3h，过滤，滤液经浓缩和柱层析(PE：EA＝5：1)纯化后，得到中间体；中间体经混合溶剂溶解后，室温下搅拌4～6h；搅拌完成后，向所得混合体系中加入甲苯，浓缩后加入乙醚，超声后过滤，取固体部分用乙醚洗涤并干燥后，即得，
其中，上述中间体Ⅲ、碳酸钠、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅳ的摩尔比为1：0.5～1.2：0.01：1～1.3；化合物Ⅳ和四氢呋喃的固液比为1g：5～200mL；中间体和混合溶剂的固液比为1g：5～200mL；混合溶剂由二氯甲烷和三氟醋酸以1：3～5的体积比混合而成；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅰ)的制备方法，，其特征在于，它包括如下步骤：
将上述中间体Ⅲ、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅴ溶于乙腈后在氮气保护下室温下搅拌0.5～1.5h后，过滤，滤液经乙腈洗涤后，浓缩并经柱层析纯化后，得到中间体；中间体溶于二甲亚砜后，加入NaN3，90～120℃下搅拌0.5～1.5h，加水后用乙酸乙酯萃取2～3次，取有机相浓缩并干燥，所得固体部分溶于三氟醋酸后在室温下搅拌2～6h，反应完成后所得混合体系中加入甲苯，浓缩后加入乙醚，超声后过滤，取固体部分用乙醚洗涤并干燥后，即得，
其中，上述中间体Ⅲ、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯、化合物Ⅴ和NaN3的摩尔比为1：1～1.5：0.05～0.1：0.05～0.1：1～1.3：1.1～1.4；化合物Ⅴ和乙腈的固液比为1g：5～200mL；中间体和二甲亚砜的固液比为1g：5～200mL；固体部分和三氟醋酸的固液比为1g：5～200mL；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
一种由下述通式Ⅱ表示的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，及其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、代谢产物和前药：
其中，
环B为氢或芳香基，优选C6-10芳香基，进一步的，优选苯基或嘧啶基；
q为环B上取代基Rs的数目，q的取值为0、1、2、3、4、或5，优选0、1或2；
Rs各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基、杂环芳香基，且Rt上的H原子任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-R1、-OR1、-C(O)-R1、-C(O)-OR1、-OC(O)-R1、-C(O)N(R1)2、-S(O)x-R1、-NH2、-NHR1、-N(R1)2、-NHC(O)R1、-NHC(O)OR1或-NR2C(O)R1的基团取代；其中，x为0、1或2；所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
R1和R2各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基、杂环芳香基，且R1和R2上的H原子任选地被一个或多个选自-OH、-CN、-NH2、烷基、单烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、杂环基、烷基杂环基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基、羟基烷氧基烷基、烷基羰基烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基羰基氨基烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、烷基环烷基取代、环烷基羰基、烷氧基羰基、烷氧基羰基杂环基、(烷氧羰基)(烷基)氨基、(烷氧基烷基)(烷基)氨基或(烷基羰基)(烷基)氨基的集团取代。
优选的，本发明的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅱ)结构式如下：
上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅱ)在制备抗肿瘤药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
其中，所述的肿瘤为白血病、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌、鼻咽癌、脑癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌或口腔癌。
其中，制备得到的抗肿瘤药物为固态、半固态、液态或气态，包括但不限于片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、疑胶剂、微球和气溶胶。
其中，所述的抗肿瘤药物的制备方法为本领域公知的制备方法。例如，旨在注射给药的药物组合物可以通过将本发明的化合物或其药学上可接受的盐或前药与灭菌的蒸馆水组合来制备，从而形成溶液剂。可添加表面活性剂以促进形成均匀溶液或混悬液。制备药物组合物的实际方法为本领域技术人员所己知，例如可参见The Science and Practiceof Pharmacy(制药科学与实践)，20th Edition(Philadelphia College of Pharmacy andScience,2000)。
其中，所述的抗肿瘤药物的给药途径包括但不限于口服、局部、经皮、肌肉、静脉、吸入、肠胃外、舌下、直肠、阴道及鼻内。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、庶糖等。用于液体制剂的载体包括但不限于水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。具体的给药方式和剂型取决于化合物本身的理化性质以及所应用疾病的严重程度等。本领域技术人员能够根据上述因素并结合其自身具有的知识来确定具体的给药途径。例如可参见:李俊，<<临床药理学>>，人民卫生出版社，2008.06；丁玉峰，论临床剂型因素与合理用药，医药导报，26(5)，2007；Howard C.Ansel,Loyd V Allen,Jr.,Nicholas G.Popovich著，张志强主译，<<药物剂型与给药体系>>，中国医药科技出版社，2003.05。
同时，本发明中香豆素类NEDD8激活酶抑制剂可以与一种或多种其它的本发明化合物或者一种或多种其它抗癌药物联合或组合使用，以治疗和/或预防肿瘤。可以与本发明化合物联用的药物包括但不限于万珂、多西他赛、吉西他滨、顺铂、卡铂、格列卫、替莫唑胺、阿霉素、达卡巴嗪、特罗凯、依托泊糖苷、柔红霉素以及阿糖胞昔等。
上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅱ)的制备方法，包括如下步骤：
将上述中间体Ⅲ、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅵ溶于乙腈后在氮气保护下在室温下搅拌0.5～1.5h后，过滤，滤液经浓缩后经柱层析纯化，得中间体；中间体溶于四氢呋喃后加入TBAF，室温下搅拌5～15min后溶于乙酸乙酯，取有机相用饱和食盐水洗涤2～3次后溶于混合溶剂中，室温下搅拌4～8h；搅拌完成后将所得的混合体系溶于甲苯，浓缩，加入乙醚，超声后过滤，固体部分用乙醚洗涤后干燥，即得，
其中，上述中间体Ⅲ、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯、化合物Ⅵ和TBAF的的摩尔比为1：1～1.5：0.05～0.1：0.05～0.1：1～1.3：1.1～1.4；所述的混合溶剂由三氟乙酸和二氯甲烷以1：3～5的体积比混合而成；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂(Ⅱ)的制备方法，包括如下步骤：
将上述中间体Ⅲ、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅵ溶于乙腈后在氮气保护下在室温下搅拌0.5～1.5h后，过滤，滤液经浓缩后经柱层析纯化，得中间体；中间体溶于混合溶剂中，室温下搅拌4～8h；搅拌完成后将所得的混合体系溶于甲苯，浓缩，加入乙醚，超声后过滤，固体部分用乙醚洗涤后干燥，即得，
其中，上述中间体Ⅲ、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯、化合物Ⅵ和TBAF的的摩尔比为1：1～1.5：0.05～0.1：0.05～0.1：1～1.3：1.1～1.4；化合物Ⅵ和乙腈的固液比为1g：5～200mL；所述的混合溶剂由三氟乙酸和二氯甲烷以1：3～5的体积比混合而成；中间体和混合溶剂的固液比为1g：5～200mL；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
上述制备方法中，没有特别说明的的柱层析，都是使用PE：EA＝20：1的层析柱。
有益效果：
与现有技术相比，本发明具有如下优势：本发明化合物能够有效抑制肿瘤细胞增值，对NEDD8激活酶高表达细胞增值抑制效果明显。可用于治疗肿瘤，与硼替佐米联合用药具有协同作用，增加药效。
附图说明
图1为实施例37中试验结果示意图。
具体实施方式
下述实施例中，Ⅰ-1～Ⅰ-26和Ⅱ-1～Ⅱ-10的制备总反应式如下所示
其中，由间溴苯酚和苯乙胺为起始原料合成关键中间体7。关键中间体经suzuki反应后脱Boc制得Ⅰ-1～Ⅰ-22，关键中间体7依次经Sonogashiva反应、与NaN3点击化学反应及脱Boc后制得Ⅰ-23～Ⅰ-26。关键中间体7经Sonogashiva反应后脱Boc制得Ⅱ-1～Ⅱ-10。
实施例1 7-(4-(苯乙胺基)哌啶-1-取代)-4-苯基-香豆素(Ⅰ-1)
操作步骤:
(1)1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸甲酯(1)的合成
2L四颈圆底烧瓶中加入1000mL无水甲苯及31g NaH，氮气保护下，冰浴搅拌5min。冰浴条件下滴加溶有60g 4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液400mL。滴加完毕后继续冰浴搅拌20min。然后滴加67g碳酸二乙酯。滴加完毕后加热回流搅拌过夜。TLC检测反应完毕后，冰浴降温，用浓盐酸调pH至酸性。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩的粗品。用柱层析纯化(PE：EA＝20:1)的产品60.41g。HNMR(300MHz,CDCl3)δ:7.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.22(s,1H),7.08(d,J＝5.7Hz,1H),3.98(s,2H),3.77(s,3H).MS(ESI)(m/z):295.0[M+23]+.
(2)4-羟基-7-溴香豆素(2)的合成
500mL圆底烧瓶中加入300mL甲苯。及60.41g化合物1，加热回流搅拌24h。有大量白色固体生成，过滤，滤液用甲苯洗涤。收集滤饼并干燥，滤液浓缩得黄色油状物，加入200mL甲苯，继续加热回流搅拌24h。过滤，滤饼用甲苯洗涤，收集滤饼并干燥。得白色固体产品37.23g。HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.22(d,J＝1.8Hz,1H),7.08(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H),5.61(s,1H).MS(ESI)(m/z):239.0[M-1]+.(3)4-苄氧基-7-溴香豆素(3)的合成
500mL圆底烧瓶中加入300mL无水乙腈，37.23g中间体2，42.69g碳酸钾及52.6g溴化苄，氮气保护条件下加热回流搅拌6h。趁热过滤，滤液静置自然降温至室温后继续静置1h。有白色絮状固体生成。过滤，滤饼用4℃的乙腈洗涤。收集滤饼干燥。的17.27g产品。HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.75-7.72(m,2H),7.56-7.52(m,3H),7.47-7.40(m,3H),6.09(s,1H),5.35(s,2H).
(4)7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素(5)
500mL圆底烧瓶中依次加入400mL 1,4-二氧六环、0.18g氯化钯、3.14g BINAP、17.28g碳酸铯及15.35g 4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶(4)。置换氮气3次，90℃加热搅拌过夜。TLC检测反应完毕后，自然降温至室温。过滤，滤饼用1,4-二氧六环洗涤。合并滤液，浓缩的粗品。柱层析纯化的15.4g黄色油状产品。
(5)7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素(6)
250mL圆底烧瓶中加入100mL四氢呋喃，15.4g中间体5，及1g 10％钯碳。室温搅拌过夜。TLC检测反应完毕后。加入100mL氨气饱和的甲醇溶液，搅拌5min。过滤。滤饼用氨气饱和的甲醇溶液洗涤。合并滤液浓缩，得黄色油状粗品。加入200mL PE：EA＝3：1的混合溶液溶解，搅拌1h，有灰色固体生成。过滤，滤饼用PE：EA＝3：1的混合溶液洗涤，收集滤饼，干燥的7.18g产品。HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.59(d,J＝9Hz,1H),7.31-7.19(m,5H),6.95(d,J＝8.7Hz,1H),6.76(s,1H),5.32(s,1H),4.02(d,J＝13.2Hz,2H),3.48(1H),3.24(s,2H),2.91(t,J＝12.6Hz,2H),2.77(t,2H),1.82(d,2H),1.63(d,2H),1.38(s,9H).
(6)三氟甲磺酸7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基香豆素-4-酯(7)
25mL圆底烧瓶中加入0.45g中间体6，5mL无水二氯甲烷及0.147g三乙胺。冰浴搅拌10min后滴加三氟甲磺酸酐0.408g。滴加完毕后自然升温至室温，继续搅拌2h。TLC检测反应完毕后，直接加入1g 100-200目硅胶制砂柱层析纯化，得0.36g黄色油状产品。
(7)7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-苯基香豆素(Ⅰ-1)
25mL圆底烧瓶中依次加入5mL无水四氢呋喃，0.12g中间体7，0.058g碳酸钠，0.012g四(三苯基膦)钯，及0.027g苯基硼酸。置换氮气后，氮气保护条件下加热回流搅拌2h，TLC检测反应完毕后，过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤。合并滤液，浓缩，柱层析(PE：EA＝5:1)，所得中间体用3mL二氯甲烷溶解，加入0.5mL三氟醋酸，室温搅拌过夜。反应完毕后加入1mL甲苯，浓缩。加入15mL乙醚，超声5min，过滤，滤饼用乙醚洗涤。收集滤饼干燥，得45.5mg产品，纯度96.9％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.56(s,3H),7.51(s,2H),7.22(m,6H),6.96(d,2H),6.07(s,H),4.05(d,J＝13.2Hz,2H),3.40(s,H),3.21(s,2H),2.91(m,4H),2.07(d,J＝10.1Hz,2H),1.54(d,J＝11.4Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.81.156.41,155.68,152.93,137.51,135.74,129.99,129.27,129.09,129.06,128.75,127.97,127.26,111.91,109.66,109.32,101.16,54.68,45.89,45.21,32.23,27.51.HRMS(ESI)(m/z):425.2239[M+1]+,calculated for C28H29N2O2,425.2229.
实施例2 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-氟-4-甲基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-2)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.147g中间体7、0.042g3-氟-4-甲基苯硼酸、0.014g四(三苯基膦)钯和0.061g碳酸钠，得74.6mg，产率81.2％，纯度99.0％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.45(t,J＝7.6Hz,H),7.23-7.38(m,8H),6.95(d,2H),6.09(s,H),4.05(d,J＝12.8Hz,2H),3.40(s,H),3.23(s,2.65),2.90(m,4H),2.33(s,3H),2.08(d,J＝10.7Hz,2H),1.51(q,J＝11.8Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:161.93,160.74,159.99,156.39,154.27,152.96,137.52,135.27,135.20,132.52,132.48,129.09,129.06,127.86,127.25,126.36,126.22,124.71,115.54,115.36,111.93,109.81,109.09,101.15.
实施例3 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-甲基-4-氟苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-3)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.16g中间体7、0.045g3-甲基-4-氟苯硼酸、0.015g四(三苯基膦)钯和0.067g碳酸钠，得64.9mg，产率56.5％，纯度97.5％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.44(d,J＝7.3Hz,H),7.23-7.38(m,8H),6.96(d,2H),6.06(s,H),4.05(d,J＝13.3Hz,2H),3.39(H),3.22(s,2H),2.90(m,4H),2.31(s,3H),2.08(d,J＝11.0Hz,2H),1.51(q,J＝11.6Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:162.74,160.78,156.37,154.79,152.92,137.50,132.21,131.79,129.10,129.06,128.39,128.33,127.98,127.26,125.56,125.42,115.94,115.76,111.92,109.69,109.27,101.13,54.66,45.87,45.19,32.22,27.51,14.58.
实施例4 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3,4-二甲基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-4)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.033g3，4-二甲基苯硼酸、0.011g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得78.9mg，产率69.3％，纯度98.8％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.20-7.38(m,9H),6.96(d,2H),6.02(s,H),4.05(d,J＝13.1Hz,2H),3.36(1H),3.22(s,2H),2.90(m,4H),2.30(s,6H),2.07(d,J＝9.6Hz,2H),1.52(q,J＝11.0Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.89,156.41,155.83,152.84,138.49,137.50,137.35,133.24,130.26,129.69,129.11,129.07,128.10,127.27,126.18,111.87,109.39,109.24,101.15,54.68,45.88,45.19,32.23,27.50,19.81,19.67.
实施例5 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3,4-二甲基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-5)
合成方法如实施例1，不同的是，所用原料为0.16g中间体7、0.056g 2-三氟甲基苯硼酸、0.016g四(三苯基膦)钯和0.067g碳酸钠，得67.1mg，产率50.8％，纯度96.1％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.93(d,J＝7.7Hz,1H),7.74-7.86(m,2H),7.48(d,J＝7.4Hz,1H),7.24-7.38(m,5H),6.98(s,1H),6.88(d,J＝9.1Hz,1H),6.65(d,J＝8.9Hz,1H),6.87(s,1H),4.07(d,J＝13.4Hz,2H),3.39(s,1H),3.22(s,2H),2.89(m,4H),2.06(d,J＝11.2Hz,2H),1.54(d,J＝12.1Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.34,155.74,153.50,153.01,137.52,133.79,133.14,130.99,130.19,129.10,129.06,127.88,127.53,127.44,127.26,127.20,126.96,126.92,125.35,123.17,118.86,116.47,111.97,110.80,110.44,100.79,54.64,45.85,45.80,32.22,27.52,27.48.
实施例6 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-甲氧基-4-甲基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-6)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.037g3-甲氧基-4-甲基苯硼酸、0.011g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得61.6mg，产率49.0％，纯度98.6％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.24-7.37(m,7H),6.95-7.02(m,4H),6.10(s,H),4.05(d,J＝13.1Hz,2H),3.84(s,3H),3.40(1H),3.36(d,1H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.23(s,3H),2.07(d,J＝11.43Hz,2H),1.52(q,J＝11.4Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.92,157.90,156.43,155.78,152.88,137.52,134.58,130.99,129.09,129.06,128.14,127.75,127.26,120.58,111.87,110.80,109.44,109.39,101.16,55.86,54.69,45.89,45.22,32.23,27.55,16.33.
实施例7 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-氯-4-氟苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-7)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.039g3-氯-4-氟苯硼酸、0.011g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得47.1mg，产率49.1％，纯度97.8％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.75(d,J＝7.1Hz,H),7.58(t,J＝8.8Hz,H),7.51(m,2H),7.24-7.37(m,5H),7.18(d,J＝9.1Hz,H),6.96(d,2H),6.14(s,H),4.05(d,J＝13.1Hz,2H),3.37(d,1),3.22(s,2H),2.90(m,4H),2.08(d,J＝11.61Hz,2H),1.52(q,J＝11.73Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.63,159.25,157.26,156.33,153.24,153.03,137.55,133.40,133.37,131.06,129.86,129.80,129.05,127.76,127.24,120.65,120.50,117.88,117.72,111.99,110.27,109.05,101.10,101.10,54.62,45.86,45.20,32.21,27.55.
实施例8 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-氯-4-三氟甲基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-8)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.16g中间体7、0.066g3-氯-4-三氟甲基苯硼酸、0.016g四(三苯基膦)钯和0.067g碳酸钠，得产物80.3mg，产率50.8％，纯度99.1％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.02(d,J＝8.2Hz,1H),7.,88(s,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,1H),7.25-7.38(m,5H),7.15(d,J＝8.9Hz,1H),6.95(t,2H),6.22(s,H),4.06(d,J＝13.6Hz,2H),3.38(d,H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.08(d,J＝11.3Hz,2H),1.51(q,J＝11.2Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.47,156.34,153.13,152.62,141.52,137.50,131.72,129.09,129.06,128.79,128.30,127.83,127.67,127.58,127.26,126.45,124.28,122.11,119.94,118.89,116.51,112.04,110.60,108.73,101.12,54.65,45.85,45.21,32.22,27.57.HRMS(ESI)(m/z):527.1719[M+1]+,calculated for C29H27N2O2Cl,527.1713.
实施例9 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-三氟甲氧基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-9)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.16g中间体7、0.061g3-三氟甲氧基苯硼酸、0.016g四(三苯基膦)钯和0.067g碳酸钠，得产物56.3mg，产率41.3％，纯度99.0％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.69(t,J＝7.9Hz,1H),7.53(t,J＝7.0Hz,2H),7.51(s,1H),7.15-7.38(m,5H),7.15(d,J＝8.7Hz,1H),6.97(d,2H),6.15(s,1H),4.06(d,J＝11.1Hz,2H),3.35(t,1H),3.20(d,2H),2.90(m,4H),2.11(d,J＝10.6Hz,2H),1.52(q,J＝11.0Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.61,156.39,153.78,153.02,148.90,137.87,137.50,131.47,129.09,129.06,128.03,127.61,127.26,122.37,121.55,121.42,119.50,118.90,117.47,116.51,112.02,110.25,108.99,101.17,54.67,45.86,45.21,32.23,27.53.HRMS(ESI)(m/z):509.2063[M+1]+,calculated for C29H28N2O3,509.2052.
实施例10 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-甲氧基-5-氯苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-10)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.041g3-甲氧基-5-氯苯硼酸、0.011g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得产物59.8mg，产率60.8％，纯度99.0％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.20-7.37(m,7H),7.11(s,H),6.98(d,3H),6.13(s,H),4.05(d,J＝13.4Hz,2H),3.85(s,3H),3.41(s,H),3.20(d,2H),2.90(q,4H),2.08(d,J＝9.5Hz,2H),1.52(q,J＝11.6Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.74,160.68,156.33,154.04,152.99,138.44,137.53,134.65,129.10,129.06,127.78,127.26,120.61,115.41,113.67,112.00,109.99,109.00,56.31,54.63,45.86,45.19,32.22,27.53.
实施例11 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2,5-二甲氧基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-11)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.04g 2,5-二甲氧基苯硼酸、0.012g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得产物77.3mg，产率63.4％，纯度98.3％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.24-7.38(m,5H),7.05-7.15(m,2H),6.85-6.93(m,2H),6.03(s,1H),4.02(d,J＝13.1Hz,2H),3.75(s,3H),3.66(s,3H),3.37(d,1H),3.22(s,2H),2.89(m,4H),2.07(d,J＝10.6Hz,2H),1.51(q,J＝11.4Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.99,155.76,153.89,153.66,152.82,150.38,137.53,129.10,129.06,128.29,127.26,125.26,115.93,115.80,113.40,111.85,110.64,109.94,100.79,56.44,55.98,54.66,45.94,45.19,32.22,27.50.
实施例12 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(苯并[1,4]二氧六环)香豆素(Ⅰ-12)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.16g中间体7、0.053g1,4-苯并二氧六环-6-硼酸、0.015g四(三苯基膦)钯和0.067g碳酸钠，得产物58.1mg，产率54.35％，纯度98.9％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.28-7.38(m,6H),6.96-7.04(m,5H),6.02(s,1H),4.32(s,4H),4.05(d,J＝12.8Hz,2H),3.40(s,1H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.08(d,J＝11.3Hz,2H),1.52(q,J＝10.5Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.87,156.39,155.02,152.86,145.12,143.95,137.52,129.09,129.05,128.68,128.04,127.25,121.94,117.88,117.57,111.84,109.35,109.22,101.15,64.71,64.57,54.68,45.89,45.21,32.22,27.52.
实施例13 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(喹啉-8-取代)香豆素(Ⅰ-13)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.1g中间体7、0.032g喹啉-8-硼酸、0.009g四(三苯基膦)钯和0.042g碳酸钠，得产物47.9mg，产率60.1％，纯度99.2％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.49(d,J＝8.19Hz,1H),8.16(d,7.17Hz,1H),7,73(t,2H),7.58(dd,J＝8.1Hz,4.2Hz,1H),7.27-7.37(m,5H),6.98(s,1H),6.76(d,J＝9.3Hz,1H),6.57(d,J＝8.8Hz,1H),6.16(s,1H),4.00(d,J＝13.2Hz,2H),3.33(s,1H),3.21(s,2H),2.89(m,4H),2.05(d,J＝10.8Hz,2H),1.54(d,J＝10.8Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.97,155.68,155.65,152.71,151.18,145.77,137.51,136.95,135.05,130.12,130.08,129.09,129.05,128.64,128.35,127.25,126.84,122.43,111.78,111.37,111.20,100.79,54.68,45.97,45.19,32.22,27.47.
实施例14 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(喹啉-7-取代)香豆素(Ⅰ-14)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.038g喹啉-7-硼酸、0.012g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得产物51.7mg，产率54.1％，纯度90.5％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.49(d,J＝8.4Hz,1H),8.13(t,2H),7.64-7.72(m,2H),7.26-7.38(m,7H),6.96(t,2H),6.25(s,H),4.06(d,J＝14.0Hz,2H),3.35(1H),3.2(d,2H),2.89(m,4H),2.08(d,J＝10.5Hz,2H),1.52(q,J＝11.6Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.76,156.45,154.90,152.99,151.91,147.52,137.52,136.90,136.70,129.29,129.10,129.06,128.90,128.62,127.98,127.26,127.02,122.90,111.99,110.30,109.26,101.18,54.65,45.87,45.20,32.22,27.52.
实施例15 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-氟-6-甲氧基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-15)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.12g中间体7、0.038g2-氟-6-甲氧基苯硼酸、0.012g四(三苯基膦)钯和0.05g碳酸钠，得产物49.3mg，产率51.9％，纯度99.7％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.51(q,J＝8.2Hz,1H),7.27-7.38(m,5H),6.90-7.10(m,4H),6.82(d,1H),6.12(s,1H),4.03(d,J＝12.4Hz,2H),3.75(s,3H),3.40(s,1H),3.22(s,2H),2.89(m,4H),2.06(d,J＝11.1Hz,2H),1.51(q,J＝10.9Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.68,160.49,155.91,153.00,147.44,137.53,132.10,132.02,129.10,129.05,127.44,127.25,112.23,112.11,112.07,111.96,109.71,108.47,108.33,100.90,56.74,54.63,45.93,45.18,32.22,27.43.
实施例16 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-甲氧羰基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-16)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.1g中间体7、0.033g 4-甲氧羰基苯硼酸、0.01g四(三苯基膦)钯和0.042g碳酸钠，得产物67.1mg，产率83.0％，纯度99.1％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.11(d,J＝8.1Hz,2H),7.64(d,J＝8.0Hz,2H),7.25-7.38(m,5H),7.16(d,J＝8.8Hz,H),6.95(t,2H),6.14(s,H),4.05(d,J＝13.4Hz,2H),3.91(s,3H),3.37(d,H),3.23(s,2H),2.89(m,4H),2.07(d,J＝11.0Hz,2H),1.55(q,J＝11.2Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:166.21,160.63,156.40,154.54,153.01,140.30,137.51,130.89,130.00,129.31,129.10,129.06,127.77,127.26,111.97,110.00,108.89,101.16,54.64,52.83,45.85,45.19,32.22,27.51.HRMS(ESI)(m/z):483.2291[M+1]+,calculatedfor C30H31N2O4,483.2284.
实施例17 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(异吲哚啉-1-酮-5-取代)香豆素(Ⅰ-17)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.13g中间体7、0.064g异吲哚啉-1-酮-5-硼酸、0.013g四(三苯基膦)钯和0.055g碳酸钠，得产物75.6mg，产率70.7％，纯度97.7％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.82(d,J＝7.8Hz,1H),7.70(s,1H),7.56(d,J＝7.9Hz,1H),7.20-7.38(m,7H),6.95(t,2H),6.12(s,1H),4.46(s,2H),4.06(d,J＝13.1Hz,2H),3.40(1H),3.21(d,2H),2.90(m,4H),2.08(d,J＝10.6Hz,2H),1.56(q,J＝10.41Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:169.73,160.69,156.39,155.25,152.99,145.09,138.59,137.50,134.03,129.10,129.06,128.49,127.96,127.26,124.26,123.59,111.95,110.02,109.18,101.13,54.65,45.86,45.50,45.20,32.22,27.51.
实施例18 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-苯基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-18)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.15g中间体7、0.054g4-苯基苯硼酸、0.014g四(三苯基膦)钯和0.061g碳酸钠，得产物78.1mg，产率63.3％，纯度98.2％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.85(d,J＝8.2Hz,2H),7.75(d,J＝7.4Hz,2H),7.59(d,J＝8.1Hz,2H),7.50(t,J＝7.1Hz,2H),7.42(d,J＝7.2Hz,1H),7.25-7.40(m,6H),6.98(d,2H),6.13(s,H),4.06(d,J＝13.3Hz,2H),3.40(t,H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.08(d,2H),1.52(q,J＝12.0Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.82,156.45,155.27,152.95,141.75,139.69,137.51,134.76,129.53,129.48,129.09,129.06,128.42,128.00,127.50,127.24,111.93,109.59,109.27,101.20,54.69,45.89,45.22,32.23,27.54.HRMS(ESI)(m/z):501.2554[M+1]+,calculated for C34H33N2O2,501.2542
实施例19 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-苯氧基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-19)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.15g中间体7、0.058g4-苯氧基苯硼酸、0.014g四(三苯基膦)钯和0.061g碳酸钠，得产物68.4mg，产率53.7％，纯度94.9％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.44-7.54(m,4H),7.20-7.38(m,7H),7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.99(s,1H),6.08(s,1H),4.05(d,J＝13.32Hz,2H),3.37(d,H),3.20(d,2H),2.89(m,4H),2.07(d,J＝10.9Hz,2H),1.51(q,J＝12.1Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.82,158.67,156.43,156.17,155.00,152.90,137.47,130.76,130.70,130.35,129.10,129.06,128.02,127.27,124.72,119.98,118.55,111.89,109.49,109.33,101.19,55.45,54.70,45.89,45.21,32.24,27.52.HRMS(ESI)(m/z):517.2498[M+1]+,calculated forC34H33N2O3,517.2491.
实施例20 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3-甲基-4-甲氧基-5-氯苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-20)
合成方法如实施例1，不同的是，所用原料为0.1g中间体7、0.037g 3-甲基-4-甲氧基-5-氯苯硼酸、0.01g四(三苯基膦)钯和0.042g碳酸钠，得产物71.9mg，产率83.0％，纯度97.3％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.44(s,H),7.24-7.38(m,7H),6.97(d,2H),6.09(s,1H),4.05(d,J＝12.8Hz,2H),3.83(s,3H),3.37(d,2H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.35(s,3H),2.08(d,J＝11.0Hz,2H),1.56(q,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.71,156.33,155.13,153.88,152.95,137.51,134.15,132.40,130.47,129.10,129.06,128.03,127.89,127.59,127.26,111.98,109.84,109.09,101.12,60.49,54.65,45.86,45.19,32.22,27.53.HRMS(ESI)(m/z):503.2112[M+1]+,calculated for C30H32N2O3Cl,503.2101.
实施例21 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(3,4,5-三甲氧基苯-1-取代)香豆素(Ⅰ-21)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.1g中间体7、0.039g 3,4,5-三甲氧基苯硼酸、0.01g四(三苯基膦)钯和0.042g碳酸钠，得产物71.9mg，得产物68.2mg，产率79.1％，纯度97.6％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.28-7.43(m,6H),6.97(s,2H),6.79(s,H),6.14(s,1H),4.05(d,J＝13.0Hz,2H),3.83(s,6H),3.75(s,3H),3.40(s,1H),3.23(s,2H),2.92(t,4H),2.08(d,J＝11.5Hz,2H),1.56(q,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.89,156.40,155.62,153.50,152.89,138.89,137.53,131.12,129.09,129.06,128.21,127.25,111.91,109.52,109.34,106.44,101.15,60.55,56.55,54.68,45.89,45.22,32.22,27.58.
实施例22 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(尿嘧啶-5-取代)香豆素(Ⅰ-22)
合成方法如实施例1，不同的是，在步骤(7)所用原料为0.11g中间体7、0.035g尿嘧啶-5-硼酸、0.02g四(三苯基膦)钯和0.045g碳酸钠，得产物21.5mg，产率28.0％，纯度91.0％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.68(d,J＝5.0Hz,1H),7.27-7.38(m,6H),6.90(d,2H),6.08(s,1H),4.04(d,J＝13.89Hz,2H),3.34(s,1H),3.22(s,2H),2.91(m,4H),2.06(d,J＝11.6Hz,2H),1.51(dd,J＝11.4Hz,9.3Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:162.75,161.01,155.77,152.75,151.57,149.37,142.70,137.45,129.11,129.07,128.66,127.29,111.60,111.24,109.99,108.81,100.70,54.72,45.99,45.16,32.25,27.42.
实施例23 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-环丙基-1,2,3-三氮唑-5-取代)香豆素(Ⅰ-23)
25mL圆底烧瓶中加入5mL无水乙腈、0.11g中间体7、0.034g二异丙基乙基胺、0.0031g碘化亚铜、0.01g四(三苯基膦)钯及0.0272g苯乙炔。置换氮气后，氮气保护下室温搅拌1h。TLC检测完毕后，过滤，滤液用乙腈洗涤。浓缩滤液，粗品经柱层析纯化，所得中间体用3mL二甲亚砜溶解，加入0.0132g NaN3，加热至100℃搅拌1h，加入10mL水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，浓缩干燥，所得固体中加入0.5mL三氟醋酸，室温搅拌过夜，反应完毕后加入1mL甲苯，浓缩。加入15mL乙醚，超声5min，过滤，滤饼用乙醚洗涤。收集滤饼干燥，得21.2mg产品，产率25.2％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:7.37-7.25(m,6H),7.05-6.93(m,2H),6.30(m,1H),4.10(d,J＝13.5Hz,2H),3.41(br,1H),3.23(s,2H),2.99(m,4H),2.12(d,J＝11Hz,2H),2.00(m,1H),1.63(m,2H),1.03(t,2H),0.88(m,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.82,160.51,156.50,153.13,152.97,151.02,144.99,143.52,141.87,137.50,129.09,129.06,127.26,119.30,111.81,110.93,108.79,108.29,100.95,54.71,45.86,45.22,32.23,27.53,9.08,8.69.
实施例24 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-环己基-1,2,3-三氮唑-5-取代)香豆素(Ⅰ-24)
制备方法同实施例23，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.026g环己基乙炔、0.013g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.057g二异丙基乙基胺0.014g叠氮化钠，得产物10.2mg，产率11.3％，纯度93.7％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.44(d,J＝8.9Hz,1H),7.34-7.20(m,5H),6.97-6.91(m,2H),6.07(s,1H),4.00(d,J＝13.1Hz,2H),3.31(br,1H),3.17(m,4H),2.82(m,2H),2.00(m,2H),1.82-1.65(m,5H),1.56-1.17(m,10H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.78,156/41.153.33,146.51,145.87,139.13,137.39,129.04,128.86,128.48,126.77,111.71,109.91,109.04,100.61,54.43,46.68,45.97,34.29,33.84,32.76,29.44,26.13,25.79.实施例25 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-苯基-1,2,3-三氮唑-5-取代)香豆素(Ⅰ-25)
制备方法同实施例23，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.028g4-苯基乙炔、0.013g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.57g二异丙基乙基胺0.014g叠氮化钠，得产物16.1mg，产率21.3％，纯度92.8％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:15.69(br,1H),7.55(d,J＝7HZ,2H),7.41-7.20(m,10H),6.97(s,1H),6.88(d,J＝9Hz,1H),6.11(s,1H),4.07(d,J＝13.5Hz,2H),3.39(br,1H),3.22(s,2H),2.967(m,4H),2.10(d,J＝10.5Hz,2H),1.60(m,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.57,156.45,153.09,137.50,129.40,129.09,129.06,127.86,127.26,111.81,108.71,100.90,54.65,45.77,45.21,32.22,27.57.
实施例26 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(4-(3-氯苯-1-取代)-1,2,3-三氮唑-5-取代)香豆素(Ⅰ-26)
制备方法同实施例23，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.031g 3-氯苯-1-乙炔、0.011g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.51g二异丙基乙基胺0.013g叠氮化钠，得产物16.1mg，产率21.3％，纯度92.0％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:15.90(br,1H),7.65(s,1H),7.42-7.18(m,9H),6.97(s,1H),6.86(d,J＝9Hz,1H),6.14(s,1H),4.07(d,J＝13Hz,2H),3.41(m,1H),3.24(t,2H),2.97(m,4H),2.11(d,J＝11.5Hz,2H),1.61(m,2H).
实施例27 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-乙炔基香豆素(Ⅱ-1)
25mL圆底烧瓶中加入5mL无水乙腈、0.133g(0.223mmol)中间体7、0.058g(0.452mmol)二异丙基乙基胺、0.004g(0.021mmol)碘化亚铜、0.0129g(0.0116mmol)四(三苯基膦)钯、以及0.025g(0.223mmol)苯乙炔。置换氮气，氮气保护下室温搅拌1h。TLC检测完毕后，过滤，滤液用乙腈洗涤。浓缩滤液，粗品经柱层析纯化，得0.119g中间体。该中间体0.119g溶解于5mLTHF中，并加入0.093g TBAF，室温搅拌10min。反应完毕后加入50mL乙酸乙酯稀释，有机相用饱和食盐水洗涤3次。浓缩有机相，所得残渣用所得中间体用4mL TFA:DCM＝1:5的混合溶剂溶解，室温搅拌6h。反应完毕后加入1mL甲苯，浓缩反应液。加入15mL乙醚，超声5min，过滤，滤饼用乙醚洗涤。收集滤饼干燥，得46.1mg产品，产率55.5％，纯度96.7％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.58(d,J＝9.0Hz,1H),7.28-7.38(m,5H),7.04(d,J＝9.0Hz,1H),6.91(s,1H),6.36(s,1H),5.16(s,1H),4.06(d,J＝12.4Hz,2H),3.38(d,H),3.24(s,4H),2.89(m,4H),2.07(d,J＝11.6Hz,2H),1.54(d,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.18,155.82,153.41,137.52,136.06,129.09,129.05,127.43,127.25,114.10,112.15,109.02,100.76,93.16,77.67,54.64,45.86,45.22,32.22,27.55.
实施例28 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-环丙基乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-2)
25mL圆底烧瓶中加入5mL无水乙腈、0.080g(0.134mmol)中间体7、0.035g(0.271mmol)二异丙基乙基胺、0.0025g(0.013mmol)碘化亚铜、0.008g(0.006mmol)四(三苯基膦)钯、以及0.014g(0.211mmol)环丙基乙炔。置换氮气，氮气保护下室温搅拌1h。TLC检测完毕后，过滤，滤液用乙腈洗涤。浓缩滤液，粗品经柱层析纯化，所得中间体用4mL TFA:DCM＝1:5的混合溶剂溶解，室温搅拌6h。反应完毕后加入1mL甲苯，浓缩反应液。加入15mL乙醚，超声5min，过滤，滤饼用乙醚洗涤。收集滤饼干燥，得23.0mg产品，纯度97.1％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:7.56(d,J＝7.5Hz,1H),7.36-7.25(m,5H),7.03(d,J＝7.5Hz,1H),6.87(s,1H),6.16(s,H),4.08(d,J＝13Hz,2H),3.38(1H),3.23(s,1H),2.98(m,4H),2.12(d,J＝11Hz,2H),1.77(m,1H),1.63(m,2H),1.06(t,2H),0.93(s,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.45,155.72,153.28,137.57,137.53,129.09,129.05,127.63,127.24,112.24,112.05,109.52,108.20,100.74,70.52,54.64,45.91,45.22,9.87,0.57.
实施例29 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-环己基乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-3)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.26g环己基乙炔、0.017g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜和0.056g二异丙基乙基胺，得产物48.9mg，产率49.4％，纯度97.1％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(m,2H),7.26(m,3H),7.05(dd,J＝9Hz,2.5Hz,1H),6.89(d,J＝2Hz,1H),6.191(s,1H),4.07(d,J＝13Hz,2H),3.38(s,1H),3.22(s,1H),2.92(m,4H),2.83(m,1H),2.09(d,J＝10.5Hz,2H),1.87(m,2H),1.52(m,5H),1.36(m,3H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.46,155.76,153.29,137.51,137.46,129.10,129.06,127.50,127.26,112.46,112.14,109.50,108.05,100.77,75.41,54.63,45.89,45.19,32.22,32.01,29.44,27.52,25.65,24.55.
实施例30 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-苯基乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-4)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.028g 4-苯基乙炔、0.013g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.057g二异丙基乙基胺，得产物24.0mg，产率25.7％，纯度91.5％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.72(t,3H),7.52(d,3H),7.30(t,6H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.94(s,1H),6.42(s,H),4.08(d,J＝13.8Hz,2H),3.41(s,1H),3.24(s,2H),2.92(m,4H),2.09(d,J＝10.0Hz,2H),1.55(t,2H).
实施例31 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-(3-甲基苯-1-取代)乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-5)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.1g中间体7、0.022g 3-甲基苯基乙炔、0.01g四(三苯基膦)钯、0.003g碘化亚铜、0.043g二异丙基乙基胺，得产物57.3mg，产率73.9％，纯度98.8％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.75(d,J＝8.9Hz,1H),7.56(s,1H),7.51(d,J＝7.2Hz,1H),7.25-7.43(m,7H),7.06(d,J＝9.0Hz,1H),6.94(s,1H),6.39(s,1H),4.07(d,J＝13.7Hz,2H),3.35(q,1H),3.20(m,2H),2.90(m,4H),2.37(s,3H),2.09(d,J＝11.3Hz,2H),1.52(dd,J＝21.0Hz,11.7Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.34,155.83,153.40,138.93,137.53,136.62,132.97,131.70,129.74,129.34,129.09,129.06,127.70,127.25,120.82,112.80,112.15,109.09,101.31,100.84,83.34,54.64,45.91,45.23,32.22,27.56,21.10.
实施例32 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-(4-甲基苯-1-取代)乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-6)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.028g 4-甲基苯乙炔、0.013g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.57g二异丙基乙基胺，得产物41.6mg，产率53.7％，纯度98.8％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.74(d,J＝8.9Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,2H),7.24-7.38(m,7H),7.06(d,J＝8.9Hz,1H),6.93(s,1H),6.38(s,1H),4.07(d,J＝13.4Hz,2H),3.37(t,1H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.38(s,3H),2.09(d,J＝11.19Hz,2H),1.53(q,J＝10.5Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.39,155.82,153.37,141.13,137.52,136.73,132.61,130.09,129.11,129.07,127.72,127.26,117.94,112.58,112.14,109.09,101.56,100.64,83.24,54.63,45.90,45.21,32.22,27.55,21.63.
实施例33 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-(3-氯苯-1-取代)乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-7)
制备方法同实施例28，所不同的是，中所用原料为0.13g中间体7、0.026g 3-氯基苯乙炔、0.013g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.57g二异丙基乙基胺，得产物56.3mg，产率58.0％，纯度98.6％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:7.87(s,1H),7.80(d,J＝9.0Hz,1H),7.70(d,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.5Hz,1H),7.53(t,J＝7.5Hz,1H),7.34(t,J＝7.5Hz,2H),7.26(m,3H),7.05(dd,J＝8.5Hz,2Hz,1H),6.93(d,2Hz,1H),4.09(d,13.5Hz,2H),3.38(1H),3.23(s,2H),2.93(m,4H),2.11(d,J＝10.05Hz,2H),1.57(m,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.27,155.84,153.43,137.53,136.14,134.00,132.09,131.31,130.97,129.10,129.06,127.87,127.26,122.94,113.33,112.12,108.90,100.81,99.05,84.59,54.61,45.88,45.21,32.22,27.56.
实施例34 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-(4-氯苯-1-取代)乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-8)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.13g中间体7、0.026g 4-氯基苯乙炔、0.013g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.57g二异丙基乙基胺，得产物49.7mg，产率51.2％，纯度98.8％。
HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.75(d,J＝8.56Hz,3H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.25-7.38(m,5H),7.05(d,J＝9.3Hz,1H),6.94(s,1H),6.43(s,H),4.07(d,J＝13.1Hz,2H),3.37(m,H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.09(d,J＝11.1Hz,2H),1.52(q,J＝11.2Hz,2H)
实施例35 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-(吡啶-1-取代)乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-9)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.11g中间体7、0.021g吡啶-2-乙炔、0.011g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.48g二异丙基乙基胺，得产物60.4mg，产率66.8％，纯度98.1％。
HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:8.70(d,J＝4.6Hz,1H),7.96(t,J＝7.7Hz,1H),7.84(d,J＝7.5Hz,1H),7.73(d,J＝8.9Hz,1H),7.52(m,1H),7.25-7.38(m,5H),7.09(d,J＝8.9Hz,1H),6.95(d,J＝1.5Hz 1H),6.49(s,1H),4.08(d,J＝13.0Hz,2H),3.42(s,1H),3.23(s,2H),2.90(m,4H),2.09(d,J＝11.2Hz,2H),1.53(q,J＝11.9Hz,2H).CNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:160.20,155.85,153.46,151.02,141.17,137.60,137.51,135.72,129.10,129.06,128.84,127.53,127.26,125.35,113.77,112.19,108.88,100.82,99.56,82.00,54.63,45.86,45.22,32.22,27.57.
实施例35 7-(4-苯乙胺基哌啶-1-取代)-4-(2-(吡啶-3-取代)乙炔-1-取代)香豆素(Ⅱ-9)
制备方法同实施例28，所不同的是，所用原料为0.11g中间体7、0.021g吡啶-3-乙炔、0.011g四(三苯基膦)钯、0.004g碘化亚铜、0.48g二异丙基乙基胺，得产物71.2mg，产率78.7％，纯度96.3％。
实施例36细胞增殖抑制活性实验
本实施例所描述的细胞增殖抑制活性实验，是用来测定本发明化合物对于NEDD8激活酶高表达的细胞株及对MLN4924敏感细胞株的增殖抑制活性，受试化合物对细胞增殖的抑制活性用半数抑制浓度IC50来表示。该类试验的试验方案如下:选择不同细胞，如A549细胞、HCT-116细胞或K562等(细胞购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库/中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)，以适宜的细胞浓度(例如，60000个细胞/mL培养基)将细胞接种于96孔培养板上。之后将细胞放置于37℃，5％CO2的环境中进行培养12小时后，向培养的细胞培养基中加入一系列浓度梯度的药物，一般选择10个浓度。之后将细胞放回原培养环境中继续培养48小时，之后按照CCK-8的方法，测定受试化合物对不同细胞增殖的影响，并计算不同浓度的化合物对细胞增殖的抑制活率。之后对不同浓度的化合物下细胞增殖抑制率进行参数拟合，计算出IC50数据。结果见表1
表1本发明化合物对人源性肿瘤细胞的IC50(μM)
实施例37 细胞内NEDD8激活酶活性抑制实验
本实施例所描述的细胞内NEDD8激活酶活性抑制的实验，是用来测定本发明化合物对于肿瘤细胞株内NEDD8激活酶的抑制活性，如AGS细胞。活性取生长状态良好的对数生长期细胞，以1.5×105个细胞/mL密度接种于6孔板，每孔接种2mL。培养24h。裂解细胞并提取蛋白。用western方法检测细胞内相关蛋白含量。结果显示Ⅰ-18对胃癌AGS有剂量依赖性抑制Uba3-NEDD8(NEDD8激活酶β亚基与NEDD8结合的复合物)、Ubc12-NEDD8生成的作用。随着Ⅰ-18的剂量升高，A549胞内P27、CDT1及NRF2含量水平逐渐上升，说明该化合物促进胞内泛素CRLs E3酶底物的积累。详细结果见图1。
Claims (25)
1.一种由下述通式Ⅲ表示的中间体：
2.权利要求1所述的中间体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)NaH溶于甲苯后在氮气保护下冰浴搅拌4～6min，并在冰浴条件下向其中滴加4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液，滴加完毕后继续冰浴搅拌15～25min；冰浴搅拌完成后，向其中加入碳酸二乙酯并在110～125℃下加热回流搅拌8～16h；加热回流搅拌完成后，用盐酸水溶液调节混合体系pH至4～6后，过滤，滤液经柱层析纯化后得到1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯；
(2)将步骤(1)中制备得到的1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯溶于甲苯后在110～125℃下加热回流搅拌18～30h后，过滤，滤液经甲苯洗涤并浓缩后，与甲苯混合后继续在110～125℃下加热回流搅拌18～30h；加热回流搅拌完成后过滤，取固体部分用甲苯洗涤，干燥后，得到4-羟基-7-溴香豆素；
(3)将碳酸钾、溴化苄和步骤(2)中制备得到的4-羟基-7-溴香豆素溶于乙腈后在氮气保护下75～81℃加热回流搅拌4～8h，过滤，滤液降至室温后静置0.5～1.5h后，过滤，取固体部分用4℃的乙腈洗涤，干燥后，得到4-苄氧基-7-溴香豆素；
(4)将氯化钯、联萘二苯磷、碳酸铯和4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶和步骤(3)中制备得到的4-苄氧基-7-溴香豆素溶于1,4-二氧六环后，在氮气保护下，80～100℃下加热搅拌8～16h后，过滤，取滤液经柱层析纯化后得到7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素；
(5)将步骤(4)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素和10％钯碳溶于四氢呋喃后在室温下搅拌6～12h后，加入氨气饱和的甲醇溶液,，搅拌4～6min后，过滤，滤液经氨气饱和的甲醇溶液洗涤并浓缩后得到黄色油状粗品；将黄色油状粗品溶于混合溶液中，搅拌0.5～1.5h后，过滤，取固体部分用混合溶液洗涤后，干燥，得到7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素；
(6)将步骤(5)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素和三乙胺溶于二氯甲烷后冰浴搅拌5～15min，滴加三氟甲磺酸酐，滴加完成后在室温下搅拌1～3h后，经100～200目硅胶制砂柱层析纯化，得到三氟甲磺酸7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基香豆素-4-酯，即得所需制备的中间体。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，4-溴-2-羟基苯乙酮、NaH和碳酸二乙酯的摩尔比为1：2.1～2.4：1.1～1.4；4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液中，溶质4-溴-2-羟基苯乙酮的浓度为100～300g/L；盐酸水溶液中，溶质HCl的质量百分比为37～40％。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯和溶解其所用甲苯的固液比为1g：5～10mL。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，碳酸钾、溴化苄和步骤(2)中制备得到的4-羟基-7-溴香豆素的摩尔比为0.5～1：1.8～2.2：1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，氯化钯、联萘二苯磷、碳酸铯、4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶和步骤(3)中制备得到的4-苄氧基-7-溴香豆素的摩尔比0.005～0.01：0.08～0.1：1～1.1：1～1.2：1。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，步骤(4)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素和10％钯碳的质量比为1:0.01～0.1；所述的混合溶液由石油醚和乙酸乙酯以3：1的体积比混合而成；氨气饱和的甲醇溶液与四氢呋喃的体积比为1：3～5；黄色油状粗品和溶解其所用混合溶液的质量比为1：3～5。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，步骤(5)中制备得到的7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4-羟基香豆素、三乙胺和三氟甲磺酸酐的摩尔比为1：1.1～1.5：1.1～1.3。
9.权利要求1所述的中间体在制备香豆素类NEDD8激活酶抑制剂中的应用。
10.一种由下述通式Ⅰ表示的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，及其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、代谢产物和前药：
其中，
环A为芳香基，碳数为6～10；
p为0、1、2、3、4、或5；
Rt各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基或杂环芳香基，且Rt上的H原子任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-R1、-OR1、-C(O)-R1、-C(O)-OR1、-OC(O)-R1、-C(O)N(R1)2、-S(O)x-R1、-NH2、-NHR1、-N(R1)2、-NHC(O)R1、-NHC(O)OR1或-NR2C(O)R1的基团取代；其中，x为0、1或2；所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
R1和R2各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基或杂环芳香基，且R1和R2上的H原子任选地被一个或多个选自-OH、-CN、-NH2、烷基、单烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、杂环基、烷基杂环基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基、羟基烷氧基烷基、烷基羰基烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基羰基氨基烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、烷基环烷基取代、环烷基羰基、烷氧基羰基、烷氧基羰基杂环基、(烷氧羰基)(烷基)氨基、(烷氧基烷基)(烷基)氨基或(烷基羰基)(烷基)氨基的基团取代。
11.根据权利要求10所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，其特征在于，其结构式为：
12.权利要求10所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为白血病、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌、鼻咽癌、脑癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌或口腔癌。
14.权利要求10所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：
将权利要求1中所述的中间体、碳酸钠、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅳ溶于四氢呋喃后，在氮气保护下60～65℃加热回流搅拌1～3h，过滤，滤液经浓缩和柱层析纯化后，得到中间体；中间体经混合溶剂溶解后，室温下搅拌4～6h；搅拌完成后，向所得混合体系中加入甲苯，浓缩后加入乙醚，超声后过滤，取固体部分用乙醚洗涤并干燥后，即得，
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，权利要求1中所述的中间体、碳酸钠、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅳ的摩尔比为1：0.5～1.2：0.01：1～1.3；化合物Ⅳ和四氢呋喃的固液比为1g：5～200mL；中间体和混合溶剂的固液比为1g：5～200mL；混合溶剂由二氯甲烷和三氟醋酸以1：3～5的体积比混合而成；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
16.权利要求10所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：
将权利要求1中所述的中间体、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅴ溶于乙腈后在氮气保护下室温下搅拌0.5～1.5h后，过滤，滤液经乙腈洗涤后，浓缩并经柱层析纯化后，得到中间体；中间体溶于二甲亚砜后，加入NaN3，90～120℃下搅拌0.5～1.5h，加水后用乙酸乙酯萃取2～3次，取有机相浓缩并干燥，所得固体部分溶于三氟醋酸后在室温下搅拌2～6h，反应完成后所得混合体系中加入甲苯，浓缩后加入乙醚，超声后过滤，取固体部分用乙醚洗涤并干燥后，即得，
17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，权利要求1中所述的中间体、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯、化合物Ⅴ和NaN3的摩尔比为1：1～1.5：0.05～0.1：0.05～0.1：1～1.3：1.1～1.4；化合物Ⅴ和乙腈的固液比为1g：5～200mL；中间体和二甲亚砜的固液比为1g：5～200mL；固体部分和三氟醋酸的固液比为1g：5～200mL；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
18.一种由下述通式Ⅱ表示的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，及其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、代谢产物和前药：
其中，
环B为氢或芳香基，碳数为6～10；
q为0、1、2、3、4、或5；
Rs各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基、杂环芳香基，且Rt上的H原子任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-R1、-OR1、-C(O)-R1、-C(O)-OR1、-OC(O)-R1、-C(O)N(R1)2、-S(O)x-R1、-NH2、-NHR1、-N(R1)2、-NHC(O)R1、-NHC(O)OR1或-NR2C(O)R1的基团取代；其中，x为0、1或2；所述的卤素为氟、氯、溴或碘；
R1和R2各自独立取自烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳香基、杂环芳香基，且R1和R2上的H原子任选地被一个或多个选自-OH、-CN、-NH2、烷基、单烷基氨基、二烷基氨基、环烷基、杂环基、烷基杂环基、烷氧基、羟基烷基、烷氧基烷基、羟基烷氧基烷基、烷基羰基烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基羰基氨基烷基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳烷基、烷基环烷基取代、环烷基羰基、烷氧基羰基、烷氧基羰基杂环基、(烷氧羰基)(烷基)氨基、(烷氧基烷基)(烷基)氨基或(烷基羰基)(烷基)氨基的集团取代。
19.根据权利要求18所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂，其特征在于，其结构式为：
20.权利要求18所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为白血病、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌、鼻咽癌、脑癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌或口腔癌。
22.权利要求18所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求1中所述的中间体、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅵ溶于乙腈后在氮气保护下在室温下搅拌0.5～1.5h后，过滤，滤液经浓缩后经柱层析纯化，得中间体；中间体溶于四氢呋喃后加入TBAF，室温下搅拌5～15min后溶于乙酸乙酯，取有机相用饱和食盐水洗涤2～3次后溶于混合溶剂中，室温下搅拌4～8h；搅拌完成后将所得的混合体系溶于甲苯，浓缩，加入乙醚，超声后过滤，固体部分用乙醚洗涤后干燥，即得，
23.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，权利要求1中所述中间体、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯、化合物Ⅵ和TBAF的的摩尔比为1：1～1.5：0.05～0.1：0.05～0.1：1～1.3：1.1～1.4；所述的混合溶剂由三氟乙酸和二氯甲烷以1：3～5的体积比混合而成；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
24.权利要求18所述的香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求1中所述的中间体、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯和化合物Ⅵ溶于乙腈后在氮气保护下在室温下搅拌0.5～1.5h后，过滤，滤液经浓缩后经柱层析纯化，得中间体；中间体溶于混合溶剂中，室温下搅拌4～8h；搅拌完成后将所得的混合体系溶于甲苯，浓缩，加入乙醚，超声后过滤，固体部分用乙醚洗涤后干燥，即得，
25.根据权利要求24所述的制备方法，其特征在于，权利要求1中所述中间体、二异丙基乙基胺、碘化亚铜、四(三苯基膦)钯、化合物Ⅵ和TBAF的的摩尔比为1：1～1.5：0.05～0.1：0.05～0.1：1～1.3：1.1～1.4；化合物Ⅵ和乙腈的固液比为1g：5～200mL；所述的混合溶剂由三氟乙酸和二氯甲烷以1：3～5的体积比混合而成；中间体和混合溶剂的固液比为1g：5～200mL；混合体系和甲苯的固液比为1g：5～200mL；浓缩后的混合体系和乙醚的固液比为1g：5～200mL。
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| 黄安邦: "具有抗肿瘤活性的新型香豆素衍生物合成和活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112851671A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-28 | 南京思聚生物医药有限公司 | 一种4-取代的吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮类化合物及其制备方法和应用 |
| CN112939971A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-06-11 | 南京易腾药物研究院有限公司 | 一种香豆素类化合物及其制备方法和应用 |
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| CN106008475B (zh) | 2019-01-22 |
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