CN107308033A - 一种橄榄果实高纯度多酚的制备方法及其在化妆品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种橄榄果实高纯度多酚的制备方法及其在化妆品中的应用。本发明以新鲜橄榄为原料，经清洗、热烫、去核、真空冷冻干燥、粉碎，进而采用超声波辅助乙醇提取橄榄果实多酚类物质，得到橄榄果实多酚粗提物，然后利用大孔树脂对粗提物进行纯化，所得多酚洗脱液经真空浓缩、冷冻干燥，制备得到多酚含量在89％以上的橄榄果实高纯度多酚产品。纯化后的多酚含量高，抗氧化活性强，可用于化妆品领域。本发明制备了橄榄果实高纯度多酚贴布式面膜，具有保湿护肤、美白防晒、收敛抗皱、抗衰老等功效。

Description

一种橄榄果实高纯度多酚的制备方法及其在化妆品中的应用

技术领域

本发明属于多酚的纯化和应用领域，具体涉及橄榄果实多酚的富集纯化及其贴布式面膜制备方法。

背景技术

植物多酚因其具有天然无毒的特点常被用作天然的食品添加剂。在药品保健品领域，经过多年的药理学研究和临床应用，证明多酚在抑菌、抗病毒、抗肿瘤、治疗心脑血管疾病、抗老化、免疫调节等方面具有疗效。因此，酚类物质已开始应用于保健品、医药等领域。以葡萄籽、银杏等富含酚类物质的植物资源为原料，己研发出多种相关药品、保健品。在日用化妆品领域，植物多酚因其分子中所含的苯环结构和活性酚羟基，对紫外光有强吸收作用以及抗氧化能力强，能促进细胞质膜的新陈代谢，与基础脂肪酸结合使皮肤变得具有弹性，改进体内组织细胞微循环等作用，是很好的美白护肤生理活性物质，故一直成为日化护肤行业新产品的研发热点。目前，已从葡萄籽、茶叶等植物中提取植物多酚，作为化妆品的活性成分。

植物多酚的分离纯化主要有粗有机溶剂萃取、柱层析分离、膜分离、沉淀法等方法。然而传统方法具有低效、耗能、溶剂残留等缺点。大孔吸附树脂具有操作成本低、溶剂消耗少、处理量大、预处理和再生简单，效率高，适合于规模化生产等优点，近年来已广泛应用于不同材料的生物活性物质分离和纯化。

橄榄[Cauarium album(Lour.)Raeusch]是我国特色的亚热带水果，在我国有着2000多年的悠久栽培历史。橄榄自古为我国传统中药材，《三辅黄图》、《南州异物志》和《图经本草》等多部史书皆有记载，属药食同源植物，其皮、根、茎、叶、果、花、核均可入药，适用于治咽喉肿痛、咳嗽吐血、菌痢、癫痫、暑热烦渴、肠炎腹泻、手脚酸麻、鱼蟹中毒、醉酒等病症；现代药理学研究表明其具有抑菌、抗氧化、消炎和抗病毒等功能。橄榄果实中的总酚含量为1291mg GAE/100g FW(鲜重)，远高于苹果、梨、桃、香蕉等同类普通水果(He等)；Liu等(Liu Haiying等)对红景天、地榆等68种中药材中多酚含量以及抗氧化活性研究表明橄榄多酚含量28％(干重)，在68种中药材中含量最高。

橄榄果实主要多酚化合物有酚酸类化合物(没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、芥子酸)、黄酮类(山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、金丝桃苷、穗花衫双黄酮、木犀草素、槲皮素)、鞣花单宁类化合物(异柯里拉京、HHDP的衍生物)。我们研究发现橄榄果实中具有高含量的鞣花单宁组分，其含量可达823.8mg/100g FW。与被公认为具有高含量鞣花单宁的草莓、云莓、黑莓等浆果类相比，橄榄果实含量远高于这些浆果(2.3-13倍)。据报道，鞣花单宁因其结构多样性而具有广泛的生理活性，如抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗炎、抗血管新生、抗癌、抗糖尿病、抗辐射诱变剂、抑菌等。

面膜主要分为剥离式面膜、粉末面膜、膏状面膜和面贴式(贴布式)面膜。面贴式面膜是近年来出现的新型面膜，由于使用方便而备受消费者的喜爱。它是将调配好的高浓度保养精华液吸附在棉布(纸)上，使用时撕开包装敷到脸上，经15-20min后，面膜液逐渐被吸收干燥，将布撕下即可。一般均采用单片式独立包装，方便卫生。近年来研究者利用植物天然活性成分，开发了多种类型的面膜。橄榄因含有大量植物多酚，尤其是含有多羟基的鞣花单宁组分，具有很强的抗氧化活性，同时具有美白防晒、收敛抗皱、抗衰老等作用。但是，目前，与橄榄果实相关的面膜产品在市场上还较为少见。

发明内容

本发明的目的是提供一种橄榄果实多酚的富集纯化制备方法，进而以高纯度多酚为主要功效成分制备一种贴布式面膜。

橄榄果实多酚的提取纯化方法，包括以下步骤：

(1)橄榄果实前处理：选用橄榄果实(新鲜果实，优选为我国福建省橄榄[Cauariumalbum(Lour.)Raeusch]果实为原料，用自来水冲洗干净。将清洗干净的果实放入75-85℃热水中热烫2-3min后，迅速取出置于冷水(20-30℃，优选25℃)中冷却，然后破碎去除果核。将去核橄榄果实切碎。干燥后粉碎样品，过40目筛得橄榄果肉粉末。

(2)提取：橄榄果肉冻干样按照重量体积比1:10-1:20的比例加入重量浓度为60％-80％的食用级无水乙醇溶液。超声波辅助提取后过滤，超声波提取温度为25-35℃，功率为320-380W，重复提取两次，每次提取时间为25-35min，然后在30-45℃下真空浓缩除去酒精得到橄榄果实多酚粗提液。

(3)纯化：将步骤(2)中制备的橄榄果实粗提物配制成水溶液，加入预处理的大孔树脂常压层析柱中，所述的大孔树脂为HPD-750型大孔树脂，大孔树脂柱高径比为11-13，将层析柱置于恒温层析柜中，4℃过夜。吸附达到平衡后，在20-30℃(优选25℃)下，首先用2-4个柱床体积的蒸馏水去除样品中杂质(糖类和蛋白质等)。经蒸馏水平衡后，用食用级酒精溶液作为洗脱剂将多酚类物质洗脱，上样的橄榄果实多酚粗提物水溶液浓度为10-25mg/mL；上样流速为1-2mL/min，上样体积为1-3BV；洗脱用的食用级酒精浓度为70-90％溶液；洗脱流速为0.5-1mL/min，洗脱体积为1-3BV；然后将洗脱液浓缩冻干得到纯化的多酚。

优选地，步骤(1)中热水热烫温度为80℃，时间为2-3min。

优选地，步骤(1)中干燥方式：置于超低温冰箱预冻24h后，取出置于冷冻干燥机冷冻干燥40h，干燥后含水量为1.2％。

优选地，步骤(2)中超声波提取温度为30℃，功率为350W，提取时间为30min，重复提取两次。

优选地，步骤(3)中大孔树脂柱高径比优选为12。

本发明将从橄榄果实粗提物中纯化制备的高纯度多酚应用于化妆品中。

橄榄果实多酚面膜的制备方案(以质量分数100％计)：橄榄果实高纯度多酚提取物1-3％，1,3-丙二醇1-3％，甘油聚醚-26 2-5％，1,2-己二醇0.2-0.8％，对羟基苯乙酮0.1-0.5％，汉生胶0.1-0.35％,精氨酸0.1-0.35％，肌肽0.1-1％，透明质酸钠0.02-1％，香精0.003-0.1％，余量以去离子水补齐。

本发明还提供了一种橄榄果实多酚面膜的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取各成分原料

A相：1,3-丙二醇，透明质酸钠、汉生胶、甘油聚醚-26、EDTA二钠

B相：纯化水和精氨酸、对羟基苯乙酮、肌肽、PEG-40氢化蓖麻油和香精

C相：橄榄提取液、1,2-己二醇、糖类同分异构体

(2)A相混合液制备：将透明质酸钠和汉生胶加适量去离子水溶胀，再加入其余A相原料一起混合，加热搅拌至完全分散均匀，得A相混合液。

(3)B相和C相混合液制备：分别将B相和C相各原料混合，加热搅拌均匀。

(4)A相、B相、C相混合：将A相和B相混合，加热搅拌均匀、冷却后，加入C相，再次搅拌匀质，冷却，得面膜液。

(5)将无纺布面贴浸透面膜液，进行单片式无菌处理包装。

步骤(2)中所述的加热温度为80±5℃，在1000±10r/min下搅拌10min。

步骤(3)中所述温度为60±5℃，在1000±10r/min下搅拌10min。

步骤(4)具体为：将A相和B相缓慢混合，在60±5℃下500±5r/min匀质30min后，冷却至35℃；加入C相，再次搅拌匀质，冷却，得面膜液。

本发明主要具有以下特点：

(1)本发明从橄榄果实中提取高纯度多酚组分，提取效率高，达到135.84mg/g-172.78mg/g，纯化后，纯度达到74.45％-89.67％。

(2)首次以橄榄果实高纯度多酚组分为主要功效成分制备一种贴布式面膜。本发明生产工艺简单高效、成本低、适合于规模化生产。

(3)有效挖掘了我国药食同源的橄榄果实特色资源，将天然多酚与辅料有效缔合制备面膜，使其具有优良的保湿、美白、防晒、抗衰老的构效。

(4)本发明包含药食同源橄榄果实高纯度多酚属天然产物、安全无毒副作用。

具体实施方式

实施例一：

(1)提取：将清洗干净的橄榄果实(我国福建省橄榄[Cauarium album(Lour.)Raeusch]果实，实施例二、三相同)放入80℃的热水中热烫2-3min，冷却后破碎去除果核。将去核橄榄果实切碎后进行真空冷冻干燥，粉碎，过40目筛得橄榄果肉粉末。按照重量体积比1:10的比例加入浓度为60％的食用级无水乙醇溶液。在30℃，功率为350W，超声波提取30min，果渣重复提取两次。然后在45℃下真空浓缩除去酒精得到橄榄果实多酚粗提液。其多酚含量为135.84mg/g(以粗提液冻干后重量记，即每g冻干粉中的多酚含量，实施例二、三相同)。

(2)纯化：用去离子水将橄榄果实多酚粗提液浓度调整为10mg/mL，以1mL/min的上样流速，上样体积为1BV，装载于HPD-750大孔树脂层析柱内进行吸附，吸附达到平衡后，先用2个柱床体积的蒸馏水洗脱去除样品中杂质(糖类和蛋白质)。再用1BV、浓度为70％的食用级酒精溶液作为洗脱剂，以洗脱流速为0.5mL/min，洗脱体积为1BV将柱中吸附的多酚类物质洗脱，收集橄榄果实多酚洗脱液。洗脱液在30℃下真空浓缩除去酒精溶液，然后经真空冷冻干燥制备得到粉末状橄榄果实多酚，其含量达74.45％。

实施例二：

(1)提取：将清洗干净的橄榄果实放入80℃的热水中热烫2-3min，冷却后破碎去除果核。将去核橄榄果实切碎后进行真空冷冻干燥，粉碎，过40目筛得橄榄果肉粉末。按照重量体积比1:20的比例加入浓度为70％的食用级无水乙醇溶液。在30℃，功率为350W，超声波提取30min，果渣重复提取两次。然后在45℃下真空浓缩除去酒精得到橄榄果实多酚粗提液。其多酚含量为158.73mg/g。

(2)纯化：用去离子水将橄榄果实多酚粗提液浓度调整为15mg/mL，以1.5mL/min的上样流速，上样体积为2BV，装载于HPD-750大孔树脂层析柱进行吸附，吸附达到平衡后，先用2个柱床体积的蒸馏水洗脱去除样品中杂质(糖类和蛋白质等)。再用2个柱床体积、浓度为80％的食用级酒精溶液作为洗脱剂，以洗脱流速为0.8mL/min，洗脱体积为2BV将柱中吸附的多酚类物质洗脱，收集橄榄果实多酚洗脱液。洗脱液在30℃下真空浓缩除去酒精溶液，然后经真空冷冻干燥制备得到粉末状橄榄果实多酚，其含量达81.45％。

实施例三：

(1)提取：将清洗干净的果实放入80℃的热水中热烫2-3min，冷却后破碎去除果核。将去核橄榄果实切碎后进行真空冷冻干燥，粉碎，过40目筛得橄榄果肉粉末。按照重量体积比1:20的比例加入浓度为80％的食用级无水乙醇溶液。在30℃，功率为350W，超声波提取30min，果渣重复提取两次。然后在45℃下真空浓缩除去酒精得到橄榄果实多酚粗提液。其多酚含量为172.78mg/g。

(2)纯化：用去离子水将橄榄果实多酚粗提液浓度调整为25mg/mL，以2mL/min的上样流速，上样体积为3BV，装载于HPD-750大孔树脂层析柱进行吸附，吸附达到平衡后，先用2个柱床体积的蒸馏水洗脱去除样品中杂质(糖类和蛋白质)。再用3个柱床体积、浓度为90％的食用级酒精溶液作为洗脱剂，以洗脱流速为1mL/min，洗脱体积为3BV将柱中吸附的多酚类物质洗脱，收集橄榄果实多酚洗脱液。洗脱液在30℃下真空浓缩除去酒精溶液，然后经真空冷冻干燥制备得到粉末状橄榄果实多酚，纯化后多酚含量为89.67％。

本发明采用Folin-Ciocalteu法测定多酚含量；采用清除DPPH自由基和总还原力FRAP实验评价抗氧化活性。取实施例三橄榄果实粗提物中多酚(含量为172.78mg/g)。纯化后多酚含量为89.67％，纯化后多酚含量提高了5.18倍。同时纯化后多酚的DPPH清除能力以及FARP分别是纯化前的3.5倍和3倍，且呈方差显著。

表1橄榄果实粗提物纯化前后多酚含量以及抗氧化活性。

实施例四：橄榄果实高纯度多酚面膜的制备

本实施例提供了一种橄榄果实多酚面膜，包括：

A相：1,3-丙二醇，透明质酸钠、汉生胶、甘油聚醚-26、EDTA二钠

B相：纯化水和精氨酸、对羟基苯乙酮、肌肽、PEG-40氢化蓖麻油和香精

C相：橄榄提取液、1,2-己二醇、糖类同分异构体

以上各相组分的重量份数如下：

以质量分数100％计，橄榄果实高纯度多酚提取物3％，1,3-丙二醇3％，甘油聚醚-26 2％，1,2-己二醇0.2％，对羟基苯乙酮0.1％，汉生胶0.1％，精氨酸0.1％，肌肽1％，透明质酸钠1％，香精0.003％，余量以去离子水补齐。

前述的橄榄果实多酚面膜的制备方法，包括以下步骤：

将A相中透明质酸钠和汉生胶加适量去离子水溶胀，再将其余原料一起混合，在80±5℃下加热搅拌至完全分散均匀，得A相混合液。然后分别将B相和C相各原料混合，在60±5℃下加热搅拌均匀。最后将A相和B相混合，在60±5℃下加热搅拌均匀、冷却后，加入C相，再次搅拌匀质，冷却，得面膜液。将无纺布面贴浸透面膜液，进行单片式无菌处理包装。即得橄榄果实高纯度多酚贴布式面膜。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明专利申请专利范围所做均等变化或修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (8)

1.一种橄榄果实高纯度多酚提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、橄榄果实前处理：选用橄榄果实为原料，洗净；将清洗干净的果实放入75-85℃热水中热烫2-3min后，迅速取出置于20-30℃水中冷却，然后破碎去除果核；将去核橄榄果实切碎；干燥后粉碎样品，过40目筛得橄榄果肉粉末；

(2)、提取：橄榄果肉冻干样按照重量体积比1:10-1:20的比例加入重量浓度为60％-80％的食用级无水乙醇溶液；超声波辅助提取后过滤，超声波提取温度为25-35℃，功率为320-380W，重复提取两次，每次提取时间为25-35min，然后在30-45℃下真空浓缩除去酒精得到橄榄果实多酚粗提液；

(3)、纯化：将步骤(2)中制备的橄榄果实粗提物配制成水溶液，加入预处理的大孔树脂常压层析柱中，所述的大孔树脂为HPD-750型大孔树脂，大孔树脂柱高径比为11-13，将层析柱置于恒温层析柜中，4℃过夜；吸附达到平衡后，在20-30℃下，首先用2-4个柱床体积的蒸馏水去除样品中杂质；经蒸馏水平衡后，用食用级酒精溶液作为洗脱剂将多酚类物质洗脱，上样的橄榄果实多酚粗提物水溶液浓度为10-25mg/mL；上样流速为1-2mL/min，上样体积为1-3BV；洗脱用的食用级酒精浓度为70-90％溶液；洗脱流速为0.5-1mL/min，洗脱体积为1-3BV；然后将洗脱液浓缩冻干得到纯化的多酚。

2.根据权利要求1所述的橄榄果实高纯度多酚提取纯化方法，其特征在于，步骤(1)中热水热烫温度为80℃，时间为2-3min。

3.根据权利要求1所述的橄榄果实高纯度多酚提取纯化方法，其特征在于，步骤(1)中干燥为：置于超低温冰箱预冻24h后，取出置于冷冻干燥机冷冻干燥40h，干燥后含水量低于1.2％。

4.根据权利要求1所述的橄榄果实高纯度多酚提取纯化方法，其特征在于，步骤(2)中超声波提取温度为30℃，功率为350W，提取时间为30min，重复提取两次。

5.根据权利要求1所述的橄榄果实高纯度多酚提取纯化方法，其特征在于，步骤(3)中大孔树脂柱高径比为12。

6.根据权利要求1所述的橄榄果实高纯度多酚提取纯化方法，制备的橄榄果实高纯度多酚在化妆品中的应用。

7.一种橄榄果实多酚面膜，其特征在于，以质量分数100％计，根据权利要求1要求方法制备的橄榄果实高纯度多酚提取物1-3％，1,3-丙二醇1-3％，甘油聚醚-26 2-5％，1,2-己二醇0.2-0.8％，对羟基苯乙酮0.1-0.5％，汉生胶0.1-0.35％,精氨酸0.1-0.35％，肌肽0.1-1％，透明质酸钠0.02-1％，香精0.003-0.1％，余量以去离子水补齐。

8.一种根据权利要求7所述的一种橄榄果实多酚面膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)称取各成分原料

(2)A相：1,3-丙二醇，透明质酸钠、汉生胶、甘油聚醚-26、EDTA二钠

B相：纯化水和精氨酸、对羟基苯乙酮、肌肽、PEG-40氢化蓖麻油和香精

C相：橄榄提取液、1,2-己二醇、糖类同分异构体；

(2)A相混合液制备：将透明质酸钠和汉生胶加适量去离子水溶胀，再加入其余A相原料一起混合，加热搅拌至完全分散均匀，得A相混合液；

(3)B相和C相混合液制备：分别将B相和C相各原料混合，加热搅拌均匀；

(4)A相、B相、C相混合：将A相和B相混合，加热搅拌均匀、冷却后，加入C相，再次搅拌匀质，冷却，得面膜液；

(5)将无纺布面贴浸透面膜液，进行单片式无菌处理包装，即得橄榄果实多酚贴布式面膜。