CN105998358A - 一种具有抗氧化活性与α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞叶多酚制备方法 - Google Patents

一种具有抗氧化活性与α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞叶多酚制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种利用大孔树脂柱层析法制备具有抗氧化活性与α‑葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞叶多酚的方法。该方法包括沸水浸提，过滤，离心取上清液，减压浓缩，AB‑8大孔树脂柱层析纯化；采用体外清除DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的方法分析了枸杞叶多酚粗提物及经AB‑8大孔树脂处理的多酚样品的体外抗氧化活性，以阿卡波糖作为阳性对照测定了二者对α‑葡萄糖苷酶活性的抑制作用。本方法制备的枸杞叶多酚对自由基有良好的清除能力，对α‑葡萄糖苷酶也有显著的抑制作用。本发明的枸杞叶多酚的制备方法具有提取效率高、重复性好、工艺温和、成本低、不污染环境等优点，制备的多酚具有显著的抗氧化活性与α‑葡萄糖苷酶抑制活性，因此在食品工业及医药行业具有广阔的应用前景。

Description

一种具有抗氧化活性与α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞叶多酚制备方法
技术领域
本发明涉及从枸杞叶茶中提取相关成分的技术领域，具体涉及一种利用大孔树脂柱层析制备枸杞叶多酚的方法。
背景技术
枸杞(Lycium barbarum L.)为茄科枸杞属多年生落叶小灌木，是中国传统的药食同源性滋补食品。据《本草纲目》记载，枸杞具有滋养肝肾、补充能量、改善视力，增强免疫力等功效。目前枸杞干燥果实已列入《中华人名共和国药典》。在中国，枸杞的种植主要分布于陕、新疆、西藏、甘肃等地区，其中尤其以宁夏地区已经将枸杞作为一种重要的经济作物对其开展了大面积的种植和利用。大量研究报道枸杞中含有丰富的包括多酚、多糖、类胡萝卜素，氨基酸，不饱和脂肪酸等在内的生物活性成分。多酚是广泛存在于高等植物体中的次级代谢产物，具有十分广泛的生物活性。研究发现绿茶中多酚类物质对于抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血压、降胆固醇、预防肥胖等具有良好的预防效果，目前对于传统绿茶中多酚类物质的研究已经十分透彻。枸杞的药用部位主要包括果实、根皮、芽叶、果柄等部位，长期以来研究者们将研究重要主要集中在枸杞果实方面，对枸杞果实中所含有的多糖、多酚、类胡萝卜素等活性成分的研究已经十分成熟，而对于枸杞的芽叶方面的活性成分研究还十分不完善。枸杞叶作为一种传统的中药材，具有清热止咳，养肝明目等功效，对于虚劳发热、热毒疮肿等疾病也有很好的治疗效果。枸杞叶茶是以新鲜枸杞嫩叶为原料加工而成的新型茶品，在宁夏地区枸杞叶茶又被称为“长寿茶”，近年来随着枸杞的种植面积与应用方向的不断扩大，枸杞叶茶这一新型茶品也逐渐受到消费者关注与青睐。茶多酚作为绿茶中最主要的生物活性成分已经得到了十分广泛的研究与利用，因而对枸杞叶茶这一新型茶品中所含有的多酚类物质进行研究分析具有重要的意义与价值。
发明内容
本发明旨在提供一种高效、便捷、低成本制备枸杞叶多酚的方法，实现本发明的具体方案如下：
(1)取枸杞叶茶或枸杞叶以1∶40料液比用预热去离子水浸泡并以96℃浸提30min，期间每隔5min搅拌一次。
(2)将步骤(1)得到的枸杞叶茶浸提液经8层纱布过滤去除残渣得枸杞叶茶茶汤。
(3)将步骤(2)得到的枸杞叶茶茶汤离心(4000rpm，10min)得淡黄色澄清上清液。
(4)将步骤(3)得到的上清液倒入旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸温度40℃，待上清液旋至浓稠的墨绿色液体停止旋蒸，收集旋蒸液。
(5)将步骤(4)得到的墨绿色旋蒸液体冷冻干燥得枸杞叶多酚粗提物并保存于-20℃冰箱中备用。
(6)将步骤(5)所得粗提物以料液比1∶15配置成水溶液后上样于AB-8大孔树脂层析柱，以去离子水洗脱一个柱体积后继续以80％乙醇洗脱两个柱体积，收集80％乙醇洗脱液；
(7)将步骤(6)所得带有颜色的80％乙醇洗脱液收集并以40℃旋蒸，旋至洗脱液呈较浓稠的黄色液体为止。
(8)将步骤(6)所得的黄色旋蒸液冻干燥得高浓度的枸杞叶多酚纯化样品，并保存于-20℃冰箱中备用。
(9)将步骤(5)得到的枸杞叶多酚粗提物及步骤(8)得到的枸杞叶多酚分别以去离子水配制成系列浓度溶液，测定其对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的清除能力及二者对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
制备得到的枸杞叶多酚纯化样品呈黄色粉末状，该多酚样品对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基有较好的清除能力，并呈现较明显的剂量依赖关系，枸杞叶多酚对α-葡萄糖苷酶活性也有较好的抑制作用。枸杞叶多酚对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基及α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)分别为86.29、47.38、61.90、63.91μg/mL。
附图说明
图1枸杞叶多酚粗提物、枸杞叶多酚及维生素C对DPPH自由基的清除作用分析图
图2枸杞叶多酚粗提物、枸杞叶多酚及维生素C对ABTS自由基的清除作用分析图
图3枸杞叶多酚粗提物、枸杞叶多酚及维生素C对DPPH自由基的清除作用分析图
图4枸杞叶多酚粗提物、枸杞叶多酚及市售阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用分析图
具体实施方式
下面通过实施例，对本发明作进一步描述。
实施例1：
(1)取枸杞叶茶或枸杞叶以1∶40料液比96℃水浴浸提30min。
(2)将步骤(1)得到的枸杞叶茶浸提液经8层纱布过滤得枸杞叶茶茶汤。
(3)将步骤(2)得到的枸杞叶茶茶汤离心(4000rpm，10min)得上清液。
(4)将步骤(3)得到的上清液倒入旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸温度40℃，旋至较浓稠的墨绿色液体。
(5)将步骤(4)得到的墨绿色液体冷冻干燥得枸杞叶多酚粗提物。
(6)将步骤(5)所得粗提物以料液比1∶15配置成水溶液后上样于AB-8大孔树脂层析柱，先后分别以去离子水及80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液；
(7)将步骤(6)所得带有颜色的洗脱液收集到旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸温度为40℃，旋至较浓稠的黄色液体。
(8)将步骤(6)所得的样品旋蒸，冷冻干燥即为高浓度的枸杞叶多酚纯化样品。
(9)将步骤(5)得到的枸杞叶多酚粗提物及步骤(8)得到的枸杞叶多酚以去离子水分别配制成一系列浓度溶液，测定其对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基清除能力及二者对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。
制备得到的枸杞叶多酚纯化样品为黄色粉末，该茶多酚纯化样品对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的清除率呈现剂量依赖关系，枸杞叶多酚对α-葡萄糖苷酶有较好的体外抑制作用。枸杞叶多酚对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基及α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)分别为86.29、47.38、61.90、63.91μg/mL。
DPPH自由基清除率(％)＝[A0-(A1-A2)]/A0×100％
A0组是以水代替样品溶液，A2组是以乙醇代替DPPH溶液，A1组是样品实验。
ABTS自由基清除率(％)＝[A0-(A1-A2)]/A0×100％
A0组是水代替样品溶液，A2组是以磷酸盐缓冲溶液代替ABTS溶液，A1组是样品实验。
超氧阴离子自由基清除率(％)＝[A0-(A1-A2)]/A0×100％
A0组是以水代替样品，A2组是以磷酸盐缓冲液代替NBT溶液，A1组是样品实验。
α-葡萄糖苷酶抑制率(％)＝[(A1-A2)/A1]×100％
A1、A2分别为空白对照和不同浓度样品溶液在405nm处吸光值。
综上所述仅为本发明的较佳施例而已，并非用来限定本发明的实施范围。即凡依本发明申请专利范围的内容所做的等效变化与修饰都应为本发明的技术。

Claims (2)

1.一种具有抗氧化活性与α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞叶多酚制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：
(1)取适量枸杞叶茶或枸杞叶以预热去离子水按料液比1∶40于96℃水浴中浸提30min，期间每隔数分钟搅拌一次。
(2)将步骤(1)得到的枸杞叶茶浸提液经8层纱布过滤去除茶渣得枸杞叶茶茶汤。
(3)将步骤(2)得到的枸杞叶茶茶汤离心(4000rpm，10min)得澄清上清液。
(4)将步骤(3)得到的上清液旋蒸，旋蒸温度40℃，上清液旋蒸至颜色呈墨绿色为止。
(5)将步骤(4)得到的旋蒸液冷冻干燥得枸杞叶多酚粗提物，粗提物保存于-20℃冰箱中备用。
(6)将步骤(5)所得粗提物以料液比1∶15配置成水溶液后过0.22μm滤膜并通过AB-8大孔树脂层析柱进行纯化，先后分别以去离子水及80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液；
(7)将步骤(6)所得带有颜色的80％乙醇洗脱液收集并旋蒸，旋蒸温度为40℃，乙醇洗脱液旋蒸至呈现黄色为止。
(8)将步骤(7)所得旋蒸液冷冻干燥即得含量较高的枸杞叶AB-8多酚纯化样品。
(9)将步骤(5)所得的枸杞叶茶粗提物及步骤(8)得到的枸杞叶多酚纯化样品用去离子水配置系列浓度梯度水溶液，测定二者对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的清除能力及对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
2.制备的枸杞叶多酚为黄色粉末，对比枸杞叶多酚粗提物，枸杞叶多酚对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基清除效果显著，并呈现明显剂量依赖关系、对α-葡萄糖苷酶也有良好的抑制作用。枸杞叶多酚对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基及α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)分别为86.29、47.38、61.90、63.91μg/mL。
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