CN101322737A - 一种柿叶黄酮提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种柿叶黄酮提取物及其制备方法，它是将柿叶破碎，用低碳醇提取1～3次，每次5～180min，合并提取液，回收低碳醇、浓缩，离心，上清液过大孔树脂柱进行纯化，先用水再用低碳醇洗柱，收集洗脱液；洗脱液经浓缩、回收低碳醇后，用有机试剂萃取2～5次，萃取液浓缩，干燥，即得柿叶黄酮提取物。本发明采用醇提、大孔树脂纯化、乙酸乙酯萃取的工艺路线从柿叶中提取黄酮类物质，克服了现有技术从柿叶中提取黄酮类物质收率低、含量不高的缺陷，简化了生产工艺，容易操作，降低了生产成本，对有效成分的提取更加完全，并避免了有效成分的损失，所得提取物中黄酮类物质的含量高，其重量含量达80～98％。

Description

一种柿叶黄酮提取物及其制备方法

(一)技术领域：

本发明涉及一种柿叶黄酮提取物及其制备方法，属于药用活性成分的提取技术领域。

(二)背景技术：

柿叶中的主要有效成分是黄酮，目前已发现的柿叶黄酮化合物有黄芪甙、异槲皮素、山奈酚、槲皮素、山奈酚-3-o-β-D-葡萄糖甙、山奈酚-3-o-α-L-鼠李糖甙、山奈酚-3-β-D-木糖甙、山奈酚-3-o-α-L-阿拉伯糖甙、槲皮素-3-o-[2″-o-(3、4、5-三羟基苯甲酰)]-葡萄糖甙、芦丁、金丝桃甙、杨梅树皮甙、紫云英甙等。国内外研究表明，柿叶黄酮具有降血压、抑菌、降血脂、降低胆固醇、止血、活血化瘀、抑制肿瘤生长等功能，并有促进植物生长的作用。

柿叶中的黄酮主要以甙类形式存在，采用不同的提取方法所得黄酮的成分以及含量高低均存在较大差异。目前公开文献已报道的柿叶黄酮的提取工艺主要有以下几种：(1)用15倍柿叶重的50％乙醇水溶液，在75℃下浸提3小时；此方法仅得到粗提取物，黄酮含量只有15％左右。(2)采用水煮提取，加碱类物质助溶，过滤，滤液上吸附树脂层析，然后洗脱，收集洗脱液；该方法得到的也是粗提取物，虽然具有降血压功能及促进植物生长的活性，但杂质仍较多，无法作为人体药用成分。(3)CN1709542A公开了双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，先加入乙醇溶液固液浸取，粗提液进行双水相萃取，然后用乙酸酯类反萃，蒸馏，干燥即可；但该方法所得产品中黄酮类化合物的含量也只有12.1％左右。(4)CN1546014A和CN101194921A公开的柿叶黄酮提取物的制备方法为：水煮，过滤，醇沉，乙酸乙酯萃取，大孔树脂吸附，乙醇洗脱，回收乙醇得浓缩物，干燥即可；所得提取物含总黄酮为60 90％。但该方法的流程较为繁琐，提取效果依然不够理想。

(三)发明内容：

本发明所要解决的技术问题是：利用改进的工艺方法从柿叶中提取黄酮类物质，其工艺流程简单，生产成本低，提取物中黄酮类物质含量高。

本发明的技术方案：柿叶黄酮提取物的制备方法为：将柿叶破碎，用低碳醇提取1～3次，每次5～180min，合并提取液，回收低碳醇、浓缩，离心，上清液过大孔树脂柱进行纯化，先用水再用低碳醇洗柱，收集醇洗脱液；洗脱液经浓缩、回收低碳醇后，用有机试剂萃取2～5次，萃取液浓缩，干燥，即得柿叶黄酮提取物。所用的柿叶原料可以是新鲜或干燥的。

更具体的制备方法为：将柿叶破碎，用3～8倍重量的低碳醇提取1～3次，每次5～180min，合并提取液，回收低碳醇、浓缩至提取液体积的1/25～1/6倍，离心，上清液过大孔树脂柱进行纯化，先用去离子水洗柱2～3h，再用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集醇洗脱液(为树脂重量的1～3倍)；洗脱液浓缩至10～15波美度，回收低碳醇后，用浓缩液体积3～10倍的有机试剂萃取2～5次，萃取液浓缩，喷雾干燥，即得柿叶黄酮提取物。

上述制备方法中，所述的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或异丙醇，其体积浓度为25％～100％。

所述提取方式为加热提取、超声提取或微波提取。加热提取时，提取温度为50～95℃，提取时间为每次1～3小时；超声波提取时，工作频率15～80KHz，提取时间为每次5～120min；微波提取时，工作频率900～2500MHz，提取时间为每次5～120min。

提取液和洗脱液浓缩时均采用真空浓缩，浓缩温度50～70℃，真空度0.06～0.1MPa；萃取液浓缩时采用真空浓缩，浓缩温度30～50℃，真空度为0.06～0.1MPa。

提取液离心时采用管式离心，转速为18000r/min。

大孔树脂柱纯化时，液体流速为0.5～1.5BV/h。

所述的大孔树脂柱是以聚苯乙烯为骨架的D101型、D130型、AB-8型、HP-20型或ADS-7型大孔吸附树脂。申请人经过筛选实验发现，这几种大孔吸附树脂对柿叶中黄酮类化合物的纯化效果更好，而且其价格便宜，可以多次重复使用，成本较低。

萃取用的有机试剂为乙酸乙酯、正丁醇或正丙醇。

以上所述柿叶黄酮提取物的制备方法制备得到的柿叶黄酮提取物。

由于柿叶黄酮中的有效成分山奈酚、槲皮素、异槲皮素、黄芪甙、芦丁、金丝桃素、紫云英甙、杨梅树皮甙等在醇中的溶解度要明显高于其在水中的溶解度，因此本发明选用低碳醇作为提取溶剂，结果发现醇提对黄酮类物质的提取更为完全，提取物中总黄酮的含量更高(具体见下表1)。另外，现有技术(CN101194921A)是将提取液经醇沉、萃取之后再用树脂纯化，其萃取量大，操作繁琐，效率低。而本发明的提取液先经过大孔树脂纯化，能在去除更多杂质的同时有效地保留柿叶黄酮；树脂纯化后再用乙酸乙酯萃取时，因杂质明显减少，萃取量小，更利于萃取操作，效率高，所需的乙酸乙酯量成倍减少。而且本发明因工艺设计合理，提取液经树脂纯化和乙酸乙酯萃取便能达到提纯的目的，无须经过醇沉步骤，简化了流程。

为了将水提和醇提的效果进行对照，申请人在同等条件下进行了实验：取柿叶，分别加入10倍量水和不同体积浓度的乙醇，在80℃下保温提取2小时，各提取溶剂所得提取物中黄酮类物质含量(重量百分含量)和提取物得率(重量百分比)如下表：

表1

提取溶剂	水	20％乙醇	40％乙醇	60％乙醇	80％乙醇	95％乙醇
							黄酮类物质含量	6％	8％	13％	15％	16％	18％
黄酮提取物得率	20％	20％	18％	18％	15％	12％

与现有技术相比，本发明采用醇提、大孔树脂纯化、乙酸乙酯萃取的工艺路线从柿叶中提取黄酮类物质，克服了现有技术从柿叶中提取黄酮类物质收率低、含量不高的缺陷，简化了生产工艺，容易操作，降低了生产成本，对有效成分的提取更加完全，并避免了有效成分的损失，所得提取物中黄酮类物质的含量高，其重量含量达80～98％。

(四)具体实施方式：

本发明的实施例1：柿叶黄酮提取物的制备方法，其步骤如下：

1)前处理：取新鲜柿叶，剔除腐烂、霉变部分，去除杂质，将柿叶破碎；

2)提取：将破碎的柿叶原料投入洁净的提取罐中，加入6倍重量的65％(v/v)乙醇，控制温度在85℃，第一次回流提取2h(从溶液沸腾开始计时)，然后压出药液，第二次再加入4倍重量的65％(v/v)乙醇，回流提取1.5h，收取第二次提取液；

3)回收溶剂：将提取液合并，导入浓缩器中进行真空浓缩，温度控制在60℃，真空度为0.08MPa，浓缩至提取液体积的1/20倍；

4)离心：将浓缩后的提取液通过管式离心机离心，转速为18000r/min；

5)大孔树脂纯化：离心上清液进型号为AB-8的大孔吸附树脂柱进行纯化，液体流速为1.0BV/h；用去离子水洗柱至流出液清澈，水洗约2个小时；再用65％(v/v)乙醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集带醇味的洗脱液，收集醇洗脱液约为树脂重量的2倍；

6)浓缩：醇洗脱液进行真空浓缩，温度控制在60℃，真空度为0.08MPa，浓缩至12波美度；

7)萃取：浓缩后的洗脱液用乙酸乙酯进行萃取，总共萃取4次，每次所用乙酸乙酯的量是浓缩液体积量的4倍；

8)回收有机试剂：对萃取液进行真空浓缩，浓缩温度40℃，真空度为0.081MPa，浓缩至干；用去离子水溶解，真空浓缩至25～30波美度的浸膏；

9)干燥：将浸膏进行喷雾干燥，得到柿叶黄酮提取物。

本发明的实施例2：按以下步骤制备柿叶黄酮提取物：

1)前处理：取干燥柿叶，剔除腐烂、霉变部分，去除杂质，将柿叶破碎；

2)提取：将破碎的柿叶原料投入洁净的提取罐中，加入相当于原料重量4倍的80％(v/v)乙醇，控制温度在90℃，第一次回流提取2.5h(从溶液沸腾开始计时)，然后压出药液，第二次再加入3倍重量的80％(v/v)乙醇，回流提取2h，收取第二次提取液；

3)回收溶剂：将提取液合并，导入浓缩器中进行真空浓缩，温度控制在70℃，真空度为0.1MPa，浓缩至提取液体积的1/15倍；

4)离心：将浓缩后的提取液通过管式离心机离心，转速为18000r/min；

5)大孔树脂纯化：离心上清液进型号为D101的大孔吸附树脂进行纯化，液体流速为1.5BV/h；用去离子水洗柱至流出液清澈，水洗约3个小时；再用80％(v/v)乙醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集略带醇味的洗脱液，收集洗脱液约为树脂重量的3倍；

6)浓缩：洗脱液进行真空浓缩，温度控制在70℃，真空度为0.1MPa，浓缩至15波美度；

7)萃取：浓缩后的洗脱液用正丁醇进行萃取，总共萃取5次，每次所用正丁醇的量是浓缩液体积量的3倍；

8)回收有机试剂：对萃取液进行真空浓缩，浓缩温度50℃，真空度为0.1MPa，浓缩至干；用去离子水溶解，真空浓缩至25～30波美度的浸膏；

9)干燥：将浸膏进行喷雾干燥，得到柿叶黄酮提取物。

本发明的实施例3：按以下步骤制备柿叶黄酮提取物：

1)前处理：取新鲜柿叶，剔除腐烂、霉变部分，去除杂质，将柿叶破碎；

2)提取：将破碎的柿叶原料投入洁净的提取罐中，加入8倍重量的45％(v/v)乙醇，用超声波提取120min，其工作频率15～80KHz；

3)回收溶剂：将提取液导入浓缩器中进行真空浓缩，温度控制在50℃，真空度为0.06MPa，浓缩至提取液体积的1/10倍；

4)离心：将浓缩后的提取液通过离心机离心，转速为18000r/min；

5)大孔树脂纯化：离心上清液进型号为D130的大孔吸附树脂柱进行纯化，液体流速为0.5BV/h；用去离子水洗柱至流出液清澈，水洗约2个小时；再用45％(v/v)乙醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集略带醇味的洗脱液，收集洗脱液约为树脂重量的1.5倍；

6)浓缩：洗脱液进行真空浓缩，温度控制在50℃，真空度为0.06MPa，浓缩至10波美度；

7)萃取：浓缩后的洗脱液用正丙醇进行萃取，总共萃取3次，每次所用正丙醇的量是浓缩液体积量的6倍；

8)回收有机试剂：对萃取液进行真空浓缩，浓缩温度30℃，真空度为0.06MPa，浓缩至干；用去离子水溶解，浓缩至25～30波美度的浸膏；

9)干燥：将浸膏进行喷雾干燥，得到柿叶黄酮提取物。

本发明的实施例4：按以下步骤制备柿叶黄酮提取物：

1)前处理：取干燥柿叶，剔除腐烂、霉变部分，去除杂质，将柿叶破碎；

2)提取：将破碎的柿叶原料投入洁净的提取罐中，加入7倍重量的95％(v/v)甲醇，第一次用微波提取60min，收取药液；第二次加入5倍重量的95％(v/v)甲醇，微波提取30min，收取药液；第三次再加入3倍重量的95％(v/v)甲醇，微波提取10min，收取药液；微波工作频率为900～2500MHz；

3)回收溶剂：将提取液合并，导入浓缩器中进行真空浓缩，温度控制在65℃，真空度为0.075MPa，浓缩至提取液体积的1/25倍；

4)离心：将浓缩后的提取液通过离心机离心；

5)大孔树脂纯化：离心上清液进型号为HP-20的大孔吸附树脂进行纯化，液体流速为1.2BV/h；用去离子水洗柱至流出液清澈，水洗约3个小时；再用70％(v/v)甲醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集略带醇味的洗脱液，收集洗脱液约为树脂重量的3倍；

6)浓缩：洗脱液进行真空浓缩，温度控制在65℃，真空度为0.075MPa，浓缩至14波美度；

7)萃取：浓缩后的洗脱液用乙酸乙酯进行萃取，总共萃取2次，每次所用乙酸乙酯的量是浓缩液体积量的10倍；

8)回收有机试剂：对萃取液进行真空浓缩，浓缩温度35℃，真空度为0.075MPa，浓缩至干；用去离子水溶解，浓缩至25～30波美度的浸膏；

9)干燥：将浸膏进行干燥，即得柿叶黄酮提取物。

Claims (10)

1.一种柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：将柿叶破碎，用低碳醇提取1～3次，每次5～180min，合并提取液，回收低碳醇、浓缩，离心，上清液过大孔树脂柱进行纯化，先用水再用低碳醇洗柱，收集醇洗脱液；洗脱液经浓缩、回收低碳醇后，用有机试剂萃取2～5次，萃取液浓缩，干燥，即得柿叶黄酮提取物。

2.根据权利要求1所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：将柿叶破碎，用3～8倍重量的低碳醇提取1～3次，每次5～180min，合并提取液，回收低碳醇、浓缩至提取液体积的1/25～1/6倍，离心，上清液过大孔树脂柱进行纯化，先用去离子水洗柱2～3h，再用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，收集醇洗脱液；洗脱液浓缩至10～15波美度，回收低碳醇后，用浓缩液体积3～10倍的有机试剂萃取2～5次，萃取液浓缩，喷雾干燥，即得柿叶黄酮提取物。

3.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述的低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或异丙醇，其体积浓度为25％～100％。

4.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述提取方式为加热提取、超声提取或微波提取。

5.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：提取液和洗脱液浓缩时均采用真空浓缩，浓缩温度50～70℃，真空度0.06～0.1MPa；萃取液浓缩时采用真空浓缩，浓缩温度30～50℃，真空度为0.06～0.1MPa。

6.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：提取液离心时采用管式离心，转速为18000r/min。

7.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：大孔树脂柱纯化时，液体流速为0.5～1.5BV/h。

8.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述的大孔树脂柱是以聚苯乙烯为骨架的D101型、D130型、AB-8型、HP-20型或ADS-7型大孔吸附树脂。

9.根据权利要求1或2所述柿叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：萃取用的有机试剂为乙酸乙酯、正丁醇或正丙醇。

10.权利要求1-9中任一项所述柿叶黄酮提取物的制备方法制备得到的柿叶黄酮提取物。