CN106749145A - 一种从番石榴叶提取槲皮素的方法 - Google Patents

一种从番石榴叶提取槲皮素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，经醇提取液制备、浸膏粉制备、沸水重结晶、乙醇重结晶和葡聚糖凝胶柱色谱分离得槲皮素，采用TLC法鉴定槲皮素、HPLC法测定槲皮素含量。本发明有效地减少了番石榴叶中槲皮素的浪费，节约了资源；而且原料廉价易得，对环境基本不产生污染，工艺简单易行、快捷，所获得的槲皮素成本较低、纯度高、产率高，适合于工业规模化生产。

Description

一种从番石榴叶提取槲皮素的方法
技术领域
本发明涉及药品制造技术领域，具体涉及一种从番石榴叶提取槲皮素的方法。
背景技术
番石榴属桃金娘科，番石榴叶含挥发油及鞣质等，供药用，有止痢、止血、健胃等功效，因其降血糖的功效显著，在国外常用来治疗糖尿病。中外民间医药多有采用番石榴叶治疗糖尿病及腹泻等疾病。中医认为，番石榴叶性平，味甘涩，具有生津止渴、除烦、收敛止泻，消炎止血、止痒等功用。1980年，广西医学院将番石榴的鲜绿叶洗净晾干，干叶用水煮沸腾提取，滤液浓缩成膏状。膏状提取物再与干叶打成粗粉混合干燥、打碎、过筛而得番石榴叶浸膏粉，加10％淀粉做黏合剂制成颗粒，干燥后加硝酸镁压片，制得降糖片一号。提取番石榴叶的总黄酮制成胶丸得降糖片二号。将番石榴连果皮带核压碎，制成果汁，与罗汉果煎熬液混合，制得消渴饮。3种制品用于临床试验都获得较好的降血糖疗效。目前研究认为，番石榴降糖有效成分主要是黄酮类化合物，番石榴多糖中的黄酮类物质可以保护溶酶体膜的稳定性，防止溶酶体破裂造成N-乙酰氨基糖苷酶的释放，维持血糖的稳定，也能刺激糖原合成，降低血糖。
番石榴叶的开发利用已经有很长的历史，它的主要功效成分为芳香类二级代谢产物多酚类物质。在它的叶子中已经发现含有槲皮素、蔚蓄苷、番石榴苷(即槲皮素-3-Q-L-吡喃阿拉伯糖苷)，并含有挥发油，如丁香油酚，顺-3-己烯-卜醇等。文献表明正是这些酚类化合物赋予番石榴叶降低血糖等多种功效。目前以番石榴叶为原料开发的系列产品有：番石榴叶袋泡茶、番石榴叶颗粒、番石榴叶饮料等，这些产品主要是原药材或以水为溶剂提取的番石榴叶浸膏为原料制成的产品。由于不能溶于水，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用的槲皮素存在于提取番石榴叶浸膏后的番石榴叶渣中被当作废物丢弃，造成巨大的资源浪费。目前对利用番石榴叶提取槲皮素缺乏系统的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，经醇提取液制备、浸膏粉制备、沸水重结晶、乙醇重结晶和葡聚糖凝胶柱色谱分离得槲皮素，具有工艺简单、成本低、产率高、适合于工业生产等特点。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，包括如下步骤：
1)番石榴叶醇提取液制备：向盛有番石榴叶的容器中加入乙醇，回流提取3次，每次1h，经100目筛过滤后，合并药液，得番石榴叶醇提取液，并测定提取液中总黄酮含量；
2)番石榴叶浸膏粉制备：将番石榴叶醇提取液通过旋转蒸发仪60℃下浓缩至相对密度为1.0～1.25的浸膏，加入10倍浸膏质量的水，静置12h，过滤，喷雾干燥，干燥至进料质量的70％，得番石榴叶浸膏粉；
3)沸水重结晶：用水将番石榴叶浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，70～80℃干燥后得芦丁纯品；
4)乙醇重结晶：向盛有芦丁纯品的容器中加入稀硫酸，再文火加热2h，冷却，抽滤，将滤渣水洗至中性，然后用体积浓度为95％的乙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱色谱分离(SphadexLH20)，用甲醇做洗脱剂，因芦丁不能被洗脱，从而得到槲皮素黄绿色纯品。
根据以上方案，所述乙醇与番石榴叶的质量比为6～10:1，所述乙醇的体积浓度为70％。
根据以上方案，所述喷雾干燥的进风温度为175～185℃。
根据以上方案，所述稀硫酸与芦丁纯品的质量比为70～90:1，所述稀硫酸的体积浓度为2％。
根据以上方案，所述总黄酮含量采用紫外分光光度法(UV)测定，于510nm处测定样品溶液吸光度，从标准曲线所得到回归方程中计算出样品溶液中总黄酮的浓度(mg/m1)。
根据以上方案，所述槲皮素的鉴定采用薄层色谱法(TLC)：硅胶G板，用体积比为5:4:1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸展开，3wt％三氯化铝乙醇液检验，紫外灯365nm处观察。
根据以上方案，所述槲皮素的含量测定采用高效液相色谱仪法(HPLC)：色谱柱：Ultimate XB-C18(5um，4.6mm×250mm)，流动相：乙腈-0.4％磷酸(45：55)，流速：1.0ml·min-1，检测波长：360nm，柱温：25℃。
本发明的有益效果是：
1)本发明为从番石榴叶中提取槲皮素提供了一种新的方法，有效地减少了番石榴叶中槲皮素的浪费，节约了资源；
2)本发明的原料廉价易得，对环境基本不产生污染，工艺简单易行、快捷，所获得的槲皮素成本较低、纯度高、产率高，适合于工业规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进行说明。
实施例1：
本发明提供一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，包括如下步骤：
1)番石榴叶醇提取液制备：向盛有番石榴叶的容器中加入番石榴叶7倍质量的70v％乙醇，回流提取3次，每次1h，经100目筛过滤后，合并药液，得番石榴叶醇提取液，用UV法测定提取液中总黄酮含量，于510nm处测定样品溶液吸光度，样品溶液中总黄酮的浓度96mg/m1；
2)番石榴叶浸膏粉制备：将番石榴叶醇提取液通过旋转蒸发仪60℃下浓缩至相对密度为1.1的浸膏，加入10倍浸膏质量的水，静置12h，过滤，在进风温度为175℃的条件下进行喷雾干燥，干燥至进料质量的70％，得番石榴叶浸膏粉；
3)沸水重结晶：用水将番石榴叶浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，75℃干燥后得芦丁纯品，用薄层色谱法鉴定黄酮醇化合物中的槲皮素，经展开、显色，显示槲皮素的斑点，Rf值＝0.58，精制槲皮素与标准品在相应的位置分别显黄色斑点；
4)乙醇重结晶：向盛有芦丁纯品的容器中加入芦丁纯品70倍质量的2v％稀硫酸，再文火加热2h，冷却，抽滤，将滤渣水洗至中性，然后用体积浓度为95％的乙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱色谱分离(SphadexLH20)，用甲醇做洗脱剂，因芦丁不能被洗脱，从而得到槲皮素黄绿色纯品。
采用高效液相色谱仪法鉴别测定，提取物结晶在11.60min出现与标准槲皮素相似的色谱峰，证明所得晶体为槲皮素，经制定标准品曲线，得提取物结晶的槲皮素含量为94.8％。
实施例2：
本发明提供一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，包括如下步骤：
1)番石榴叶醇提取液制备：向盛有番石榴叶的容器中加入番石榴叶9倍质量的70v％乙醇，回流提取3次，每次1h，经100目筛过滤后，合并药液，得番石榴叶醇提取液，用UV法测定提取液中总黄酮含量，于510nm处测定样品溶液吸光度，样品溶液中总黄酮的浓度110mg/m1；
2)番石榴叶浸膏粉制备：将番石榴叶醇提取液通过旋转蒸发仪60℃下浓缩至相对密度为1.2的浸膏，加入10倍浸膏质量的水，静置12h，过滤，在进风温度为180℃的条件下进行喷雾干燥，干燥至进料质量的70％，得番石榴叶浸膏粉；
3)沸水重结晶：用水将番石榴叶浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，80℃干燥后得芦丁纯品，用薄层色谱法鉴定黄酮醇化合物中的槲皮素，经展开、显色，显示槲皮素的斑点，Rf值＝0.58，精制槲皮素与标准品在相应的位置分别显黄色斑点；
4)乙醇重结晶：向盛有芦丁纯品的容器中加入芦丁纯品80倍质量的2v％稀硫酸，再文火加热2h，冷却，抽滤，将滤渣水洗至中性，然后用体积浓度为95％的乙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱色谱分离(SphadexLH20)，用甲醇做洗脱剂，因芦丁不能被洗脱，从而得到槲皮素黄绿色纯品。
采用高效液相色谱仪法鉴别测定，提取物结晶在11.58min出现与标准槲皮素相似的色谱峰，证明所得晶体为槲皮素，经制定标准品曲线，得提取物结晶的槲皮素含量为96.1％。
实施例3：
本发明提供一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，包括如下步骤：
1)番石榴叶醇提取液制备：向盛有番石榴叶的容器中加入番石榴叶10倍质量的70v％乙醇，回流提取3次，每次1h，经100目筛过滤后，合并药液，得番石榴叶醇提取液，用UV法测定提取液中总黄酮含量，于510nm处测定样品溶液吸光度，样品溶液中总黄酮的浓度123mg/m1；
2)番石榴叶浸膏粉制备：将番石榴叶醇提取液通过旋转蒸发仪60℃下浓缩至相对密度为1.25的浸膏，加入10倍浸膏质量的水，静置12h，过滤，在进风温度为180℃的条件下进行喷雾干燥，干燥至进料质量的70％，得番石榴叶浸膏粉；
3)沸水重结晶：用水将番石榴叶浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，75℃干燥后得芦丁纯品，用薄层色谱法鉴定黄酮醇化合物中的槲皮素，经展开、显色，显示槲皮素的斑点，Rf值＝0.58，精制槲皮素与标准品在相应的位置分别显黄色斑点；
4)乙醇重结晶：向盛有芦丁纯品的容器中加入芦丁纯品90倍质量的2v％稀硫酸，再文火加热2h，冷却，抽滤，将滤渣水洗至中性，然后用体积浓度为95％的乙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱色谱分离(SphadexLH20)，用甲醇做洗脱剂，因芦丁不能被洗脱，从而得到槲皮素黄绿色纯品。
采用高效液相色谱仪法鉴别测定，提取物结晶在11.56min出现与标准槲皮素相似的色谱峰，证明所得晶体为槲皮素，经制定标准品曲线，得提取物结晶的槲皮素含量为96.2％。
以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的相关技术人员应当理解：可以对本发明进行修改或者同等替换，但不脱离本发明精神和范围的任何修改和局部替换均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (7)

1.一种从番石榴叶提取槲皮素的方法，以番石榴叶干品为原料，其特征在于，包括如下步骤：
1)番石榴叶醇提取液制备：向盛有番石榴叶的容器中加入乙醇，回流提取3次，每次1h，经100目筛过滤后，合并药液，得番石榴叶醇提取液，并测定提取液中总黄酮含量；
2)番石榴叶浸膏粉制备：将番石榴叶醇提取液通过旋转蒸发仪60℃下浓缩至相对密度为1.0～1.25的浸膏，加入10倍浸膏质量的水，静置12h，过滤，喷雾干燥，干燥至进料质量的70％，得番石榴叶浸膏粉；
3)沸水重结晶：用水将番石榴叶浸膏粉洗至中性，60℃下干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，70～80℃干燥后得芦丁纯品；
4)乙醇重结晶：向盛有芦丁纯品的容器中加入稀硫酸，再文火加热2h，冷却，抽滤，将滤渣水洗至中性，然后用体积浓度为95％的乙醇重结晶，葡聚糖凝胶柱色谱分离，用甲醇做洗脱剂，因芦丁不能被洗脱，从而得到槲皮素黄绿色纯品。
2.根据权利要求1所述的从番石榴叶提取槲皮素的方法，其特征在于，所述乙醇与番石榴叶的质量比为6～10:1，所述乙醇的体积浓度为70％。
3.根据权利要求1所述的从番石榴叶提取槲皮素的方法，其特征在于，所述喷雾干燥的进风温度为175～185℃。
4.根据权利要求1所述的从番石榴叶提取槲皮素的方法，其特征在于，所述稀硫酸与芦丁纯品的质量比为70～90:1，所述稀硫酸的体积浓度为2％。
5.根据权利要求1所述的从番石榴叶提取槲皮素的方法，其特征在于，所述总黄酮含量采用紫外分光光度法测定，于510nm处测定样品溶液吸光度，从标准曲线所得到回归方程中计算出样品溶液中总黄酮的浓度。
6.根据权利要求1所述的从番石榴叶提取槲皮素的方法，其特征在于，所述槲皮素的鉴定采用薄层色谱法：硅胶G板，用体积比为5:4:1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸展开，3wt％三氯化铝乙醇液检验，紫外灯365nm处观察。
7.根据权利要求1所述的从番石榴叶提取槲皮素的方法，其特征在于，所述槲皮素的含量测定采用高效液相色谱仪法：色谱柱：Ultimate XB-C18(5um，4.6mm×250mm)，流动相：乙腈-0.4％磷酸(45：55)，流速：1.0ml·min-1，检测波长：360nm，柱温：25℃。
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