KR20200018738A - 헬퍼 ｔ 세포의 활성화 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포를 활성화시키는 공정을 포함하는 헬퍼 T 세포의 활성화 방법으로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법 등에 관한 것이다.

Description

헬퍼 Ｔ 세포의 활성화 방법 {METHOD FOR ACTIVATING HELPER T CELL}
본 발명은 WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포를 활성화하는 공정을 포함하는 헬퍼 T 세포의 활성화 방법으로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법, 그를 위한 조성물, 세포 상해성 T 세포의 활성화 방법, 세포 상해성 T 세포(CTL)의 활성화 유도제, 및 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포를 활성화함에 따른 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물 등에 관한 것이다. 또한, 본원은 2010년 10월 5일 출원된 일본국 특허 출원 제2010-225806호에 대하여 우선권을 주장하는 것이며, 참조에 의해 상기 일본국 특허 출원의 내용을 본원에 일체화시킨다.
WT1 유전자(윌름즈 종양 1 유전자(Wilms' tumor 1 gene))는 소아의 신장암인 윌름즈 종양의 원인 유전자로서 동정되어, 징크 핑거 구조를 갖는 전사 인자를 코드한다(비특허문헌 1 및 2). 그 후의 연구에 의해 조혈기 종양이나 고형암에 있어서 암 유전자로서 기능하는 것이 개시되었다(비특허문헌 3 내지 6).
WT1 단백질을 코드하는 아미노산 서열의 일부를 갖는 펩티드를 이용하여 말초혈 단핵구를 시험관 내(in vitro)에서 자극함으로써, 펩티드에 특이적인 세포 상해성 T 세포(CTL)가 유도되고, 이들 CTL이 WT1을 내재적으로 발현하는 조혈기 종양이나 고형암의 암 세포를 상해하는 것이 나타내어졌다. CTL은, 상기 펩티드를 MHC 클래스 I 분자에 결합한 복합체의 형태로 인식하기 때문에, 이러한 펩티드는 MHC 클래스 I의 서브타입에 따라 상이하다(특허문헌 1 내지 4 및 비특허문헌 7).
한편, CTL이 유효하게 유도되기 위해서는, 암 항원에 특이적인 헬퍼 T 세포의 존재가 중요하다(비특허문헌 8). 헬퍼 T 세포는, 항원 제시 세포인 MHC 클래스 II 분자와 항원 펩티드의 복합체를 인식하여 유도ㆍ활성화된다. 활성화된 헬퍼 T 세포는 IL-2, IL-4, IL-5, IL-6 또는 인터페론 등의 사이토카인을 생산함으로써, B 세포의 증식, 분화, 성숙을 보조한다. 이러한 헬퍼 T 세포는 B 세포, T 세포의 증식ㆍ활성화를 촉진함으로써 면역계를 활성화하는 기능을 갖기 때문에, 암 면역 요법에 있어서 MHC 클래스 II 결합성의 항원 펩티드를 통하여 헬퍼 T 세포의 기능을 증강하여 암 백신의 효과를 증강하는 것이 유용하다는 것이 시사된다(비특허문헌 9).
최근, WT1 단백질을 코드하는 아미노산 서열의 일부를 갖는 특정한 펩티드(이하, 본 명세서에 있어서 WT1 펩티드라고도 함)에는, 복수의 MHC 클래스 II 분자에 결합하여 헬퍼 T 세포를 활성화할 수 있는 뒤섞인(promiscuous) 헬퍼 펩티드가 존재하는 것이 개시되었다(특허문헌 5 및 6). 그러나, 이 WT1 펩티드가 다른 MHC 클래스 II 분자에 대해서도 효과를 갖는지를 검증하는 것은, MHC 클래스 II 분자의 종류가 많기 때문에 극히 곤란하였다.
국제 공개 제2003/106682호 공보 국제 공개 제2005/095598호 공보 국제 공개 제2007/097358호 공보 국제 출원 PCT/JP2007/074146 국제 공개 제2005/045027호 공보 국제 공개 제2008/105462호 공보
Daniel A. Haber et al., Cell. 1990 Jun 29;61(7):1257-69 Call KM et al., Cell. 1990 Feb 9;60(3):509-20 Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998;181:151-212. Review Yamagami T et al., Blood. 1996 Apr 1;87(7):2878-84 Inoue K et al., Blood. 1998 Apr 15;91(8):2969-76 Tsuboi A et al., Leuk Res. 1999 May;23(5):499-505 Oka Y et al., Immunogenetics. 2000 Feb;51(2):99-107 Gao FG et al., Cancer Res. 2002 Nov 15;62(22):6438-41 Zeng G, J Immunother. 2001 May;24(3):195-204
따라서, 본 발명의 해결 과제는, 특정한 WT1 펩티드를 이용함으로써 광범위한 MHC 클래스 II 분자 양성 대상에 적용하여 헬퍼 T 세포를 활성화하는 방법, 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 방법, 세포 상해성 T 세포의 활성화 유도제, 및 암의 치료/예방용 의약 조성물 등을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 상기 사정을 감안하여 예의 연구를 거듭한 결과, 아미노산 서열: Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His를 갖는 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자, HLA-DPB1*0301 분자에 결합하여 헬퍼 T 세포를 활성화하고(활성화하거나), 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은
(1) WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포를 활성화시키는 공정을 포함하는 헬퍼 T 세포의 활성화 방법으로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법,
(2) WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 및 HLA-DPB1*0301 분자 중 적어도 2개의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인, (1)에 기재된 방법,
(3) WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자 및/또는 HLA-DPB1*0901 분자에 결합하는 능력을 더 갖는 것인, (1) 또는 (2)에 기재된 방법,
(4) WT1 펩티드의 항원 제시 세포에의 첨가가 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리펩티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포의 첨가에 의해 행해지는, (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 기재된 방법,
(5) WT1 펩티드가 아미노산 서열: Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(서열 번호: 2)를 포함하는 펩티드, 그의 변이체 또는 수식체인, (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 방법,
(6) WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포를 활성화시키기 위한 WT1 펩티드를 포함하는 조성물로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 조성물,
(7) WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 및 HLA-DPB1*0301 분자 중 적어도 2개의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인, (6)에 기재된 조성물,
(8) WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자 및/또는 HLA-DPB1*0901 분자에 결합하는 능력을 더 갖는 것인, (6) 또는 (7)에 기재된 조성물,
(9) WT1 펩티드의 항원 제시 세포에의 첨가가 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포의 첨가에 의해 행해지는, (6) 내지 (8) 중 어느 하나에 기재된 조성물,
(10) WT1 펩티드가 아미노산 서열: Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(서열 번호: 2)를 포함하는 펩티드, 그의 변이체 또는 수식체인, (6) 내지 (9) 중 어느 하나에 기재된 조성물,
(11) WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체가 제시되어 있는 항원 제시 세포로서, 상기 MHC 클래스 II 분자가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자인, 항원 제시 세포,
(12) WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체를 인식하는 헬퍼 T 세포로서, 상기 MHC 클래스 II 분자가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자인, 헬퍼 T 세포,
(13) (12)에 기재된 헬퍼 T 세포에 의해 활성화되는 세포 상해성 T 세포,
(14) (6) 내지 (10) 중 어느 하나에 기재된 조성물, (11)에 기재된 항원 제시 세포, (12)에 기재된 헬퍼 T 세포, 또는 (13)에 기재된 세포 상해성 T 세포 중 어느 하나를 유효 성분으로서 포함하는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물,
(15) WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포 중 어느 하나를 유효 성분으로서 포함하는, 세포 상해성 T 세포를 활성화시키기 위한 의약 조성물로서, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자, HLA-DPB1*0301 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, 또는 HLA-DRB4*0101 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자를 갖는 대상에 투여하기 위한 의약 조성물,
(16) WT1 펩티드에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 항체,
(17) HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0403, HLA-DRB1*0406, HLA-DRB1*0803, HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1*1101, HLA-DRB3*0202, HLA-DRB4*0101, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자 양성 대상에서의 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양을 결정하는 방법으로서,
(a) 상기 대상으로부터 취득한 시료를 WT1 펩티드를 이용하여 자극하고,
(b) 사이토카인 또는 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양을 조사하는
공정을 포함하며, 사이토카인 또는 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양의 증대가 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양을 나타내는 것인 방법
을 제공한다.
본 발명에 따르면, WT1 펩티드를 이용함으로써, HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자를 갖는 광범위한 대상에 적용하여 헬퍼 T 세포를 활성화시키는 방법, 그를 위한 조성물, 세포 상해성 T 세포를 활성화시키는 방법, 그를 위한 조성물, 세포 상해성 T 세포의 활성화 유도제, 및 헬퍼 T 세포 및 세포 상해성 T 세포를 활성화함에 따른 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물 등이 얻어지기 때문에, 이러한 MHC 클래스 II 분자를 갖는 대상에서의 생체 내(in vivo) 및 시험관 내에서의 헬퍼 T 세포 및 세포 상해성 T 세포의 활성화, 나아가 암의 치료 및 예방 등이 가능해진다.
도 1은 제공자 1(HLA-DRB1*0406/1201, DRB3*0101, DRB4*0103 양성)에서 유래하는 PBMC로부터 유도된 T 세포를 WT1-332로 펄스한 각종 제공자 유래의 PBMC와 공배양한 후, IFN-γ량을 측정한 결과를 나타낸다. 도면 중, 종축은 배양 후의 상청액에서의 IFN-γ량(pg/mL)을 나타낸다. 횡축은 각종 제공자에 있어서 양성을 나타내는 HLA-DRB1, 3 및 4 분자의 종류를 나타낸다.
도 2는 제공자 2(HLA-DRB1*0901/1101, DRB3*0202, DRB4*0103 양성)에서 유래하는 PBMC로부터 유도된 T 세포를 WT1-332로 펄스한 각종 제공자 유래의 PBMC와 공배양한 후, IFN-γ량을 측정한 결과를 나타낸다. 도면 중, 종축은 배양 후의 상청액에서의 IFN-γ량(pg/mL)을 나타낸다. 횡축은 각종 제공자에 있어서 양성을 나타내는 HLA-DRB1, 3 및 4 분자의 종류를 나타낸다.
도 3은 제공자 3(HLA-DRB1*0401/0405, DRB4*0102/0103 양성)에서 유래하는 PBMC로부터 유도된 T 세포를 WT1-332로 펄스한 각종 제공자 유래의 PBMC와 공배양한 후, IFN-γ량을 측정한 결과를 나타낸다. 도면 중, 종축은 배양 후의 상청액에서의 IFN-γ량(pg/mL)을 나타낸다. 횡축은 각종 양성의 제공자에 있어서 양성을 나타내는 HLA-DRB1 및 4 분자의 종류를 나타낸다.
도 4는 제공자 4(HLA-DRB1*0901/1101, DRB3*0202, DRB4*0103 양성)에서 유래하는 PBMC로부터 유도된 T 세포를 WT1-332로 펄스한 각종 제공자 유래의 PBMC와 공배양한 후, IFN-γ량을 측정한 결과를 나타낸다. 도면 중, 종축은 배양 후의 상청액에서의 IFN-γ량(pg/mL)을 나타낸다. 횡축은 각종 양성의 제공자에 있어서 양성을 나타내는 HLA-DRB1, 3 및 4 분자의 종류를 나타낸다.
도 5는 HLA-클래스 II 단량체 단백질(DRB1*0101, DRB1*0405, DRB1*1501, DRB1*1502, DRB1*0803, DRB1*0901 및 DRB4*0101)과 각종 펩티드가 특이적으로 회합한 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 유지 시간의 이동도(분)를 나타낸다. 횡축은 HLA-클래스 II 단량체 단백질의 종류를 나타낸다. 또한, 막대 그래프는 첨가한 펩티드의 종류(좌측으로부터 네가티브 컨트롤(□), 포지티브 컨트롤(■), WT1-332(사선 □))를 나타낸다.
도 6은 건강한 사람의 혈액 제공자(HLA-DRB1*1501, 1502, 0405, HLA-DPB1*0501, 0901을 적어도 하나 이상 가짐, 총 42명)에서 유래하는 PBMC로부터 유도된 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 Th1 비율(CD4 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포 비율)이 경시적으로 유의하게 증가하는 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 생세포 중의 CD4 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포수의 비율(％)을 나타내고, 횡축은 배양일수(일)를 나타낸다. 또한, ●는 WT1-332를 첨가 유도한 시료(WT1-332 유도군)에서의 비율을 나타내고, ○는 용매(컨트롤)를 첨가 유도한 시료(용매 유도군)에서의 비율을 나타낸다.
도 7은 건강한 사람의 혈액 제공자(HLA-DRB1*1501, 1502, 0405, HLA-DPB1*0501, 0901을 적어도 하나 이상 가짐, 총 42명)에서 유래하는 PBMC로부터 유도된 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 CTL 세포수(CD8 양성/IFN-γ 양성의 세포 비율)가 경시적으로 유의하게 증가하는 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 생세포 중의 CD8 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포수의 비율(％)을 나타내고, 횡축은 배양일수(일)를 나타낸다. 또한, ●는 WT1-332를 첨가 유도한 시료(WT1-332 유도군)에서의 비율을 나타내고, ○는 용매(컨트롤)를 첨가 유도한 시료(용매 유도군)에서의 비율을 나타낸다.
도 8은 도 6 및 도 7에 있어서 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 17검체(제공자 21 내지 37)의 HLA-DR 구속성에 대하여 나타낸다. 각각에 있어서, WT1-332 첨가 유도 후 14일째의 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 IFN-γ 생산이 확인되며, 그 IFN-γ 생산은 항 HLA-DR 항체를 첨가하여 배양한 경우에 억제되었다. 이것은 WT1-332에 의해 유도된 T 세포가 HLA-DR 구속성인 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 제공자 번호(제공자 21 내지 37)를 나타내고, 횡축은 IFN-γ 생산량(pg/mL)을 나타낸다. 또한, ■는 WT1-332 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타내고, 사선 □는 WT1-332+ 항 HLA-DR 항체 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타내고, □는 용매(컨트롤) 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타낸다.
도 9는 도 6 및 도 7에 있어서 HLA-DR 구속성 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 17검체(제공자 21 내지 37) 각각에 있어서, WT1-332 첨가 유도 후 14일째의 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 Th1 세포(CD4 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포)수의 비율이 증가하는 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 제공자 번호(제공자 21 내지 37)를 나타내고, 횡축은 생세포 중의 CD4 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포수의 비율(％)을 나타낸다. 또한, ■는 WT1-332 자극 후의 비율을 나타내고, □는 용매(컨트롤) 자극 후의 비율을 나타낸다.
도 10은 도 6 및 도 7에 있어서 HLA-DR 구속성 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 17검체(제공자 21 내지 37) 각각에 있어서, WT1-332 첨가 유도 후 14일째의 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 CTL 세포(CD8 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포)수의 비율이 증가하는 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 제공자 번호(제공자 21 내지 37)를 나타내고, 횡축은 생세포 중의 CD8 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포수의 비율(％)을 나타낸다. 또한, ■는 WT1-332 자극 후의 비율을 나타내고, □는 용매(컨트롤) 자극 후의 비율을 나타낸다.
도 11은 도 6 및 도 7에 있어서 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 9검체(제공자 38 내지 46)의 HLA-DP 구속성에 대하여 나타낸다. 각각에 있어서, WT1-332 첨가 유도 후 14일째의 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 IFN-γ 생산이 확인되고, 그 IFN-γ 생산은 항 HLA-DR 항체를 첨가하여 배양한 경우, 및 항 HLA-DQ 항체를 첨가하여 배양한 경우 중 어느 것에 있어서도 억제되지 않았다. 이것은 WT1-332에 의해 유도된 T 세포가 HLA-DP 구속성인 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 제공자 번호(제공자 38 내지 46)를 나타내고, 횡축은 IFN-γ 생산량(pg/mL)을 나타낸다. 또한, ■는 WT1-332 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타내고, 사선 □는 WT1-332+ 항 HLA-DR 항체 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타내고, 종선(파선) □는 WT1-332+ 항 HLA-DQ 항체 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타내고, □는 용매(컨트롤) 자극 후의 IFN-γ 생산량을 나타낸다.
도 12는 도 6 및 도 7에 있어서 HLA-DP 구속성 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 9검체(제공자 38 내지 46) 각각에 있어서, WT1-332 첨가 유도 후 14일째의 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 Th1 세포(CD4 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포)수의 비율이 증가하는 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 제공자 번호(제공자 38 내지 46)를 나타내고, 횡축은 생세포 중의 CD4 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포수의 비율(％)을 나타낸다. 또한, ■는 WT1-332 자극 후의 비율을 나타내고, □는 용매(컨트롤) 자극 후의 비율을 나타낸다.
도 13은 도 6 및 도 7에 있어서 HLA-DP 구속성 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 9검체(제공자 38 내지 46) 각각에 있어서, WT1-332 첨가 유도 후 14일째의 T 세포를 WT1-332로 자극한 경우, WT1-332 특이적인 CTL 세포(CD8 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포)수의 비율이 증가하는 것을 나타낸다. 도면 중, 종축은 제공자 번호(제공자 38 내지 46)를 나타내고, 횡축은 생세포 중의 CD8 양성/세포 내 IFN-γ 양성의 세포수의 비율(％)을 나타낸다. 또한, ■는 WT1-332 자극 후의 비율을 나타내고, □는 용매(컨트롤) 자극 후의 비율을 나타낸다.
본 발명은 하나의 양태에 있어서, WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 공정을 포함하는 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포의 활성화 방법으로서, 상기 WT1 펩티드가 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법을 제공한다. 본 발명에 있어서, 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 공정은, 헬퍼 T 세포를 활성화하는 공정을 거침으로써 행해질 수도 있다. 또한, 본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것이다. 본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는, 또한 상기 MHC 클래스 II 분자 중 적어도 2개 또는 그 이상의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것일 수도 있다. 또한, 본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는, 예를 들면 HLA-DR 분자, HLA-DQ 및 HLA-DP 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 가질 수도 있다.
본 발명에 있어서, WT1 펩티드는, 서열 번호: 1로 나타내어지는 인간 WT1 단백질의 아미노산 서열의 일부를 갖는 펩티드일 수도 있다. 본 발명의 펩티드는, 상기 특징을 갖는 한 그 아미노산 서열 및 길이는 특별히 한정되지 않지만, 펩티드가 지나치게 길면 단백 분해 효소의 작용을 받기 쉬워지고, 지나치게 짧으면 펩티드 수용 홈에 잘 결합할 수 없다. 본 발명의 펩티드의 길이는 바람직하게는 10 내지 25 아미노산, 보다 바람직하게는 15 내지 21 아미노산, 더욱 바람직하게는 16 내지 20 아미노산, 예를 들면 16 아미노산, 17 아미노산, 18 아미노산 또는 19 아미노산이다. 본 발명의 펩티드의 구체예는, 아미노산 서열: Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(서열 번호: 2)를 포함하는 것이다.
또한, 본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는 상기 펩티드의 변이체도 포함한다. 변이체는, 예를 들면 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 수개, 예를 들면 1 내지 9개까지, 바람직하게는 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개, 보다 바람직하게는 1개의 아미노산이 치환, 또는 결실 또는 부가된 아미노산 서열을 갖는 펩티드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 펩티드를 포함할 수도 있다. 펩티드 중의 아미노산의 치환은 어느 위치에서 어느 종류의 아미노산과의 사이에서 행해질 수도 있으며, 보존적인 아미노산 치환이 바람직하다. 보존적인 아미노산 치환의 예로서는, Glu 잔기를 Asp 잔기로, Phe 잔기를 Tyr 잔기로, Leu 잔기를 Ile 잔기로, Ala 잔기를 Ser 잔기로, His 잔기를 Arg 잔기로 치환하는 것 등을 들 수 있다. 아미노산의 부가 또는 결실은 펩티드 중의 N 말단 및 C 말단에서 행하는 것이 바람직하지만, 서열 내부에 있어서 행해질 수도 있다. 본 발명의 펩티드의 바람직한 구체예는 서열 번호: 2를 갖는 것이지만, 상기의 어느 펩티드라도 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것이며, 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포(본 명세서에 있어서 CTL이라고도 함)를 활성화하는 것이 조건이 된다. 본 명세서에 있어서, 상기 WT1 펩티드는 「WT1-332」라고도 기재된다. 또한, 일반적으로 인간 MHC 분자를 HLA 분자라고도 하므로, 본 명세서에서는 MHC를 HLA와 동의어로서 사용한다.
본 발명의 펩티드는 또한 상기 아미노산 서열의 수식체일 수도 있다. 상기 아미노산 서열 중의 아미노산 잔기를 공지된 방법으로 수식할 수 있다. 그러한 수식체는, 예를 들면 아미노산 잔기의 측쇄 중의 관능기에 에스테르화, 알킬화, 할로겐화, 인산화 등을 실시한 것일 수도 있다. 또한, 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 N 말단 및/또는 C 말단에 여러가지 물질을 결합시킬 수 있다. 예를 들면, 아미노산, 펩티드, 이들의 아날로그 등을 결합시킬 수도 있다. 예를 들면, 히스티딘 태그를 부가할 수도 있고, 티오레독신 등의 단백과 함께 융합 단백으로 되어 있을 수도 있다. 또는, WT1 펩티드에 검출 가능한 표지를 결합시킬 수도 있다. 본 발명의 펩티드에 이들 물질이 결합하고 있는 경우, 이들 물질이 예를 들면 생체 내 효소 등에 의해, 또는 세포 내 프로세싱 등의 과정에 의해 처리되어, 최종적으로 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 발생시키는 것일 수도 있고, MHC 클래스 II 분자의 복합체로서 세포 표면에 제시됨으로써, 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포 유도 효과를 얻을 수 있다. 이들 물질은 본 발명의 펩티드의 용해성을 조절하는 것일 수도 있고, 내프로테아제 작용 등 그 안정성을 향상시키는 것일 수도 있고, 또한 예를 들면 소정의 조직ㆍ기관에 특이적으로 본 발명의 펩티드를 딜리버리하는 것일 수도 있고, 또는 항원 제시 세포의 취득 효율을 증강시키는 작용 등을 갖는 것일 수도 있다. 이들 물질은 또한 CTL 유도능을 증대시키는 것, 예를 들면 본 발명의 펩티드 이외의 헬퍼 펩티드일 수도 있다.
본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는, 해당 기술 분야에 있어서 통상 이용되는 방법 또는 이들의 변법을 이용하여 합성할 수 있다. 이러한 합성 방법은, 예를 들면 문헌 [Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976; 펩티드 합성, 마루젠(주), 1975; 펩티드 합성의 기초와 실험, 마루젠(주), 1985; 의약품의 개발 속 제14권ㆍ펩티드 합성, 히로까와 서점, 1991] 등에 기재되어 있다. 본 발명에 이용되는 펩티드는, 또한 해당 펩티드를 코드하는 뉴클레오티드 서열 정보에 기초하여 유전자 공학적 수법을 이용하여 제조할 수도 있다. 이러한 유전자 공학적 수법은 당업자에게 주지된 것이다. 이들 수법은 문헌에 기재되는 방법 등에 준하여 행할 수 있다(Molecular Cloning, T. Maniatis et al., CSH Laboratory(1983), DNA Cloning, DM. Glover, IRL PRESS(1985)).
본 발명은 상기에서 설명한 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 서열에도 관한 것이다. WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 서열은 DNA 서열일 수도 있고, RNA 서열일 수도 있다. 본 발명에 있어서, WT1 펩티드를 이용하는 대신에, 이들 폴리뉴클레오티드 서열을 이용할 수도 있다. 이들 폴리뉴클레오티드 서열을 적당한 벡터에 조립하여 사용할 수도 있다. 벡터로서는 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터 등을 들 수 있으며, 예를 들면 pUC118, pUC119, pBR322, pCR3, pYES2, pYEUra3, pKCR, pCDM8, pGL2, pcDNA3.1, pRc/RSV, pRc/CMV, pAcSGHisNT-A, λZAPII, λgt11 등을 들 수 있다. 벡터는 발현 유도 가능한 프로모터, 시그널 서열을 코드하는 유전자, 선택용 마커 유전자, 터미네이터 등의 인자를 적절하게 가질 수도 있다. 이들 유전자의 세포나 생체에의 도입 방법, 발현 방법 등은 당업자에게 공지이다.
본 발명에 이용되는 항원 제시 세포는, MHC 클래스 II 분자와 함께 상기 WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드를 헬퍼 T 세포에 제시할 수 있는 세포이며, 예를 들면 나무상 세포, 말초혈 단핵구 등을 의미한다. 그렇기 때문에, 본 발명에 이용되는 항원 제시 세포가 유래하는 대상은, 첨가하는 WT1 펩티드가 결합할 수 있는 MHC 클래스 II 분자와 동일한 분자(예를 들면, HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 등 중 어느 하나 또는 그 이상의 MHC 클래스 II 분자)를 갖는 것이어야 한다.
본 발명에 있어서, WT1 펩티드의 항원 제시 세포에의 첨가는, WT1 펩티드를 첨가함으로써 직접적으로, 또는 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 또는 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 첨가에 의해, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포의 첨가에 의해 간접적으로 행해질 수도 있다. 이들 첨가는, 해당 기술 분야에서 공지된 방법에 의해 실시할 수 있다. 상기 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 발현 벡터를 포함하는 세포는, 당업자에게 잘 알려진 수법에 의해 취득할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명에 이용되는 폴리뉴클레오티드는, 상기 WT1 펩티드의 아미노산 서열(예를 들면, 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열)에 기초하여 결정할 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는, 예를 들면 DNA 또는 RNA 합성 방법, PCR법 등에 의해 제조할 수 있다. 또한, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 종류, 상기 폴리뉴클레오티드 서열 이외에 포함되는 서열 등은, 해당 발현 벡터를 도입하는 숙주의 종류, 목적 등에 따라 적절하게 선택할 수 있으며, 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터 등을 들 수 있다. 발현 벡터를 포함하는 세포는, 예를 들면 숙주 세포를 형질 전환함으로써 제작할 수 있다. 숙주 세포로서는 대장균, 효모, 곤충 세포, 동물 세포 등을 들 수 있다. 숙주 세포에의 도입 방법은 통상의 방법, 예를 들면 인산칼슘법, DEAE-덱스트란법, 전기 천공법, 유전자 도입용 리피드를 이용할 수 있다.
일반적으로, 헬퍼 T 세포는, T 세포 표면의 TCRㆍCD3 복합체가 항원 제시 세포 표면의 MHC 클래스 II 분자를 통하여 항원 펩티드를 인식하고, T 세포 표면의 인테그린이 항원 제시 세포 표면의 인테그린 리간드로 자극됨으로써 활성화된다. 본 명세서에서의 헬퍼 T 세포의 활성화는, 헬퍼 T 세포의 활성화뿐만 아니라 헬퍼 T 세포의 유도ㆍ증식을 포함하는 것으로 한다. 또한, 본 발명에 있어서 활성화되는 헬퍼 T 세포는 미분화의 T 세포(예를 들면, 나이브 T 세포) 등일 수도 있다. 활성화된 헬퍼 T 세포는, B 세포 및 세포 상해성 T 세포의 유도ㆍ증식ㆍ활성화를 촉진함으로써 면역계를 활성화하는 기능을 갖는다. 그렇기 때문에, 본 발명의 방법을 암 등의 치료의 보조 요법으로서 이용할 수도 있다. 또한, 시험관 내에 있어서 본 발명의 방법을 이용하여 활성화된 헬퍼 T 세포를 암 등의 치료 또는 예방, 또는 이들을 위한 보조제로서 이용할 수도 있다. 헬퍼 T 세포의 활성화는 인터페론(예를 들면, 인터페론 γ 등), 인터루킨 등의 사이토카인의 생산, 분비량을 측정하는 것 등에 의해 평가할 수 있다.
본 발명은 별도의 양태에 있어서, WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 활성화시키기 위한 조성물을 제공한다. 본 발명에 있어서, 세포 상해성 T 세포의 활성화는, 헬퍼 T 세포의 활성화를 거침으로써 행해지는 것일 수도 있다. 본 발명의 조성물에 포함되는 유효 성분으로서 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 상기 벡터를 포함하는 세포를 예시할 수 있지만, WT1 펩티드를 항원 펩티드로 하여 항원 제시 세포 표면에서 제시시킬 수 있는 인자이면, 어떠한 분자일 수도 있다. 이들 인자는, 상술한 바와 같이 당업자에게 잘 알려진 방법에 의해 얻을 수 있다.
본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는, 상술한 바와 같이 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것이다. 또한, 본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는, 상기 MHC 클래스 II 분자 중 적어도 2개 또는 그 이상의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것일 수도 있다. 또한, 본 발명에 이용되는 WT1 펩티드는, HLA-DR 분자, HLA-DQ, HLA-DP 분자 중 어느 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 가질 수도 있다.
본 발명의 조성물이 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나 또는 그 이상의 MHC 클래스 II 분자를 갖는 대상에 투여되면, 대상 중의 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포가 활성화됨으로써 면역계가 활성화된다. 또한, WT1 유전자는 각종 암이나 종양, 예를 들면 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종 등의 조혈기 종양, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암 등의 고형암에 있어서 고발현되고 있으므로, 본 발명의 조성물을 암의 치료 또는 예방의 보조제로서 이용할 수도 있다. 또는, 본 발명의 조성물을 이용하여 활성화된 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 등은, 예를 들면 상기의 암의 치료의 보조제로서 이용할 수도 있다.
본 발명의 조성물은, 상기 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 상기 벡터를 포함하는 세포 이외에, 예를 들면 담체, 부형제 또는 첨가제 등을 포함할 수도 있다. 본 발명의 조성물에 포함되는 상기 WT1 펩티드 등은, WT1 펩티드 특이적으로 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포를 활성화하기 때문에, 공지된 MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드를 포함하거나, 또는 이들와 함께 적용될 수도 있다.
본 발명의 조성물의 적용 방법은, 원하는 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포의 활성화 정도, 항원 제시 세포의 상태 등의 조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 해당 적용 방법은, 예를 들면 피내 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경비 투여, 경구 투여 등에 의해 대상에 투여하는 것, 또는 항원 제시 세포 배양액에 첨가하는 것 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 본 발명의 조성물에 포함되는 상기 WT1 펩티드 등의 양, 조성물의 형태, 적용 횟수 등은, 원하는 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포의 활성화 정도, 항원 제시 세포의 상태 등의 조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 공정을 포함하는, 대상에서의 암의 치료 또는 예방 방법으로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은, 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포를 활성화함으로써 대상의 면역계를 활성화하고, 대상에서의 암을 치료 또는 예방하는 방법이다. 본 발명의 방법에 있어서, 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 공정은, 헬퍼 T 세포를 활성화하는 공정을 거침으로써 행해지는 것일 수도 있다. WT1 펩티드의 항원 제시 세포에의 첨가는, WT1 펩티드를 첨가함으로써 직접적으로, 또는 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 또는 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 첨가에 의해, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포의 첨가에 의해 간접적으로 행해질 수도 있다. 상기 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 발현 벡터를 포함하는 세포는, 상술한 바와 같이 당업자에게 잘 알려진 방법에 의해 취득할 수 있다. 본 발명의 방법을 적용할 수 있는 대상은 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자 양성 대상이다. 본 발명을 적용할 수 있는 암은 어느 것이어도 되며, 예를 들면 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종 등의 조혈기 종양, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암 등의 고형암을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은, MHC 클래스 I 분자 구속성 WT1 펩티드를 이용한 암의 치료 또는 예방 방법 또는 그를 위한 의약 조성물과 병용될 수도 있다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, 상기 조성물을 제조하기 위한 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 상기 벡터를 포함하는 세포의 사용을 제공한다. 또한, 본 발명은 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 활성화시키기 위하여 이용되는, WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 상기 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포를 활성화하기 위한 상기 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 상기 벡터를 포함하는 세포를 포함하는 키트로서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 키트에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 키트는 상기 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포의 활성화 방법에 이용된다. 본 발명의 키트는 WT1 펩티드 외에, 예를 들면 항원 제시 세포의 취득 수단, 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포의 활성 평가 수단 등을 포함할 수도 있다. 일반적으로는, 키트에는 취급 설명서를 첨부한다. 본 발명의 키트를 이용하여 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 효율적으로 활성화할 수 있다.
본 발명은 다른 양태에 있어서, WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체가 제시되어 있는 항원 제시 세포를 제공한다. 여기서, 상기 MHC 클래스 II 분자는 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 것일 수도 있고, 나아가 상기 MHC 클래스 II 분자 중 적어도 2개 또는 그 이상일 수도 있다. 본 발명의 항원 제시 세포는, 당업자 사이에서 알려지는 수법을 이용하여 제조될 수도 있다. 예를 들면, 암 환자로부터 항원 제시능을 갖는 세포를 단리하고, 단리한 세포에 상기 WT1 펩티드(예를 들면, 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 펩티드) 또는 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드로 펄스하거나, 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 세포 내에 도입하여, WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체를 세포 표면에 제시시킴으로써 제작할 수도 있다(Cancer Immunol. Immunother. 46:82, 1998, J. Immunol., 158: p1796, 1997, Cancer Res., 59:p1184, 1999, Cancer Res., 56:p5672, 1996, J.Immunol., 161:p5607, 1998, J. Exp. Med., 184: p465, 1996). 본 명세서에 있어서, 항원 제시능을 갖는 세포란, WT1 펩티드를 제시할 수 있는 MHC 클래스 II 분자를 세포 표면에 발현하는 세포이면 한정되지 않지만, 항원 제시능이 높은 말초혈 단핵구 또는 나무상 세포가 바람직하다. 또한, 본 발명의 항원 제시 세포는, 실시예에 나타내어진 바와 같이 인터페론 γ량의 증가에 의해 확인되는 세포 상해성 T 세포 활성의 상승에 의해 그 존재가 확인된다. 본 발명의 항원 제시 세포는, 의약 조성물의 유효 성분으로서 세포 요법(예를 들면, 나무상 세포 요법)에 있어서 유효하게 이용된다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체를 인식하는 헬퍼 T 세포를 제공한다. 여기서, 상기 MHC 클래스 II 분자는 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 것일 수도 있고, 나아가 상기 MHC 클래스 II 분자 중 적어도 2개 또는 그 이상일 수도 있다. 본 발명의 헬퍼 T 세포로서, 예를 들면 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자와의 복합체를 인식하는 헬퍼 T 세포를 들 수 있다. 본 발명의 헬퍼 T 세포는, 해당 기술 분야에서의 공지된 수법을 이용하여 당업자가 용이하게 제조ㆍ취득할 수 있다(Iwata, M. et al., Eur. J. Immunol, 26, 2081(1996)).
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체를 인식하는 헬퍼 T 세포에 의해 활성화되는 세포 상해성 T 세포를 제공한다. 본 발명의 세포 상해성 T 세포로서, 예를 들면 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자와의 복합체를 인식하는 헬퍼 T 세포에 의해 활성화되는 세포 상해성 T 세포를 들 수 있다. 본 발명의 세포 상해성 T 세포는, 당업자가 공지된 수법에 의해 용이하게 제조할 수 있다. 예를 들면, 환자의 말초혈 림프구를 단리하고, 이것을 펩티드(예를 들면, 서열 번호: 2에 기재된 아미노산 서열을 갖는 펩티드), 상기 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이것을 포함하는 발현 벡터로 시험관 내에서 자극함으로써 제작된다(Journal of Experimental Medicine 1999, 190: 1669). 상기와 같이 제조된 세포 상해성 T 세포는, 암 등의 치료 또는 예방용 의약 조성물의 유효 성분으로서 이용할 수 있다. 본 명세서의 실시예에 있어서, WT-332 투여에 의해 일정한 MHC 클래스 분자를 갖는 대상 유래의 시료에 있어서, 세포 상해성 T 세포의 유도 활성이 확인되었다. 이것은 말초혈 단핵구 중에 WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체가 제시된 항원 제시 세포가 존재하고, 이 복합체를 제시하는 항원 제시 세포, 이것을 특이적으로 인식하는 헬퍼 T 세포, 및 헬퍼 T 세포에 의해 유도된 세포 상해성 T 세포가 존재하는 것을 나타내는 것이다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, 상기 WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자를 갖는 HLA 4량체를 제공한다. 상기 MHC 클래스 II 분자는 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자 또는 HLA-DPB1*0901 분자 중 어느 것일 수도 있고, 상기 MHC 클래스 II 분자 중 적어도 2개 또는 그 이상일 수도 있다. 본 명세서에 있어서, HLA 4량체는 HLA 단백질을 펩티드와 회합시킨 복합체(HLA 단량체)를 비오틴화하고, 아비딘에 결합시킴으로써 4량체화한 것을 의미한다. HLA 4량체로서 여러가지 항원 펩티드를 함유하는 것이 시판되고 있으며, 본 발명의 HLA 4량체를 용이하게 제작할 수 있다(Science 279: 2103-2106(1998), Science 274: 94-96(1996)). 본 발명의 4량체는 유세포 분석기, 형광 현미경 등의 공지된 검출 수단에 의해 결합한 본 발명의 헬퍼 T 세포나 세포 상해성 T 세포를 용이하게 선별 또는 검출할 수 있도록 형광 표지되는 것이 바람직하다. 본 발명에서의 HLA 4량체는 4량체에 한정되는 것이 아니라, 필요에 따라 5량체, 덴드리머 등의 멀티머를 사용할 수도 있다. 본 명세서에 있어서, 멀티머란 HLA 단백질을 펩티드와 회합시킨 복합체(HLA 단량체)를 공지된 수법을 이용하여 2개 또는 그 이상 결합시킴으로써 다량체화한 것을 말한다.
본 발명은 다른 양태에 있어서, 상기 조성물, 항원 제시 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 또는 4량체 중 어느 하나를 유효 성분으로서 포함하는, 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 활성화시키기 위한 의약 조성물을 제공한다. 본 발명의 의약 조성물은, 상기 조성물, 항원 제시 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 또는 4량체 중 어느 하나 또는 그 이상을 유효 성분으로서 포함할 수도 있다. 본 발명의 의약 조성물은 암을 치료 또는 예방하기 위하여 이용할 수 있다. 본 발명의 의약 조성물은 WT1을 발현하는 각종 암 및 종양, 예를 들면 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종 등의 조혈기 종양, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암 등의 고형암에 적용할 수 있다. 또한, 본 발명의 의약 조성물은 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 등의 MHC 클래스 II 분자를 갖는 대상에 투여하기 위하여 이용할 수 있다. 본 발명의 의약 조성물을 그 밖의 암의 치료 또는 예방 방법 또는 그를 위한 의약 조성물과 병용할 수도 있다. 또한, 본 발명의 의약 조성물은, 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포의 활성화제, 증식제, 유도제 등을 포함할 수도 있고, 또는 공지된 MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드를 포함할 수도 있다.
본 발명의 의약 조성물은 유효 성분 이외에, 예를 들면 담체, 부형제 등을 포함할 수도 있다. 본 발명의 의약 조성물의 투여 방법은, 질환의 종류, 대상의 상태, 표적 부위 등의 조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 해당 방법은, 예를 들면 피내 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경비 투여, 경구 투여 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 본 발명의 의약 조성물에 포함되는 상기 유효 성분의 양, 의약 조성물의 제형, 투여 횟수 등은, 질환의 종류, 대상의 상태, 표적 부위 등의 조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, 상기의 조성물, 항원 제시 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 또는 4량체 중 어느 하나의 유효량을 대상에 투여하는 공정을 포함하는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 방법으로서, 대상이 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자를 갖는 것인 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에 의해 치료 또는 예방할 수 있는 암은 WT1을 발현하는 각종 암 및 종양, 예를 들면 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종 등의 조혈기 종양, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암 등의 고형암이다. 본 발명의 방법은, 그 밖의 암의 치료 또는 예방 방법, 예를 들면 공지된 MHC 클래스 I 분자 구속성 WT1 펩티드를 이용한 암의 치료 또는 예방 방법과 병용될 수도 있다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, 상기 의약 조성물을 제조하기 위한, 상기의 조성물, 항원 제시 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 또는 4량체 중 어느 하나의 사용을 제공한다. 또한, 본 발명은 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포를 활성화시키기 위하여 이용되는, 상기의 조성물, 항원 제시 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 또는 4량체를 제공한다. 또한, 본 발명은 암의 치료 또는 예방에 사용되는, 상기의 조성물, 항원 제시 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포 또는 4량체를 제공한다.
본 발명은 하나의 양태에 있어서, 상기 WT1 펩티드 또는 상기 WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하는 항체(이하, 항 WT1 항체라고도 함)에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 중 어느 것이어도 된다. 구체적으로는, 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 등을 들 수 있다. 이들 항체의 제조 방법은 이미 주지이며, 본 발명의 항체도 이들 통상법에 따라 제조할 수 있다(Current protocols in Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Section 11.12 내지 11.13, Antibodies; A Laboratory Manual, Lane, H, D.등 편집, Cold Spring Harber Laboratory Press 출판 New York 1989). 예를 들면, 서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 면역원으로서 이용하여 집토끼 등의 비인간 동물을 면역시키고, 이 동물의 혈청으로부터 통상법에 의해 얻을 수 있다. 한편, 모노클로날 항체의 경우에는, 본 발명에 이용되는 펩티드(서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 펩티드)를 마우스 등의 비인간 동물에게 면역시키고, 얻어진 비장 세포와 골수종 세포를 세포 융합시켜 제조한 하이브리도마 세포 중에서 얻을 수 있다(Current protocols in Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Section 11.4 내지 11.11). 또한, 본 발명의 항 WT1 항체의 제작은, 숙주에 따라 여러가지 아쥬반트를 이용하여 면역학적 반응을 높임으로써 행할 수도 있다. 이러한 아쥬반트로서 미네랄 겔(예를 들면, 프로인트 아쥬반트, 수산화알루미늄 등), 표면 활성 물질, 인간 아쥬반트 등을 들 수 있다. 본 발명의 항 WT1 항체는 어피니티-크로마토그래피, 면역학적 진단 등에 이용할 수 있다. 면역학적 진단은 면역 블롯법, 방사 면역 측정법(RIA), 효소 면역 측정법(ELISA), 형광 또는 발광 측정법 등으로부터 적절하게 선택할 수 있다.
본 발명은 다른 양태에 있어서, HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0403, HLA-DRB1*0406, HLA-DRB1*0803, HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1*1101, HLA-DRB3*0202, HLA-DRB4*0101, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자 양성 대상에서의 WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하는 방법으로서,
(a) 상기 대상으로부터 취득한 시료를 상기 항 WT1 항체와 반응시키고, 이어서
(b) 상기 시료에 포함되는 상기 항 WT1 항체의 존재 또는 양을 조사하는
공정을 포함하는 방법을 제공한다. 상기 공정 (a)에 있어서 이용되는 시료로서 HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0403, HLA-DRB1*0406, HLA-DRB1*0803, HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1*1101, HLA-DRB3*0202, HLA-DRB4*0101, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자를 갖는 대상으로부터 취득된 것을 이용할 수 있다. 상기 공정 (a)에 이용되는 시료는, 예를 들면 혈액, 림프구 등의 체액, 조직 등을 들 수 있다. 시료의 취득이나 항체의 반응 등은, 당업자이면 공지된 수법을 이용하여 적절하게 행할 수 있다. 본 발명에서의 공정 (b)는, 예를 들면 상기 항 WT1 항체의 국재, 부위, 양 등을 결정하는 것을 포함하기 때문에, 암의 진단, 예후 진단 등에 이용할 수 있다. 상기 항 WT1 항체는 표지되어 있을 수도 있다. 표지로서는 형광 표지, 방사성 표지 등의 공지된 것을 사용할 수 있다. 표지함으로써 WT1 펩티드의 존재 또는 양의 결정을 간편하면서 신속하게 행하는 것이 가능해진다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, 상기 항 WT1 항체를 필수 구성 성분으로서 포함하는, WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하기 위한 키트에 관한 것이다. 본 발명의 키트는, 상기 항 WT1 항체 외에, 예를 들면 항 WT1 항체의 취득 수단, 평가 수단 등을 포함할 수도 있다. 일반적으로는, 키트에는 취급 설명서를 첨부한다. 본 발명의 키트를 이용함으로써, 상술한 WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하는 방법에 있어서 간편하면서 신속하게 WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하는 것이 가능해진다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0403, HLA-DRB1*0406, HLA-DRB1*0803, HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1*1101, HLA-DRB3*0202, HLA-DRB4*0101, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자 양성 대상에서의 WT1 특이적 헬퍼 T 세포 또는 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포의 존재 또는 양을 결정하는 방법으로서,
(a) 상기 대상으로부터 취득한 시료를 WT1 펩티드를 이용하여 자극하고,
(b) 사이토카인, 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포의 존재 또는 양을 조사하는
공정을 포함하며, 사이토카인, 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포의 존재 또는 양의 증대가 WT1 특이적 헬퍼 T 세포 또는 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포의 존재 또는 양을 나타내는 것인 방법을 제공한다. 본 발명의 시료는 항원 제시 세포를 포함하는 것이면 어떠한 것이어도 되며, 예를 들면 말초혈 단핵구, 침윤성 림프구, 종양 세포, 복수 중의 세포, 흉수 중의 세포, 뇌척수액 중의 세포, 골수 세포 또는 림프절 세포 등을 들 수 있다. 본 발명에 이용되는 시료는 건강한 사람 유래일 수도 있고, 또는 암 환자 유래일 수도 있다. 건강한 사람 유래의 이들 세포를 이용함으로써, 예를 들면 암에 이환되어 있는지 여부, 또는 그 소인을 갖고 있는지 여부를 진단하는 것 등이 가능해진다. 암 환자 유래의 이들 세포를 이용함으로써, 예를 들면 암 환자에 있어서 WT1 면역 요법이 효과를 갖는지 여부를 예측하는 것 등이 가능해진다. 본 발명의 방법에 있어서, 취득한 시료는 WT1 펩티드에 의한 자극 전후에 배양될 수도 있으며, 상기 배양 조건은 당업자가 적절하게 결정할 수 있다. WT1 펩티드를 이용한 이들 세포의 자극은 전기 천공 등의 공지된 수법을 이용하여 행할 수 있고, 시험관 내 또는 생체 내 중 어느 것에 있어서 행해질 수도 있다. 사이토카인 생산, 헬퍼 T 세포, 세포 상해성 T 세포의 반응이 존재하는지, 또는 사이토카인 생산량, 헬퍼 T 세포 또는 세포 상해성 T 세포의 반응량은 기지의 방법에 의해 조사할 수 있다.
본 발명은 또 다른 양태에 있어서, 상기 WT1 펩티드를 필수 구성 성분으로서 포함하는, WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하기 위한 키트에 관한 것이다. 본 발명의 키트는, 상기 WT1 펩티드 외에, 예를 들면 시료의 취득 수단, 사이토카인 등의 평가 수단 등을 포함할 수도 있다. 일반적으로는, 키트에는 취급 설명서를 첨부한다. 본 발명의 키트를 이용함으로써, 상술한 WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하는 방법에 있어서 간편하면서 신속하게 WT1 펩티드의 존재 또는 양을 결정하는 것이 가능해진다.
이하에 실시예를 나타내어 본 발명을 구체적이면서 상세하게 설명하지만, 실시예는 본 발명을 한정하는 것으로 해석해서는 안된다.
실시예 1
1. WT1-332 특이적 I형 헬퍼 T 세포의 유도
건강한 사람의 혈액 제공자(제공자 1: HLA-DRB1*0406/1201, DRB3*0101, DRB4*0103 양성, 제공자 2: HLA-DRB1*0901/1101, DRB3*0202, DRB4*0103 양성, 제공자 3: HLA-DRB1*0401/0405, DRB4*0102/0103 양성, 제공자 4: HLA-DRB1*0901/1101, DRB3*0202, DRB4*0103 양성)의 말초혈로부터 말초혈 단핵구(PBMC)를 분리하였다. 분리한 PBMC(1.5×107개)를 45％ RPMI-1640(시그마(SIGMA)사), 45％ AIM-V(인비트로겐(invitrogen)사), 10％ AB형 인간 혈청(MP 바이오메디컬즈(Biomedicals)사)으로 조성되는 배지에 현탁하고, 1.5×106개/웰로 24웰 플레이트에 파종하였다(0일째). PBMC를 파종한 웰에 WT1-332(서열 번호: 2에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드)를 10㎍/mL, IL-7(페프로테크(PeproTech)사)을 10ng/mL가 되도록 첨가하고, 37℃, 5％ CO2에서 1주일간 배양하였다. 또한, 분리한 PBMC의 일부를 재자극시의 항원 제시 세포용으로 동결 보존하였다.
1주일 후(7일째), 재자극을 행하였다. 우선, 동결 보존해 둔 PBMC를 해동하여 10㎍/mL WT1-332로 펄스하고, 50㎍/mL 마이토마이신 C(교와 핫꼬 기린사)로 처리하고, 새로운 24웰 플레이트에 1.0×106 내지 1.6×106개/웰로 파종하였다. 다음에, 1주일간 배양한 세포를 회수하여, 1.0×106 내지 1.6×106개/웰로 항원 제시 세포를 파종한 웰에 파종하였다. 마지막으로, IL-7을 10ng/mL가 되도록 각 웰에 첨가하여 37℃, 5％ CO2에서 배양하였다. 2일 후(9일째)에 각 웰의 배양액 반량을 조심히 추출하고, 대신에 40U/mL IL-2(페프로테크사) 함유 배지를 첨가하여 배양을 계속하였다. 그 후, 1일 걸러 20U/mL IL-2 함유 배지에서 배양액 반량의 교환 조작을 행하고, 14일째부터 21일째 사이에 적절하게 세포를 회수하여 실험에 사용하였다.
2. 구속 대립 유전자 결정 실험에 이용하는 항원 제시 세포의 제조
건강한 사람의 혈액 제공자(제공자 5: HLA-DRB1*0406/1201, DRB3*0101, DRB4*0103 양성, 제공자 6: HLA-DRB1*0403/1405, DRB3*0202, DRB4*0103 양성, 제공자 7: HLA-DRB1*0403/1201, DRB3*0101, DRB4*0103 양성, 제공자 8: HLA-DRB1*0101/0901, DRB4*0103 양성, 제공자 9: HLA-DRB1*1401/1406, DRB3*0202 양성, 제공자 10: HLA-DRB1*0803/0901, DRB4*0103 양성, 제공자 11: HLA-DRB1*1101/1502, DRB3*0202 양성, 제공자 12: HLA-DRB1*0405/1406, DRB3*0202, DRB4*0103 양성, 제공자 13: HLA-DRB1*0401/0405, DRB4*0102/0103 양성, 제공자 14: HLA-DRB1*0401/1502, DRB4*0102 양성, 제공자 15: HLA-DRB1*0101/0405, DRB4*0103 양성, 제공자 16: HLA-DRB1*0901/1501, DRB4*0103 양성, 제공자 17: HLA-DRB1*0405/1501, DRB4*0103 양성, 제공자 18: HLA-DRB1*1401/1502, DRB3*0202 양성, 제공자 19: HLA-DRB1*1403/1502, DRB3*0101 양성, 제공자 20: HLA-DRB1*0803/1302, DRB3*0301 양성)의 말초혈로부터 PBMC를 분리하고, 구속 대립 유전자 결정 실험에 이용하는 항원 제시 세포로 하였다. 각각의 PBMC를 사용할 때까지 -80℃에서 동결 보존하였다.
3. IFN-γ의 측정(항 HLA-DR 항체에서의 반응 저해)
제공자 1 내지 4의 PBMC로부터 유도된 T 세포를, WT1-332 비존재하, 10㎍/mL WT1-332 존재하, 10㎍/mL WT1-332 및 10㎍/mL 항 HLA-DR 항체(BD사) 존재하에서 24시간 배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA(BD사)로 정량하였다. 그 결과, 유도된 모든 T 세포가 WT1-332를 인식하여 IFN-γ를 생산하는 것, 또한 그 반응은 HLA-DR 분자 구속적인 것이 나타내어졌다.
4. IFN-γ의 측정(구속 대립 유전자의 결정)
제공자 1 내지 4의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 각각 적당한 WT1-332로 펄스한 항원 제시 세포와 반응시켜, 유도된 T 세포의 구속 대립 유전자를 결정하였다.
(4-1. 제공자 1 유래 T 세포)
제공자 1의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 10㎍/mL WT1-332로 펄스한 제공자 5, 6, 7, 8, 9 유래 항원 제시 세포와 24시간 공배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA로 정량하였다. 결과를 도 1에 나타낸다. 제공자 1 유래 T 세포는 HLA-DR4(DRB1*0403, 0406) 양성 항원 제시 세포와 공배양하였을 때 IFN-γ를 생산하기 때문에, 구속 대립 유전자는 HLA-DRB1*0406인 것이 나타내어졌다. 또한, HLA-DRB1*0403이 WT1-332를 제시하여 T 세포를 자극할 수 있는 것도 나타내어졌다.
(4-2. 제공자 2 유래 T 세포)
제공자 2의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 10㎍/mL WT1-332로 펄스한 제공자 10, 11, 12, 9 유래 항원 제시 세포와 24시간 공배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA로 정량하였다. 결과를 도 2에 나타낸다. 제공자 2 유래 T 세포는 HLA-DRB3*0202 양성 항원 제시 세포와 공배양하였을 때 IFN-γ를 생산하기 때문에, 구속 대립 유전자는 HLA-DRB3*0202인 것이 나타내어졌다.
(4-3. 제공자 3 유래 T 세포)
제공자 3의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 10㎍/mL WT1-332로 펄스한 제공자 13, 14, 15, 10 유래 항원 제시 세포와 24시간 공배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA로 정량하였다. 결과를 도 3에 나타낸다. 제공자 3 유래 T 세포는 HLA-DR4(DRB1*0401, 0405) 양성 항원 제시 세포와 공배양하였을 때 IFN-γ를 생산하였다. 따라서, HLA-DRB1*0401, 0405 모두 WT1-332를 제시하여 T 세포를 자극할 수 있는 것이 나타내어졌다.
(4-4. 제공자 4 유래 T 세포)
제공자 4의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 10㎍/mL WT1-332로 펄스한 제공자 16, 11, 17, 18, 19, 20 유래 항원 제시 세포와 24시간 공배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA로 정량하였다. 결과를 도 4에 나타낸다. 제공자 4 유래 T 세포는 HLA-DRB1*1101 양성 항원 제시 세포와 공배양하였을 때 IFN-γ를 생산하기 때문에, 구속 대립 유전자는 HLA-DRB1*1101인 것이 나타내어졌다.
실시예 2
이어서, WT1-332와 MHC 클래스 II 분자의 결합능을 평가하기 위하여, HPLC를 이용함으로써 7종류의 HLA 클래스 II 단량체 단백질(DRB1*1501, 0101, 0405, 0803, 0901, 1502 또는 DRB4*0101)과 WT1-332의 폴딩 시험을 행하였다. 간단히 설명하면, HLA 클래스 II 단량체 단백질, 펩티드(각 단백질에 결합하는 펩티드(포지티브 컨트롤), 결합하지 않는 펩티드(네가티브 컨트롤) 및 WT1-332), 폴딩 버퍼를 섞어 폴딩 반응액을 제작하여 37℃에서 반응시킨 후, HPLC를 이용한 유지 시간을 해석하였다. HLA 클래스 II 단량체 단백질과 펩티드의 결합에 의한 유지 시간의 이동을 이용하여 WT1-332와의 폴딩을 평가하였다. 이 시험에 이용하는 시약류를 하기 표에 나타낸다.
(표 1. 시험에 이용하는 시약류)
Figure pat00001
HLA 클래스 II 단량체 단백질의 제조
-80℃로 동결 보존한 HLA 클래스 II 단량체 단백질을 빙상에서 융해하였다. 융해한 HLA 클래스 II 단량체 단백질을 83μL 중에 0.05mg(1×10-9mol) 포함되도록 희석 버퍼로 제조하였다.
펩티드 용액의 제조
각 펩티드를 전자 천칭으로 약 1mg 칭량하고, 유리 바이알로 옮겨 20mg/mL가 되도록 DMSO로 용해하였다.
50배 몰량의 펩티드 용액량의 산출
HLA 클래스 II 단량체 단백질에 대하여 50배 몰량이 되는 펩티드량을 이하의 계산식으로 산출하였다.
필요한 펩티드량: 1×10-9mol×50=5×10-8mol(필요한 펩티드량)
5×10-8×(펩티드 분자량)×1000=(필요한 펩티드량)(mg)
(필요한 펩티드량)/[펩티드 순도/100]=(첨가하는 펩티드량)(mg)
[(첨가하는 펩티드량)/20mg/mL]×1000=(첨가하는 펩티드 용액량)(μL)
폴딩 버퍼 첨가량의 산출
폴딩 버퍼로서, HLA 클래스 II 단량체 단백질과 펩티드의 혼합 용액의 10％량을 첨가하였다. 폴딩 버퍼 첨가량을 이하의 계산식으로 산출하였다.
[83μL(HLA 클래스 II 단량체 단백질량)+(50배 몰량의 펩티드 용액량)]×0.1=폴딩 버퍼 첨가량
HPLC에 의한 폴딩 해석
HLA 클래스 II 단량체 단백질이 들어간 유리 바이알에, 산출하여 얻어진 펩티드 용액, 폴딩 버퍼를 첨가하여 37℃에서 밤새 정치하였다. HLPC(워터즈 2695 세퍼레이션 모듈(Waters 2695 Separation Module))를 기동하고, 슈퍼덱스(Seperdex) 200 칼럼을 평형화 버퍼로 평형화하였다. 모든 샘플에 평형화 버퍼를 300μL 첨가하여 잘 혼합하고, 그 중 100μL를 샘플 주입 용량(Sample injection volume)으로 하여 유지 시간을 산출하였다. 분석 시간을 50분으로 하였다. HLA 클래스 II 단량체 단백질과 펩티드가 폴딩한 기준은, 유지 시간이 컨트롤(용매만)과 비교하여 0.1분 이상 이동한 것으로 하였다. 그 결과, 조사한 7종류의 HLA 클래스 II 단량체 단백질(DRB1*1501, 0101, 0405, 0803, 0901, 1502 또는 DRB4*0101)에서 유지 시간의 이동도가 0.1분 이상 상승하였기 때문에(도 5), 이들 단백질에 대하여 WT1-332가 특이적으로 결합하여 항원 제시할 수 있는 것이 명확해졌다.
실시예 3
WT1-332 특이적 T 세포의 유도
건강한 사람의 혈액 제공자(HLA-DRB1*1501, 1502, 0405, HLA-DPB1*0501, 0901을 적어도 하나 이상 가짐, 총 42명)의 말초혈로부터 말초혈 단핵구(PBMC)를 분리하였다. 분리한 PBMC를 1.2×107개씩 분할하고, 45％ RPMI-1640(시그마사), 45％ AIM-V(인비트로겐사), 10％ AB형 인간 혈청(MP 바이오메디컬즈사)으로 조성되는 배지에 현탁하고, 1.5×106개/웰로 24웰 플레이트에 파종하였다(0일째). PBMC를 파종한 웰에 WT1-332를 20㎍/mL, IL-7(페프로테크사)을 10ng/mL가 되도록 첨가하고, 37℃, 5％ CO2에서 1주일간 배양하였다. 대조군으로서 WT1-332 대신에 용매(10mM 아세트산)를 최종 농도 10μM이 되도록 첨가한 군(용매 유도군)을 설정하였다. 또한, 분리한 PBMC의 일부를 재자극시의 항원 제시 세포용으로 동결 보존하였다.
1주일 후(7일째), 재자극을 행하였다. 우선, 동결 보존해 둔 PBMC를 해동하여 20㎍/mL WT1-332 또는 10μM 아세트산 용매로 펄스하고, 50㎍/mL 마이토마이신 C(교와 핫꼬 기린사)로 처리하고, 새로운 24웰 플레이트에 1.0×106 내지 1.6×106개/웰로 파종하였다. 다음에, 1주일간 배양한 세포를 회수하여, 1.0×106 내지 1.6×106개/웰로 항원 제시 세포를 파종한 웰에 파종하였다. 마지막으로, IL-7을 10ng/mL가 되도록 각 웰에 첨가하여 37℃, 5％ CO2에서 배양하였다. 2일 후(9일째)에 각 웰의 배양액 반량을 조심히 추출하고, 대신에 40U/mL IL-2(페프로테크사) 함유 배지를 첨가하여 배양을 계속하였다. 그 후, 1일 걸러 20U/mL IL-2 함유 배지에서 배양액 반량의 교환 조작을 행하였다.
0, 7, 14일째에 세포를 회수하여 IFN-γ 측정 실험에 사용하였다.
IFN-γ의 측정(세포 내 사이토카인 염색(ICS))
0일째에 있어서는 제조 후의 PBMC, 7일째 및 14일째에 있어서는 WT1-332 유도군 및 용매 유도군으로부터 회수한 생세포를 96웰 U 바닥 플레이트에 파종, 및 WT1-332 함유 배지를 최종 농도 20㎍/mL가 되도록 첨가하여 항원 재자극을 넣었다. 또한, 비교 대조로서 용매 함유 배지를 최종 농도 10μM이 되도록 첨가하였다. 37℃, 5％ CO2에서 4시간 배양한 후, 브레펠딘(Brefeldin) A(바이오레전드(BioLegend))를 첨가하여 배양을 더 계속하였다. 배양 개시로부터 6시간 후에 세포를 회수하고, PE 표지 항인간 CD4 항체, FITC 표지 항인간 CD8 항체로 염색하였다. 세포 내 IFN-γ 염색을 BD 시토픽스/시토펌 픽세이션/퍼미어빌리제이션 키트(Cytofix/Cytoperm Fixation/Permiabilization Kit)(벡톤 딕킨슨(Becton Dickinson))와 PerCP/Cy5.5 표지 항인간 IFN-γ 항체를 이용하여 행하였다. 해석은 EPICS-XL MCL(벡만 쿨터(Beckman Coulter))을 이용하였다. 결과를 도 6 및 도 7에 나타낸다. 도 6으로부터 WT1-332 유도군에 있어서, 7일째부터 14일째의 사이에 있어서 WT1-332 특이적 Th1의 현저한 증가가 확인되어, 경시적으로 증가하는 것을 알 수 있었다. 이 증가는 용매 유도군에 비하여 유의한 증가이었다(P<0.0001). 또한, 도 7로부터 WT1-332 특이적 CTL에 관해서도 7일째부터 14일째의 사이에 WT1-332 유도군에 있어서 경시적인 증가가 확인되어, 그 증가도 용매 유도군과 비교하여 유의하였다(P<0.0001).
IFN-γ의 측정(항 HLA-DR 항체, 항 HLA-DQ 항체에서의 반응 저해)
14일째에 있어서, 제공자 21 내지 37의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 10μM 용매 존재하, 20㎍/mL WT1-332 존재하, 20㎍/mL WT1-332 및 10㎍/mL 항 HLA-DR 항체(L243[G46-6], BD사) 존재하에서 24시간 배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA(BD사)로 정량하였다. 결과를 도 8에 나타낸다. 제공자 21 내지 37의 검체에 있어서, 유도된 T 세포가 WT1-332를 인식하여 IFN-γ를 생산하는 것, 또한 그 반응은 HLA-DR 분자 구속적인 것이 나타내어졌다.
또한, 14일째에 있어서, 제공자 38 내지 46의 PBMC로부터 유도된 T 세포를 10μM 용매 존재하, 20㎍/mL WT1-332 존재하, 20㎍/mL WT1-332 및 10㎍/mL 항 HLA-DR 항체(L243[G46-6], BD사), 10㎍/mL 항 HLA-DQ 항체(SPVL3, BC사) 존재하에서 24시간 배양하였다. 배양 후, 상청 중의 IFN-γ량을 ELISA(BD사)로 정량하였다. 결과를 도 11에 나타낸다. 제공자 38 내지 46의 검체에 있어서, 유도된 T 세포가 WT1-332를 인식하여 IFN-γ를 생산하고, 그 반응은 항 HLA-DR 항체, 항 HLA-DQ 항체로 저해되지 않았다. 이들로부터 제공자 38 내지 46에서 유래하는 WT1-332 유도 T 세포가 HLA-DP 분자 구속적인 것이 나타내어졌다.
WT1-332 특이적 T 세포의 유도(신규 대립 유전자와의 관계)
도 6 및 도 7에서의 건강한 사람의 혈액 제공자(HLA-DRB1*1501, 1502, 0405, HLA-DPB1*0501, 0901을 적어도 하나 이상 가짐, 총 42명)를 이용한 결과에 있어서, HLA-DR 구속성 내지 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 17명의 검체(제공자 21 내지 37) 각각에 대하여 14일째의 결과를 도 9 및 도 10에 나타낸다. 또한, 17명의 검체(제공자 21 내지 37) 각각의 HLA 클래스 II형(HLA-DRB1 및 HLA-DPB1 대립 유전자의 형)을 이하의 표 2에 나타낸다. 여기서, DRB3*0202는 DRB1*1101, DRB1*1401 및 DRB1*1405와 연쇄 불평형에 있고(표 중, △로 나타내는 DRB1 대립 유전자), DRB4*0101은 DRB1*0403, DRB1*0405, DRB1*0901과 연쇄 불평형에 있다(표 중, ▲로 나타내는 DRB1 대립 유전자). 표 중, 굵은 이탤릭 문자로 나타내는 대립 유전자는 신규 적합 HLA-DRB1 대립 유전자를 나타낸다.
Figure pat00002
도 9, 도 10 및 표 2로부터, 이들 HLA-DR 대립 유전자를 갖는 세포에 있어서 WT1-332 특이적 Th1 및 WT1-332 특이적 CTL의 유도가 확인되었다.
또한, 도 6 및 도 7에서의 건강한 사람의 혈액 제공자(HLA-DRB1*1501, 1502, 0405, HLA-DPB1*0501, 0901을 적어도 하나 이상 가짐, 총 42명)를 이용한 결과에 있어서, HLA-DP 구속성 내지 WT1-332 특이적 Th1이 유도된 9명의 검체(제공자 38 내지 46) 각각에 대하여 14일째의 결과를 도 12 및 도 13에 나타낸다. 또한, 9명의 검체(제공자 38 내지 46) 각각의 HLA 클래스 II형(HLA-DRB1 및 HLA-DPB1 대립 유전자의 형)을 이하의 표 3에 나타낸다. 표 중, ※은 이제까지 알려져 있는 적합 HLA-DPB1 대립 유전자를 나타낸다.
Figure pat00003
도 12, 도 13 및 표 3으로부터, 이들 HLA-DP 대립 유전자를 갖는 세포에 있어서 WT1-332 특이적 Th1 및 WT1-332 특이적 CTL의 유도가 확인되었다.
<산업상 이용가능성>
본 발명에 의해 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자, HLA-DPB1*0901 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 WT1 펩티드를 이용하여 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포를 활성화하는 방법 및 그를 위한 조성물, 및 헬퍼 T 세포 및/또는 세포 상해성 T 세포를 활성화함에 따른 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물 등이 제공되기 때문에, 의약품 등의 분야, 예를 들면 WT1 유전자를 고발현하고 있는 여러가지 조혈기 종양, 고형암의 예방약 또는 치료약의 개발, 제조 분야에 있어서 이용 가능하다.
SEQUENCE LISTING <110> Osaka University Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. <120> METHOD FOR ACTIVATING HELPER T CELLS <130> 670460 <150> JP 2010-225806 <151> 2010-10-05 <160> 4 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro 1 5 10 15 Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala Ala 20 25 30 Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 35 40 45 Gly Ser Leu Gly Gly Pro Ala Pro Pro Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro 50 55 60 Pro Pro Pro Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp Gly Gly 65 70 75 80 Ala Glu Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val His Phe 85 90 95 Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly Pro Phe 100 105 110 Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe 115 120 125 Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ile 130 135 140 Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Thr Phe Asp Gly Thr Pro Ser Tyr 145 150 155 160 Gly His Thr Pro Ser His His Ala Ala Gln Phe Pro Asn His Ser Phe 165 170 175 Lys His Glu Asp Pro Met Gly Gln Gln Gly Ser Leu Gly Glu Gln Gln 180 185 190 Tyr Ser Val Pro Pro Pro Val Tyr Gly Cys His Thr Pro Thr Asp Ser 195 200 205 Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu Leu Leu Arg Thr Pro Tyr Ser Ser Asp 210 215 220 Asn Leu Tyr Gln Met Thr Ser Gln Leu Glu Cys Met Thr Trp Asn Gln 225 230 235 240 Met Asn Leu Gly Ala Thr Leu Lys Gly Val Ala Ala Gly Ser Ser Ser 245 250 255 Ser Val Lys Trp Thr Glu Gly Gln Ser Asn His Ser Thr Gly Tyr Glu 260 265 270 Ser Asp Asn His Thr Thr Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg Ile 275 280 285 His Thr His Gly Val Phe Arg Gly Ile Gln Asp Val Arg Arg Val Pro 290 295 300 Gly Val Ala Pro Thr Leu Val Arg Ser Ala Ser Glu Thr Ser Glu Lys 305 310 315 320 Arg Pro Phe Met Cys Ala Tyr Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys 325 330 335 Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His Thr Gly Glu Lys Pro 340 345 350 Tyr Gln Cys Asp Phe Lys Asp Cys Glu Arg Arg Phe Ser Arg Ser Asp 355 360 365 Gln Leu Lys Arg His Gln Arg Arg His Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln 370 375 380 Cys Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg Ser Asp His Leu Lys Thr 385 390 395 400 His Thr Arg Thr His Thr Gly Lys Thr Ser Glu Lys Pro Phe Ser Cys 405 410 415 Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe Ala Arg Ser Asp Glu Leu Val 420 425 430 Arg His His Asn Met His Gln Arg Asn Met Thr Lys Leu Gln Leu Ala 435 440 445 Leu <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His 1 5 10 15 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> positive control peptide for binding to class II monomer protein <400> 3 Pro Val Ser Lys Met Arg Met Ala Thr Pro Leu Leu Met Gln Ala 1 5 10 15 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> negative control peptide for binding to class II monomer protein <400> 4 Lys Ala Glu Arg Ala Asp Leu Ile Ala Tyr Leu Lys Gln Ala Thr Ala 1 5 10 15

Claims (14)

  1. WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포를 활성화시키는 공정을 포함하는 헬퍼 T 세포의 활성화 방법으로서,
    상기 WT1 펩티드는 서열 번호: 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드이고,
    상기 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것이고,
    상기 항원 제시 세포는 HLA-DRB1*0403 양성 대상, HLA-DRB1*0406 양성 대상, HLA-DRB1*0803 양성 대상, HLA-DRB3*0202 양성 대상, HLA-DRB4*0101 양성 대상 또는 HLA-DPB1*0301 양성 대상 중 어느 하나에 유래하는 것인 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 적어도 2개의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자 및/또는 HLA-DPB1*0901 분자에 결합하는 능력을 더 갖는 것인 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, WT1 펩티드의 항원 제시 세포에의 첨가가 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리펩티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포의 첨가에 의해 행해지는 방법.
  5. WT1 펩티드를 항원 제시 세포에 첨가하여 헬퍼 T 세포를 활성화시키기 위한 WT1 펩티드를 포함하는 조성물로서,
    상기 WT1 펩티드는 서열 번호: 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드이고,
    상기 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것인 조성물.
  6. 제5항에 있어서, WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 중 적어도 2개의 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 것인 조성물.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, WT1 펩티드가 HLA-DRB1*0405 분자, HLA-DRB1*1501 분자, HLA-DRB1*1502 분자, HLA-DPB1*0501 분자 및/또는 HLA-DPB1*0901 분자에 결합하는 능력을 더 갖는 것인 조성물.
  8. 제5항 또는 제6항에 있어서, WT1 펩티드의 항원 제시 세포에의 첨가가 WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포의 첨가에 의해 행해지는 조성물.
  9. WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체가 제시되어 있는 항원 제시 세포로서, 상기 MHC 클래스 II 분자가 HLA-DRB1*0101 분자, HLA-DRB1*0401 분자, HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB1*0901 분자, HLA-DRB1*1101 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자, HLA-DPB1*0201 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 MHC 클래스 II 분자인 항원 제시 세포.
  10. WT1 펩티드를 포함하는 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체를 인식하는 헬퍼 T 세포로서,
    상기 WT1 펩티드는 서열 번호: 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드이고,
    상기 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것이고,
    상기 MHC 클래스 II 분자는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나의 분자인 헬퍼 T 세포.
  11. 제10항에 기재된 헬퍼 T 세포에 의해 활성화되는 세포 상해성 T 세포.
  12. WT1 펩티드, WT1 펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 상기 발현 벡터를 포함하는 세포 중 어느 하나를 유효 성분으로서 포함하는, 세포 상해성 T 세포를 활성화시키기 위한 의약 조성물로서,
    상기 의약 조성물은 HLA-DRB1*0403 양성 대상, HLA-DRB1*0406 양성 대상, HLA-DRB1*0803 양성 대상, HLA-DRB3*0202 양성 대상, HLA-DRB4*0101 양성 대상 또는 HLA-DPB1*0301 양성 대상 중 어느 하나에 투여되는 것이고,
    상기 WT1 펩티드는 서열 번호: 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드이고,
    상기 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것인 의약 조성물.
  13. WT1 펩티드에 특이적으로 결합하는 항체로서,
    상기 WT1 펩티드는 서열 번호: 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드이고,
    상기 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것인 항체.
  14. HLA-DRB1*0403 양성 대상, HLA-DRB1*0406 양성 대상, HLA-DRB1*0803 양성 대상, HLA-DRB3*0202 양성 대상, HLA-DRB4*0101 양성 대상 또는 HLA-DPB1*0301 양성 대상 중 어느 하나에 있어서 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양을 결정하는 방법으로서,
    (a) 상기 대상으로부터 취득한 시료를 WT1 펩티드를 이용하여 자극하고,
    (b) 사이토카인 또는 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양을 조사하는
    공정을 포함하며, 사이토카인 또는 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양의 증대가 WT1 특이적 헬퍼 T 세포의 존재 또는 양을 나타내는 것이고,
    상기 WT1 펩티드는 서열 번호: 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드이고,
    상기 WT1 펩티드는 HLA-DRB1*0403 분자, HLA-DRB1*0406 분자, HLA-DRB1*0803 분자, HLA-DRB3*0202 분자, HLA-DRB4*0101 분자 또는 HLA-DPB1*0301 분자 중 어느 하나에 결합하는 능력을 갖는 것인 방법.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2378264T3 (es) 2003-11-05 2012-04-10 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Péptido antigénico de unión a HLA-DR derivado de WT1
CA2900087C (en) 2005-10-17 2024-02-13 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same
EP3117836A1 (en) 2006-04-10 2017-01-18 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Immunogenic wt-1 peptides and uses thereof
RU2680539C2 (ru) 2007-02-27 2019-02-22 Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. Способ активации хелперных т-клеток и композиция для применения в данном способе
AR076349A1 (es) 2009-04-23 2011-06-01 Int Inst Cancer Immunology Inc Peptido auxiliar del antigeno del cancer
WO2013106834A2 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof
WO2014042226A1 (ja) * 2012-09-12 2014-03-20 株式会社癌免疫研究所 抗原特異的ヘルパーｔ細胞レセプター遺伝子
TWI646970B (zh) * 2012-12-17 2019-01-11 大塚製藥股份有限公司 活化輔助ｔ細胞的方法
US10815273B2 (en) 2013-01-15 2020-10-27 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof
PT2945647T (pt) 2013-01-15 2020-11-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Péptidos imunogénicos wt-1 e métodos de uso dos mesmos
RU2668560C2 (ru) 2013-03-29 2018-10-02 Сумитомо Дайниппон Фарма Ко., Лтд. Конъюгированная вакцина на основе пептида антигена wt1
US10253075B2 (en) 2014-02-26 2019-04-09 tella, Inc. WT1 antigenic polypeptide, and anti-tumor agent containing said polypeptide
CA2974066A1 (en) 2014-12-25 2016-06-30 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Method for modifying t cell population
CN106565836B (zh) * 2015-10-10 2020-08-18 中国科学院广州生物医药与健康研究院 高亲和力的可溶性pdl-1分子
JP6994201B2 (ja) 2016-11-09 2022-02-21 国立大学法人大阪大学 Ｔ細胞集団の改変方法
WO2018101309A1 (ja) * 2016-11-30 2018-06-07 大日本住友製薬株式会社 Ｗｔ１ヘルパーペプチド及びこれと癌抗原ペプチドコンジュゲート体との組合せ
US20200368338A1 (en) * 2017-12-27 2020-11-26 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Conjugate of wt1-derived peptides and composition comprising the same
US20210038703A1 (en) * 2018-02-15 2021-02-11 National University Corporation Asahikawa Medical University Cancer Antigen Peptide

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003106682A1 (ja) 2002-06-12 2003-12-24 中外製薬株式会社 Ｈｌａ−ａ２４拘束性癌抗原ペプチド
WO2005045027A1 (ja) 2003-11-05 2005-05-19 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｗｔ１由来のｈｌａ−ｄｒ結合性抗原ペプチド
WO2005095598A1 (ja) 2004-03-31 2005-10-13 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｗｔ１由来の癌抗原ペプチド
WO2007074146A1 (en) 2005-12-29 2007-07-05 Timex Group B.V. Multimode electronic device with calibrating/setting mechanism
WO2007097358A1 (ja) 2006-02-22 2007-08-30 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｈｌａ－ａ＊３３０３拘束性ｗｔ１ペプチド、およびそれを含む医薬組成物
WO2008105462A1 (ja) 2007-02-27 2008-09-04 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. ヘルパーｔ細胞の活性化方法およびそのための組成物

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5726288A (en) 1989-11-13 1998-03-10 Massachusetts Institute Of Technology Localization and characterization of the Wilms' tumor gene
CN1178956C (zh) 1998-07-31 2004-12-08 杉山治夫 基于癌抑制基因wt1的产物的癌抗原
US20030235557A1 (en) 1998-09-30 2003-12-25 Corixa Corporation Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy
US7063854B1 (en) 1998-09-30 2006-06-20 Corixa Corporation Composition and methods for WTI specific immunotherapy
CA2349442C (en) 1998-09-30 2012-12-04 Corixa Corporation Compositions and methods for wt1 specific immunotherapy
AU2001247220A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Corixa Corporation Compositions and methods for diagnosis and therapy of malignant mesothelioma
TWI318630B (en) 2001-03-22 2009-12-21 Int Inst Cancer Immunology Inc Wt1 modified peptide
GB0108491D0 (en) 2001-04-04 2001-05-23 Gendaq Ltd Engineering zinc fingers
CA2451846A1 (en) 2001-06-29 2003-01-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cancer vaccine comprizing a cancer antigen based on the product of a tumor suppressor gene wt1 and a cationic liposome
WO2003028758A1 (fr) 2001-09-28 2003-04-10 Haruo Sugiyama Nouvelle methode d'induction de lymphocytes t specifiques d'un antigene
EP1447091A4 (en) 2001-09-28 2008-02-13 Institute Of Can International NEW METHOD FOR INDUCTION OF ANTIGEN SPECIFIC T CELLS
EP1550453B1 (en) 2002-09-12 2015-05-27 International Institute of Cancer Immunology, Inc. Cancer antigen peptide preparation
US7378384B2 (en) 2002-09-20 2008-05-27 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. WT1 substitution peptides
WO2004063217A1 (ja) 2003-01-15 2004-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 二量体化ペプチド
ES2443582T3 (es) 2003-06-27 2014-02-19 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Método para diagnosticar el cáncer que comprende la medición de las células precursoras de CTL específicos de WT1
US7608769B2 (en) * 2004-05-12 2009-10-27 First Act, Inc. Packaged drum set
JP4719876B2 (ja) 2005-04-04 2011-07-06 国立大学法人愛媛大学 Ｈｌａクラスｉｉ拘束性ｗｔ１抗原ペプチド
CA2900087C (en) 2005-10-17 2024-02-13 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same
CN101336249A (zh) 2005-11-30 2008-12-31 株式会社癌免疫研究所 新型肽化合物
EP3117836A1 (en) 2006-04-10 2017-01-18 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Immunogenic wt-1 peptides and uses thereof
US8653038B2 (en) 2006-12-28 2014-02-18 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. HLA-A* 1101-restricted WT1 peptide and pharmaceutical composition comprising the same
EP2857508A3 (en) 2007-03-05 2015-04-15 International Institute of Cancer Immunology, Inc. Cancer antigen-specific T-cell receptor gene, peptide encoded by the gene, and use of them
AR076349A1 (es) 2009-04-23 2011-06-01 Int Inst Cancer Immunology Inc Peptido auxiliar del antigeno del cancer
TWI646970B (zh) 2012-12-17 2019-01-11 大塚製藥股份有限公司 活化輔助ｔ細胞的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003106682A1 (ja) 2002-06-12 2003-12-24 中外製薬株式会社 Ｈｌａ−ａ２４拘束性癌抗原ペプチド
WO2005045027A1 (ja) 2003-11-05 2005-05-19 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｗｔ１由来のｈｌａ−ｄｒ結合性抗原ペプチド
EP1696027A1 (en) * 2003-11-05 2006-08-30 International Institute of Cancer Immunology, Inc. Hla-dr-binding antigen peptide derived from wt1
WO2005095598A1 (ja) 2004-03-31 2005-10-13 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｗｔ１由来の癌抗原ペプチド
WO2007074146A1 (en) 2005-12-29 2007-07-05 Timex Group B.V. Multimode electronic device with calibrating/setting mechanism
WO2007097358A1 (ja) 2006-02-22 2007-08-30 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. Ｈｌａ－ａ＊３３０３拘束性ｗｔ１ペプチド、およびそれを含む医薬組成物
WO2008105462A1 (ja) 2007-02-27 2008-09-04 International Institute Of Cancer Immunology, Inc. ヘルパーｔ細胞の活性化方法およびそのための組成物

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Call KM et al., Cell. 1990 Feb 9;60(3):509-20
Daniel A. Haber et al., Cell. 1990 Jun 29;61(7):1257-69
Gao FG et al., Cancer Res. 2002 Nov 15;62(22):6438-41
Inoue K et al., Blood. 1998 Apr 15;91(8):2969-76
Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998;181:151-212. Review
Oka Y et al., Immunogenetics. 2000 Feb;51(2):99-107
Tsuboi A et al., Leuk Res. 1999 May;23(5):499-505
Yamagami T et al., Blood. 1996 Apr 1;87(7):2878-84
Zeng G, J Immunother. 2001 May;24(3):195-204

Also Published As

Publication number Publication date
NZ703560A (en) 2016-11-25
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SG10201508252PA (en) 2015-11-27

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