CN117017829A - 一种抗氧化保湿组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗氧化保湿组合物及其制备方法和应用，上述组合物以刺梨多糖及铁皮石斛多糖为主要提取物，同时复配辣木多糖和葡萄籽提取物，主要原料为天然植物提取物，对肌肤温和无刺激，能够对皮肤起到良好的抗氧化效果，对肌肤有着很好的保湿滋润效果。各成分发挥协同作用，弥补了单一组分的功能缺陷，有着显著的抗氧化效果；同时，能够提高刺梨等天然植物的利用价值，促进天然植物在护肤化妆品中的应用；能够滋润皮肤，有较好的保湿性能，在肌肤表面形成保护膜，减缓水分流失的速度还能够增强肌肤对外界刺激的抵抗力；各提取物的提取方法操作简便，能够有效提取和保留活性物质。

Description

一种抗氧化保湿组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种抗氧化保湿组合物及其制备方法和应用，属于日用护肤品领域。
背景技术
随着生活水平的不断提高，人们对化妆品原材料的质量和安全更加注重，目前市面上较多的抗氧化保湿产品添加了很多化学合成物质，对皮肤有较大刺激；天然植物提取物有着性质温和、安全性能良好、不易产生副作用等优点，刺梨及铁皮石斛属于天然植物，目前对于刺梨及铁皮石斛的应用主要集中于药用及食用，其在化妆品中的应用不够广泛。
皮肤是人体最大的器官，当皮肤暴露于电离辐射、紫外线辐射以及外来化学物质等刺激时，会引起大量活性氧自由基(ROS)的形成，导致氧化应激，造成皱纹产生、皮肤变薄，胶原和弹性蛋白降低，引起色素沉淀等。
植物多糖是从植物组织中提取得到的一类高分子聚合物，多糖具有成膜性，能够在皮肤表面成膜，防止皮肤水分蒸发；在化妆品的保湿补水、抗衰老、美白祛斑等方面有着诸多应用；刺梨，属蔷薇科蔷薇属多年生落叶小灌木，是一种功能性食品，主要分布在贵州、云南等地区。刺梨有着极高的药用价值，刺梨多糖具有抗菌、抗肿瘤、提高免疫力、延缓衰老、抗氧化等功效；铁皮石斛是属兰科植物，为石斛属，石斛具有养胃护肠、清热滋阴、止咳润肺的效果。铁皮石斛中的主要有效物质为多糖、石斛碱等物质，铁皮石斛的主要功效有抗衰抗氧化、提高机体免疫力、降糖降脂等。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种提取方法简便，能够有效提取和保留活性物质的抗氧化保湿组合物及其制备方法和应用。
技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供一种抗氧化保湿组合物，以重量份计，包含以下组分：5-8份刺梨提取物和5-8份铁皮石斛提取物。
进一步地，以重量份计，还包含以下组分：1-3份辣木籽提取物、0.2-0.6份葡萄籽提取液、8-10份霍霍巴油、2-4份乳木果油、3-5份角鲨烷、1-1.5份维E醋酸酯、5-6份硬脂酸甘油酯-聚乙二醇-100硬脂酸酯混合物、4-6份丙烯酸钠/丙烯酰二甲酯牛磺酸钠共聚物-异十六烷-聚山梨醇酯80混合物、5-8份甘油、0.2-0.5份酶切寡聚透明质酸钠、0.5-0.8份吡咯烷酮羧酸钠、1.5-2份1,3-丁二醇、0.8-1份苄醇-DHA和0.1-0.4份香精。
优选地，以重量份计，包含以下组分：5份刺梨提取物、5份石斛提取物、1份辣木籽提取物、0.2份葡萄籽提取液、8份霍霍巴油、2份乳木果油、3份角鲨烷、1份维E醋酸酯、5份硬脂酸甘油酯-聚乙二醇-100硬脂酸酯混合物、4份丙烯酸钠/丙烯酰二甲酯牛磺酸钠共聚物-异十六烷-聚山梨醇酯80混合物、5份甘油、0.2份酶切寡聚透明质酸钠、0.5份吡咯烷酮羧酸钠、1.5份1,3-丁二醇、56.7份去离子水、0.8份苄醇-DHA、0.1份香精。
本发明还提供了一种含有所述抗氧化保湿组合物的日用品。
其中，制剂形式包括乳剂、膏剂或贴剂。
本发明还提供了一种制备所述抗氧化保湿组合物的方法，包括以下步骤：
(1)将8-10份霍霍巴油、2-4份乳木果油、3-5份角鲨烷、1-1.5份维E醋酸酯、5-6份硬脂酸甘油酯-聚乙二醇-100硬脂酸酯混合物、4-6份丙烯酸钠/丙烯酰二甲酯牛磺酸钠共聚物-异十六烷-聚山梨醇酯80混合物，水浴加热，搅拌至完全融化，得到油相混合物；
(2)5-8份甘油、0.2-0.5份酶切寡聚透明质酸钠、0.5-0.8份吡咯烷酮羧酸钠、1.5-2份1,3-丁二醇、5-8份刺梨提取物、5-8份铁皮石斛提取物、1-3份辣木籽提取物、0.2-0.6份葡萄籽提取液，水浴加热，搅拌至完全溶解，得到水相混合物；
(3)将步骤(1)中所述的油相混合物加入到步骤(2)中的水相混合物中，混合均匀，加入0.8-1份苄醇-DHA和香精溶液，即可得到所述的抗氧化保湿组合物。
其中，步骤(2)中所述刺梨提取物溶液的浓度为0.0625-1.00mg/mL。
优选地，步骤(2)中所述刺梨提取物溶液的浓度为0.125-1.00mg/mL。
优选地，步骤(2)中所述刺梨提取物溶液的浓度为0.50-1.00mg/mL。
其中，步骤(2)中所述铁皮石斛提取物溶液的浓度为0.0625-1.00mg/mL。
优选地，步骤(2)中所述铁皮石斛提取物溶液的浓度为0.125-1.00mg/mL。
优选地，步骤(2)中所述铁皮石斛提取物溶液的浓度为0.50-1.00mg/mL。
其中，步骤(3)中所述油相混合物和水相混合物的质量比为23-32.5：18.4-30.9。
其中，步骤(3)中所述油相混合物和香精溶液的质量体积比为23-32.5：0.9-1.5。
其中，步骤(3)中所述香精的浓度为1％-2％。
本发明还提供了所述组合物在制备具有抗氧化保湿功效的化妆品中的应用。
本发明提供的抗氧化保湿组合物以刺梨多糖及铁皮石斛多糖为主要提取物的同时复配辣木多糖和葡萄籽提取物，主要原料为天然植物提取物，通过一系列组分复配，提供一种安全有效、作用温和的具有抗氧化保湿作用的组合物。
刺梨多糖是刺梨果实中含有的一类具有抗氧化效果的多糖，刺梨多糖中含有的糖阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等单糖，具有抗菌、抗肿瘤、抗自由基等功效，可以有效的清除活性氧，抑制黑色素生成，有利于机体的抗衰老作用。
铁皮石斛多糖是铁皮石斛中重要的活性成分之一，铁皮石斛多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖等单糖组成，具有调节人体免疫功能的作用，能够有效清除自由基；铁皮石斛多糖同时具有保湿功效，是潜在的护肤保湿剂。
辣木多糖主要成份是半乳糖、葡萄糖、甘露糖及其鼠李糖等单糖，可以活化细胞，增强机体的免疫功能，能够抑制皮肤老化，有着很好的抗氧化、抗衰老的作用。
葡萄籽提取液中含有的原花色素低聚物是一种有很好抗氧化效果的抗氧化剂，葡萄籽提取液可以预防高血压，改善血液循环，可以增加整个人体的胶原蛋白水平，从而有益于皮肤健康。
霍霍巴油含有丰富的维生素A、B、E和钙、镁等矿物质，能够在皮肤中迅速渗透吸收，软化皮肤角质，让皮肤变得柔软有弹性；霍霍巴油作为润滑剂或润滑油的添加剂，具有许多优点，可以与皮脂完全混合，在皮肤上形成一层无油膜，促进皮肤表层呼吸，调节皮肤湿度，因此常用作化妆品的活性配方。
乳木果油的主要成份为甘油三酯(含一定数量的亚油酸)和不可皂化物，有着很好的皮肤渗透性，乳木果油具有较好的深层滋润的功效，适合干性、混合性肌肤使用；乳木果油中含有的萜烯醇具有伤口愈合和消炎的作用。
角鲨烷是从深海鲨鱼肝脏中提取的角鲨烯经氢化制得一种烃类油脂，能够加强修护表皮，有效形成天然保护膜，帮助肌肤与皮脂间的平衡，是目前稳定性极高，亲肤感极佳的一种动物油脂，具有锁水保湿、修护维稳、抗氧化等功效。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：1、各成分发挥协同作用，弥补了单一组分的功能缺陷，有着显著的抗氧化效果；2、本发明主要成分为天然植物提取物，无毒无刺激，作用温和，不会对皮肤造成伤害，适用广泛人群；3、同时，能够提高刺梨等天然植物的利用价值，促进天然植物在护肤化妆品中的应用；4、能够滋润皮肤，有较好的保湿性能，在肌肤表面形成保护膜，减缓水分流失的速度还能够增强肌肤对外界刺激的抵抗力；5、各提取物的提取方法操作简便，能够有效提取和保留活性物质。
附图说明
图1为实施例3制备的面霜；
图2为面霜的稳定性考察结果，从左至右依次为耐寒试验、耐热试验、离心试验结果及冷热循环试验；
图3为刺梨多糖、刺梨多糖与铁皮石斛多糖二者混合的DPPH清除效果；
图4为刺梨多糖、铁皮石斛多糖、刺梨多糖与铁皮石斛多糖二者混合的羟自由基清除效果；
图5为刺梨多糖、铁皮石斛多糖、刺梨多糖与铁皮石斛多糖二者混合的ABTS自由基清除效果；
图6为石斛多糖的保湿效果；
图7为同时含有铁皮石斛多糖和刺梨多糖的面霜DPPH清除效果；
图8为面霜的保湿效果；
图9为刺梨多糖对细胞存活率的影响；
图10为铁皮石斛多糖对细胞存活率的影响；
图11为辣木多糖对细胞存活率的影响；
图12为对比例中面霜的DPPH清除效果：a为含有铁皮石斛多糖但不含刺梨多糖的面霜DPPH清除效果；b为含有刺梨多糖但不含铁皮石斛多糖的面霜DPPH清除效果。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1刺梨多糖粉末的制备
1、提取：将刺梨干果粉碎，称取10.0g刺梨粉末于500mL圆底烧瓶中，按料液比为1：40(g/mL)加入去离子水，在50℃条件下恒温水浴回流浸提1h，提取液在4000r/min条件下离心10min，取上清液；沉淀中继续加入上述比例的去离子水回流浸提，重复提取3次。在55℃条件下将提取液旋蒸，浓缩至50mL后加入5倍体积的无水乙醇醇沉过夜，在4000r/min条件下离心10min后取沉淀，加入200mL去离子水溶解后放入-80℃冰箱冷冻一天后，放入冷冻干燥机中冷冻干燥3天后得刺梨粗多糖。
2、纯化：将AB-8大孔树脂用无水乙醇活化，将大孔树脂填装柱后，用超纯水清洗大孔树脂数次以除去残留的乙醇，配制刺梨粗多糖20mL上样，调整速率为1mL/min，在30℃下洗脱，取滤液后再加入5倍体积的无水乙醇醇沉，在4000r/min条件下离心，取沉淀，冷冻干燥即可得到刺梨多糖粉末。
实施例2铁皮石斛多糖粉末的制备
1、提取：将铁皮石斛粉碎，称取10.0g铁皮石斛粉末于500mL圆底烧瓶中，按料液比为1：20(g/mL)加入去离子水，在60℃条件下恒温水浴回流浸提1h，提取液在4000r/min条件下离心10min，取上清液；沉淀中继续加入上述比例的去离子水回流浸提，重复提取3次。在55℃条件下将上次4次获得的提取液进行旋蒸，浓缩至50mL后加入5倍体积的无水乙醇醇沉过夜，在4000r/min条件下离心10min后取沉淀，加入200mL去离子水溶解后放入-80℃冰箱冷冻一天后，放入冷冻干燥机中冷冻干燥3天后得铁皮石斛粗多糖。
2、纯化：采用savage法除蛋白，预先配制氯仿与正丁醇体积比例为4：1的混合液，将铁皮石斛粗多糖溶解，混合液倒入配制好的4mg/mL石斛粗多糖溶液中，混合液与石斛多糖溶液的体积比为4：1，倒入分液漏斗中，充分振摇，静置直至出现分层，将水相与氯仿相分开，取上清液，重复上述操作直至除去石斛多糖中含有的蛋白质；在除取蛋白质的多糖溶液中加入5倍体积的无水乙醇醇沉，离心，取沉淀，冷冻干燥即可铁皮石斛多糖粉末。
实施例3面霜的制备
1、原料：
维E醋酸酯：购自Making Cosmetics网站(商品名为Vitamin E(dl-alphatocopherylacetate)；硬脂酸甘油酯-聚乙二醇-100硬脂酸酯混合物：购自MakingCosmetics网站(商品名为Blend)；丙烯酸钠/丙烯酰二甲酯牛磺酸钠共聚物-正异十六烷-聚山梨醇酯80混合物：购自MakingCosmetics网站(商品名为GelmakerEMU)；霍霍巴油：购自麦克林(商品名为Jojoba0il)；乳木果油：购自MakingCosmetics网站(商品名为Shea Butter,Certified Organic)；角鲨烷：购自上海麦克林生化科技有限公司；甘油：购自国药集团化学试剂有限公司；吡咯烷酮羧酸钠：购自源叶生物；乙二胺四乙酸：购自迈瑞尔；葡萄籽提取液：购自广州佰宇生物科技有限公司；酶切寡聚透明质酸钠：购自华熙福瑞达生物医药有限公司；1,3-丁二醇：购自麦克林；苄醇-DHA：购自Making Cosmetics网站(商品名为Benzylalcohol-DHA)；香精：购自华新公司。
2、溶液的配制：
用超纯水将刺梨粉末配成0.075％的水溶液；铁皮石斛粉末配成0.1％的水溶液；酶切寡聚透明质酸钠配成1％的水溶液；香精配成1％的水溶液，备用。
3、制备
配方如表1所示：
表1
按照表1的配方，将A相原料加入消毒烧杯中，置于90℃水浴锅中搅拌直至原料溶解，将B相加热至90℃以溶解其成分，保温10min，然后，将A相缓慢加入到B中，边加边搅拌，然后立即在10000r/min下的均质机下均质5min，当温度低于50℃时，在搅拌过程中依次加入C相，再在均质机下均质2min，然后转移到锡膏搅拌机下以10000r/min的速率搅拌10min即得面霜，产品见图1。
实施例3稳定性试验
1、离心试验
过程：将实施例2中制备的面霜样品装入带有10mL刻度的离心管中约2/3的高度，并装实，用盖子塞好，然后放入预先调节到40℃的电热恒温培养箱内，保温1h后，两支离心管相对放入离心机中保持平衡，以转速3000r/min，离心30min，观察有无油水分层，颗粒的现象。结果见图2中的第3管。结果：无油水分层，无颗粒。
2、耐热试验
过程：将实施例2中制备的面霜样品装入带有10mL刻度的离心管中约2/3的高度中，在恒温箱中设定温度为40℃下放置24h，然后恢复室温观察有无变色、油水分层情况，结果见图2中的第2管。结果：无油水分层，无颗粒。
3、耐寒试验
过程：将实施例2中制备的面霜样品装装入带有10mL刻度的离心管中约2/3的高度，放入-20℃以下的冰箱中放置24h，然后恢复室温观察有无变粗、变色、分层情况，结果见图2中的第1管。结果：无油水分层，无变粗、变色。
4、冷热循环试验
过程：将实施例2中制备的面霜样品装入密闭的样品瓶中，在恒温箱内放置24h后取出恢复室温，再放入冰箱24h，取出恢复室温，再放入恒温箱24h。如此反复两次，观察所测样品是否出现油水分层、变化或渗油等现象，结果见图2中的第4管。结果：无油水分层，无变粗、变色。上述离心试验、耐热实验、耐寒试验和冷热循环实验均表明实施例2制备的面霜稳定性较好。
5、pH测定
采用稀释法，取面霜样品1份，纯化水9份，40℃搅拌10min，混合均匀后冷却至室温测pH，设置3个重复组。结论：pH值分别为7.12、7.06、7.10，pH符合国家标准GB/T 13521.1-2000的要求。
实施例4功效性评价
1、DPPH清除试验
DPPH无水乙醇溶液：0.04mg/mL DPPH无水乙醇溶液
不同浓度样品溶液：
刺梨多糖溶液：0.125、0.250、0.50、0.75、1.0(mg/mL)；
铁皮石斛多糖溶液：0.125、0.250、0.50、0.75、1.0(mg/mL)；
将铁皮石斛多糖和刺梨多糖按照1：1的比例混合，铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液：0.125、0.250、0.50、0.75、1.00(mg/mL)。
样品组：
2mL样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)+2mL DPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Aa。
本底组：
2mL超纯水+2mL样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ab。
空白组：
2mL超纯水+2mL DPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ac。
DPPH的清除率IP＝[1-(Aa-Ab)/Ac]×100％，结果见图3。其中，横坐标为样品溶液的浓度，纵坐标为DPPH的清除率。
结论：以维生素C为对照，随着刺梨多糖浓度的增加，其DPPH清除率也在升高，刺梨多糖的清除效果较优，最高约为90％；铁皮石斛多糖在此浓度范围没有DPPH清除效果；铁皮石斛多糖与刺梨多糖混合后，随着浓度的增加，其DPPH清除率也在升高；同时，铁皮石斛多糖与刺梨多糖的混合溶液的DPPH清除率高于刺梨多糖溶液，而混合溶液中的刺梨多糖浓度为相同浓度的刺梨多糖溶液中刺梨多糖浓度的一半，可见含有较少刺梨多糖的混合溶液的DPPH清除率远高于纯的刺梨多糖溶液，即刺梨多糖浓度和铁皮石斛多糖起到了协同增效的作用。
2、·0H清除试验
(1)水杨酸溶液的配制：分析天平称取0.0622g水杨酸固体粉末，用无水乙醇溶解定容至100mL容量瓶中备用；
(2)硫酸亚铁溶液的配制：分析天平称取0.1251g七水合硫酸亚铁固体粉末，用超纯水溶解定容至100mL容量瓶中备用；
(3)双氧水的配制：吸取0.17mL 30％的双氧水，超纯水定容于100mL容量瓶中备用。
(4)不同浓度样品溶液的配制：
刺梨多糖溶液：0.0625、0.125、0.250、0.50、1.00(mg/mL)
铁皮石斛多糖溶液：0.0625、0.125、0.250、0.50、1.00(mg/mL)
将铁皮石斛多糖和刺梨多糖按照1：1的比例混合，铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液：0.0625、0.125、0.250、0.50、1.00(mg/mL)
样品组：1.00mL七水硫酸亚铁+1.00mL双氧水+1.00mL不同浓度的样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)分别反应10min，再加入1.00mL水杨酸后在水浴锅37℃下反应30min，在波长为510nm处测定混合液的吸光度，记为Aa；
空白组：1.00mL七水硫酸亚铁+1.00mL双氧水+1.00mL超纯水反应10min，再加入1.00mL水杨酸后在水浴锅37℃下反应30min，在波长为510nm处测定混合液的吸光度，记为Ab；
本底组：1.00mL七水硫酸亚铁+1.00mL双氧水+1.00mL不同浓度的样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)分别反应10min，再加入1.00mL超纯水后在水浴锅37℃下反应30min，在波长为510nm处测定混合液的吸光度，记为Ac。
羟基自由基的清除率IP＝[1-(Aa-Ab)/Ac]×100％，结果见图4。其中，横坐标为样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)的浓度，纵坐标为羟基自由基的清除率。
结论：以维生素C为对照，随着样品多糖浓度的增加，其·0H清除率均升高；且刺梨多糖的清除效果优于铁皮石斛多糖，刺梨多糖的清除率最高约为90％，铁皮石斛多糖的清除率最高约为60％；铁皮石斛多糖和刺梨多糖二者混合后，其·OH清除率优于单一物质的清除率，即含有较少铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液达到了更优的效果。
3、ABTS·清除率试验
(1)ABTS溶液：用甲醇配制成7mM的ABTS溶液；
(2)过硫酸钾溶液：用超纯水配制成2.45mM的过硫酸钾溶液；
(3)将上述两溶液混合避光反应12h，再用甲醇稀释20倍；
(4)不同浓度样品溶液的配制：
刺梨多糖溶液：0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00(mg/mL)
铁皮石斛多糖溶液：0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00(mg/mL)
将铁皮石斛多糖和刺梨多糖按照1：1的比例混合，铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液：0.0625、0.125、0.250、0.50、1.00(mg/mL)
样品组：1mL样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)+3mL ABTS混合溶液，混匀，避光保存30min，734nm下测Aa；
对照组：1mL样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)+3mL无水甲醇，混匀，避光保存30min，734nm下测Ab；
空白组：1mL超纯水+3mL ABTS混合溶液，混匀，避光保存30min，734nm下测Ac。
ABTS·清除率IP＝[1-(Aa-Ab)/Ac]×100％，结果见图5。其中，横坐标为样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液)的浓度，纵坐标为ABTS·清除率。
结论：以维生素C为对照，随着刺梨多糖或铁皮石斛多糖浓度的增加，其ABTS·清除率均升高。刺梨多糖的清除效果优于铁皮石斛多糖，最高约为98％，铁皮石斛多糖的清除效果最高约为40％；铁皮石斛多糖和刺梨多糖二者混合后，其ABTS·清除率优于单一物质的清除率，即含有较少铁皮石斛多糖和刺梨多糖的混合溶液达到了更优的效果。
4、石斛多糖的保湿性能
方法：将石斛多糖分别配制成0.5、1、2mg/mL的石斛多糖溶液，将甘油分别配制成0.5、1、2mg/mL的溶液，均匀涂敷于培养皿中，上面封一层透气膜，置于37℃恒温干燥箱内，分别0、2、4、6、8、10、12h后称重，每组设置3个重复；
保湿率(％)＝M1/M2×100％，结果见图6；
式中：
M1：放置后水分质量(mg)；M2：放置前水分质量(mg)。
结论：随着时间的延长，与甘油相比，石斛多糖仍然保持着与之相当的保湿性能。
5、面霜的DPPH清除效果评价
方法：配制三氯甲烷与冰醋酸的体积比例为6：4的混合溶液100mL备用，取10g面霜，加入混合溶液充分搅拌使面霜溶解，倒入分液漏斗中静置2h，将水相与油相分离，取水相溶液。
不同浓度样品溶液(100mg/mL水相溶液)的配制：以体积比例为6：4的三氯甲烷与冰醋酸的混合溶液为溶剂进行配制。
样品溶液：20.0、40.0、60.0、80.0、100.0(mg/mL)
样品组：2mL样品溶液+2mL DPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Aa。
本底组：2mL三氯甲烷混合液+2mL样品溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ab。
空白组：2mL三氯甲烷混合液+2mLDPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ac。
DPPH的清除率IP＝[1-(Aa-Ab)/Ac]×100％，结果见图7。其中，横坐标为水相溶液的浓度，纵坐标为DPPH的清除率。
结论：随着面霜样品浓度的增加，其DPPH清除率也在升高，清除效果最高约为43％。
6、面霜的保湿性能
方法：分别取200mg的1％甘油水溶液，1％酶切寡聚透明质酸钠水溶液，实施例3制备的面霜或去离子水均匀涂敷于培养皿中，上面封一层透气膜，置于37℃恒温干燥箱内，0、2、4、6、8、10、12h后称重，每组设置3个重复；
保湿率(％)＝M1/M2×100％，结果见图8；
式中：
M1：放置后水分质量(mg)，M2：放置前水分质量(mg)。
结论：随着时间的延长，面霜仍然保持着较好的保湿性能；而1％甘油水溶液和1％酶切寡聚透明质酸钠水溶液在8小时之后保湿效果不佳，去离子水溶液10小时就已全部挥发。
实施例5提取物对人永生化表皮细胞HaCaT细胞的毒性实验
方法：采用MTT法检测提取物对对人永生化表皮细胞HaCaT细胞的毒性作用。
具体地
1)以DMEM培养基为溶剂配制不同浓度的样品溶液：
刺梨多糖溶液：0、1.96、3.93、7.85、15.62、31.25、62.5(μg/mL)
铁皮石斛多糖溶液：0、1.96、3.93、7.85、15.62、31.25、62.5(μg/mL)
辣木多糖溶液：0、1.96、3.93、7.85、15.62、31.25、62.5(μg/mL)
2)将HaCaT细胞(上海之礼生物科技有限公司，ZI-E34236)以4000细胞/孔接种于96孔板中，每孔100μl，放入孵箱孵育24h后，加入配制好的不同浓度样品溶液(刺梨多糖溶液、铁皮石斛多糖溶液或辣木多糖溶液)100μl，每个浓度设置5个复孔，放入孵箱孵育48h。每孔加入20μl的MTT试剂，放入孵箱4h，弃去上层培养液，每孔加入200μl的DMSO试剂溶解掉因被活细胞还原生成的甲瓒，用酶标仪测定各孔在492nm处的吸光度。计算各组细胞的存活率。结果见图9～11，刺梨多糖、铁皮石斛多糖和辣木多糖都对细胞的存活率没有明显影响，说明三种提取物均对HaCaT细胞无毒性。
对比例1含有铁皮石斛多糖但不含刺梨多糖的面霜DPPH清除效果评价
方法：配制三氯甲烷与冰醋酸的体积比例为6：4的混合溶液100mL备用，取10g面霜，加入混合溶液充分搅拌使面霜溶解，倒入分液漏斗中静置2h，将水相与油相分离，取水相溶液。
不同浓度样品溶液(100mg/mL水相溶液)的配制：以体积比例为6：4的三氯甲烷与冰醋酸的的混合溶液为溶剂进行配制。
样品溶液：20.0、40.0、60.0、80.0、100.0(mg/mL)
样品组：2mL样品溶液+2mL DPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Aa。
本底组：2mL三氯甲烷混合液+2mL样品溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ab。
空白组：2mL三氯甲烷混合液+2mLDPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ac。
DPPH的清除率IP＝[1-(Aa-Ab)/Ac]×100％，结果见图12a。其中，横坐标为水相溶液的浓度，纵坐标为DPPH的清除率。
结论：随着面霜样品浓度的增加，其DPPH清除率也在升高，清除效果最高约为37％。
对比例2含有刺梨多糖但不含铁皮石斛多糖的面霜DPPH清除效果评价
方法：配制三氯甲烷与冰醋酸的体积比例为6：4的混合溶液100mL备用，取10g面霜，加入混合溶液充分搅拌使面霜溶解，倒入分液漏斗中静置2h，将水相与油相分离，取水相溶液。
不同浓度样品溶液(100mg/mL水相溶液)的配制：以体积比例为6：4的三氯甲烷与冰醋酸的混合溶液为溶剂进行配制。
样品溶液：20.0、40.0、60.0、80.0、100.0(mg/mL)
样品组：2mL样品溶液+2mL DPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Aa。
本底组：2mL三氯甲烷混合液+2mL样品溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ab。
空白组：2mL三氯甲烷混合液+2mLDPPH溶液，混匀，避光保存30min，517nm下测吸光度，记为Ac。
DPPH的清除率IP＝[1-(Aa-Ab)/Ac]×100％，结果见图12b。其中，横坐标为水相溶液的浓度，纵坐标为DPPH的清除率。
结论：随着面霜样品浓度的增加，其DPPH清除率也在升高，清除效果最高约为40％。

Claims (9)

1.一种抗氧化保湿组合物，其特征在于，以重量份计，包含以下组分：5-8份刺梨提取物、5-8份铁皮石斛提取物、1-3份辣木籽提取物、0.2-0.6份葡萄籽提取液、8-10份霍霍巴油、2-4份乳木果油、3-5份角鲨烷、1-1.5份维E醋酸酯、5-6份硬脂酸甘油酯-聚乙二醇-100硬脂酸酯混合物、4-6份丙烯酸钠/丙烯酰二甲酯牛磺酸钠共聚物-异十六烷-聚山梨醇酯80混合物、5-8份甘油、0.2-0.5份酶切寡聚透明质酸钠、0.5-0.8份吡咯烷酮羧酸钠、1.5-2份1,3-丁二醇、0.8-1份苄醇-DHA和0.1-0.4份香精。
2.一种含有权利要求1所述抗氧化保湿组合物的日用品。
3.根据权利要求2所述日用品，其特征在于，所述日用品的制剂形式包括乳剂、膏剂或贴剂。
4.一种制备权利要求1所述抗氧化保湿组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将8-10份霍霍巴油、2-4份乳木果油、3-5份角鲨烷、1-1.5份维E醋酸酯、5-6份硬脂酸甘油酯-聚乙二醇-100硬脂酸酯混合物、4-6份丙烯酸钠/丙烯酰二甲酯牛磺酸钠共聚物-异十六烷-聚山梨醇酯80混合物，水浴加热，搅拌至完全融化，得到油相混合物；
(2)5-8份甘油、0.2-0.5份酶切寡聚透明质酸钠、0.5-0.8份吡咯烷酮羧酸钠、1.5-2份1,3-丁二醇、5-8份刺梨提取物、5-8份铁皮石斛提取物、1-3份辣木籽提取物、0.2-0.6份葡萄籽提取液，水浴加热，搅拌至完全溶解，得到水相混合物；
(3)将步骤(1)中所述的油相混合物加入到步骤(2)中的水相混合物中，混合均匀，加入0.8-1份苄醇-DHA和香精溶液，即可得到所述的抗氧化保湿组合物。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述刺梨提取物溶液的浓度为0.0625-1.00mg/mL。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述铁皮石斛提取物溶液的浓度为0.0625-1.00mg/mL。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述香精溶液的浓度为1％-2％。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述油相混合物和香精溶液的质量体积比为23-32.5：0.9-1.5。
9.权利要求1所述组合物或权利要求2所述日用品在制备具有抗氧化保湿功效的护肤用品中的应用。
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