CN1058990A - 植物毒素白树因的蛋白质结构 - Google Patents

Abstract

编码白树因或编码某种具有抑制细胞蛋白质合 成但不粘附在细胞表面受体上的活性的多肽的 cDNA结构，以及白树因的氨基酸顺序。

Description

本发明涉及纯化的白树因及由此产生的毒性片段，以及编码白树因的DNA顺序和通过DNA重组技术利用DNA生产白树因及其毒性片段和融合蛋白质。更确切地说，本发明讲的是白树因的初级氨基酸顺序及编码白树因的DNA顺序，以及合成白树因及其毒性片段的生产。

用于任何疾病治疗的药物的设计所面临的主要问题是其特异性和功效。用于癌症治疗的各种药物也同样面临这类问题。使毒性药物选择性地作用于某些肿瘤已成为过去几年中热衷研究的主题（Thorpe，1985，Biol  Clin  Applications，84：475-512;Moller  ed.，1982，Immun.Rev.62：1-215）。近些年来，单克隆抗体和多克隆抗体，植物血凝素，淋巴激活素以及激素，这些能识别肿瘤细胞表面特异决定簇（determinants）的物质都已被用作载体将毒性药剂输送进细胞，使后者能够发挥它们的细胞毒性潜力（Blattler，et  al.，1985，Biochemistry，24：1517-1524;Frankel，et  al.，1985J.Biol.Res.Modif.，4：437-446;Reimann，et  al.，1988，J.Clin.Invest.82：129-138;Schwartz  and  Vale，1988，Endocrinology，122：1695-1700;Scott，et  al.，1987，J.Natl.Cancer  Inst.79：1163-1172;Singh，et  al.，1989，Biol.Chem.264：3089-3095;Srinivasan，et  al.，1985，FEBS  Letters，192：113;Schwartz，et  al.，1987，Endocrinology，121：1454-1460）。在这些传递性药剂中，迄今已研究过的毒性部分包括：放射性核素（Ghose，et  al.，1967，Br.Med.J.1：90-96），通常用于癌症化疗的细胞毒性药物（Thorp  and  Ross，1982，Immun.Rev.62：119-157;Deweger，et  al.，Immun.Rev.62：29-45;Arnon  and  Sela，1982，Immun.Rev.62：5-27;Pimm，et  al.，1982，Cancer  Immun.Immunotherap.12：125-134;Rowl  and  and  Axton，1985，Cancer  Immun.Immunotherap.19：1-7）以及来自细菌和植物如白喉或蓖麻毒的蛋白质（Jansen，et  al.，1982  Immun.Rev.62：185-216;Raso，1982，Immun.Rev.62：93-117;Vitetta，et  al.，1982，Immun.Rev.62：159-183，Nelville  and  Youle，1982，Immun.Rev.62：47-73;Thorpe，et  al.，1981，Eur.J.Biochem.116：447-454）。通过以某种抗体或激素取代其非特异性的B链而设计出一种特异性的分子。

细菌和植物毒素，如白喉毒素（DT），绿脓杆菌毒素A（Pseudomo-nas  aeruginosa  toxinA），红豆因，蓖麻毒，槲寄生，modeccin以及志贺氏菌毒素，都是有效的杀细胞药剂，这是由于它们具有破坏关键性细胞功能的能力。例如，白喉毒素和蓖麻毒分别通过使伸长因子-2失活和使核糖体60s亚基失活而抑制细胞的蛋白质合（Bacterial  Toxins  and  Cell  Membranes，Eds.Jelajaszewicz  and  Wadstrom，1978，Academic  Press，P.291）。因为这些毒素是酶，通过催化作用而不是通过化学数量增加而起作用，因此它们极其有效。这此毒素的分子通常由具酶促活性多肽链或片段（通常称为“A”链或片段），与一个或多个多肽链或片段（通常称为“B”链或片段）连接组成，后者粘附到细胞的表面并使A链到达它的活性位点（如细胞溶质中）以行使其破坏功能。这种使A链进入细胞溶质中的作用在不同地方分别被称为“内在化in-ternalization”，“中毒intoxication”，或“易位translocation”。这些蛋白质毒素属于一类带有两条链（分别称为A链和B链）的物质。B链具备粘附于几乎所有细胞的能力，而行使细胞毒性活性的却是A链。一般认为A链必须及时地从B链中解离出来-通常通过二硫键的还原-以使A链具有功能。因为这些天然毒素的B链可识别并粘附于不同类型细胞的受体，因此它们通常不能选择性地作用于给定的细胞或组织类型。

某种当单独使用时对各种细胞不具备细胞毒性的毒素分子的实用性是有限的。某些天然存在的单链毒素分子因为它们本身并不能附着于细胞表面的受体，因此通常不能被细胞摄入。它们的利用提供了一些当单独使用时对大多数细胞（如果不是所有细胞的话）相对来说是没有毒性的毒素分子。到目前为止，这样的已知天然存在的单链毒素包括（当然并不局限于）：美国商陆抗病毒蛋白（Ramakrishnan  and  Houston，1984，Cancer  Res.44：201-208），皂角苷（Thorpe，et  al.，1985，J.Natl.Cancer  Inst.75：151-159），以及白树因（Stirpe，et  al.，1980，J.Biol.Chem.255：6947-6953）。这些蛋白质在游离形式时对细胞是没有毒性的，但是一旦它们进入细胞即可抑制细胞的蛋白质合成。然而，这些单链毒素在纯的形式下的利用是很有限的，因为事实上，它们必须从植物资源中精炼出来，而它们在这些植物中的含量本来就比较低，并且在这些植物中这类浓缩的毒素的再生性依赖于该植物的生长条件以及植物的收成。

白树因（Gelonin）是一种从多花白树（Gelonium  multiforum的种子中分离得到的单链多肽，分子量大约为28，000-30，000kd（千道尔顿）。白树因是一种碱性糖蛋白，等电点大约为8.15，含有甘露糖和氨基葡糖残基（Falasca，et  al.，1982，Biochem  J.207：505-509）。对比其他植物和细菌毒素，这种蛋白质本身对细胞没有毒性，但当它通过载体或媒介物而被运送到细胞时，它所以破坏核糖体60s亚基。体内和体外的生物学数据都表明白树因等价于其他植物毒素甚至超过它们。事实上，若将白树因在体外和体内的轭合物与其他的A链轭合物作一比较，就会发现它具有相似的功效，选择性更好，肿瘤定位作用更强，并且具有更显著的治疗效果（Sivan，et  al.，1987，Cancer  Res.47：3169-3173）。然而，从自然资源中获取可再生的，很容易拿到的白树因仍是有限的。此外，从植物资源中精炼纯化白树因也十分困难，产量很低。

实验表明，白树因单独使用时能引起小鼠流产，并且增加依赖细胞的细胞毒性的抗体（Yeung，et  al.，1988，Internatl.J.Peptide  Pro-tein  Res.31：265-268）。

一些研究人员已将白树因用作通过化学法粘附于单克隆抗体或肽类激素的细胞定向配位体的细胞毒性剂。然而，白树因和细胞定向部分的化学修饰会降低定向效果和白树因本身的细胞毒性效力。而且，白树因的天然资源很易受植物的收成的变化和生长影响，植物生长会影响白树因的胞毒活性。而利用化学法或DNA重组技术生产合成白树因的技术提供了这种毒素丰富的可再生资源。

本发明提供了被纯化的白树因，它具有图1所示的氨基酸顺序。该项发明也提供了图2所示的编码白树因的DNA顺序。利用发明中的氨基酸和DNA顺序，通过重组技术大量生产基本纯化的白树因将提供大量的毒素，而在此之前，它是从自然资源的提炼中不可能做到的。

图1所示为白树因的氨基酸顺序。

图2表明了编码白树因的cDNA结构。

图3表明了白树因的氨基酸顺序与栝楼因（trichosanthin），蓖麻毒A链，从蓖麻中分离得到的凝集素前体和红豆因A链的氨基酸顺序之间的同源性。

图4表明了溴化氰片段的高压液相色谱（HPLC）图形。

图5表明了白树因经（A）赖氨酸氨肽酶Lys-c（B）葡萄球菌蛋白酶，以及（C）羟胺消化后的HPLC图谱。

图6表明了白树因（A），栝楼因（B），红豆因（C），蓖麻毒（D），以及凝集素前体（E）的疏水性。

本发明中所用到的术语“substantially  pure”是指这种多肽制剂基本上已不含自然状态下通常伴随着白树素的其他植物蛋白质，并能表现可重复的电泳或色谱反应，洗脱图形以及毒理活性测定的结果。术语“基本纯”并不排除白树因蛋白质与其他化合物的人造或合成的混合物。

白树因是利用资料中已提到的那些技术从多花白树（Gelonium  multiforum）的种子中精炼而来的。氨基酸顺序是利用径改进的爱德曼降解法确定的。

将白树因样品加到反向相反应室中进行爱德曼降解。发现白树因的N-末端是不均一的（该蛋白质分子中50%明显比其他的蛋白质分子短一个氨基酸）。这种不均一性使得测序要大大超过40个循环，变得十分困难。因此，为了进一步确定该序列中的氨基酸，只得用酶促裂解法。

蛋白质的内部顺序通常是通过酶裂解和化学法裂解的结合使用，将大的蛋白质分子消化或者切割成较小的片段然后进行测试分析得到。当将天然白树因置于不同的质溶性酶液中消化时，发现它不能被完全裂解。这部分是由于这种分子的N-末端存在一个二硫键。通过还原作用以及用碘乙酸进行烷基取代而使该键裂开将产生一个在酶促消化所需pH下比天然物质更难溶解的片段。将天然白树因用胰蛋白酶，赖氨酸氨肽酶（Lysc），葡萄球菌蛋白酶（V₈）以及胰凝乳蛋白酶共同消化，产生一些多数情况下来自该分子C-末端部分的肽链。这表明该分子的N-末端部分（从N-末端分析到残基70的天冬氨酸-丙氨酸-脯氨酸位点）不能迅速地为酶所消化。

当用溴化氰裂介时，白树因变为3个大的肽段。将蛋白质试样（0.2mg/ml）溶于70%甲酸。在溶液中加入溴化氰结晶，反应至少持续18小时。然后将该溶液用于稀释并加到小型测序柱中。在加入样品后，用1-10%的正丙醇与0.1%三氟乙酸（TFA）形成的梯度洗脱蛋白质片段。洗脱图见图4。

总蛋白或溴化氰片段的酶促消化产生许多重叠肽段。用赖氨酰肽链内切酶（溶于0.1%SDS，100mM  Tris，pH8.0），金黄色葡萄球菌蛋白酶（溶于0.1%SDS）或者胰旦白酶（溶于0.1%吐温20）进行酶促消化。白树因在49位点含有一个半胱氨酸残基，通过还原作用和羧甲基化作用产生一个在反向相HPLC上回收较好并且对酶催消化更敏感的蛋白质。因此，大多数酶促消化都是在0.1%SDS或0.1%吐温中进行。

在C-末端的160个残基通过溴化氰消化和酶促裂介排定顺序后，其余在40到70残基之间的未知顺序由利用磺乙酸进行半胱氨酸的化学修饰以及利用SDS对烷化蛋白的增溶作用来确定。然后将RCM烷化白树因用过量赖氨酸氨肽酶在37℃下进行短时间裂解（1-5小时）。HPLC洗脱图谱见图5A。

利用这种方法产生了一个以前未见到的新的顺序，其中有天冬酰胺-甘氨酸结合在一起。这种氨基酸结合可利用羟胺裂解的化学法使其分开。

羟胺裂解法的进行是先将100mg白树因加入2M新鲜配制的羟胺中（含0.2M  Tris，pH9.0，2MNacl，1mM  EDTA，10%乙醇），室温下温育7小时，再将整个反应混合物加到一个测序柱中。然后用溶于水中的1%TFA（三氟乙酸）洗柱，并用乙腈梯度洗脱或直接进行混合物的测序。经化学裂解后，产生一个含有200个氨基酸顺序的大的疏水肽，这些氨基酸顺序原来在残基70与天冬氨酰-丙氨酰-脯氨酸相连。洗脱图谱见图5C。

剩下来自残基40到50之间重叠顺序的短肽部分的氨基酸顺序通过在没有烷化作用的情况下用赖氨酸氨肽酸Lysc（溶于SDS）消化白树因来确定。这样就消除了该物质的大部分C-末端顺序。然后再将这种混合物利用胰凝乳蛋白酶消化，并将消化产物用HPLC分离。大肽段的序列分析表明存在一个从该分子N-末端的5个氨基酸开始的Ser-Thr-Lys顺序。这点可用于移去该分子的非均一部分和进行较长顺序的测定。

白树因蛋白包含258个氨基酸，其顺序已经在图1上显示。将白树因的氨基酸顺序与其它在顺序资料库中可查到的已知顺序作了比较（Genbank  PIR，EMVL），希望了解白树因是否与其他蛋白质有任何方面的同源性。将白树因的氨基酸顺序与其他已知氨基酸顺序的蛋白质作的比较表明白树因的氨基酸顺序是独特的。白树因某些部分的顺序与其他蛋白质的相应部分的同源性已被查明。例如，白树因与来自栝楼的α-栝楼素有36.0%的同源性，与来自印度甘草（Indian  Licquorice）的红豆因A链有33.8%的同源性，与来自蓖麻的凝集素前体有35.2%的同源性，与来自蓖麻的蓖麻毒蛋白D的A链有33.7%的同源性，与来自紫茉莉的抗病毒蛋白（MAP）有27.3%的同源性。白树因与这些蛋白质以及其他蛋白质的同源程度概括见图3和4。

图6A-6E所显示的疏水性图形表明了白树因的疏水区与栝楼因，蓖麻毒蛋白以及其他抑制核糖体功能的蛋白质的疏水区的相似性。

白树因结构的疏水图表明其疏水区位于残基35-80和150-180。这些区域是该分子可能发生真正折叠的部位。类似的疏水图形也可在其他毒素中观察到（见图6A-6E），这可能意味着它们的酶促活性中心就包含在这些折叠区域里。因此，活性酶促位点可能不会在该分子的线性区域找到，它们的结构可能需被充分折叠以得到合适的酶活中心。

重组体白树因可利用白树因的cDNA产生。可在该分子内部引进特异性的突变，以产生缺乏糖类基团的重组白树因，因为糖类基团会将白树因错误地引到抗体轭合物。重组白树因分子可通过定位突变发生使其具备①比天然分子更大的毒性活性，②一旦通过某种载体如单克隆抗体或某种靶性配位体如IL-2，EGF，IFN等等而被结合到细胞表面即能更有效地进入胞液，③阻碍溶酶体降解因此使其更稳定，能更长时间作为毒性部分起作用。

重组白树因分子也可被设计成融合产物，具有杀死细胞的其他功能特征，例如酶促活性，TNF，IFN活性，次级毒理活性，如白喉毒素（这里所谓的次级活性是指通过白树因以外的其他不同的生物学途径），由此产生一种“超级毒素Supertoxin”或一种具备多功能活性的毒素。

融合蛋白质也可设计来与白树因携带化学治疗药剂或用于放射疗法的同位素。白树因肽链可能用作堕胎剂，免疫抑制剂，抗癌药以及抗病毒药剂（如抗艾滋病毒药剂）。

下面将举例详细说明白树因的制备，特征以及氨基酸顺序。所用到的实验方法在下面的例子中将详细叙述。当然举这些例子并不是想对该项发明给予任何方式的限制。

例1

白树因的纯化和特性

白树因是基本上按照Stirpe等人描述的步骤从多花白树（Gelo-niummultiforum）的种子中分离得到的（Stirpe，et  al.，1980，J.Biol.Chem.255：6947-6953）简单地说，白树因先在盐缓冲溶液（pH7.4）中匀浆从种子中提取出来。将上清液在5mM磷酸钠（pH6.5）中透析后浓缩，然后利用下面所说的离子交换色谱法将白树因进一步纯化。白树因的纯度用高压液相色谱法（HPLC）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-Page）鉴定。白树因毒素迁移时为一条带（分子量大约为29，000到30，000道尔顿）。

白树因毒素的活性利用无细胞系统中的蛋白合成抑制实验来测定（见例2）。

将多花白树（Gelonium  multiforum）的种子剥下，坚果在含8倍体积的0.14MNacl溶液（含5mM磷酸钠，pH7.4）的均化器（匀浆器）中研磨。将匀浆在4℃下放置过夜，不停地搅拌，冰中冷却。在0℃，35，000×g下离心20分钟。移取上清液，将其在5mM磷酸钠溶液（pH6.5）中透析，并用pm10滤器浓缩。将样品放置在已用5mM磷酸钠（pH6.5）溶液平衡的CM-52离子交换柱（20×1.5cm）上。将束缚在离子交换树脂上的物质用400ml 0-0.3M的线性NaCl梯度洗脱（4℃），洗脱速度为每小时40毫升。收集5毫升洗脱成分。洗脱成分的收集是由分光光度计在280nm波长下监视进行。白树因在大约55-70洗脱部分中洗脱出来，是最后的主要洗脱峰。将这些洗脱部分集中起来，用0.1M NaCl的0.1M Na₂HPO₄缓冲液（pH7.4）进行透析。然后将样品加到Cibacron蓝色琼脂糖凝胶柱（24×2cm，事先已用0.1M Na₂HPO₄/0.1MNaCl缓冲液平衡），用3倍柱体积的缓冲液洗涤凝胶柱，并用400ml线性盐梯度（0.1M-2MNaCl）洗脱。吸附物质的洗脱用柱洗脱部分的Lowry测定监测。将含有单一蛋白峰的洗脱部分集中起来，4℃下对PBS溶液透析过夜。从聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的银染分析结果估计，经纯化的白树因毒素的纯度大于97%。其纯度以及每份制备物的分子量可利用50mM磷酸钠缓冲液（pH7.4）中TSK3000凝胶渗透柱的高压液相色谱分析和15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-page）检测。白树因以一条单一带迁移（分子量大约为29，000-30，000道尔顿）。

例2

白树因活性的测定

白树因的活性是利用胞外蛋白质合成抑制测定来检测的。胞外蛋白质合成抑制测定过程如下：依次加入50μl家兔网织红细胞溶胞液（融解后立即使用），每次加液后与下列成分混合起来：0.5ml  0.2M的Tris-HCl（pH7.8），8.9ml  1，2-亚甲基二醇，0.25ml  1MHCl。

20微升的盐-氨基酸-能量分子混合物（SAEM）由下列成分组成：0.375MKCl，10mMMg（CH₃CO₂）₂，15mM葡萄糖，0.25-10mM氨基酸（亮氨酸除外），5mM ATP，1mM GTP，50mM Tris-HCl（pH7.6），10μl肌酸酐磷酸酯-肌酸酐磷酸激酶，8μl〔¹⁴C〕亮氨酸（Amersham，348mCi mmol），并加入1.5μl含有不同浓度白树因混合物的溶液。将它们混匀后在30℃保温60分钟。在该混合反应液的某一等分中¹⁴C-亮氨酸的掺入通过下列过程检测：将合成的蛋白质沉淀在玻璃纤维滤器上，用10%的三氯乙酸（TCA）和丙酮洗涤，然后利用Aquasol闪烁液体在β-计数器中测定放射性。利用这种测定方法测得经纯化的白树因的比活性为4×10⁹v/mg蛋白（即每毫克蛋白的活性为4×10⁹个单位）。一单位白树因活性定义为在胞外反应液中引起〔¹⁴C〕亮氨酸掺入到蛋白质中的抑制50%所用的白树因蛋白量。

例3

白树因氨基酸顺序的测定

白树因的氨基酸顺序是利用自动氨基酸测序仪（欧洲专利申请No.EP-257735）通过爱德曼降解法测定的。将大的肽段和完整蛋白加到测序反应室的逆相部分。用过量水洗去不需要的缓冲成分，然后用爱德曼化学降解法测定蛋白质或肽样品的氨基酸顺序，在65℃下，利用25%TFA的水溶液可将提取的ATZ氨基酸衍生物转变为PTH形式。PTH型样品可在Np1090柱上通过反相分析分离鉴定。

为了得到进一步的氨基酸顺序，将该蛋白用不同的解蛋白剂和化学试剂消化后，用高性能液体色谱纯化。发现白树因对胰蛋白酶和乙酰胰蛋白酶的消化抵抗力很强（前者裂解精氨酸和赖氨酸残基以后的顺序，而后者仅裂解赖氨酸残基后的顺序）。还发现该蛋白质对浓度高达5%（w/w）的这类酶液也有抵抗力。白树因这种对解蛋白酶-胰蛋白酶的抗性作用并不是由于它的分子结构中缺乏胰蛋白酶裂解位点，因为白树因分子中有21个赖氨酸和12个精氨酸残基。这些结果表明白树因可能是一个包装很严实的分子，使得它不易受解蛋白酶类的作用。

既然发现白树因对解蛋白酶类的裂解有抗性作用，于是试验了该种蛋白质的化学裂解。

例4

白树因的溴化氰（CNBr）裂解

将例1中制备的白树因溶于70%甲酸，在其中加入溴化氰晶体。在反应至少18小时以后，将该溶液或加到一个小柱（.15cm×5cm）的反相中（J.T.1Baker;15cmC-B吸附相Cat Ⅱ 7191-02），或加到分析用逆相柱（4.6×100mm）中。用1%三氟乙酸（TFA）水溶液的1-70%正丙醇梯度洗脱可产生图6所示的5个峰。将每个峰进行测序并用于进一步酶消化以拼接在一起形成完整顺序。将峰1直接测序得到一个从苯丙氨酸（Phe，用F表示），延续38个氨基酸残基后以谷氨酸（Glu或用E表示）为结尾的序列。这种顺序已由大规模分光镜和用赖氨酰氨肽酶（Lysc）消化该分离到的肽测得的结果证实。峰2直接测序的结果表明它是一个起始氨基酸为缬氨酸（Val，V），延续47cy并在cy47的丙氨酸（Ala）之后仍不间断的顺序。峰3测序的结果与峰2顺序相同。峰2和3的SDS凝胶电泳结果以及Lysc消化结果均表明峰3也含有C-末端的CNBr肽段。随后白树因的胰蛋白酶消化产生一个将这两个CNBr肽段序列连接起来的肽段。这种胰蛋白酶肽段在测序时给出TSGANGMFSEAVELER顺序。峰4和峰5均给出N-末端为GLDT…的顺序，这被用来进行Lysc，V₈的部分酶解以得到的它的C-末端肽段。

例5

经CNBr裂解的白树因的酶促消化

将完整白树因蛋白质或径CNBr裂解的片段用下列酶消化：赖氨酰肽链内切酶（Wako  Chemical  Dallas，TX）溶于0.1%SDS，100mM  Tris（pH8.0）;或金黄葡萄球菌蛋白酶（Pierce）（溶于0.1%SDS）;或者胰蛋白酶（Sigma），溶于0.1%吐温20。消化混合物用HPLC分离，并将收集的肽段在原型顺序上利用气相爱德曼测序法进行测序。

例6

白树因的氨基酸顺序

在对例3中得到的CNBr片段进行分析后，得到一个含258个氨基酸残基的完整顺序。图1表明了白树因的氨基酸顺序。白树因总共含有大约258个氨基酸残基。它的DNA顺序可从该氨基酸顺序中推导出来。图2显示简并的DNA顺序。

现在本发明已全部叙述完毕，对掌握现有技术中的普通技术的人员来说，显然可对此作很多变化或改进而不背离下面陈述的本发明的精神或范围。

Claims (2)

1、纯的白树因毒素，所述毒素和片段及其衍生物，其特征在于，具有如下氨基酸顺序。

Gly Leu Asp Thr Val Ser Phe Ser Thr Lys Gly Ala Thr Tyr Ile Thr

1               5                   10                  15

Tyr Val Asn Phe Leu Asn Glu Leu Arg Val Lys Leu Lys Pro Glu Gly

            20                  25                  30

Asn Ser His Gly Ile Pro Leu Leu Ser Lys Gly Asp Asp Pro Gly Lys

        35                  40                  45

Cys Phe Val Leu Val Ala Leu Ser Asn Asp Asn Gly Gln Leu Ala Glu

    50                  55                  60

Ile Ala Ile Asp Val Thr Ser Val Tyr Val Val Gly Tyr Gln Val Arg

65                  70                  75                  80

Asn Arg Ser Tyr Phe Phe Lys Asp Ala Pro Asp Ala Tyr Glu Gly

                85                  90              95

Leu Phe Lys Asn Thr Ile Lys Asn Pro Leu Leu Phe Gly Gly Lys Thr

            100                 105                 110

Arg Leu His Phe Gly Gly Ser Tyr Pro Ser Leu Glu Gly Glu Lys Ala

        115                 120                 125

Tyr Arg Glu Thr Thr Asp Leu Gly Ile Glu Pro Leu Arg Ile Gly Ile

    130                 135                 140

Lys Lys Leu Asp Glu Asn Ala Ile Asp Asn Tyr Lys Pro Thr Glu Ile

145                 150                 155                 160

Ala Ser Ser Leu Leu Val Val Ile Gln Met Val Ser Glu Ala Ala Arg

                165                 170             175

Phe Thr Phe Ile Glu Asn Gln Ile Arg Asn Asn Phe Gln Gln Arg Ile

            180                 185                 190

Arg Pro Ala Asn Asn Thr Ile Ser Leu Glu Asn Lys Trp Gly Lys Leu

        195                 200                 205

Ser Phe Gln Ile Arg Thr Ser Gly Ala Asn Gly Met Phe Ser Glu Ala

210                     215                 220

Val Glu Leu Glu Arg Ala Asn Gly Lys Lys Tyr Tyr Val Thr Ala Val

225                 230                 235                 240

Asp Gln Val Lys Pro Lys Ile Ala Leu Leu Lys Phe Val Asp Lys Asp

                245                 250                 255

Pro Glu

所述片段及衍生物编码白树因或编码某种具有抑制细胞蛋白质合成但不粘附到细胞表面受体上的活性的多肽。

2、DNA顺序和片段及其衍生物，其特征在于，具有如下分子式：

所述片段和衍生物编码白树因或编码具有抑制细胞蛋白质合成但不粘附到细胞表面受体上的活性的多肽。

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