CN105820159A

CN105820159A - 一种碳苷黄酮化合物、其制备方法及含有该化合物的药物组合物

Info

Publication number: CN105820159A
Application number: CN201610283820.5A
Authority: CN
Inventors: 谢运昌; 蒋小华
Original assignee: Guangxi Institute of Botany of CAS
Current assignee: Guangxi Institute of Botany of CAS
Priority date: 2016-04-29
Filing date: 2016-04-29
Publication date: 2016-08-03
Anticipated expiration: 2036-04-29
Also published as: CN105820159B

Abstract

本发明公开了一种碳苷黄酮化合物、其制备方法及含有该化合物的药物组合物。该碳苷黄酮化合物的制备方法为：以红丝线为原料，获得红丝线提取物；将红丝线提取物用高速逆流色谱仪进行分离，以由乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水按12‑20：3‑5：3‑5：0.8‑2：16‑24的体积比组成的混合液作为溶剂体系，以下相为固定相溶剂，上相为流动相溶剂，分段收集流分，以TLC和HPLC‑UV分析检测，收集目标流分，即得。所述碳苷黄酮化合物具有下式(I)所示结构：

Description

一种碳苷黄酮化合物、其制备方法及含有该化合物的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种黄酮类化合物，具体涉及一种碳苷黄酮化合物、其制备方法及含有该化合物的药物组合物。

背景技术

碳苷是结构较为特殊的一类苷类化合物，碳苷黄酮是碳苷类化合物中为数最多的一类。碳苷黄酮(C-glycosylflavones)是指糖与黄酮母核通过C-C键连接的一类黄酮苷。根据黄酮母核结构不同，碳苷黄酮可分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢查耳酮、酮、黄烷-3-醇等。碳苷黄酮以芹菜素和木犀草素为苷元的最多。所连接的糖苷大多与黄酮母核A环的C-6或C-8位相连，糖基主要包括葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖等。部分碳苷黄酮中含有2个糖，连接在不同的碳位，或者2个糖以不同的顺序相连。部分碳苷黄酮中有乙酰基、羟基苯甲酰基、芥子酰基、香豆酰基等取代。碳苷黄酮具有溶解度小，难于酸水解的共同特点。目前，从自然界中已经分离出400多个碳苷黄酮类化合物。但尚未发现有阿拉伯呋喃糖基类黄酮碳苷化合物的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种结构新颖的碳苷黄酮化合物、其制备方法及含有该化合物的药物组合物。

本发明涉及下式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：

上述式(I)所示化合物的化学名称为：6-C-β-D-阿拉伯呋喃糖基-8-C-β-D-葡萄吡喃糖基芹菜素，分子式为C₂₆H₂₈O₁₄，分子量为564.49，理化性质如下：黄色粉末，无臭，易溶于二甲基亚砜，可溶于水、甲醇、乙醇，难溶于乙酸乙酯、氯仿。

上述式(I)所示化合物的药学上可接受的盐，具体可以是上述式(I)所示化合物与无机酸(如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸或氢嗅酸等)、有机酸(如马来酸、富马酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、甲磺酸、对-苯甲磺酸、己二酸、棕榈酸或单宁酸等)、碱金属(如锂、钠或钾等)、碱土金属(如钙或镁等)或碱性氨基酸(如赖氨酸等)成的盐。

上述式(I)所示化合物的制备方法，主要包括以下步骤：以红丝线为原料，获得红丝线提取物；将红丝线提取物用高速逆流色谱仪进行分离，以由乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水按12-20：3-5：3-5：0.8-2：16-24的体积比组成的混合液作为溶剂体系，以下相为固定相溶剂，上相为流动相溶剂，分段收集流分，以TLC和HPLC-UV分析检测，收集目标流分，即得。

上述制备方法中，所述的红丝线为爵床科红丝线属植物红丝线(Peristrophebaphica(Spreng)Bremek.)，优选是以其干燥地上部分为原料。

上述制备方法中，获得红丝线提取物的方法与现有技术相同，具体可以是以红丝线为原料，以水或有机溶剂为溶媒进行提取，以获得红丝线提取物。其中，所述的有机溶剂可以是体积浓度为10-100％甲醇或体积浓度为10-100％乙醇，优选为体积浓度为50-100％甲醇或体积浓度为50-100％乙醇。提取的方式具体可以是现有常规的常温浸提、加热提取或回流提取等。

上述制备方法中，所述溶剂体系中，乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水的体积比优选为16：4：4：1：20。

为了减少进入高速逆流色谱仪的杂质，降低高速逆流色谱仪的负荷，优选是对所得的红丝线提取物进行纯化后再用高速逆流色谱仪进行分离。优选的，对红丝线提取物按下述方法a-d中的一种或两种以上的方法进行纯化以制得纯化后的提取物，再将纯化后的提取物用高速逆流色谱仪进行分离；

方法a：将红丝线提取物用石油醚萃取，收集水相，得到纯化后的提取物；

方法b：将红丝线提取物上聚酰胺柱，先用水洗柱，然后用体积浓度为30-70％乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回流溶剂，得到纯化后的提取物；

方法c：将红丝线提取物用乙酸乙酯萃取，收集下相，得到纯化后的提取物；

方法d：将红丝线提取物用由乙酸乙酯、无水乙醇和水按5-7：1-2：4-5的体积比组成的溶剂萃取，收集下相，得到纯化后的提取物。

当采用上述两种以上的方法对红丝线提取物进行纯化、且其中两种以上都涉及萃取的纯化方法时，优选是遵循先选择极性小的溶剂萃取方法，再选择极性稍大的溶剂萃取方法，如：同时选择方法a和方法c(或方法d)进行纯化时，优选是先采用方法a进行萃取，收集得到水相再用方法c(或方法d)进行萃取，这样可以更好地去除红丝线提取物中的杂质。再如，同时选择方法c和方法d进行纯化时，先用方法c纯化再用方法d纯化。更优选地，是先用方法a纯化，再用方法b纯化，最后再用方法c(或方法d)纯化，这样可以最大限度的去除杂质。

本发明进一步提供一种药物组合物，该药物组合物中含有治疗有效量的上述式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐。优选地，该药物组合物中含有0.1-99.5wt％的上述式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐；更优选是含有0.5-95wt％的上述式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐。具体在应用时，可以根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，通常日剂量为0.01-10mg/kg体重，优选日剂量为0.1-5mg/kg体重。可以每日一次或多次施用。

上述药物组合物中还包括一些药学上可接受的载体，具体可以是下述选择中的一种或两种以上的选择：稀释剂(如水等)、赋形剂(如水等)、填充剂(如淀粉或蔗糖等)、黏合剂(如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等)、湿润剂(如甘油等)、崩解剂(如琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠等)、吸收促进剂(如季铵化合物等)、表面活性剂(如十六烷醇等)、吸附载体(如高岭土或皂黏土等)、润滑剂(如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇等)等，还可以进一步加入其它辅剂如香味剂或甜味剂等。

上述药物组合物可以以组合式的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酊剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。

与现有技术相比，本发明通过高速逆流色谱对红丝线提取物进行分离，成功分离得到了一种结构新颖的碳苷黄酮化合物，该化合物制备方法简单易操作。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述,以更好地理解本发明的内容,但本发明并不限于以下实施例。

实施例1

1)取爵床科红丝线属植物红丝线(Peristrophebaphica(Spreng)Bremek.)干燥地上部分3.0kg，粉碎，用体积浓度为60％乙醇7L回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，得到红丝线提取物；

2)将红丝线提取物用石油醚萃取2次，收集水相，上聚酰胺柱，先用水洗柱，然后用体积浓度为50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱流分，减压回收溶剂后用由乙酸乙酯、无水乙醇和水按5：1：5的体积比组成的溶剂萃取，收集下相，减压回收溶剂，得到纯化后的提取物；

3)称取纯化后的提取物160mg，用上相和下相各8ml溶解，混合均匀，分层后再上高速逆流萃取仪(TAUTOHSCCC-TBE300C型，容量300ml)进行分离(以由乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水按16：4：4：1：20的体积比组成的混合液作为溶剂体系)，进样采用反接正转(Out，FWD)，流速为3.0ml/min，转速为900rmp，全程采用自动接收仪接收样品，5min/管；其中20-21号流分得到1号化合物(化合物1)，25号流分得到2号化合物(化合物2)，27-28号流分得到3号化合物(化合物3)，33-37号流分得到4号化合物(化合物4)，47-53号流分得到5号化合物(化合物5)。以TLC和HPLC-UV分析检测，并用核磁共振及ESI-MS等进行结构分析，分别如下所示，各化合物的纯度均>90％。

化合物1：6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-β-D-arabinofuranosyl-apigeninUVmax(MeOH)nm273,338；1H-NMR(DMSO-d6,37℃)d:13.78(1H,brs,OH-5),8.02(2H,d,J＝8.35Hz,H-2',6'),6.89(2H,d,J＝8.65Hz,H-3',5'),6.75(1H,s,H-3)；6-C-β-Glc:4.74(1H,d,J＝9.85Hz,H-1”),3.86(1H,m,H-2”),3.26(1H,m,H-3”),3.86(1H,m,H-4”),3.23(1H,m,H-5”),3.75,3.52(2×1H,2×m,6”-CH2)；8-C-β-ara:5.43(1H,d,J＝3.15Hz,H-1”'),4.05(1H,m,H-2”'),3.93(1H,m,H-3”'),3.86(1H,m,H-4”'),3.65,3.65(2×1H,2×m,5”'-CH2)；13C-NMR(DMSO-d6,37℃)d:128.8(C-2',6'),115.8(C-3',5'),102.2(C-3)；6-C-β-Glc:73.28(C-1”),70.9(C-2”),78.8(C-3”),70.9(C-4”),81.76(C-5”),61.4(C-6”)；8-C-β-ara:79.48(C-1”'),77.80(C-2”'),77.89(C-3”'),86.87(C-4”'),61.47(C-5”'),ESI-MS(positivemode)m/z:565[M+H]+.确定其化学结构为6-C-β-D-阿拉伯呋喃糖基-8--C-β-D-葡萄吡喃糖基芹菜素(6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-β-D-arabinofuranosyl-apigenin)，其结构式如下述式(I)所示：

化合物2：Apigenin-6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-α-L-arabinopyranoside(Schaftoside)

UVmax(MeOH)nm271,338；1H-NMR(DMSO-d6,37℃)d:13.70(1H,brs,OH-5),8.05(2H,d,J＝8.15Hz,H-2',6'),6.92(2H,d,J＝8.15Hz,H-3',5'),6.77(1H,s,H-3)；6-C-β-Glc:4.77(1H,d,J＝9.5Hz,H-1”),3.47(1H,m,H-2”),3.30(1H,m,H-3”),3.40(1H,m,H-4”),3.26(1H,m,H-5”),3.75,3.52(2×1H,2×m,6”-CH2)；8-C-α-D-ara:4.70(1H,9.0Hz,H-1”'),3.80(1H,m,H-2”'),3.46(1H,m,H-3”'),3.77(1H,m,H-4”'),3.83,3.64(2×1H,2×m,5”'-CH2)；13C-NMR(DMSO-d6,37℃)d:129.27(C-2',6'),116.1(C-3',5'),102.8(C-3)；6-C-β-Glc:73.52(C-1”),71.16(C-2”),78.87(C-3”),70.69(C-4”),82.02(C-5”),61.41(C-6”)；8-C-α-Ara:74.50(C-1”'),69.61(C-2”'),73.93(C-3”'),68.60(C-4”'),70.36(C-5”'),ESI-MS(positivemode)m/z:565[M+H]+.鉴定为Apigenin-6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-α-L-arabinopyranoside(Schaftoside)

化合物3：Apigenin6-C-β-D-Glucopyranosyl-8-C-β-L-arabinopyranoside(Neoschaftoside)

UVmax(MeOH)nm273,338；1H-NMR(DMSO-d6,37℃)d:13.64(1H,brs,OH-5),8.00(2H,d,J＝8.6Hz,H-2',6'),6.89(2H,d,J＝8.8Hz,H-3',5'),6.67(1H,s,H-3)；6-C-β-Glc:4.74(1H,d,J＝9.95Hz,H-1”),3.83(1H,m,H-2”),3.24(1H,m,H-3”),3.33(1H,m,H-4”),3.25(1H,m,H-5”),3.75,3.51(2×1H,2×m,6”-CH2)；8-C-β-ara:5.24(1H,brd,J＝0.95Hz,H-1”'),3.66(1H,m,H-2”'),3.78(1H,m,H-3”'),3.94(1H,m,H-4”'),3.65,3.51(2×1H,2×m,5”'-CH2)；13C-NMR(DMSO-d6,37℃)d:128.8(C-2',6'),115.8(C-3',5'),102.1(C-3)；6-C-β-Glc:73.5(C-1”),70.9(C-2”),78.8(C-3”),70.7(C-4”),81.77(C-5”),61.5(C-6”)；8-C-β-ara:70.4(C-1”'),72.3(C-2”'),70.1(C-3”'),63.29(C-4”'),66.65(C-5”'),ESI-MS(positivemode)m/z:565[M+H]+.鉴定为Apigenin6-C-β-D-Glucopyranosyl-8-C-β-L-arabinopyranoside(Neoschaftoside)

化合物4：Apigenin-6-C-β-L-arabinopyranosyl-8-C-β-D-glucopyranoside(neoisochaftoside)

UVmax(MeOH)nm273,338；1H-NMR(DMSO-d6,37℃)d:13.61(1H,brs,OH-5),7.98(2H,d,J＝8.65Hz,H-2',6'),6.89(2H,d,J＝8.6Hz,H-3',5'),6.80(1H,s,H-3)；8-C-β-Glc:4.58(1H,d,J＝9.85Hz,H-1”),4.11(1H,m,H-2”),3.77(1H,m,H-3”),3.09(1H,m,H-4”),3.14(1H,m,H-5”),3.68,3.89(2×1H,2×m,6”-CH2)；6-C-β-D-ara:5.51(1H,brs,H-1”'),3.77(1H,m,H-2”'),3.88(1H,m,H-3”'),4.00(1H,m,H-4”'),3.74,3.63(2H,m,H-5'”)；13C-NMR(DMSO-d6,37℃)d:128.8(C-2',6'),115.8(C-3',5'),102.2(C-3)；8-C-β-Glc:73.0(C-1”),69.97(C-2”),72.40(C-3”),79.05(C-4”),81.55(C-5”),61.68(C-6”)；6-C-β-ara:71.3(C-1”'),72.40(C-2”'),69.85(C-3”'),63.14.(C-4”'),67.00(C-5”'),ESI-MS(positivemode)m/z:565[M+H]+.鉴定为Apigenin-6-C-β-L-arabinopyranosyl-8-C-β-D-glucopyranoside(neoisochaftoside)

化合物5：Apigenin6,8-Di-C-β-D-glucopyranoside(Vicenin-2)

UVmax(MeOH)nm273,338；1H-NMR(DMSO-d6,37℃)d:13.75(1H,brs,OH-5),8.00(2H,d,J＝7.45Hz,H-2',6'),6.92(2H,d,J＝8.7Hz,H-3',5'),6.76(1H,brs,H-3)；6-C-β-Glc:4.80(1H,brd,J＝9.6Hz,H-1”'),3.88(1H,m,H-2”'),3.58(1H,m,H-3”'),3.57(1H,m,H-4”'),3.35(1H,m,H-5”'),3.64，3.64(2×1H,2×m,6”'-CH₂)；8-C-β-Glc:4.68(1H,d,J＝9.8Hz,H-1”),3.88(1H,m,H-2”),3.32(1H,m,H-3”),3.41(1H,m,H-4”),3.27(1H,m,H-5”),3.76,3.65(2×1H,2×m,6”-CH2)；13C-NMR(DMSO-d6,37℃)d:129.2(C-2',6'),116.1(C-3',5'),102.7(C-3)；6-C-β-Glc:74.36(C-1”'),71.23(C-2”'),77.9(C-3”'),71.96(C-4”'),81.0(C-5”'),60.0(C-6”')；8-C-β-Glc:73.6(C-1”),70.73(C-2”),78.87(C-3”),69.27(C-4”),82.0(C-5”),61.4(C-6”).ESI-MS(positivemode)m/z:595[M+H]+.鉴定为Apigenin6,8-Di-C-β-D-glucopyranoside(Vicenin-2)

实施例2

重复实施例1，不同的是：将步骤1)中的提取溶媒由体积浓度为60％乙醇更改为体积浓度为100％甲醇，并将步骤3)中高速逆流色谱仪的溶剂体系更改为由乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水按12：5：3：1.2：24的体积比组成。

对所得的1号化合物用核磁共振及ESI-MS进行结构分析，确定为6-C-β-D-阿拉伯呋喃糖基-8--C-β-D-葡萄吡喃糖基芹菜素(6-C-β-D-glucopyranosyl-8-C-β-D-arabinofuranosyl-apigenin)。

实施例3

重复实施例1，不同的是：将步骤1)中的提取溶媒由体积浓度为60％乙醇更改为水，将提取方式改为常温浸提12h后再加热至50-60℃保温提取3h。

实施例4

重复实施例1，不同的是：省略步骤2)；并将步骤3)中高速逆流色谱仪的溶剂体系更改为由乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水按20：3：5：0.8：16的体积比组成。

实施例5

重复实施例1，不同的是：将步骤2)的纯化操作更改为下述方案：

2)将红丝线提取物用石油醚萃取2次，收集水相，然后用由乙酸乙酯萃取，收集下相，减压回收溶剂，得到纯化后的提取物。

实施例6

取实施例1制得的化合物1，加入质量浓度为4％的酒石酸溶液直至所得混合物的pH＝4，过滤，干燥，制成酒石酸盐。

实施例7

取实施例2制得的化合物1，加入质量浓度为4％的赖氨酸溶液直至所得混合物的pH＝7，过滤，干燥，制成赖氨酸盐。

实施例8

称取实施例1制得的化合物1(或实施例6制得的盐或实施例7制得的盐)10mg、乳糖180mg和淀粉55mg，混合均匀后用水均匀湿润，将湿润后的混合物过筛(16目)并干燥，再过筛(16目)，加入硬脂酸镁5mg，所得混合物压片，得到片剂(每片重250mg，化合物1含量为10mg)。

实施例9

称取实施例1制得的化合物1(或实施例6制得的盐或实施例7制得的盐)2mg和氯化钠10mg，溶解于适量的注射用水中，过滤，收集溶液，在无菌条件下装入安瓶瓶中，得到安瓶剂。

实施例10

1)称取实施例2制得的1号化合物(或实施例6制得的盐或实施例7制得的盐)10mg、碳酸氢钠2mg和甘露醇252mg，备用；

2)取碳酸氢钠和甘露醇加注射用水溶解，用活性碳吸附30min除热原，过滤除去活性碳，在滤液中加入实施例1所得化合物1(或实施例6制得的盐或实施例7制得的盐)，超声处理使溶解，用1N盐酸调节pH＝5.0-7.0，微孔滤膜(孔径为0.22μm)滤过，加注射用水，分装，冷冻干燥，上塞，轧盖，即得注射用冻干剂。

实施例11

称取实施例1制得的化合物1(或实施例6制得的盐或实施例7制得的盐)10mg、乳糖187mg、硬脂酸镁3mg混和，过筛(150目)，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，得到胶囊剂(每个胶囊重200mg、活性成分含量为10mg)。

Claims

1.下式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：

2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：以红丝线为原料，获得红丝线提取物；将红丝线提取物用高速逆流色谱仪进行分离，以由乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水按12-20：3-5：3-5：0.8-2：16-24的体积比组成的混合液作为溶剂体系，以下相为固定相溶剂，上相为流动相溶剂，分段收集流分，以TLC和HPLC-UV分析检测，收集目标流分，即得。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：以红丝线为原料，以水或有机溶剂为溶媒进行提取，以获得红丝线提取物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的有机溶剂为体积浓度为10-100％甲醇或体积浓度为10-100％乙醇。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的提取方式为常温浸提、加热提取或回流提取。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：溶剂体系中，乙酸乙酯、无水乙醇、正丁醇、乙酸和水的体积比为16：4：4：1：20。

7.根据权利要求2-6中任一项所述的制备方法，其特征在于：对红丝线提取物按下述方法a-d中的一种或两种以上的方法进行纯化以制得纯化后的提取物，再将纯化后的提取物用高速逆流色谱仪进行分离；

8.一种药物组合物，其特征在于：该药物组合物中含有治疗有效量的权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐。

9.根据权利要求8所述药物组合物，其特征在于：该药物组合物中含有0.1-99.5wt％的权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐。

10.根据权利要求8所述药物组合物，其特征在于：该药物组合物中含有0.5-95wt％的权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐。