CN105963336A - 一种柿叶总黄酮的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种柿叶总黄酮的提取方法，柿子叶自然风干后粉碎并过60目筛，在一定量柿叶中添加一定浓度的乙醇水溶液，模拟胃肠道的PH值，在一定超声波功率下超声浸提，合并提取液，减压低温蒸干，经干燥得到柿叶总黄酮提取物。本发明的有益效果是提取工艺简单，提取时间短，提取柿叶总黄酮得率高，生产成本低，模拟人体胃，大小肠的转运吸收环境，有效成分吸收利用率高，可以大规模应用于工业化提取。

Description

一种柿叶总黄酮的提取方法
技术领域
本发明属于化合物技术领域，涉及一种柿叶总黄酮的提取方法。
背景技术
柿叶为柿科柿属植物柿Diospyros kaki的叶，长期作为天然药物入药。柿叶中富含黄酮类化合物，这些黄酮类化合物大多都以槲皮素、山奈素及其苷类形式存在，研究表明，该类物质具有抗氧化、抗过敏、抗菌，活血止血、增强免疫，保护心脑血管等药理作用，从柿叶中提取的总黄酮在酿造食醋方面有巨大市场价值。
采用不同的提取方法得到的柿叶黄酮种类和含量不同，目前已经公开的提取方法有溶剂法提取，双水相提取，超声波或微波辅助提取，酶和半仿生法提取。常用的提取方法是溶剂提取法，溶剂提取存在工艺耗时长，使用溶剂多，溶剂及溶剂回收成本高，得率低杂质多等问题。超声波辅助提取法是利用超声波能增大物质分子运动频率和速度，从而提高目标成分溶出速度和次数，缩短提取时间的提取方法。该方法加速了细胞内有效成分的释放、扩散和溶解，从而能显著提高提取率。近几年，新的中草药提取新技术半仿生法是根据仿生学原理，模拟人体胃，大小肠的转运吸收环境，采用选定PH值的酸性水和碱性水，连续提取得到含有效成分高的活性混合物。半仿生法提取是一种活性指导下的导向分离方法，具有能保留更多的有效成分，能缩短生产周期，能降低成本的优势，且提取液中叶绿素含量较低，有利于后期精制。超声波辅助溶剂提取与半仿生技术结合可以解决目前柿叶总黄酮提取生产周期长，成本高，有效成分得率低的问题。
发明内容
本发明提供了超声波辅助与半仿生技术结合的一种柿叶黄酮提取新技术，目的在于解决目前柿叶总黄酮提取存在的工艺耗时长，使用溶剂多，成本高，得率低杂质多等问题。
本发明所采用的技术方案为：柿叶自然风干后粉碎并过60目筛，在柿叶中添加乙醇水溶液，半仿生模拟胃肠条件PH值，超声浸提三次，合并提取液，减压低温蒸干，经干燥得到柿叶总黄酮提取物。
进一步，所述三次超声浸提的半仿生模拟胃肠条件PH值分别为2.0、7.5和8.3。
进一步，所述乙醇水溶液浓度为70％。
进一步，所述每克柿叶添加乙醇水溶液10mL。
进一步，所述超声浸提时间为45min。
进一步，所述超声浸提所用超声波功率为400W。
本发明的有益效果是提取工艺简单，提取时间短，提取柿叶总黄酮得率高，生产成本低，模拟人体胃，大小肠的转运吸收环境，有效成分吸收利用率高，可以大规模应用于工业化提取。
附图说明
图1是PH设置对柿叶总黄酮得率的影响示意图；
图2是提取剂乙醇浓度对柿叶总黄酮得率的影响示意图；
图3是液固比对柿叶总黄酮得率的影响示意图；
图4是提取时间对柿叶总黄酮得率的影响示意图；
图5是超声波功率对柿叶总黄酮得率的影响示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明以柿叶总黄酮提取分离为目标，考察了提取液乙醇浓度、3次提取液的PH设置、液固比、提取时间和超声波功率对柿叶总黄酮提取的影响，从而得出较佳的提取条件。本发明提取方法步骤如下：
(1)三次提取液的PH设置确定
准确称取5g柿叶，液固比10mL/g，加入一定浓度乙醇水溶液，模拟胃肠道的三个PH值，分别加入盐酸，不同PH值氨-氯化铵缓冲溶液，在一定超声波功率下超声浸提一定时间，合并三次提取液，经干燥得到柿叶总黄酮提取物，以芦丁为标准物质，按标准曲线方程方法测出总黄酮的含量。测得总黄酮得率与三次提取液PH设置的关系。
柿叶总黄酮得率(Y)＝(提取物中总黄酮的质量/原料的质量)*100。，
(2)提取剂乙醇浓度的确定
准确称取5g柿叶，液固比10mL/g，以(1)部分实验优化确定的模拟胃肠道的三个PH值为仿生条件，在一定超声波功率下超声浸提一定时间，合并三次提取液，经干燥得到柿叶总黄酮提取物，以芦丁为标准物质，按标准曲线方程方法测出总黄酮的含量。测得总黄酮得率与提取剂乙醇浓度的关系。
(3)液固比的确定
准确称取5g柿叶，以一定的液固比，以(1)部分实验优化确定的模拟胃肠道的三个PH值为仿生条件，以(2)部分实验优化确定浓度的乙醇水溶液为提取剂，在一定超声波功率下超声浸提一定时间，合并三次提取液，经干燥得到柿叶总黄酮提取物，以芦丁为标准物质，按标准曲线方程方法测出总黄酮的含量。测得总黄酮得率与液固比的关系。
(4)提取时间的确定
准确称取5g柿叶，以(3)部分确定的液固比，，以(1)部分实验优化确定的模拟胃肠道的三个PH值为仿生条件，以(2)部分实验优化确定浓度的乙醇水溶液为提取剂，在一定超声波功率下超声浸提一定时间，合并三次提取液，经干燥得到柿叶总黄酮提取物，以芦丁为标准物质，按标准曲线方程方法测出总黄酮的含量。测得总黄酮得率与提取时间的关系。
(5)超声波功率的确定
准确称取5g柿叶，以(3)部分确定的液固比，，以(1)部分实验优化确定的模拟胃肠道的三个PH值为仿生条件，以(2)部分实验优化确定浓度的乙醇水溶液为提取剂，在一定超声波功率下超声浸提(4)部分实验优化确定的浸提时间，合并三次提取液，经干燥得到柿叶总黄酮提取物，以芦丁为标准物质，按标准曲线方程方法测出总黄酮的含量。测得总黄酮得率与超声波功率的关系。
柿叶总黄酮提取验证：
(1)三次提取液的PH设置确定
称5g柿叶，液固比10mL/g，乙醇浓度80％，超声波功率400W，提取30min，模拟胃酸性环境的PH值取2.0-2.4，模拟小肠弱碱性环境的PH值取7.2-7.8，模拟大肠碱性环境的PH值取8.0-8.6，选取胃、小肠、大肠的运转环境三因素，进行正交试验设计，优选三次提取液的PH设置，结果如图1所示。由图1可知，7号试样的柿叶黄酮含量最高，达到0.599％，即酸性环境PH 2.0、弱碱性环境PH7.5、碱性环境PH 8.3。因此后续实验中三次提取液的PH分别为2.0、7.5和8.3。
(2)提取剂乙醇浓度的确定
称5g柿叶，液固比10mL/g，以浓度分别为0％、30％、50％、70％和95％的乙醇水溶液为提取剂，依次加入PH 2.0盐酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化铵缓冲溶液，超声波功率400W，提取30min，结果如图2所示。由图2可知，柿叶总黄酮的得率随乙醇浓度升高先增大，当用70％乙醇提取时，有最高峰值，随后柿叶总黄酮的得率随乙醇浓度升高而减小。这可能是因为低浓度的乙醇易提取出高极性的黄酮苷，而高浓度的乙醇易提取出低极性的黄酮苷元，所以选择70％乙醇作为柿叶总黄酮的提取溶剂。
(3)液固比的确定
称5g柿叶，70％乙醇水溶液为提取剂，依次加入PH 2.0盐酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化铵缓冲溶液，超声波功率400W，提取30min，按液固比6mL/g、8mL/g、10mL/g、12mL/g和15mL/g依次进行浸提，考察了提取液固比对柿叶总黄酮得率的影响，结果如图3所示。由图3可知，柿叶总黄酮的得率随液固比增大而增大，因为溶液量大，有利于传质进行，但在液固比为10后变化较小，考虑液固比增大，一时增大成本，二是杂质会随之浸出出来过多，所以选择液固比为10作为较佳的实验条件。
(4)提取时间的确定
称5g柿叶，液固比10mL/g，以70％乙醇水溶液为提取剂，依次加入PH 2.0盐酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化铵缓冲溶液，超声波功率400W，考察的提取时间分别为5、15、30、45、55、65min，测得提取时间对柿叶总黄酮得率的影响，结果如图4所示。由图4可知，提取时间在5至45min内，得率随提取时间延长明显增高，提取45min后，得率变化已经很小了，这可能是超声波辅助使有效成分溶出在较短的时间内达到类平衡，所以选择45min作为提取时间。
(5)超声波功率的确定
称5g柿叶，液固比10mL/g，以70％乙醇水溶液为提取剂，依次加入PH 2.0盐酸，PH值7.5和PH 8.3的氨-氯化铵缓冲溶液，提取时间45min，考察的超声波功率分别为200W、300W、400W、500W、600W，结果如图5所示。由图5可知，随着超声功率提高柿叶黄酮得率先变大后减小，在400W处有达到平衡，所以选择400W作为超声波功率。
本发明的优点还在于：以柿叶总黄酮得率为指标，通过实验研究，得到的超声波辅助溶剂与半仿生法结合提取柿叶总黄酮的较佳工艺条件为：以70％乙醇(V/V)为提取溶剂，液固比10mL/g，模拟胃肠三次提取液的PH分别为2.0、7.5和8.3，超声功率400W，提取45min，柿叶总黄酮得率约在0.6％左右，为工业化提取柿叶总黄酮提供参考。
以上所述仅是对本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (6)

1.一种柿叶总黄酮的提取方法，其特征在于按照以下步骤进行：柿叶自然风干后粉碎并过60目筛，在柿叶中添加乙醇水溶液，半仿生模拟胃肠条件PH值，超声浸提三次，合并提取液，减压低温蒸干，经干燥得到柿叶总黄酮提取物。
2.按照权利要求1所述一种柿叶总黄酮的提取方法，其特征在于：所述三次超声浸提的半仿生模拟胃肠条件PH值分别为2.0、7.5和8.3。
3.按照权利要求1所述一种柿叶总黄酮的提取方法，其特征在于：所述乙醇水溶液浓度为70％。
4.按照权利要求1所述一种柿叶总黄酮的提取方法，其特征在于：所述每克柿叶添加乙醇水溶液10mL。
5.按照权利要求1所述一种柿叶总黄酮的提取方法，其特征在于：所述超声浸提时间为45min。
6.按照权利要求1所述一种柿叶总黄酮的提取方法，其特征在于：所述超声浸提所用超声波功率为400W。
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