CN105802910A - 用于激活辅助性t细胞的方法 - Google Patents
用于激活辅助性t细胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105802910A CN105802910A CN201610191489.4A CN201610191489A CN105802910A CN 105802910 A CN105802910 A CN 105802910A CN 201610191489 A CN201610191489 A CN 201610191489A CN 105802910 A CN105802910 A CN 105802910A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hla
- molecule
- drb1
- peptide
- aminoacid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 88
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 76
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 268
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 claims abstract description 240
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 claims abstract description 240
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 167
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 claims abstract description 165
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 claims abstract description 164
- 102100031618 HLA class II histocompatibility antigen, DP beta 1 chain Human genes 0.000 claims abstract description 83
- 108010045483 HLA-DPB1 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 83
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims abstract description 58
- 108010029657 HLA-DRB1*04:01 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102210010945 HLA-DRB1*0901 Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 108010053362 HLA-DRB1*04:06 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 102100040482 HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108010061311 HLA-DRB3 Chains Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102100028636 HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 4 chain Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108010040960 HLA-DRB4 Chains Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 97
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 74
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 61
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 61
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 47
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 43
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 40
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 40
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 39
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 38
- 108010029618 HLA-DPB1*05:01 antigen Proteins 0.000 claims description 33
- 108010024996 HLA-DRB1*04:05 antigen Proteins 0.000 claims description 30
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 30
- 108010076599 HLA-DPB1*09:01 antigen Proteins 0.000 claims description 28
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 22
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 17
- PFBPIHUEFUNOIS-DVQPEGLTSA-N (2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-carbamimidamido-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]cn1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]cn1)C(O)=O PFBPIHUEFUNOIS-DVQPEGLTSA-N 0.000 claims description 15
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 12
- GGAPIOORBXHMNY-ULQDDVLXSA-N Lys-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O GGAPIOORBXHMNY-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims description 10
- DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 9
- DIIGDGJKTMLQQW-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N DIIGDGJKTMLQQW-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 8
- UROVZOUMHNXPLZ-AVGNSLFASA-N His-Leu-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 UROVZOUMHNXPLZ-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 8
- BKIFWLQFOOKUCA-DCAQKATOSA-N Met-His-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N BKIFWLQFOOKUCA-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 claims 7
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 abstract 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 abstract 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 52
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 50
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 42
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 101100117565 Oryza sativa subsp. japonica DRB4 gene Proteins 0.000 description 23
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 18
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 101150034979 DRB3 gene Proteins 0.000 description 16
- 101100278514 Oryza sativa subsp. japonica DRB2 gene Proteins 0.000 description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 14
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 14
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 7
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 4
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 4
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000008261 skin carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000012991 uterine carcinoma Diseases 0.000 description 4
- -1 16 aminoacid Chemical class 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- XUZQMPGBGFQJMY-SRVKXCTJSA-N Gln-Met-His Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N XUZQMPGBGFQJMY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010046732 HLA-DR4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 108010075101 HLA-DRB1*14:01 antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N Ser-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101100297345 Caenorhabditis elegans pgl-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010048612 Hydrothorax Diseases 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101800001386 Peptide II Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010083312 T-Cell Antigen Receptor-CD3 Complex Proteins 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- VJMRKWPMFQGIPI-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxyethyl)-5-(hydroxymethyl)-3-methyl-1-[2-[[3-(trifluoromethyl)phenyl]methyl]-1-benzothiophen-7-yl]pyrazole-4-carboxamide Chemical compound OCC1=C(C(=O)NCCO)C(C)=NN1C1=CC=CC2=C1SC(CC=1C=C(C=CC=1)C(F)(F)F)=C2 VJMRKWPMFQGIPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464452—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/464453—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/82—Translation products from oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2307—Interleukin-7 (IL-7)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
Abstract
本发明涉及用于激活辅助性T细胞的方法，所述方法包括通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞的步骤，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLADRB1*0101分子、HLADRB1*0401分子、HLADRB1*0403分子、HLADRB1*0406分子、HLADRB1*0803分子、HLADRB1*0901分子、HLADRB1*1101分子、HLADRB3*0202分子、HLADRB4*0101分子、HLADPB1*0201分子或HLADPB1*0301分子等。
Description
本申请是国际申请日为
2011
年
10
月
4
日的国际申请
PCT/JP2011/072874
进入中国、申请号为
201180058552.2
的题为“用于激活辅助性
T
细胞的方法”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及用于激活辅助性T细胞的方法及用于其的组合物，所述方法包括通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞的步骤，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子；涉及用于激活细胞毒性T细胞的方法；涉及细胞毒性T细胞(CTL)的激活诱导物；涉及通过激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞来治疗和/或预防癌症的药物组合物等。
背景技术
WT1基因(Wilms’肿瘤1基因)被鉴定为Wilms’肿瘤(童年期肾癌)的致病基因，且该基因编码具有锌指结构的转录因子(非专利文献1和2)。随后的研究显示，上述基因在造血器官肿瘤或实体癌中充当癌基因(非专利文献3-6)。
已经表明，通过使用具有编码WT1蛋白的部分氨基酸序列的肽来体外刺激外周血单核细胞，诱导了对该肽特异的细胞毒性T细胞(CTL)，且这些CTL损伤内源性表达WT1的造血器官肿瘤或实体癌的癌细胞。CTL识别以与MHC I类分子结合的复合物形式的上述肽，并因此该肽根据MHC I类的亚型不同(专利文献1-4和非专利文献7)。
在另一方面，为有效诱导CTL，对癌抗原特异的辅助性T细胞的存在是重要的(非专利文献8)。通过识别抗原呈递细胞上的MHC II类分子与抗原肽的复合物来诱导和激活辅助性T细胞。激活的辅助性T细胞通过产生细胞因子例如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6或干扰素来帮助B细胞的增殖、分化和成熟。因为所述辅助性T细胞具有通过促进B细胞和T细胞的增殖和激活来激活免疫系统的功能，所以建议在癌症免疫治疗中通过MHC
II类-结合抗原肽增强辅助性T细胞的功能以增强癌症疫苗的作用是有用的(非专利文献9)。
最近显示，可与多种MHC II类分子结合并激活辅助性T细胞的非选择性(promiscuous)辅助性肽存在于具有编码WT1蛋白的部分氨基酸序列的特定肽(在本说明书中以下亦称为WT1肽)中(专利文献5和6)。然而，由于MHC II类分子的种类多，证实是否WT1肽亦对其他MHC II类分子具有作用是非常困难的。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公布号WO
2003/106682
专利文献2：国际公布号WO
2005/095598
专利文献3：国际公布号WO
2007/097358
专利文献4：国际申请号PCT/JP2007/074146
专利文献5：国际公布号WO
2005/045027
专利文献6：国际公布号WO
2008/105462
非专利文献
非专利文献1：Daniel
A. Haber等, Cell. 1990年6月29日; 61(7):1257-69
非专利文献2：Call
KM等, Cell. 1990年2月9日; 60(3):509-20
非专利文献3：Menke
AL等, Int Rev Cytol. 1998; 181:151-212. 综述
非专利文献4：Yamagami
T等, Blood. 1996年4月1日; 87(7):2878-84
非专利文献5：Inoue
K等, Blood. 1998年4月15日; 91(8):2969-76
非专利文献6：Tsuboi
A等, Leuk Res. 1999年5月; 23(5):499-505
非专利文献7：Oka Y等, Immunogenetics. 2000年2月; 51(2):99-107
非专利文献8：Gao
FG等, Cancer Res. 2002年11月15日; 62(22):6438-41
非专利文献9：Zeng
G, J Immunother. 2001年5月; 24(3):195-204。
发明内容
发明所要解决的问题
因此，本发明所要实现的目的是，通过将特定的WT1肽施用给广泛的MHC II类分子-阳性受试者，提供用于激活辅助性T细胞的方法、用于激活细胞毒性T细胞的方法，提供细胞毒性T细胞的激活诱导物，提供用于治疗/预防癌症的药物组合物等。
用于解决问题的手段
在这些背景下，本发明人已仔细研究并发现，具有氨基酸序列Lys Arg Tyr Phe
Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His的肽与以下分子结合：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子和HLA-DPB1*0301分子，并激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞。因此，完成本发明。
本发明提供：
(1) 用于激活辅助性T细胞的方法，所述方法包括通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞的步骤，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子；
(2) (1)的方法，其中所述WT1肽具有与以下至少2种MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子和HLA-DPB1*0301分子；
(3) (1)或(2)的方法，其中所述WT1肽还具有与以下分子结合的能力：HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子和/或HLA-DPB1*0901分子；
(4) (1)-(3)中任一项的方法，其中将WT1肽加入抗原呈递细胞是通过加入WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该多肽的表达载体或者包含该表达载体的细胞进行的；
(5) (1)-(4)中任一项的方法，其中所述WT1肽是包含氨基酸序列Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg
Lys His (SEQ ID NO: 2)的肽、其变体或修饰物；
(6) 用于通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞的包含WT1肽的组合物，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子；
(7) (6)的组合物，其中所述WT1肽具有与以下至少2种MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子和HLA-DPB1*0301分子；
(8) (6)或(7)的组合物，其中所述WT1肽还具有与以下分子结合的能力：HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子和/或HLA-DPB1*0901分子；
(9) (6)-(8)中任一项的组合物，其中将WT1肽加入抗原呈递细胞是通过加入WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体或者包含该表达载体的细胞进行的；
(10) (6)-(9)中任一项的组合物，其中所述WT1肽是包含氨基酸序列Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg
Lys His (SEQ ID NO: 2)的肽、其变体或修饰物；
(11) 呈递包含WT1肽的抗原肽与MHC
II类分子的复合物的抗原呈递细胞，其中所述MHC II类分子是以下任何MHC II类分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子；
(12) 识别包含WT1肽的抗原肽与MHC
II类分子的复合物的辅助性T细胞，其中所述MHC
II类分子是以下任何MHC II类分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子；
(13) 通过(11)的辅助性T细胞激活的细胞毒性T细胞；
(14) 用于治疗或预防癌症的药物组合物，其包含(6)-(10)中任一项的组合物、(11)的抗原呈递细胞、(12)的辅助性T细胞或(13)的细胞毒性T细胞中的任一种作为活性成分；
(15) 用于激活细胞毒性T细胞的药物组合物，其包含WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体或包含该表达载体的细胞中的任一种作为活性成分，并将其给予具有以下任何MHC
II分子的受试者：HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子、HLA-DPB1*0301分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子或HLA-DRB4*0101分子；
(16) 与WT1肽特异性结合的抗体，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子；
(17) 用于测定受试者中WT1-特异性辅助性T细胞的存在或量的方法，所述受试者对于以下任何MHC II类分子阳性：HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0401、HLA-DRB1*0403、HLA-DRB1*0406、HLA-DRB1*0803、HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*1101、HLA-DRB3*0202、HLA-DRB4*0101、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，所述方法包括以下步骤：
(a) 使用WT1肽刺激获自受试者的样品，和
(b) 测定细胞因子或辅助性T细胞的存在或量，其中细胞因子或辅助性T细胞的存在或量的增加显示WT1-特异性辅助性T细胞的存在或量。
发明的效果
根据本发明，通过将WT1肽施用给广泛的具有以下任何MHC
II类分子的受试者：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，从而使得辅助性T细胞和细胞毒性T细胞能够在具有这样的MHC II类分子的受试者中体内和体外激活，并治疗和预防癌症等，获得了用于激活辅助性T细胞的方法，用于其的组合物，用于激活细胞毒性T细胞的方法，用于其的组合物，细胞毒性T细胞的激活诱导物，通过激活辅助性T细胞和细胞毒性T细胞来治疗和/或预防癌症的药物组合物等。
附图说明
图1显示将诱导自源自供体1
(HLA-DRB1*0406/1201-、DRB3*0101-和DRB4*0103-阳性)的PMBC的T细胞与源自多种供体的用WT1-332脉冲的PBMC共培养后，通过测量IFN-γ量获得的结果。在该图中，纵坐标表示共培养后上清液中的IFN-γ量(pg/mL)。在该图中，横坐标表示HLA-DRB1、3和4分子的类型，其在多种供体中为阳性。
图2显示将诱导自源自供体2
(HLA-DRB1*0901/1101-、DRB3*0202-和DRB4*0103-阳性)的PMBC的T细胞与源自多种供体的用WT1-332脉冲的PBMC共培养后，通过测量IFN-γ量获得的结果。在该图中，纵坐标表示共培养后上清液中的IFN-γ量(pg/mL)。横坐标表示HLA-DRB1、3和4分子的类型，其在多种供体中为阳性。
图3显示将诱导自源自供体3
(HLA-DRB1*0401/0405-和DRB4*0102/0103-阳性)的PMBC的T细胞与源自多种供体的用WT1-332脉冲的PBMC共培养后，通过测量IFN-γ量获得的结果。在该图中，纵坐标表示共培养后上清液中的IFN-γ量(pg/mL)。横坐标表示HLA-DRB1和4分子的类型，其在多种阳性供体中为阳性。
图4显示将诱导自源自供体4 (HLA-DRB1*0901/1101-、DRB3*0202-和DRB4*0103-阳性)的PMBC的T细胞与源自多种供体的用WT1-332脉冲的PBMC共培养后，通过测量IFN-γ量获得的结果。在该图中，纵坐标表示共培养后上清液中的IFN-γ量(pg/mL)。横坐标表示HLA-DRB1、3和4分子的类型，其在多种阳性供体中为阳性。
图5显示HLA II类单体蛋白(DRB1*0101、DRB1*0405、DRB1*1501、DRB1*1502、DRB1*0803、DRB1*0901和DRB4*0101)与多种肽特异性缔合。在该图中，纵坐标表示保留时间(分钟)的变化程度。横坐标表示HLA II类单体蛋白的类型。另外，柱状图显示所加入的肽的类型[从左起，阴性对照(□)、阳性对照(■)和WT1-332 (阴影的□)]。
图6显示当诱导自来源于健康血液供体(具有HLA-DRB1*1501、1502、0405、HLA-DPB1*0501和0901中至少一个的总计42个供体)的PBMC的T细胞用WT1-332刺激时，WT1-332-特异性Th1的比例(CD4-阳性细胞/细胞内IFN-γ-阳性细胞的比例)时间依赖性地并显著地增加。在该图中，纵坐标表示活细胞中CD4-阳性细胞的数量/细胞内IFN-γ-阳性细胞的数量的比例(%)，和横坐标表示培养天数(天)。另外，符号“●”表示在通过加入WT1-332诱导的样品中的比例(WT1-332诱导组)，和符号“○”表示在通过加入溶剂诱导的样品中的比例(对照) (溶剂诱导组)。
图7显示当诱导自来源于健康血液供体(具有HLA-DRB1*1501、1502、0405、HLA-DPB1*0501和0901中至少一个的总计42个供体)的PBMC的T细胞用WT1-332刺激时，WT1-332-特异性CTL细胞的数量(CD8-阳性细胞/IFN-γ-阳性细胞的比例)时间依赖性地并显著地增加。在该图中，纵坐标表示活细胞中CD8-阳性细胞的数量/细胞内IFN-γ-阳性细胞的数量的比例(%)，和横坐标表示培养天数(天)。另外，符号“●”表示在通过加入WT1-332诱导的样品中的比例(WT1-332诱导组)，和符号“○”表示在通过加入溶剂诱导的样品中的比例(对照) (溶剂诱导组)。
图8显示在图6和图7中WT1-332-特异性Th1被诱导的17个样品(供体21-37)的HLA-DR-限制性。在各样品中，当将通过加入WT1-332进行诱导后第14天的T细胞用WT1-332刺激时，观察到WT1-332-特异性IFN-γ的产生，但当加入抗-HLA-DR抗体培养细胞时，抑制了IFN-γ的产生。这显示由WT1-332诱导的T细胞是HLA-DR-限制的。在该图中，纵坐标表示供体编号(供体21-37)，和横坐标表示产生的IFN-γ量(pg/mL)。另外，符号“■”表示WT1-332刺激后产生的IFN-γ量，符号“阴影的□”表示WT1-332 + 抗-HLA-DR抗体刺激后产生的IFN-γ量，符号“□”表示溶剂(对照)刺激后产生的IFN-γ量。
图9显示当在图6和图7中具有诱导的HLA-DR-限制的WT1-332-特异性Th1的17个样品(供体21-37)的每一个中，将通过加入WT1-332进行诱导后第14天的T细胞用WT1-332刺激时，WT1-332-特异性Th1细胞(CD4-阳性细胞/细胞内IFN-γ-阳性细胞)数量的比例增加。在该图中，纵坐标表示供体编号(供体21-37)，和横坐标表示活细胞中CD4-阳性细胞数量/细胞内IFN-γ-阳性细胞数量的比例(%)。另外，符号“■”表示WT1-332刺激后的比例，符号“□”表示溶剂(对照)刺激后的比例。
图10显示当在图6和图7中具有诱导的HLA-DR-限制的WT1-332-特异性Th1的17个样品(供体21-37)的每一个中，将通过加入WT1-332进行诱导后第14天的T细胞用WT1-332刺激时，WT1-332-特异性CTL细胞(CD8-阳性细胞/细胞内IFN-γ-阳性细胞)数量的比例增加。在该图中，纵坐标表示供体编号(供体21-37)，和横坐标表示活细胞中CD8-阳性细胞数量/细胞内IFN-γ-阳性细胞数量的比例(%)。另外，符号“■”表示WT1-332刺激后的比例，符号“□”表示溶剂(对照)刺激后的比例。
图11显示在图6和图7中WT1-332-特异性Th1被诱导的9个样品(供体38-46)的HLA-DP-限制性。在各样品中，当将通过加入WT1-332进行诱导后第14天的T细胞用WT1-332刺激时，观察到WT1-332-特异性IFN-γ的产生，但当加入抗-HLA-DR抗体培养细胞时，且同样当加入抗-HLA-DQ抗体培养细胞时，均未抑制IFN-γ的产生。这显示由WT1-332诱导的T细胞是HLA-DP-限制的。在该图中，纵坐标表示供体编号(供体38-46)，和横坐标表示产生的IFN-γ量(pg/mL)。另外，符号“■”表示WT1-332刺激后产生的IFN-γ量，符号“阴影的□”表示WT1-332 + 抗-HLA-DR抗体刺激后产生的IFN-γ量，符号“虚线的□”表示WT1-332 + 抗-HLA-DQ抗体刺激后产生的IFN-γ量，符号“□”表示溶剂(对照)刺激后产生的IFN-γ量。
图12显示当在图6和图7中具有诱导的HLA-DP-限制的WT1-332-特异性Th1的9个样品(供体38-46)的每一个中，将通过加入WT1-332进行诱导后第14天的T细胞用WT1-332刺激时，WT1-332-特异性Th1细胞(CD4-阳性细胞/细胞内IFN-γ-阳性细胞)数量的比例增加。在该图中，纵坐标表示供体编号(供体38-46)，和横坐标表示活细胞中CD4-阳性细胞数量/细胞内IFN-γ-阳性细胞数量的比例(%)。另外，符号“■”表示WT1-332刺激后的比例，符号“□”表示溶剂(对照)刺激后的比例。
图13显示当在图6和图7中具有诱导的HLA-DP-限制的WT1-332-特异性Th1的各9个样品(供体38-46)中，将通过加入WT1-332进行诱导后第14天的T细胞用WT1-332刺激时，WT1-332-特异性CTL细胞(CD8-阳性细胞/细胞内IFN-γ-阳性细胞)数量的比例增加。在该图中，纵坐标表示供体编号(供体38-46)，和横坐标表示活细胞中CD8-阳性细胞数量/细胞内IFN-γ-阳性细胞数量的比例(%)。另外，符号“■”表示WT1-332刺激后的比例，符号“□”表示溶剂(对照)刺激后的比例。
具体实施方式
在一个方面，本发明提供用于激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的方法，所述方法包括通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的步骤，其中WT1肽具有与MHC II类分子结合的能力。在本发明中，可通过经过激活辅助性T细胞的步骤来进行激活细胞毒性T细胞的步骤。另外，本发明中使用的WT1肽是具有与以下任何MHC
II类分子结合的能力的WT1肽：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。此外，本发明使用的WT1肽可为具有与上述MHC II类分子中的至少两种或更多种MHC II类分子结合的能力的WT1肽。同样，本发明使用的WT1肽可具有与任何MHC II类分子(例如HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP分子)结合的能力。
在本发明中，WT1肽可为具有SEQ ID NO: 1中描述的人WT1蛋白的部分氨基酸序列的肽。本发明的肽在其氨基酸序列和长度上无特别限制，只要该肽具有上述特征即可。然而，太长的肽对蛋白酶作用敏感，而太短的肽不能与肽容纳槽(peptide
accommodating groove)很好结合。本发明肽的长度是以下的长度：优选10-25个氨基酸、更优选15-21个氨基酸、进一步优选16-20个氨基酸，例如16个氨基酸、17个氨基酸、18个氨基酸或19个氨基酸。本发明肽的具体实例是包含以下氨基酸序列的那些肽：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His
Leu Gln Met His Ser Arg Lys His (SEQ ID NO: 2)。
另外，本发明中使用的WT1肽包括上述肽的变体。变体可包含，例如选自具有以下氨基酸序列的肽：在SEQ
ID NO: 2描述的氨基酸序列中数个氨基酸(例如1-9、优选1-5、1-4、1-3、更优选1-2个氨基酸、进一步优选1个氨基酸)被取代、缺失或添加的氨基酸序列。可在任何位置上并用任何类型的氨基酸进行肽的氨基酸取代，优选保守氨基酸取代。保守氨基酸取代的实例包括Glu残基取代为Asp残基、Phe残基取代为Tyr残基、Leu残基取代为Ile残基、Ala残基取代为Ser残基、His残基取代为Arg残基等。优选地，氨基酸的添加或缺失可在肽的N端和C端进行，但也可在内部序列中进行。本发明肽的优选具体实例是具有SEQ
ID NO: 2的那些肽。在这一点上，任何上述肽必须具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，并必须激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞(本文亦称为CTL)。在本说明书中，上述WT1肽亦称为“WT1-332”。另外，人MHC分子通常称为HLA分子，并因此，MHC在本说明书中用作HLA的同义词。
此外，本发明的肽可为通过修饰上述氨基酸序列所获得的那些肽。可通过已知的方法修饰上述氨基酸序列的氨基酸残基。这样的修饰可为，例如，氨基酸残基侧链的官能团上的酯化、烷基化、卤化、磷酸化等。同样，可使多种物质与包含上述氨基酸序列的肽的N-端和/或C-端结合。例如，氨基酸、肽、其类似物等可与该肽结合。例如，可加入组氨酸标签，或者可与蛋白例如硫氧还蛋白一起形成融合蛋白。备选地，可将可检测性标签与WT1肽结合。如果这些物质与本发明的肽结合，那么可例如通过体内酶等或者通过例如细胞内加工的方法处理它们以最终产生由上述氨基酸序列组成的肽，该肽作为与MHC
II类分子的复合物被呈递至细胞表面上，藉此能够获得对辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞的诱导效应。这些物质可为调节本发明肽的溶解度的那些物质，改善肽的稳定性例如蛋白酶抗性的那些物质，允许本发明肽特异性递送例如至给定组织或器官的那些物质，或者具有增强抗原呈递细胞的摄取效率作用或其他作用的那些物质。这些物质还可为增加诱导CTL能力的那些物质，例如除本发明肽以外的辅助性肽。
可使用本领域通常使用的方法或者其改良方法合成本发明使用的WT1肽。这样的合成方法公开于，例如Peptide
Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, 第2卷, Academic Press
Inc., New York, 1976; Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd., 1975; Basis and
Experiments of Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd., 1985; Development of
Medicines (continuation), 第14卷, Peptide Synthesis, Hirokawa Shoten Co., 1991等。根据编码肽的核苷酸序列的信息，本发明所用的肽还可用基因工程技术制备。这样的基因工程技术为本领域技术人员所熟知。可根据例如文献中描述的那些方法进行这样的技术(Molecular
Cloning, T. Maniatis 等, CSH Laboratory
(1983); DNA Cloning, DM. Glover, IRL PRESS (1985))。
本发明还涉及编码上文所述的WT1肽的多核苷酸序列。编码WT1肽的多核苷酸序列可为DNA序列或RNA序列。在本发明中，可使用这样的多核苷酸序列代替WT1肽。可通过将其整合到合适的载体中来使用这样的多核苷酸序列。载体包括质粒、噬菌体载体、病毒载体等，例如pUC118、pUC119、pBR322、pCR3、pYES2、pYEUra3、pKCR、pCDM8、pGL2、pcDNA3.1、pRc/RSV、pRc/CMV、pAcSGHisNT-A、λZAPII、λgt11等。根据需要，载体可包含，因子例如表达诱导型启动子、编码信号序列的基因、用于选择的标志物基因和终止子。将这些基因导入细胞或活体的方法、表达它们的方法等是本领域技术人员已知的。
本发明使用的抗原呈递细胞是可将包含上述WT1肽的抗原肽与MHC
II类分子一起呈递给辅助性T细胞的那些细胞，并意指，例如，树突细胞、外周血单核细胞等。因此，本发明使用的抗原呈递细胞来源的受试者必须具有与加入的WT1肽所结合的MHC II类分子相同的分子(例如，以下MHC II分子中的任何一个或多个：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子、HLA-DPB1*0301分子等)。
在本发明中，将WT1肽加入抗原呈递细胞可直接通过加入WT1肽进行，或者间接通过加入编码WT1肽的多核苷酸或加入包含编码WT1肽的多核苷酸的表达载体或通过加入包含该表达载体的细胞进行。可通过本领域已知的方法进行上述加入。可通过本领域技术人员公知的技术获得上述编码WT1肽的多核苷酸、包含编码WT1肽的多核苷酸的表达载体和包含该表达载体的细胞。具体地，基于上述WT1肽的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO: 2中描述的氨基酸序列)，可确定本发明中使用的多核苷酸。可例如通过DNA或RNA合成、PCR法等制备上述多核苷酸。同样，可根据表达载体导入到其中的宿主的目的、类型等，合适地选择包含上述多核苷酸的表达载体的类型、除上述多核苷酸序列外所包含的序列等。表达载体包括质粒、噬菌体载体、病毒载体等。可例如通过转化宿主细胞来制备包含表达载体的细胞。宿主细胞包括大肠杆菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、动物细胞等。用于转化宿主细胞的方法可为常规方法，并可使用，例如磷酸钙法、DEAE-葡聚糖法、电穿孔法和用于基因转移的脂质。
通常，当T细胞表面上的TCR-CD3复合物通过抗原呈递细胞表面上的MHC II类分子识别抗原肽时，激活辅助性T细胞，并通过抗原呈递细胞表面上的整联蛋白配体刺激T细胞表面上的整联蛋白。本说明书中辅助性T细胞的激活不仅包括辅助性T细胞的激活，还包括辅助性T细胞的诱导和增殖。本发明的激活的辅助性T细胞还可为未分化的T细胞(例如，幼稚T细胞)等。激活的辅助性T细胞具有通过促进B细胞和细胞毒性T细胞的诱导、增殖和激活来激活免疫系统的功能。因此，本发明的方法可用作用于治疗癌症等的辅助治疗。使用本发明的方法体外激活的辅助性T细胞还可用于治疗或预防癌症等，或者作为其中的辅助剂。可例如通过测量细胞因子例如干扰素(例如干扰素-γ等)和白细胞介素的产生或分泌来评价辅助性T细胞的激活。
在另一方面，本发明通过将WT1肽加入抗原呈递细胞提供用于激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的组合物。在本发明中，可通过经过辅助性T细胞的激活来进行细胞毒性T细胞的激活。虽然在本发明的组合物中可例示WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该核苷酸的载体和包含该载体的细胞，但是可使用任何分子，只要它们是能够在抗原呈递细胞表面上呈递作为抗原肽的WT1肽的因子即可。可如上文所述通过本领域技术人员公知的方法获得这些因子。
如上文所述，本发明使用的WT1肽具有与任何以下分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。本发明使用的WT1肽还可具有与上述MHC II类分子中的至少两种或更多种MHC II类分子结合的能力。此外，本发明使用的WT1肽可具有与HLA-DR、HLA-DQ或HLA-DP分子中的任何MHC II类分子结合的能力。
当将本发明的组合物给予具有以下任何一种或多种MHC II分子的受试者时：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，通过激活受试者的辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞来激活免疫系统。此外，WT1基因在多种癌症和肿瘤中是高度表达的，例如，在血液恶性肿瘤(例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤和恶性淋巴瘤)以及实体癌(例如胃癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌和卵巢癌)中，并因此，本发明的组合物可用作用于治疗或预防癌症的辅助剂。备选地，可使用使用本发明的组合物激活的辅助性T细胞、细胞毒性T细胞等，例如作为用于治疗上述癌症的辅助剂。
除了上述WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的载体和包含该载体的细胞外，本发明的组合物还可包含，例如载体、赋形剂、添加剂等。本发明组合物中包含的上述WT1肽等以WT1肽特异性方式激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞，并因此，该组合物可包含已知的MHC I类限制性WT1肽，或者可与这样的肽一起施用。
可根据条件(例如所需的辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞激活程度以及抗原呈递细胞的状态)，合适地选择用于施用本发明组合物的方法。施用方法包括，例如，通过皮内给药、皮下给药、肌内给药、静脉内给药、经鼻给药、口服给药等给予受试者，或者加入到抗原呈递细胞的培养液，但不限于此。可根据条件(例如所需的辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞激活程度以及抗原呈递细胞的状态)，合适地选择本发明组合物中包含的上述WT1肽等的量、组合物的形式、组合物的施用频率等。
在另一方面，本发明提供用于治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的步骤，其中该WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。本发明的方法通过激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞来激活受试者的免疫系统，藉此治疗或预防受试者的癌症。在本发明的方法中，可通过经过激活辅助性T细胞的步骤来进行激活细胞毒性T细胞的步骤。将WT1肽加入抗原呈递细胞可直接通过加入WT1肽进行，或者间接通过加入编码WT1肽的多核苷酸或加入包含编码WT1肽的多核苷酸的表达载体或通过加入包含该表达载体的细胞进行。如上所述，可通过本领域技术人员公知的方法获得上述编码WT1肽的多核苷酸、包含编码WT1肽的多核苷酸的表达载体和包含该表达载体的细胞。可对其施用本发明方法的受试者是相对于以下任何MHC
II类分子为阳性的那些受试者：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。本发明可应用的癌症可为任何癌症，并包括，例如造血器官肿瘤(例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤和恶性淋巴瘤)以及实体癌(例如胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌和卵巢癌)。本发明的方法还可与使用MHC I类分子-限制性WT1肽或其药物组合物治疗或预防癌症的方法一起使用。
在另一方面，本发明提供WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的载体和包含该载体的细胞用于制备上述组合物的用途。
在又一方面，本发明涉及含有上述WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的载体或包含该载体的细胞的试剂盒，所述试剂盒通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞，其中WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。优选地，该试剂盒用于在上述方法中激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞。本发明的试剂盒除了WT1肽外，还可包括例如抗原呈递细胞的获得工具、辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活性的评价工具等。通常，试剂盒带有说明书。可使用本发明的试剂盒有效激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞。
在另一方面，本发明提供抗原呈递细胞，其呈递包含WT1肽的抗原肽与MHC
II类分子的复合物。在这种情况下，MHC II类分子可为以下任何分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，或者可为上述MHC II类分子中的至少两种或更多种分子。可使用本领域技术人员已知的技术制备本发明的抗原呈递细胞。例如，它们可通过以下进行制备：分离来自癌症患者的具有抗原呈递能力的细胞，然后用上述WT1肽(例如，具有如SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列的肽)或用编码WT1肽的多核苷酸脉冲分离的细胞，或者将包含该多核苷酸的表达载体导入细胞，藉此使得包含WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合物能够在细胞表面上呈递(Cancer
Immunol. Immunother. 46:82, 1998; J. Immunol., 158: 第1796页, 1997; Cancer
Res., 59: 第1184页,
1999; Cancer Res., 56: 第5672页, 1996; J. Immunol., 161: 第5607页, 1998; J. Exp. Med., 184: 第465页, 1996)。在本说明书中，具有抗原呈递能力的细胞不受限制，只要它们表达能够在细胞表面上呈递WT1肽的MHC II类分子即可，并优选具有高的抗原呈递能力的外周血单核细胞或树突细胞。另外，本发明抗原呈递细胞的存在是通过细胞毒性T细胞活性的增加所确定的，细胞毒性T细胞活性的增加是通过干扰素-γ量的增加所确定的，如实施例中所示。本发明的抗原呈递细胞作为药物组合物的活性成分有效用于细胞治疗(例如，树突细胞治疗)。
在另一方面，本发明提供辅助性T细胞，其识别包含WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合物。在这种情况下，MHC II类分子可为以下任何分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，或者可为上述MHC II类分子中的至少两种或更多种分子。本发明的辅助性T细胞包括，例如，识别包含由SEQ ID NO: 2中描述的氨基酸序列组成的肽的抗原肽与以下任何MHC
II类分子的复合物的那些辅助性T细胞：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。本发明的辅助性T细胞可由本领域技术人员使用本领域已知的技术容易地制备和获得(Iwata, M. 等, Eur. J. Immunol, 26, 2081 (1996))。
在另一方面，本发明提供细胞毒性T细胞，其由识别包含WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合物的辅助性T细胞激活。本发明的细胞毒性T细胞包括，例如，由识别包含由SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列组成的肽的抗原肽与以下任何MHC II类分子的复合物的辅助性T细胞激活的那些细胞毒性T细胞：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。本发明的细胞毒性T细胞可由本领域技术人员使用已知的技术容易地制备。例如，它们通过以下进行制备：分离来自患者的外周血淋巴细胞，并在体外用肽(例如，具有SEQ ID NO: 2中描述的氨基酸序列的肽)、编码该肽的多核苷酸或包含该多核苷酸的表达载体刺激它们(Journal of Experimental Medicine 1999,
190:1669)。如此制备的细胞毒性T细胞可用作用于治疗或预防癌症等的药物组合物的活性成分。在本说明书的实施例中，通过给予WT-332，在来源于具有特定MHC类分子的受试者的样品中观察到诱导细胞毒性T细胞的活性。这显示呈递由WT1肽组成的抗原肽与MHC II类分子的复合物的抗原呈递细胞存在于外周血单核细胞中，并显示呈递该复合物的抗原呈递细胞、特异性识别它们的辅助性T细胞和由该辅助性T细胞诱导的细胞毒性T细胞的存在。
在另一方面，本发明提供具有包含WT1肽的上述抗原肽和MHC II类分子的HLA四聚体。MHC II类分子可为以下任何分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子或HLA-DPB1*0901分子，或者可为上述MHC II类分子中的至少两种或更多种分子。在本说明书中，HLA四聚体意指四聚化产物，其通过将由HLA蛋白与肽缔合所获得的复合物(HLA单体)生物素化，然后将生物素化产物与抗生物素蛋白结合而获得。包含多种抗原肽的HLA四聚体是市售可得的，并可容易制备本发明的HLA四聚体(Science
279: 2103-2106 (1998), Science 274: 94-96 (1996))。本发明的四聚体优选用荧光标记，以便可通过已知的检测手段(例如流式细胞术和荧光显微镜)容易地选择或检测本发明的结合的辅助性T细胞和细胞毒性T细胞。本发明的HLA四聚体不限于四聚体，并视需要可使用多聚体例如五聚体和树状聚体。在本说明书中，多聚体意指多聚化产物，其是通过使用已知的技术将两个或更多个复合物(HLA单体)结合获得的，该复合物由HLA蛋白与肽结合获得。
在另一方面，本发明提供用于激活辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的药物组合物，所述药物组合物包含上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚体中的任一种作为活性成分。本发明的药物组合物可包含上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性细胞、细胞毒性T细胞或四聚体中的任何一种或多种作为活性成分。本发明的药物组合物可用于治疗或预防癌症。可将本发明的药物组合物施用于表达WT1的多种癌症和肿瘤，例如施用于造血器官肿瘤(例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤和恶性淋巴瘤)以及实体癌(例如胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌和卵巢癌)。本发明的药物组合物还可用于给予具有MHC II类分子的受试者，MHC
II类分子例如HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。本发明的药物组合物可与用于治疗或预防癌症的其他方法或者组合物一起使用。此外，本发明的药物组合物可包含辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的激活剂、增殖剂、诱导剂等，或者可包含已知的MHC I类-限制性WT1肽。
除了活性成分外，本发明的药物组合物还可包含，例如载体、赋形剂等。可根据条件(例如疾病类型、受试者的状态和靶位点)合适地选择本发明药物组合物的给药方法。该方法包括，例如皮内给药、皮下给药、肌内给药、静脉内给药、经鼻给药、口服给药等，但不限于此。可根据条件(例如疾病类型、受试者的状态和靶位点等)合适地选择本发明药物组合物中所包含的上述活性成分量、组合物的剂型、组合物的给药频率等。
在另一方面，本发明提供用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括将上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚体中的任一种以有效量给予受试者的步骤，其中该受试者具有以下任何MHC
II类分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。通过本发明的方法可治疗或预防的癌症是表达WT1的多种癌症和肿瘤，例如，造血器官肿瘤(例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤和恶性淋巴瘤)以及实体癌(例如胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、宫颈癌和卵巢癌)。本发明的方法可与治疗或预防癌症的其他方法一起使用，例如使用已知的MHC I类分子-限制性WT1肽治疗或预防癌症的方法。
在另一方面，本发明提供上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚体中的任一种用于制备上述药物组合物的用途。
在一个方面，本发明涉及与上述WT1肽或编码WT1肽的多核苷酸特异性结合的抗体(在下文中，该抗体亦被称为抗-WT1抗体)。本发明的抗体可为多克隆抗体或单克隆抗体。具体地，可提及与具有SEQ
ID NO: 2等中所示的氨基酸序列的肽特异性结合的抗体等。用于制备这样的抗体的方法是已知的，并亦可根据这样的常规方法制备本发明的抗体(Current
protocols in Molecular Biology, Ausubel 等 (主编), 1987, John Wiley and Sons (出版), 第11.12-11.13章, Antibodies; A Laboratory Manual, Lane, H. D. 等 (主编), Cold Spring
Harber Laboratory Press (出版), New York,
1989)。例如，使用具有SEQ ID NO: 2中描述的氨基酸序列的肽作为免疫原来免疫非人动物(例如家兔)，并可通过常规方法从动物的血清中获得多克隆抗体。另一方面，在单克隆抗体的情况下，使用本发明所使用的肽(具有SEQ ID NO: 2中描述的氨基酸序列的肽)来免疫非人动物(例如小鼠)，并将得到的脾细胞与骨髓瘤细胞融合以制备杂交瘤细胞，可由此获得单克隆抗体(Current
protocols in Molecular Biology, Ausubel 等 (主编), 1987, John Wiley and Sons (出版), 第11.4-11.11章)。还可根据宿主，通过使用多种佐剂加强免疫反应来制备本发明的抗-WT1抗体。这样的佐剂包括矿物质凝胶(例如，弗氏佐剂、氢氧化铝等)、表面活性剂、人佐剂等。本发明的抗-WT1抗体可用于亲和层析、免疫学诊断等。用于免疫学诊断的方法可合适地选自免疫印迹、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、荧光或发光测量等。
在另一方面，本发明提供用于测定受试者中WT1肽的存在或量的方法，所述受试者对于以下任何MHC
II类分子阳性：HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0401、HLA-DRB1*0403、HLA-DRB1*0406、HLA-DRB1*0803、HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*1101、HLA-DRB3*0202、HLA-DRB4*0101或HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，该方法包括以下步骤：
(a) 使获自受试者的样品与上述抗-WT1抗体反应，然后
(b) 测定样品中包含的上述抗-WT1抗体的存在或量。
可将获自具有以下任何MHC II类分子的受试者的样品用作上述步骤(a)中使用的样品：HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0401、HLA-DRB1*0403、HLA-DRB1*0406、HLA-DRB1*0803、HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*1101、HLA-DRB3*0202、HLA-DRB4*0101或HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子。上述步骤(a)中使用的样品包括，例如体液和组织(例如血液和淋巴细胞)。本领域技术人员使用已知的技术可合适地获得样品，使其与抗体反应并进行其他步骤。本发明的步骤(b)包括，例如测定上述抗-WT1抗体的定位、位点、量等，并因此本发明可用于癌症的诊断、预后等。上述抗-WT1抗体可被标记。作为标签，可使用已知标签，例如荧光标签和放射性标签。通过标记，可简单和快速地进行WT1肽的存在或量的测定。
在另一方面，本发明涉及用于测定WT1肽的存在或量的试剂盒，所述试剂盒包含作为必需组分的上述抗-WT1抗体。本发明的试剂盒除了上述抗-WT1抗体外，还可包含例如获得抗-WT1抗体的工具和评价抗-WT1抗体的工具等。通常，试剂盒带有说明书。通过使用本发明的试剂盒，可在上述测定WT1肽的存在或量的方法中简单和快速地测定WT1肽的存在或量。
在另一方面，本发明提供一种用于测定受试者中WT1-特异性辅助性T细胞或WT1-特异性细胞毒性T细胞的存在或量的方法，所述受试者对于以下任何MHC II类分子阳性：HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0401、HLA-DRB1*0403、HLA-DRB1*0406、HLA-DRB1*0803、HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*1101、HLA-DRB3*0202、HLA-DRB4*0101或HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，该方法包括以下步骤：
(a) 使用WT1肽刺激获自受试者的样品，和
(b) 测定细胞因子、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的存在或量，其中细胞因子、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的存在或量的增加显示WT1-特异性辅助性T细胞或WT1-特异性细胞毒性T细胞的存在或量。
本发明的样品可为任何样品，只要其包含抗原呈递细胞即可，并包括例如，外周血单核细胞、侵袭性淋巴细胞、肿瘤细胞、腹水的细胞、胸腔积液的细胞、脑脊液的细胞、骨髓细胞、淋巴结细胞等。本发明使用的样品可来源于健康供体或癌症患者。通过使用来源于健康供体的那些细胞，例如可诊断是否供体受癌症影响、是否供体具有癌症的倾向等。通过使用来源于癌症患者的那些细胞，例如可预测是否WT1免疫治疗在癌症患者中有效果等。在本发明的方法中，可在用WT1肽刺激之前和之后培养获得的样品，培养条件可由本领域技术人员合适地确定。可使用已知技术例如电穿孔进行WT1肽对这些细胞的刺激，并可在体外或体内进行。可通过已知方法测定细胞因子的产生、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的反应的存在、所产生的细胞因子的量或者反应的辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的量。
在另一方面，本发明涉及用于测定WT1肽的存在或量的试剂盒，所述试剂盒包含作为必需组分的上述WT1肽。除了上述WT1肽外，本发明的试剂盒还可包含例如获得样品的工具和评价工具例如细胞因子。通常，试剂盒附有说明书。通过使用本发明的试剂盒，可在上述用于测定WT1肽的存在或量的方法中简单和快速地测定WT1肽的存在或量。
将通过实施例的方式详细和具体地描述本发明，但其不应被理解为限制本发明。
实施例
1
1. WT1-332-
特异性
I
型辅助性
T
细胞的诱导
从健康血液供体(供体1：HLA-DRB1*0406/1201-、DRB3*0101-和DRB4*0103-阳性，供体2：HLA-DRB1*0901/1101-、DRB3*0202-和DRB4*0103-阳性，供体3：HLA-DRB1*0401/0405-和DRB4*0102/0103-阳性，供体4：HLA-DRB1*0901/1101-、DRB3*0202-和DRB4*0103-阳性)的外周血中分离外周血单核细胞(PBMC)。将分离的PBMC (1.5 × 107细胞)在由45% RPMI-1640
(SIGMA)、45% AIM-V (Invitrogen)和10% AB型人血清 (MP
Biomedicals)组成的培养基中悬浮，并以1.5 × 106细胞/孔接种于24孔板(第0天)。以10 μg/mL浓度将WT1-332 (由SEQ ID NO: 2中描述的氨基酸序列组成的肽)和以10 ng/mL浓度将IL-7 (PeproTech)加入用PBMC接种的孔中，并于37℃将细胞在5% CO2下培养一周。另外，将分离的PBMC的一部分冷冻保存用于再刺激情况下的抗原呈递细胞。
一周后(在第7天)，进行再刺激。首先，将冷冻保存的PBMC解冻，用10 μg/mL WT1-332脉冲，用50 μg/mL丝裂霉素C (Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.)处理，并以1.0 × 106-1.6
× 106细胞/孔接种于新的24孔板。接着，回收培养了一周的细胞，并以1.0 × 106-1.6
× 106细胞/孔接种于用抗原呈递细胞接种过的孔中。最后，将IL-7以10 ng/mL的浓度加入各孔中，并于37℃在5% CO2下培养细胞。2天后(在第9天)，将各孔中的半量培养液轻轻移除，并将包含40
U/mL IL-2 (PeproTech)的培养基代替加入到各孔中，继续培养。此后，每隔一天使用包含20
U/mL IL-2的培养基进行半量培养液的置换步骤，合适地回收第14天与第21天之间的细胞并将其用于实验。
2.
用于限制性等位基因的测定实验的抗原呈递细胞的制备
从健康血液供体(供体5：HLA-DRB1*0406/1201-、DRB3*0101-和DRB4*0103-阳性，供体6：HLA-DRB1*0403/1405-、DRB3*0202-和DRB4*0103-阳性，供体7：HLA-DRB1*0403/1201-、DRB3*0101-和DRB4*0103-阳性，供体8：HLA-DRB1*0101/0901-和DRB4*0103-阳性，供体9：HLA-DRB1*1401/1406-和DRB3*0202-阳性，供体10：HLA-DRB1*0803/0901-和DRB4*0103-阳性，供体11：HLA-DRB1*1101/1502-和DRB3*0202-阳性，供体12：HLA-DRB1*0405/1406-、DRB3*0202-和DRB4*0103-阳性，供体13：HLA-DRB1*0401/0405-和DRB4*0102/0103-阳性，供体14：HLA-DRB1*0401/1502-和DRB4*0102-阳性，供体15：HLA-DRB1*0101/0405-和DRB4*0103-阳性，供体16：HLA-DRB1*0901/1501-和DRB4*0103-阳性，供体17：HLA-DRB1*0405/1501-和DRB4*0103-阳性，供体18：HLA-DRB1*1401/1502-和DRB3*0202-阳性，供体19：HLA-DRB1*1403/1502-和DRB3*0101-阳性，供体20：HLA-DRB1*0803/1302-和DRB3*0301-阳性)的外周血中分离PBMC，并用作测定限制性等位基因的实验中所使用的抗原呈递细胞。将各供体的PBMC在-80℃冷冻保存直至使用。
3.
IFN-
γ的测量
(
在抗
-HLA-DR
抗体存在下反应的抑制
)
在WT1-332不存在下、在10 μg/mL WT1-332存在下、在10 μg/mL WT1-332和10 μg/mL 抗-HLA-DR 抗体(BD Co.)存在下，将从供体1-4的PBMC诱导的T细胞培养24小时。培养后，通过ELISA (BD Co.)来定量上清液中的IFN-γ量。结果显示，所有诱导的T细胞识别WT1-332并产生IFN-γ，且该反应是HLA-DR分子-限制的。
4.
IFN-
γ的测量
(
限制性等位基因的测定
)
使从供体1-4的PBMC诱导的T细胞与用WT1-332脉冲的各适当的抗原呈递细胞反应，并测定所诱导的T细胞的限制性等位基因。
(4-1.
来源于供体1的T细胞)
将从供体1的PBMC诱导的T细胞与用10 μg/mL WT1-332脉冲的来源于供体5、6、7、8和9的抗原呈递细胞共培养24小时。共培养后，通过ELISA来定量上清液中的IFN-γ量。结果如图1所示。当与HLA-DR4 (DRB1*0403, 0406)-阳性抗原呈递细胞共培养时，来源于供体1的T细胞产生IFN-γ，其揭示限制性等位基因是HLA-DRB1*0406。还显示HLA-DRB1*0403可呈递WT1-332并刺激T细胞。
(4-2.
来源于供体2的T细胞)
将从供体2的PBMC诱导的T细胞与用10 μg/mL WT1-332脉冲的来源于供体10、11、12和9的抗原呈递细胞共培养24小时。共培养后，通过ELISA来定量上清液中的IFN-γ量。结果如图2所示。当与HLA-DRB3*0202-阳性抗原呈递细胞共培养时，来源于供体2的T细胞产生IFN-γ，其揭示限制性等位基因是HLA-DRB3*0202。
(4-3.
来源于供体3的T细胞)
将从供体3的PBMC诱导的T细胞与用10 μg/mL WT1-332脉冲的来源于供体13、14、15和10的抗原呈递细胞共培养24小时。共培养后，通过ELISA来定量上清液中的IFN-γ量。结果如图3所示。当与HLA-DR4
(DRB1*0401, 0405)-阳性抗原呈递细胞共培养时，来源于供体3的T细胞产生IFN-γ，其揭示HLA-DRB1*0401和0405两者可呈递WT1-332并刺激T细胞。
(4-4.
来源于供体4的T细胞)
将从供体4的PBMC诱导的T细胞与用10 μg/mL WT1-332脉冲的来源于供体16、11、17、18、19和20的抗原呈递细胞共培养24小时。共培养后，通过ELISA来定量上清液中的IFN-γ量。结果如图4所示。当与HLA-DRB1*1101-阳性抗原呈递细胞共培养时，来源于供体4的T细胞产生IFN-γ，其揭示限制性等位基因是HLA-DRB1*1101。
实施例
2
接着，为了评价WT1-332与MHC
II类分子的结合能力，使用HPLC进行7种HLA II类单体蛋白(DRB1*1501、0101、0405、0803、0901、1502或DRB4*0101)与WT1-332的折叠测试。简言之，通过将HLA II类单体蛋白、肽[与各蛋白结合的肽(阳性对照)、不与各蛋白结合的肽(阴性对照)和WT1-332]与折叠缓冲液混合来制备折叠反应溶液。使该溶液在37℃反应后，使用HPLC分析保留时间。通过利用HLA II类单体蛋白与肽的结合所引起的保留时间的变化来评价与WT1-332的折叠。该测试使用的试剂在下表中示出。
(表1：测试中使用的试剂)
表1
HLA II
类单体蛋白的制备
在冰上解冻于-80℃冷冻保存的HLA
II类单体蛋白。使用稀释缓冲液调整解冻的HLA II类单体蛋白使得它们以0.05 mg (1 × 10-9
mol)的量包含在83 μL中。
肽溶液的制备
通过电子天平称量约1 mg的各肽，将其转移到玻璃管中，并溶解于DMSO中以得到20 mg/mL的浓度。
50
倍摩尔量的肽溶液的量的计算
使用下述计算公式计算相对于HLA II类单体蛋白为50倍摩尔量的肽的量。
所需要的肽的量：1 × 10-9
mol × 50 = 5 × 10-8
mol (所需要的肽的量)
5 × 10-8 × (肽的分子量) × 1,000 = (所需要的肽的量)
(mg)
(所需要的肽的量)/[肽的纯度/100]
= (所加入的肽的量) (mg)
[(所加入的肽的量)/20 mg/mL] × 1,000 = (所加入的肽溶液的量) (μL)。
加入的折叠缓冲液的量的计算
作为折叠缓冲液，加入10%量的HLA
II类单体蛋白与肽的混合溶液。使用下述计算公式计算所加入的折叠缓冲液的量。
[83 μL (HLA II类单体蛋白的量) + (50-倍摩尔量的肽溶液的量)] × 0.1 = 所加入的折叠缓冲液的量。
使用
HPLC
分析折叠
以计算的量将肽溶液和折叠缓冲液加入装有HLA II类单体蛋白的玻璃管中，并使混合物在37℃静置过夜。开始HPLC
(Waters 2695 Separation Module)，并用平衡缓冲液平衡Seperdex 200柱。将300 μL的平衡缓冲液加入所有样品中并充分混合，将100 μL部分的混合物用作样品注射体积以计算保留时间。分析时间为50分钟。HLA
II类单体蛋白与肽的折叠的标准是，与对照(仅溶剂)相比，保留时间变化不小于0.1分钟。结果发现，在所测试的7种HLA II类单体蛋白(DRB1*1501、0101、0405、0803、0901、1502或DRB4*0101)中保留时间的变化程度增加不小于0.1分钟(图5)，藉此很明显WT1-332与这些蛋白特异性结合并可作为抗原被呈递。
实施例
3
WT1-332-
特异性
T
细胞的诱导
从健康血液供体(具有HLA-DRB1*1501、1502、0405、HLA-DPB1*0501和0901中至少一个的总计42个供体)的外周血中分离外周血单核细胞(PBMC)。将分离的PBMC分为每份1.2 × 107个细胞，将其在由45% RPMI-1640 (SIGMA)、45%
AIM-V (Invitrogen)和10% AB型人血清 (MP Biomedicals)组成的培养基中悬浮，并以1.5 × 106细胞/孔接种于24孔板(在第0天)。以20 μg/mL浓度将WT1-332和以10 ng/mL浓度将IL-7 (PeproTech)加入用PBMC接种的孔中，并将细胞于37℃在5% CO2下培养一周。将以10 μM的终浓度的溶剂(10 mM醋酸)代替WT1-332加入的组(溶剂诱导组)设为对照组。另外，将分离的PBMC的一部分冷冻保存用于再刺激时的抗原呈递细胞。
一周后(在第7天)，进行再刺激。首先，将冷冻保存的PBMC解冻，用20 μg/mL WT1-332或10 μM 醋酸溶剂脉冲，用50 μg/mL丝裂霉素C (Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.)处理，并以1.0 × 106-1.6
× 106细胞/孔接种于新的24孔板。接着，回收培养了一周的细胞，并以1.0 × 106-1.6
× 106细胞/孔接种于用抗原呈递细胞接种过的孔中。最后，将IL-7以10 ng/mL的浓度加入各孔中，并于37℃在5% CO2下培养细胞。2天后(在第9天)，将各孔中的半量培养液轻轻移除，并将包含40
U/mL IL-2 (PeproTech)的培养基代替加入到各孔中，继续培养。此后，每隔一天使用包含20
U/mL IL-2的培养基进行半量培养液的置换步骤。
在第0天、第7天和第14天回收细胞并将其用于测量IFN-γ的实验。
IFN-
γ的测量
[
细胞内细胞因子染色
(ICS)]
通过第0天将制备后的PBMC以及第7天和第14天将从WT1-332诱导组和溶剂诱导组回收的活细胞接种于96孔U底板，并加入终浓度为20 μg/mL的包含WT1-332的培养基，进行抗原再刺激。另外，加入终浓度为10 μM的包含溶剂的培养基作为对照。于37℃在5% CO2下培养细胞4小时后，加入布雷菲德菌素A (BioLegend)，并进一步继续培养。培养开始6小时后，回收细胞并用PE-标记的抗-人CD4抗体和FITC-标记的抗-人CD8抗体染色。使用BD
Cytofix/Cytoperm固定/透化试剂盒(Becton Dickinson)和PerCP/Cy5.5-标记的抗-人IFN-γ抗体进行细胞内IFN-γ染色。将EPICS-XL MCL
(Beckman Coulter)用于分析。结果如图6和7所示。从图6中，证实在WT1-332诱导组中，WT1-332-特异性Th1在第7天与第14天之间显著并时间依赖性地增加。该增加相对于溶剂诱导组是显著的(P
< 0.0001)。从图7中，证实在WT1-332诱导组中，WT1-332-特异性CTL在第7天与第14天之间时间依赖性地增加，且该增加相对于溶剂诱导组是显著的(P < 0.0001)。
IFN-
γ的测量
(
在抗
-HLA-DR
抗体和抗
-HLA-DQ
抗体的存在下反应的抑制
)
在第14天，在10 μM的溶剂存在下、在20 μg/mL的WT1-332存在下以及在20 μg/mL的WT1-332和10 μg/mL的抗-HLA-DR抗体(L243[G46-6], BD Co.)存在下，将从供体21-37的PBMC诱导的T细胞培养24小时。培养后，通过ELISA (BD Co.)来定量上清液中的IFN-γ量。结果如图8所示。在来自供体21-37的样品中，显示诱导的T细胞识别WT1-332并产生IFN-γ，且该反应是HLA-DR分子-限制的。
同样，在第14天，在10 μM的溶剂存在下、在20 μg/mL的WT1-332存在下以及在20 μg/mL的WT1-332和10 μg/mL的抗-HLA-DR 抗体(L243[G46-6], BD Co.)或10 μg/mL的抗- HLA-DQ抗体(SPVL3, BC Co.)存在下，将从供体38-46的PBMC诱导的T细胞培养24小时。培养后，通过ELISA (BD Co.)来定量上清液中的IFN-γ量。结果如图11所示。在来自供体38-46的样品中，诱导的T细胞识别WT1-332并产生IFN-γ，且该反应不被抗-HLA-DR抗体和抗-HLA-DQ抗体所抑制。从这些事实很明显看出，来源于供体38-46的WT1-332-诱导的T细胞是HLA-DP分子-限制的。
WT1-332-
特异性
T
细胞的诱导
(
与新的等位基因的关系
)
关于在使用图6和7的健康血液供体(具有HLA-DRB1*1501、1502、0405、HLA-DPB1*0501和0901中至少一个的总计42个供体)的结果中为HLA-DR-限制的并具有诱导的WT1-332-特异性Th1的17个样品(供体21-37)的每一个，第14天的结果如图9和10所示。另外，17个样品(供体21-37)中每一个的HLA II类类型(HLA-DRB1等位基因和HLA-DPB1等位基因的类型)在下述表2中示出。在这一点上，DRB3*0202与DRB1*1101、DRB1*1401和DRB1*1405是连锁不平衡的(在该表中DRB1等位基因通过符号“Δ”表示)，DRB4*0101与DRB1*0403、DRB1*0405和DRB1*0901是连锁不平衡的(在该表中DRB1等位基因通过符号“▲”表示)。在该表中，等位基因通过粗体表示，斜体字母代表新的相容性HLA-DRB1等位基因。
表2
从图9、图10和表2中，在具有这些HLA-DR等位基因的细胞中观察到WT1-332-特异性Th1和WT1-332-特异性CTL的诱导。
另外，关于在使用图6和7的健康血液供体(具有HLA-DRB1*1501、1502、0405、HLA-DPB1*0501和0901中至少一个的总计42个供体)的结果中为HLA-DP-限制的并具有诱导的WT1-332-特异性Th1的9个样品(供体38-46)的每一个，第14天的结果如图12和13所示。另外，9个样品(供体38-46)中每一个的HLA II类类型(HLA-DRB1等位基因和HLA-DPB1等位基因的类型)在下述表3中示出。在该表中，符号“*”表示之前已知的相容性HLA-DPB1等位基因。
表3
从图12、图13和表3中，在具有这些HLA-DP等位基因的细胞中观察到WT1-332-特异性Th1和WT1-332-特异性CTL的诱导。
工业应用性
本发明提供用于激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞的方法及用于其的组合物，所述方法使用具有与以下任何MHC
II类分子结合的能力的WT1肽：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，提供用于通过激活辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞来治疗和/或预防癌症的药物组合物等。因此，本发明可应用于药物领域等，例如多种高度表达WT1基因的造血器官肿瘤和实体癌的预防或治疗的开发和生产领域。
Claims (17)
1.WT1肽在制备用于激活辅助性T细胞的方法中的试剂盒中的用途，所述方法包括通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞的步骤，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
2.权利要求1的用途，其中所述WT1肽具有与以下至少2种MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子和HLA-DPB1*0301分子。
3.权利要求1或2的用途，其中所述WT1肽还具有与以下分子结合的能力：HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子和/或HLA-DPB1*0901分子。
4.权利要求1或2的用途，其中将WT1肽加入抗原呈递细胞是通过加入WT1肽、编码所述WT1肽的多核苷酸、包含该多肽的表达载体或者包含该表达载体的细胞进行的。
5.权利要求3的用途，其中将WT1肽加入抗原呈递细胞是通过加入WT1肽、编码所述WT1肽的多核苷酸、包含该多肽的表达载体或者包含该表达载体的细胞进行的。
6.用于通过将WT1肽加入抗原呈递细胞来激活辅助性T细胞的包含WT1肽的组合物，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
7.权利要求6的组合物，其中所述WT1肽具有与以下至少2种MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子和HLA-DPB1*0301分子。
8.权利要求6或7的组合物，其中所述WT1肽还具有与以下分子结合的能力：HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DPB1*0501分子和/或HLA-DPB1*0901分子。
9.权利要求6或7的组合物，其中将WT1肽加入抗原呈递细胞是通过加入WT1肽、编码所述WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体或者包含该表达载体的细胞进行的。
10.权利要求8的组合物，其中将WT1肽加入抗原呈递细胞是通过加入WT1肽、编码所述WT1肽的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体或者包含该表达载体的细胞进行的。
11.呈递包含WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合物的抗原呈递细胞，其中所述MHC II类分子是以下任何MHC II类分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
12.识别包含WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合物的辅助性T细胞，其中所述MHC II类分子是以下任何MHC II类分子：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
13.通过权利要求12的辅助性T细胞激活的细胞毒性T细胞。
14.用于治疗或预防癌症的药物组合物，所述药物组合物包含权利要求5-10中任一项的组合物、权利要求11的抗原呈递细胞、权利要求12的辅助性T细胞或权利要求13的细胞毒性T细胞中的任一种作为活性成分。
15.用于激活细胞毒性T细胞的药物组合物，所述药物组合物包含WT1肽、编码所述WT1肽的多核苷酸、包含多该核苷酸的表达载体或包含该表达载体的细胞中的任一种作为活性成分，并所述药物组合物被给予具有以下任何MHC II类分子的受试者：HLA-DPB1*0501分子、HLA-DPB1*0901分子、HLA-DPB1*0201分子、HLA-DPB1*0301分子、HLA-DRB1*1501分子、HLA-DRB1*1502分子、HLA-DRB1*0405分子、HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子或HLA-DRB4*0101分子，其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
16.与WT1肽特异性结合的抗体，其中所述WT1肽具有与以下任何MHC II类分子结合的能力：HLA-DRB1*0101分子、HLA-DRB1*0401分子、HLA-DRB1*0403分子、HLA-DRB1*0406分子、HLA-DRB1*0803分子、HLA-DRB1*0901分子、HLA-DRB1*1101分子、HLA-DRB3*0202分子、HLA-DRB4*0101分子、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
17.WT1肽在制备用于测定受试者中WT1-特异性辅助性T细胞的存在或量的方法中的试剂盒中的用途，所述受试者对于以下任何MHC
II类分子阳性：HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0401、HLA-DRB1*0403、HLA-DRB1*0406、HLA-DRB1*0803、HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*1101、HLA-DRB3*0202、HLA-DRB4*0101、HLA-DPB1*0201分子或HLA-DPB1*0301分子，所述方法包括以下步骤：
(a) 使用所述WT1肽刺激获自受试者的样品，和
(b) 测定细胞因子或辅助性T细胞的存在或量，其中细胞因子或辅助性T细胞的存在或量的增加显示WT1-特异性辅助性T细胞的存在或量，
其中所述WT1肽是选自下述的肽：
（a）由SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser
His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）组成的肽，其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加；
（b）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His）；和
（c）由25个氨基酸或更少的氨基酸组成的肽，其含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列（Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His），其中1-5个氨基酸被取代、缺失或添加。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010-225806 | 2010-10-05 | ||
| JP2010225806 | 2010-10-05 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201180058552.2A Division CN103298928B (zh) | 2010-10-05 | 2011-10-04 | 用于激活辅助性t细胞的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105802910A true CN105802910A (zh) | 2016-07-27 |
Family
ID=45927725
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201180058552.2A Active CN103298928B (zh) | 2010-10-05 | 2011-10-04 | 用于激活辅助性t细胞的方法 |
| CN201610191489.4A Pending CN105802910A (zh) | 2010-10-05 | 2011-10-04 | 用于激活辅助性t细胞的方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201180058552.2A Active CN103298928B (zh) | 2010-10-05 | 2011-10-04 | 用于激活辅助性t细胞的方法 |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10654892B2 (zh) |
| EP (1) | EP2626418B8 (zh) |
| JP (3) | JP6134139B2 (zh) |
| KR (3) | KR102079480B1 (zh) |
| CN (2) | CN103298928B (zh) |
| AR (1) | AR083295A1 (zh) |
| AU (1) | AU2011313327B2 (zh) |
| BR (1) | BR112013008230A2 (zh) |
| CA (1) | CA2813557C (zh) |
| CO (1) | CO6710946A2 (zh) |
| EA (1) | EA037547B1 (zh) |
| ES (1) | ES2849187T3 (zh) |
| IL (2) | IL225536B (zh) |
| MX (2) | MX361299B (zh) |
| MY (1) | MY170306A (zh) |
| NZ (2) | NZ609460A (zh) |
| SG (3) | SG189287A1 (zh) |
| TW (2) | TW201623616A (zh) |
| WO (1) | WO2012046730A1 (zh) |
| ZA (1) | ZA201303056B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112812154A (zh) * | 2018-02-15 | 2021-05-18 | 国立大学法人旭川医科大学 | 癌症抗原肽 |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101213015B1 (ko) | 2003-11-05 | 2012-12-26 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | Ｗｔ１ 로부터 유도된 ｈｌａ-ｄｒ 결합성 항원 펩티드 |
| EP2565201B1 (en) | 2005-10-17 | 2014-11-26 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | WT1 HLA class II-binding peptides and compositions and methods comprising same |
| CA2645766A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
| CN104774910B (zh) | 2007-02-27 | 2018-04-10 | 株式会社癌免疫研究所 | 活化辅助t细胞的方法以及用于该方法的组合物 |
| AR076349A1 (es) | 2009-04-23 | 2011-06-01 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Peptido auxiliar del antigeno del cancer |
| CN104684577B (zh) | 2012-01-13 | 2018-05-08 | 纪念斯隆凯特林癌症中心 | 免疫原性wt-1肽及其使用方法 |
| CN104797711B (zh) * | 2012-09-12 | 2018-09-21 | 株式会社癌免疫研究所 | 抗原特异性辅助性t细胞受体基因 |
| MX2015007745A (es) * | 2012-12-17 | 2015-12-15 | Otsuka Pharma Co Ltd | Metodo para activar la celula t auxiliar. |
| PT2945647T (pt) | 2013-01-15 | 2020-11-26 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Péptidos imunogénicos wt-1 e métodos de uso dos mesmos |
| US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
| RU2668560C2 (ru) | 2013-03-29 | 2018-10-02 | Сумитомо Дайниппон Фарма Ко., Лтд. | Конъюгированная вакцина на основе пептида антигена wt1 |
| KR101804343B1 (ko) | 2014-02-26 | 2017-12-04 | 텔라 가부시키가이샤 | Ｗｔ１ 항원성 폴리펩티드 및 상기 폴리펩티드를 포함하는 항종양제 |
| CA2974066A1 (en) | 2014-12-25 | 2016-06-30 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method for modifying t cell population |
| CN106565836B (zh) * | 2015-10-10 | 2020-08-18 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 高亲和力的可溶性pdl-1分子 |
| DK3539974T5 (en) | 2016-11-09 | 2024-05-27 | Osaka Univ | Method for modifying t cell population |
| US20200016255A1 (en) * | 2016-11-30 | 2020-01-16 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Wt1 helper peptides and combinations of wt1 helper peptide and conjugate of cancer antigen peptides |
| WO2019131722A1 (ja) * | 2017-12-27 | 2019-07-04 | 大日本住友製薬株式会社 | Ｗｔ１由来ペプチドのコンジュゲート体およびこれを含む組成物 |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5726288A (en) | 1989-11-13 | 1998-03-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Localization and characterization of the Wilms' tumor gene |
| JP4422903B2 (ja) | 1998-07-31 | 2010-03-03 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌抑制遺伝子ｗｔ１の産物に基づく癌抗原 |
| US7063854B1 (en) | 1998-09-30 | 2006-06-20 | Corixa Corporation | Composition and methods for WTI specific immunotherapy |
| MXPA01003344A (es) | 1998-09-30 | 2004-04-21 | Corixa Corp | Composiciones y metodos para inmunoterapia especifica de wt1. |
| US20030235557A1 (en) | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
| JP2003524021A (ja) | 2000-02-22 | 2003-08-12 | コリクサ コーポレイション | 悪性中皮腫の診断および治療のための組成物および方法 |
| KR100863853B1 (ko) | 2001-03-22 | 2008-10-15 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 더블유티1 개변 펩티드 |
| GB0108491D0 (en) | 2001-04-04 | 2001-05-23 | Gendaq Ltd | Engineering zinc fingers |
| EP2014300B1 (en) | 2001-06-29 | 2011-01-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer vaccine comprising a cancer antigen based on the product of a tumor suppressor gene WT1 and a cationic liposome |
| JP5230891B2 (ja) | 2001-09-28 | 2013-07-10 | 株式会社癌免疫研究所 | 抗原特異的ｔ細胞の新規な誘導方法 |
| US20050002951A1 (en) | 2001-09-28 | 2005-01-06 | Haruo Sugiyama | Novel method of inducing antigen-specific t cells |
| CA2489227C (en) | 2002-06-12 | 2012-03-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hla-a24-restricted cancer antigen peptides |
| JP4611022B2 (ja) | 2002-09-12 | 2011-01-12 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌抗原ペプチド製剤 |
| AU2003264514A1 (en) | 2002-09-20 | 2004-04-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Wt1 substitution peptides |
| KR20120054644A (ko) | 2003-01-15 | 2012-05-30 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 이량체화 펩티드 |
| EP1640458B1 (en) | 2003-06-27 | 2011-12-28 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | Method of selecting patients suitable for wt1 vaccine |
| KR101213015B1 (ko) | 2003-11-05 | 2012-12-26 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | Ｗｔ１ 로부터 유도된 ｈｌａ-ｄｒ 결합성 항원 펩티드 |
| DK2186896T3 (en) | 2004-03-31 | 2015-12-21 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Cancer antigen peptides derived from WT1 |
| US7608769B2 (en) * | 2004-05-12 | 2009-10-27 | First Act, Inc. | Packaged drum set |
| JP4719876B2 (ja) | 2005-04-04 | 2011-07-06 | 国立大学法人愛媛大学 | Ｈｌａクラスｉｉ拘束性ｗｔ１抗原ペプチド |
| EP2565201B1 (en) | 2005-10-17 | 2014-11-26 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | WT1 HLA class II-binding peptides and compositions and methods comprising same |
| ES2352855T3 (es) | 2005-11-30 | 2011-02-23 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Nuevos compuestos peptídicos del tumor de wilms. |
| US7420880B2 (en) | 2005-12-29 | 2008-09-02 | Timex Group B.V. | Multimode electronic device with calibrating/setting mechanism |
| ES2558330T3 (es) | 2006-02-22 | 2016-02-03 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Péptido WT1 restringido por HLA-A*3303 y composición farmacéutica que comprende el mismo |
| CA2645766A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
| RU2481398C2 (ru) * | 2006-12-28 | 2013-05-10 | Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. | Hla-a*1101-ограниченный пептид wt1 и содержащая его фармацевтическая композиция |
| CN104774910B (zh) * | 2007-02-27 | 2018-04-10 | 株式会社癌免疫研究所 | 活化辅助t细胞的方法以及用于该方法的组合物 |
| KR101773690B1 (ko) | 2007-03-05 | 2017-08-31 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 암 항원 특이적 ｔ 세포의 수용체 유전자 및 그것에 따라 코드되는 펩티드 및 이들의 사용 |
| AR076349A1 (es) | 2009-04-23 | 2011-06-01 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Peptido auxiliar del antigeno del cancer |
| MX2015007745A (es) | 2012-12-17 | 2015-12-15 | Otsuka Pharma Co Ltd | Metodo para activar la celula t auxiliar. |
-
2011
- 2011-10-04 MY MYPI2013001197A patent/MY170306A/en unknown
- 2011-10-04 KR KR1020197008457A patent/KR102079480B1/ko active IP Right Grant
- 2011-10-04 NZ NZ609460A patent/NZ609460A/en unknown
- 2011-10-04 CN CN201180058552.2A patent/CN103298928B/zh active Active
- 2011-10-04 TW TW105107752A patent/TW201623616A/zh unknown
- 2011-10-04 EP EP11830662.0A patent/EP2626418B8/en active Active
- 2011-10-04 US US13/877,768 patent/US10654892B2/en active Active
- 2011-10-04 ES ES11830662T patent/ES2849187T3/es active Active
- 2011-10-04 AR ARP110103676A patent/AR083295A1/es unknown
- 2011-10-04 WO PCT/JP2011/072874 patent/WO2012046730A1/ja active Application Filing
- 2011-10-04 EA EA201390509A patent/EA037547B1/ru unknown
- 2011-10-04 BR BR112013008230A patent/BR112013008230A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-10-04 SG SG2013025622A patent/SG189287A1/en unknown
- 2011-10-04 AU AU2011313327A patent/AU2011313327B2/en active Active
- 2011-10-04 NZ NZ703560A patent/NZ703560A/en unknown
- 2011-10-04 TW TW100135857A patent/TWI608099B/zh active
- 2011-10-04 JP JP2012537718A patent/JP6134139B2/ja active Active
- 2011-10-04 MX MX2013003884A patent/MX361299B/es active IP Right Grant
- 2011-10-04 SG SG10202108581TA patent/SG10202108581TA/en unknown
- 2011-10-04 CN CN201610191489.4A patent/CN105802910A/zh active Pending
- 2011-10-04 SG SG10201508252PA patent/SG10201508252PA/en unknown
- 2011-10-04 KR KR1020137011554A patent/KR20140009168A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-10-04 KR KR1020207004213A patent/KR102171794B1/ko active IP Right Grant
- 2011-10-04 CA CA2813557A patent/CA2813557C/en active Active
-
2013
- 2013-04-02 IL IL225536A patent/IL225536B/en not_active IP Right Cessation
- 2013-04-05 MX MX2018008436A patent/MX2018008436A/es unknown
- 2013-04-25 ZA ZA2013/03056A patent/ZA201303056B/en unknown
- 2013-05-03 CO CO13111246A patent/CO6710946A2/es unknown
-
2016
- 2016-05-03 IL IL245440A patent/IL245440A0/en unknown
- 2016-05-31 JP JP2016109398A patent/JP6298101B2/ja active Active
-
2017
- 2017-12-12 JP JP2017237964A patent/JP2018093870A/ja active Pending
-
2020
- 2020-03-31 US US16/835,761 patent/US20200354405A1/en active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| FUJIKI等: "A WT1 protein-derived，naturally processed 16-mer peptide，WT1 332，is a promiscuous helper peptide for induction of WT1-specific Th1-type CD4+ T cells", 《MICROBIOL IMMUNOL》 * |
| KOBAYASHI等: "Defining MHC class II T helper epitopes for WT1 tumor antigen", 《CANCER IMMUNOLOGY IMMUNOTHER》 * |
| RENA J. MAY 等: "Peptide Epitopes from the Wilms Tumor 1 Oncoprotein Stimulate CD4 + and CD8+ T Cells That Recognize and Kill Human Malignant Mesothelioma Tumor Cells", 《CLINICAL CANCER RESEARCH》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112812154A (zh) * | 2018-02-15 | 2021-05-18 | 国立大学法人旭川医科大学 | 癌症抗原肽 |
| CN112812154B (zh) * | 2018-02-15 | 2022-04-05 | 国立大学法人旭川医科大学 | 癌症抗原肽 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103298928B (zh) | 用于激活辅助性t细胞的方法 | |
| TWI517859B (zh) | 癌抗原輔助肽 | |
| EP2119778B1 (en) | Method for activation of helper T cell and composition for use in the method | |
| JP6530192B2 (ja) | ヘルパーｔ細胞の活性化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160727 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |