CN101974045B

CN101974045B - 一种制备红景天苷的方法

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Publication number: CN101974045B
Application number: CN2010105182440A
Authority: CN
Inventors: 闵建华; 许冬瑾; 向飞军; 吴晓东; 陈华师
Original assignee: Kangmei Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Kangmei Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2010-10-19
Filing date: 2010-10-19
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2030-10-19
Also published as: CN101974045A

Abstract

本发明提供了一种制备红景天苷的方法。本发明提供的制备红景天苷的方法包括以下步骤：1)提取：取大花红景天药材，加水微波提取，滤过，浓缩，得浓缩液；2)纯化：将步骤1)所得浓缩液进行二次醇沉，得滤液；和3)精制：将步骤2)所得滤液上大孔树脂，洗脱，浓缩，干燥，即得。本发明提供的制备方法具有提取效率高、工艺简单、可用于工业大生产等优点。

Description

一种制备红景天苷的方法

技术领域

本发明涉及一种制备红景天苷的方法。

背景技术

本发明所用药材为大花红景天，来源于景天科红景天属植物大花红景天(拉丁名：Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba)的根或者根茎的主要活性成分是红景天苷。大花红景天主产于西藏、云南西北部、四川西部，生于海拔2800～5600米的山坡草地、灌丛中，能在恶劣而多变的自然环境中生长，是一种适应性很强的植物。传统医学认为大花红景天能益气活血，通脉平喘，用于气虚血淤，胸痹心痛，中风偏瘫，倦怠气喘。大花红景天中主要含有苷类、黄酮类、多糖类、鞣质、挥发油等，红景天苷为其主要活性成分，也是治疗心脑血管疾病的主要成分之一，具有预防和抗痴呆作用，抗缺氧作用，延缓衰老作用，抑制快速型室性心律失常，临床上用来治疗冠心病、高原低血压症、高原性红细胞增多症。毒性试验表明，红景天苷毒性甚小：红景天苷1g/Kg小鼠皮下注射，未见毒性反应。

近年来，随着人们生活水平的提高，加上人口结构的老龄化，心血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗效果较好的心脑血管疾病的药物已经成为当今药物研究的热点，临床研究报道显示：高纯度单一成分的红景天苷在治疗心脑血管方面具有良好的应用前景。

目前红景天苷的制备方法较多，邰韧辉等(“高纯度红景天苷的制备工艺研究”，现代中药研究与实践，2004，18(4)：58)用溶剂萃取结合大孔树脂分离，然后用硅胶柱精制。用该方法制得的红景天苷含量低，且成本高，不适合工业化大生产。丁朝武等(“红景天苷和红景天苷元标准品的制备方法研究”，分析测试学报，1997，16(1)：38)用化学和高效液相制备色谱方法分离制备，所得的产品纯度高，但高效液相色谱制备量小，无法大规模生产。葛永潮等(“红景天苷的制备工艺改进”，中国药物化学杂志，1994，4(3)：196)将聚酰胺、反相大孔树脂、硅胶及葡聚糖凝胶四种柱层析组合使用，来制备红景天苷，此方法分离介质品种较多，且成本较高，不适合工业化大生产。

因此，还有待开发一种工艺简单、成本低、纯度高、适合工业化生产的制备红景天苷的方法。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种新的制备红景天苷的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。本发明提供了一种制备红景天苷的方法，所述方法包括以下步骤：1)提取：取大花红景天药材，加水微波提取，滤过，浓缩，得浓缩液；2)纯化：将步骤1)所得浓缩液进行二次醇沉，得滤液；和3)精制：将步骤2)所得滤液上大孔树脂，洗脱，浓缩，干燥，即得。

优选地，所述步骤1)中大花红景天药材为50～80目的粉末，优选为50目的粉末。

优选地，所述步骤1)中微波提取之前，还包括采用水浸泡大花红景天药材的步骤；更优选地，所述浸泡时间为0.5～3小时，优选为1.5小时。

优选地，所述步骤1)中微波提取的功率为119～700w，优选为462w。

优选地，所述步骤1)中微波提取的次数为3次。

优选地，所述微波提取的时间为90秒。

优选地，所述微波提取的水用量为20倍。

优选地，所述步骤2)中二次醇沉的乙醇含量分别为：第一次60～70％，优选60％；第二次80～90％，优选85％；更优选地，所述二次醇沉的时间分别为12～48小时，优选第一次醇沉时间为48小时，第二次醇沉时间为24小时。

优选地，所述步骤2)所得滤液在精制之前，还包括加碱调节pH值的步骤。

优选地，所述pH值为pH 8～10，优选为pH 8；更优选地，所述调pH值后还包括于2～8℃下静置的步骤，所述静置的时间为12～48小时，优选为24小时。

优选地，所述步骤3)中所使用的大孔树脂选自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8中的一种或多种，优选为SP825。

优选地，所述树脂与大花红景天药材的重量比为1∶0.5以上。

优选地，所述步骤3)中洗脱大孔树脂的操作如下：先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5％乙醇洗脱，最后用10％乙醇洗脱，再合并各洗脱液并浓缩；更优选地，所述5％乙醇洗脱的用量为1～9BV，优选为3BV；所述10％乙醇洗脱的用量为2～10BV，优选为10BV。

优选地，所述步骤3)中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为0.5～1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1∶10～1∶30，上柱流速为2～4BV/h；优选地，步骤3)中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1∶30，上柱流速为2BV/h。

在一个优选实施方案中，本发明提供的方法包括以下步骤：

1)提取：取大花红景天药材，粉碎成50～80目的粉末，优选为50目的粉末，加水浸泡0.5～3小时，优选为1.5小时，微波119～700w，优选为462w功率提取，优选提取3次，合并提取液，浓缩，得20℃下相对密度为1.00～1.10的浓缩液；

2)纯化：加乙醇使步骤1)所得浓缩液中乙醇含量达到60～70％，优选为60％，2～8℃下静置12～48小时，优选为48小时，过滤，滤液再加乙醇使含醇量达到80～90％，优选为85％，2～8℃下静置12～48小时，优选为24小时，过滤，滤液加碱调节pH值为pH 8～10，优选为pH8，2～8℃下静置12～48小时，优选为24小时，过滤，得滤液；

3)精制：将步骤2)所得滤液浓缩至0.5～1.5g/ml的上样浓度，优选为1.5g/ml的上样浓度，以2～4BV/h的流速上SP825型大孔树脂柱，优选为2BV/h，先用水冲洗至洗脱液近无色，再用1～9BV，优选为3BV的5％乙醇进行洗脱，最后用2～10BV，优选为10BV的10％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，浓缩液继续上SP825型大孔树脂柱洗脱，反复2～3次，即得。

此外，本发明还提供了上述的方法制备的红景天苷或者包含上述方法制备的红景天苷的药物组合物。

与现有技术相比，本发明提供的制备红景天苷的方法至少具有以下几方面的优点和有益效果：

1)微波提取，红景天苷的提取效率较高，工艺过程较为简单，且提取时间短；

2)纯化和精制工艺过程简单，得到的红景天苷单体纯度较高，并且精制工艺中的大孔树脂柱可以反复应用，后处理简单，成本较低，适用于工业化大生产；

3)整个制备工艺过程中只用到乙醇和水，无其它有机溶剂，比较安全，所制备的红景天苷可用于药品生产；

4)提取溶剂仅为水，与使用高浓度乙醇的提取方法相比，成本较低；

5)红景天苷的得率较高，可以提高资源利用率，节约资源。

6)得到的红景天苷纯度较高，可直接用作注射剂的原料。

可见，本发明提供了一种新的制备红景天苷的方法，可以提高红景天苷的收率，节省资源，制备得到的高纯度红景天苷，可以用作注射剂等剂型的原料药，据此可以开发出一种速效的、纯度较高、高生物利用度、治疗心脑血管疾病的药物。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

以下各实施例中，红景天苷的含量依据《中国药典》2010版一部中规定的HPLC方法测定。

以下各实施例中使用的原料大花红景天药材(购自普宁中药材市场)，测定红景天药材中红景天苷含量为0.51％(按干品计)，符合药典规定的红景天药材中红景天苷含量不得低于0.5％(按干品计)的规定，认为该药材合格。

实施例1对大花红景天的提取工艺的研究

本实施例对大花红景天提取工艺中的提取方法、提取溶剂、原料粒度、浸泡时间、提取条件等分别进行了研究。

1.提取方法的考察

取过50目筛的大花红景天药材3份，每份10g，分别用热回流提取(每次加10倍量的水，加热温度100℃，提取3次，每次提取3小时)；超声波提取(每次加10倍量的水，超声波频率45KHz，提取3次，每次提取1小时)；微波提取(每次10倍量的水，微波功率462w，提取3次，每次提取1.5分钟)；将提取液过滤，减压浓缩至相对密度约1.00(20℃时测定)，稀释定容至100ml，测定红景天苷含量，结果见表1。

表1提取方法考察结果

提取方法	10g药材中红景天苷提取量(mg)	提取率(％)
			微波提取	57.439	129.12
超声提取	40.937	92.21
			热回流提取	33.904	76.39

根据表1的结果可见，与其他两种提取方法相比，微波提取的提取率显著提高，并且提取时间短，因此选择微波提取作为红景天苷的提取方法。

2.提取溶剂的考察

取过50目的大花红景天药材5份，每份5g，分别用10倍量的水、20％、40％、60％、80％乙醇作为溶剂，微波提取3次，微波功率462w，每次1分钟，提取液过滤，减压浓缩至相对密度约为1.00(20℃时测定)，定容至50ml，测定红景天苷含量。结果见表2。

表2提取溶剂考察结果

由表2的结果可见，80％乙醇对红景天苷的提取率最高，但在实验过程中，使用含乙醇的溶剂提取时会产生爆沸现象，且在水沉过程处理时很多的细小的沉淀难以滤除去，给实验造成一定的负担，同时用80％乙醇提取成本较高，因此，选择水作为提取溶剂。

3.微波功率的考察

取过50目的大花红景天药材5份，每份5g，分别用不同频率(低档、中低档、中档、中高档、高档)微波提取，加10倍量的水提取3次，每次1分钟，提取液过滤，减压浓缩至相对密度约为1.00(20℃时测定)，定容至50ml，测定红景天苷含量。结果见表3。

表3微波功率考察结果

根据表3的结果，选择中档(功率462w)作为微波提取的功率。

4.原料粒度的考察

分别取过24、50、65、80目筛的大花红景天药材各5g，分别加入10倍的水，微波提取3次，功率462w，每次1分钟，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度约为1.00(20℃时测定)，定容至50ml，测定红景天苷含量，结果见表4。

表4粒度考察结果

从表4可以看出，粒度越细，红景天苷提取率越高，但实验时处理越困难，且难以应用于大生产，因此选择50目做为红景天原料提取粒度。

5.浸泡时间的考察

分别取7份过50目的大花红景天药材5g，在第一次微波提取之前加10倍量的水浸泡，时间依次为0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h，微波提取3次，每次加10倍量水，每次提取时间为1min，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度约为1.00(20℃时测定)，定容至50ml，测定红景天苷含量，结果见表5。

表5浸泡时间考察结果

从表5的结果看出，浸泡1.5小时，红景天苷提取率最高，因此将浸泡时间选择1.5小时。

6.提取条件的考察

选择对微波提取红景天苷影响较大的三个因素即加溶剂量、提取时间、提取次数做正交试验，分别取9份过50目的大花红景天药材2g，浸泡1.5h，按下述安排的条件提取，提取液过滤，减压浓缩至相对密度约为1.00(20℃时测定)，定容至20ml，HPLC法测定含量，用红景天苷的提取量来做为考察指标，表6A为因素水平表。

表6A提取条件考察的因素水平表

表6B提取条件考察结果

表6C实验结果方差分析表

从上表可以看出，R_C＞R_B＞R_A，C因素(提取次数)为影响微波提取红景天苷最大的因素，其次是B因素(提取时间)，A因素的影响最小，方差分析显示，C因素(提取次数)对红景天苷的影响具有极显著性差异，这与红景天苷的提取率基本一致。

因此，结合实际的工业生产考虑，选择A₂B₃C₃较为合理，即加20倍量的水，提取3次，每次90秒。

7.三次工艺验证实验：

取3份过50目筛的大花红景天粉末，每份2g，按照上述最佳工艺进行提取，即加20倍量的水，提取3次，每次90秒，测定提取液中红景天苷含量，结果如表9所示。

表7三次工艺验证结果

从上表可以看出，该工艺稳定可行。

实施例2对大花红景天的纯化工艺的研究

当提取液中乙醇含量达到60％～70％时，除鞣质、树脂等外，其他杂质已基本上沉淀而除去，如果分2次加入乙醇，浓度逐步提高，最终达到75％～85％，除去杂质的效果更好，因此选择两次醇沉法除去杂质。

1.第一次醇沉工艺的考察

提取液的相对密度、醇沉浓度、醇沉时间为影响纯化工艺的主要因素，对此三因素，选择我们选择L₉(3⁴)正交实验进行优化，每个因素中选出常规的三个水平考虑，表8A为因素水平表：

表8A醇沉工艺因素水平表

取9份过50目筛的大花红景天药材，每份20g，分别加20倍量的水，微波提取3次，功率462w，每次90秒，合并提取液，提取液分别浓缩为一定相对密度(20℃测定)的浓缩液，加乙醇使含醇量达到一定的浓度，2～8℃静置一定时间，过滤，分别测定滤液中红景天苷含量和沉淀重量。实验过程中的密度、浓度及时间按照下述正交试验的编号进行，实验结果见表8B。

表8B醇沉工艺实验结果及分析

从上表可以看出，R_A＞R_C＞R_B，A因素(相对密度)为影响一次醇沉实验中红景天苷最大的因素，其次是C因素(静置时间)，B因素的影响最小。方差分析显示，三个因素对红景天苷的影响均没有极显著性差异。从沉淀的情况来看，B因素(醇沉浓度)的对沉淀质量的影响较大。

从实际的工业生产成本及除杂质效果考虑，选择A₂B₂C₃较为合理，即浓缩到相对密度为1.10(20℃测定)的溶液，加乙醇使含醇量达到60％，2～8℃静置48小时。

2.三次工艺验证

取46g过50目筛的大花红景天粉末，分别加20倍水，浸泡1.5小时，微波提取三次，功率462w，每次90秒，合并提取液，提取液分别浓缩到相对密度为1.10(20℃测定)的浓缩液，加乙醇使含醇量达到60％，2～8℃静置48小时，过滤，分别测定滤液中红景天苷含量和沉淀重量。结果见表9。

表9三次工艺验证结果

从表9结果可以看出，该工艺稳定可行。

3.二次醇沉乙醇浓度的考察

取45g过50目筛的大花红景天药材，加20倍水，浸泡1.5小时，微波提取三次，功率462w，每次90秒，合并提取液，提取液分别浓缩到相对密度为1.10(20℃测定)的浓缩液，加乙醇使含醇量达到60％，2～8℃静置48小时，过滤，滤液平均分成3份，加乙醇使含醇量分别为80％、85％、90％，2～8℃静置24小时，过滤，分别测定滤液中红景天苷含量和沉淀重量。结果见表10。

表10二次醇沉乙醇浓度的考察结果

含醇量	药液中红景天苷含量(g)	沉淀重量(g)	红景天苷转移率(％)
				80％	0.0631	0.0881	89.63
85％	0.0656	0.1497	93.13
				90％	0.0651	0.2224	92.48

从表10结果可以看出，用85％乙醇溶液进行二次醇沉转移率最高，用90％乙醇容液进行二次醇沉沉淀重量最高，结合工业生产的实际，选择85％乙醇作为二次醇沉乙醇浓度。

4.二次醇沉静置时间的考察

取45g过50目筛的大花红景天药材，分别加20倍水，浸泡1.5小时，微波提取三次，功率462w，每次90秒，合并提取液，提取液分别浓缩到相对密度为1.10(20℃测定)的浓缩液，加乙醇使含醇量达到60％，2～8℃静置48小时，过滤，滤液平均分成3份，分别加乙醇使含醇量达到85％，2～8℃分别静置12、24、48小时，过滤，分别测定滤液中红景天苷含量和沉淀重量。结果见表11。

表11二次醇沉静置时间的考察结果

静置时间(h)	药液中红景天苷含量(g)	沉淀重量(g)	红景天苷转移率(％)
				12	0.0596	0.1385	79.56
24	0.0633	0.1445	84.42
				48	0.0642	0.1534	85.67

从表11结果可以看出，静置48小时，红景天苷转移率最高，其次是24小时，但由于而者相差不大，所以选择24小时作为二次醇沉静置时间。

5.碱溶液醇沉淀法除鞣质pH值考察

取75g过50目筛的大花红景天药材，分别加20倍水，浸泡1.5小时，微波提取三次，功率462w，每次90秒，合并提取液，提取液分别浓缩到相对密度为1.10(20℃测定)的浓缩液，加乙醇使含醇量达到60％，2～8℃静置48小时，过滤，滤液加乙醇使含醇量达到85％，2～8℃静置24小时，过滤，滤液平均分成5份，分别调pH值到8.0、8.5、9.0、9.5、10.0，2～8℃静置24小时，过滤，测定滤液中红景天苷含量和沉淀重量。结果见表12。

表12碱溶液醇沉淀法除鞣质PH值考察结果

PH值	8.0	8.5	9.0	9.5	10.0
						药液中红景天苷含量(g)	0.0535	0.0582	0.0619	0.0591	0.0598
沉淀重量(g)	0.0442	0.1148	0.2638	0.3527	0.3960
						红景天苷转移率(％)	79.86	86.87	92.30	82.70	83.58

从表12结果看出，pH值为9.0的时候，溶液中红景天苷转移率最高，而随着pH值的增高，红景天苷的转移率逐渐下降，可能有一部分红景天苷与碱反应损失了，因此选择pH为9.0，但pH 8.5、9.0、9.5、10.0的滤液放置一段时间后仍有沉淀析出，后检测红景天苷含量，发现均降低，因此，pH值选择调到8.0。

6.碱溶液醇沉淀法除鞣质时间考察

取45g过50目筛的大花红景天粉末，分别加20倍水，浸泡1.5小时，微波提取三次，功率462w，每次90秒，合并提取液，提取液分别浓缩到相对密度为1.10(20℃测定)的浓缩液，加乙醇使含醇量达到60％，2～8℃静置48小时，过滤，滤液加乙醇使含醇量达到85％，2～8℃静置24小时，过滤，滤液平均分成3份，调pH值到8.0，2～8℃静置12、24、48小时，过滤，测定滤液中红景天苷含量和沉淀重量。结果见表13。

表13碱溶液醇沉淀法除鞣质时间考察结果

静置时间	药液中红景天苷含量(g)	沉淀重量(g)	红景天苷转移率(％)
				12	0.0644	0.1793	82.82
24	0.0678	0.2196	85.30
				48	0.0637	0.2523	80.50

从表13可见，2～8℃静置24小时，红景天苷的转移率最高，静置48小时得到的沉淀量最大，可能有一部分红景天苷与碱生成了盐，从而导致了红景天苷转移率降低，因此选择24小时作为除鞣质的静置时间。

实施例3对大花红景天的精制工艺的研究

本实施例对大花红景天精制工艺中的树脂型号、纯化工艺条件等分别进行了研究。

1.大孔树脂型号的选择

取NK-2(购自天津精细化工有限公司)、SP825(购自日本三菱化工)、D101(购自日本三菱化工)、D301(购自日本三菱化工)、AB-8(购自南开大学化工厂)、HP-20(购自日本三菱化工)、SP700(购自日本三菱化工)、S-8(购自安徽三星树脂科技有限公司)8种不同型号已经过预处理(预处理过程：以0.5BV的乙醇浸泡新购树脂24小时，然后用树脂体积3倍的乙醇与水交替反复洗脱2～3次，至醇洗脱液加水不显混浊，最终以水洗脱，保持分离使用前的状态)的大孔树脂各5g，置250ml锥形瓶中，分别加入红景天提取液25ml，置振荡器中振摇3h，静置1h，精密量取上清液1ml，HPLC法测定大孔树脂对红景天苷的吸附量，计算吸附率。然后，将以上8种树脂滤出，水洗、滤纸吸干、精密加入25ml 70％乙醇溶液，置振荡器中振摇3h，静置1h，精密量取上清液1ml，同法测得大孔树脂对红景天苷的解吸附量，计算解吸附率。结果见表14。

表14大孔树脂型号的考察结果

从表14的结果可以看出，SP825的吸附率(68.79％)仅次于SP700(71.17％)，但解吸附率(97.17％)明显高于SP700(95.32％)。

结论：选择SP825来纯化红景天苷。

2.最大上样量的选择

取5份预处理后的SP825型大孔树脂各5g，分别装柱(φ2.2cm×8.5cm)，按照树脂与生药材重量比为1∶0.5，1∶1，1∶2，1∶3，1∶4的比例，将红景天提取液动态上样，收集残留液，水洗脱8BV，合并残留液与水洗脱液，浓缩定容后，测定红景天苷的含量，观察红景天苷的流失量与上样量之间的关系，实验结果见表18。

表15最大上样量的考察结果

可见，当树脂与生药材之比为1∶0.5时，红景天苷流失量与上样量之比为4.45％，这个值已经偏大。

结论：树脂与生药材重量之比最大不得低于1∶0.5。

3.5％乙醇用量的选择

黄松(独脚金药材质量研究，广州中医药大学博士论文，2006)认为用大孔树脂柱纯化时先用水可以洗脱除掉大分子水溶性化合物，5％乙醇可以除掉大极性分子，如鞣质，多糖等。因此，在用洗脱剂洗脱前，先用水及5％乙醇除掉一些杂质以利于后面得到高纯度的红景天苷。

分别取5份SP825型大孔树脂，每份5g，装柱(φ2.2cm×8.5cm)，分别用1BV、3BV、5BV、7BV、9BV的5％乙醇液洗脱，测定洗脱液中红景天苷含量，结果见表16。

表165％乙醇用量的考察结果

选择5％乙醇溶液洗脱的目的是尽量除掉一些极性较大的水溶性杂质，如多糖、鞣质等，同时又要使损失的红景天苷尽量少。从表17结果看出，用3BV的5％乙醇对红景天提取液进行洗脱，对红景天苷的洗脱率只有0.123％，对红景天苷的影响很小，可以忽略不计。因此，选择3BV的5％乙醇对红景天提取液进行纯化。

4.洗脱剂浓度的选择

取预处理后的SP825型大孔树脂10g装柱(φ2.2cm×8.5cm)，按照大孔树脂与生药材1∶0.5的比例加入红景天提取液，先用水洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，并记录下用水量，再依次加入5％、10％、15％、20％、25％的乙醇，每个浓度的乙醇均加10BV，依次收集，相同浓度的乙醇洗脱液合并，测定红景天苷含量，实验结果见表17。

表17洗脱剂浓度的考察结果

乙醇浓度	5％	10％	15％	20％	25％
						红景天苷含量(mg)	4.4	7.6	1.7	0.63	0
红景天苷洗脱率(％)	29.71	51.13	11.45	4.23	0

本实验分别选用了相同体积的5％、10％、15％、20％、25％的乙醇溶液作为红景天苷的洗脱剂，以各自收集的洗脱液中红景天苷的含量和洗脱率为考察指标，选择合适的洗脱溶剂。从表17的实验结果可以看出，相同洗脱体积条件下，10％乙醇溶液对红景天苷的洗脱率最高。由于前面不同浓度乙醇溶液的洗脱，红景天苷基本已完全被洗脱下来，25％乙醇溶液洗脱下来的洗脱液中已检测不出红景天苷，因此其红景天苷含量和洗脱率均为0。因此，选择10％乙醇作为红景天苷的洗脱溶液。

5.洗脱剂用量的选择

取5份预处理好的大孔树脂10g装柱(φ2.2cm×8.5cm)，按树脂与生药材的比例为1∶0.5加入红景天提取液，先用水洗至洗脱液无色，大约需要4BV，再用3BV的5％乙醇洗脱，然后用10％的乙醇分别洗脱2BV，4BV，6BV，8BV，10BV，合并各洗脱液，浓缩定容后测定浸膏量、红景天苷含量及酪醇含量，测定结果见表18。

表18洗脱剂用量的考察结果

从表18可以看出，当10％的乙醇洗脱体积为10BV时，对红景天苷的洗脱率达到76.2％，从上表的趋势可以看出，如果增大洗脱体积，可能会洗脱下更多的酪醇，因此，选择10BV作为洗脱红景天苷的溶剂用量。

因此，红景天苷用10BV 10％乙醇溶液进行洗脱比较合适。

6.药液浓度、流速、径高比的选择

药液浓度、流速、径高比为影响纯化工艺的三个重要因素，也是国家食品药品监督管理局规定的中药注射剂需要明确的工艺参数之一。对此三个因素，选择L₉(3⁴)正交试验进行优化，每个因素选出三个水平进行考察，表19A为因素水平表。

表19A精制条件的考察因素水平表

取9份10g SP825型大孔树脂，按照上述径高比分别装柱，分别取20g红景天药材9份，按照前述已确定的提取纯化工艺进行提取纯化，分别浓缩成上述药液浓度，动态上柱，按照已确定的洗脱剂浓度(10％乙醇溶液)进行洗脱10BV，收集洗脱液，测定洗脱液中红景天苷含量和纯度。

表19B精制条件的考察实验结果

从上表可以看出，对于红景天苷洗脱量来说，R_A＞R_B＞R_C，A因素(径高比)为影响红景天苷最大的因素，其次是B因素(药液浓度)，C因素的影响最小，方差分析显示，三个因素对红景天苷的影响均没有极显著性差异。从得到的红景天苷的纯度来看，B因素(药液浓度)对红景天苷纯度的影响较大。

因此，结合两个因素考虑，选择A₃B₂C₁较为合理，即浓缩到相对密度为1.5g/ml(生药材重量与溶液体积之比)的溶液，大孔树脂柱的径高比为1∶30，流速为2BV/h。

7.三次验证实验

取3份10g SP825型大孔树脂，按照径高比1∶30装柱，分别取20g红景天药材3份，按照前述已确定的提取纯化工艺进行提取纯化，分别浓缩成药液浓度为1.5g/ml(生药材与药液体积之比)，动态上柱，用10％乙醇溶液以2BV/h的流速冲10BV，合并洗脱液，测定洗脱液中红景天苷含量和纯度，结果见表20。

表20三次验证实验结果

分析：三次验证结果表明，该工艺稳定可行。

实施例4红景天苷的优选制备方法

称取210g红景天粉末(过50目筛)，加20倍水，浸泡1.5h，微波提取90s，提取三次，合并三次提取液，浓缩到相对密度1.10(20℃时测定)，加乙醇使含醇量达到60％，2-8℃静置48小时，过滤，滤液加乙醇使含醇量达到85％，2-8℃静置24小时，过滤，滤液加碱调pH值到8.0，静置24小时，过滤，浓缩到1.5g/ml(生药材质量与溶液体积之比)，装入SP825型大孔树脂，大孔树脂与生药材的质量之比是2∶1，径高比为30∶1，流速2BV/h，分段收集，根据液相测定的结果，以红景天苷含量大于90％为标准，达标的进行合并，不达标的反复精制2-3次即可达到标准，最后得到红景天苷约480mg(纯度92％)。

Claims

1.一种制备红景天苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1）提取：取大花红景天药材，加水微波提取，滤过，浓缩，得浓缩液，其中微波提取每次加10倍量的水，微波功率462 W，提取三次，每次提取1.5分钟；

2）纯化：将步骤1）所得浓缩液进行二次醇沉，得滤液；和

3）精制：将步骤2）所得滤液上大孔树脂，洗脱，浓缩，干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中大花红景天药材为50～80目的粉末。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，大花红景天药材为50目的粉末。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中微波提取之前，还包括采用水浸泡大花红景天药材的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述浸泡时间为0.5～3小时。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述浸泡时间为1.5小时。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中二次醇沉的乙醇含量分别为：第一次60～70%；第二次80～90%。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中第一次醇沉的乙醇含量为60%。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中第二次醇沉的乙醇含量为85%。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述二次醇沉的时间分别为12～48小时。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，第一次醇沉时间为48小时，第二次醇沉时间为24小时。

12.根据权利要求1-6和8-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤2）所得滤液在精制之前，还包括加碱调节pH值的步骤。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述pH值为pH8～ 10。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述pH值为8。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述调pH值后还包括于2～8℃下静置的步骤，所述静置的时间为12～48小时。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述静置的时间为24小时。

17.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2）所得滤液在精制之前，还包括加碱调节pH值的步骤。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述pH值为pH8～10。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述pH值为8。

20.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述调pH值后还包括于2～8℃下静置的步骤，所述静置的时间为12～48小时。

21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述静置的时间为24小时。

22.根据权利要求1-6，8-11及13-21中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中所使用的大孔树脂选自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8。

23.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂为SP825。

24.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述树脂与大花红景天药材的重量比为1：0.5以上。

25.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中所使用的大孔树脂选自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8。

26.根据权利要求25所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂为SP825。

27.根据权利要求25所述的方法，其特征在于，所述树脂与大花红景天药材的重量比为1：0.5以上。

28.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中所使用的大孔树脂选自NK-2、SP825、D101、D301、AB-8、HP-20、SP700和S-8。

29.根据权利要求28所述的方法，其特征在于，所述的大孔树脂为SP825。

30.根据权利要求28所述的方法，其特征在于，所述树脂与大花红景天药材的重量比为1：0.5以上。

31.根据权利要求1-6，8-11，13-21及23-30中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的操作如下：先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱，最后用10%乙醇洗脱，再合并各洗脱液并浓缩。

32.根据权利要求31所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为1～9BV。

33.根据权利要求32所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为3BV。

34.根据权利要求31所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为2～10BV。

35.根据权利要求34所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为10BV。

36.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的操作如下：先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱，最后用10%乙醇洗脱，再合并各洗脱液并浓缩。

37.根据权利要求36所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为1～9BV。

38.根据权利要求37所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为3BV。

39.根据权利要求36所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为2～10BV。

40.根据权利要求39所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为10BV。

41.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的操作如下：先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱，最后用10%乙醇洗脱，再合并各洗脱液并浓缩。

42.根据权利要求41所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为1～9BV。

43.根据权利要求42所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为3BV。

44.根据权利要求41所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为2～10BV。

45.根据权利要求44所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为10BV。

46.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的操作如下：先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱，最后用10%乙醇洗脱，再合并各洗脱液并浓缩。

47.根据权利要求46所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为1～9BV。

48.根据权利要求47所述的方法，其特征在于，所述5%乙醇洗脱的用量为3BV。

49.根据权利要求46所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为2～10BV。

50.根据权利要求49所述的方法，其特征在于，所述10%乙醇洗脱的用量为10BV。

51.根据权利要求1-6，8-11，13-21，23-30及32-50中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为0.5～1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：10～1：30，上柱流速为2～4BV/h。

52.根据权利要求51所述的方法，其特征在于，步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：30，上柱流速为2BV/h。

53.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为0.5～1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：10～1：30，上柱流速为2～4BV/h。

54.根据权利要求53所述的方法，其特征在于，步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：30，上柱流速为2BV/h。

55.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为0.5～1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：10～1：30，上柱流速为2～4BV/h。

56.根据权利要求55所述的方法，其特征在于，步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：30，上柱流速为2BV/h。

57.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为0.5～1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：10～1：30，上柱流速为2～4BV/h。

58.根据权利要求57所述的方法，其特征在于，步骤3）中洗脱大孔树脂的条件如下：上柱滤液浓度为1.5g/ml，大孔树脂的径高比为1：30，上柱流速为2BV/h。

59.根据权利要求1-6，8-11，13-21，23-30，32-50及52-58中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1）提取：取大花红景天药材，粉碎成为50目的粉末，加水浸泡1.5小时，微波462W功率提取3次，合并提取液，浓缩，得20℃下相对密度为1.00～1.10的浓缩液；

2）纯化：加乙醇使步骤1）所得浓缩液中乙醇含量达到60%，2～8℃下静置48小时，过滤，滤液再加乙醇使含醇量达到85%，2～8℃下静置24小时，过滤，滤液加碱调节pH值为pH8，2～8℃下静置24小时，过滤，得滤液；

3）精制：将步骤2）所得滤液浓缩至1.5g/ml的上样浓度，以2BV/h的流速上SP825型大孔树脂柱，先用水冲洗至洗脱液近无色，再用3BV的5%乙醇进行洗脱，最后用10BV的10%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，浓缩液继续上SP825型大孔树脂柱洗脱，反复2～3次，即得。

60.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

61.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

62.根据权利要求31所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

63.根据权利要求51所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：