CN105769667A - 一种灵芝发酵液的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种灵芝发酵液的制备方法及其应用。本发明提供的方法包括以下步骤：a)、灵芝提取液、果糖和NH4Cl按照质量比100：(3～6)：(6～9)混合后灭菌，得到灭菌混合液；b)、在所述灭菌混合液中接种纳豆芽孢杆菌，进行发酵，得到灵芝发酵液。本发明采用纳豆芽孢杆菌对灵芝提取液进行发酵，从而有效释放了灵芝的活性和营养成分，进而使发酵得到的灵芝发酵液具有出色的保湿效果。实验结果表明，本发明制备得到的灵芝发酵液的保湿效果优于阳性对照组和10％甘油。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种灵芝发酵液的制备方法及其应用。
背景技术
灵芝属高温性菌类，是中国传统的珍稀药用真菌，属担子菌纲，产于欧洲、美洲、非洲、亚洲东部。我国普遍分布，但以长江以南为多，分布于长江以南高温多雨地带。灵芝具有很高经济价值，自古以来就是滋补、强身、防病、治病的珍品。
随着现代生活节奏的加快，加之工作学习的压力和环境污染的影响，肌肤问题也会随之而来。随着人民生活水平的日益提高，人们开始对保持健康体魄，延缓衰老，延长生命有了追求。而灵芝由于其有“安惊魂，补肝益气，坚筋骨，好颜色，利关节，祛痰健脾，活血”等功效而被誉为“仙草”。灵芝的主要有效成分是高分子灵芝多糖，三萜，灵芝酸及脲嘌呤核苷等生物活性物质，存在于天然灵芝子实体和菌丝体中。近年来，对灵芝的应用已不限于药用，还用于制造各种功能性保健食品和美容产品，但目前生产的灵芝美容产品的美容效果不理想，特别是保湿效果难以让消费者满意。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种灵芝发酵液的制备方法及其应用，采用本发明提供的方法制得的灵芝发酵液具有良好的保湿功效。
本发明提供了一种灵芝发酵液的制备方法，包括以下步骤：
a)、灵芝提取液、果糖和NH4Cl按照质量比100：(3～6)：(6～9)混合后灭菌，得到灭菌混合液；
b)、在所述灭菌混合液中接种纳豆芽孢杆菌，进行发酵，得到灵芝发酵液。
优选的，所述灵芝提取液按照以下方法制备得到：
首先将灵芝在75～85℃的水中浸渍1.5～2.5h，得到浸渍液；所述灵芝和水的质量比为1：(15～25)；
然后将所述浸渍液进行浓缩，得到灵芝提取液；所述浸渍液和灵芝提取液的体积比为(5～15)：1。
优选的，所述纳豆芽孢杆菌的接种方式为：
首先将纳豆芽孢杆菌在液体牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养，得到纳豆芽孢杆菌种子液；
然后将所述纳豆芽孢杆菌种子液添加到所述灭菌混合液中。
优选的，所述纳豆芽孢杆菌种子液中的活菌量为5×109～6×1010cfu/mL。
优选的，所述纳豆芽孢杆菌种子液在所述灭菌混合液中的添加量为所述灭菌混合液体积的3～8％。
优选的，所述液体牛肉膏蛋白胨培养基中含有牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水；所述牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水的质量比为2～5：8～15：3～7：800～1200。
优选的，所述发酵的温度为28～33℃；所述发酵的时间为14～18h。
本发明提供了一种上述技术方案所述的制备方法制得的灵芝发酵液在皮肤保湿的应用。
与现有技术相比，本发明提供了一种灵芝发酵液的制备方法及其应用。本发明提供的方法包括以下步骤：a)、灵芝提取液、果糖和NH4Cl按照质量比100：(3～6)：(6～9)混合后灭菌，得到灭菌混合液；b)、在所述灭菌混合液中接种纳豆芽孢杆菌，进行发酵，得到灵芝发酵液。本发明采用纳豆芽孢杆菌对灵芝提取液进行发酵，从而有效释放了灵芝的活性和营养成分，进而使发酵得到的灵芝发酵液具有出色的保湿效果。实验结果表明，本发明制备得到的灵芝发酵液的保湿效果优于阳性对照组和10％甘油。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例4提供的保湿率柱状图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种灵芝发酵液的制备方法，包括以下步骤：
a)灵芝提取液、果糖和NH4Cl按照质量比100：(3～6)：(6～9)混合后灭菌，得到灭菌混合液；
b)在所述灭菌混合液中接种纳豆芽孢杆菌，进行发酵，得到灵芝发酵液。
在本发明提供的灵芝发酵液的制备方法中，首先将灵芝提取液、果糖和NH4Cl混合。其中，所述灵芝提取液优选按照以下方法制备得到：
首先将灵芝在水中浸渍，得到浸渍液；所述灵芝和水的质量比为1：(15～25)；
然后将所述浸渍液进行浓缩，得到灵芝提取液；所述浸渍液和灵芝提取液的体积比为(5～15)：1。
在本发明提供的上述灵芝提取液的制备方法中，首先将灵芝在水中浸渍。其中，所述灵芝优选为灵芝粉，所述灵芝粉的目数优选为40～80目。在本发明中，所述灵芝和水的质量比为1：(15～25)，优选为1：20；所述浸渍的温度优选为75～85℃，更优选为80℃；所述浸渍的时间优选为1.5～2.5h，更优选为2h。在本发明中，所述浸渍优选在搅拌条件下进行。浸渍结束后，得到浸渍液和灵芝固渣。在本发明中，为提高灵芝中活性成分的浸出量，优选对灵芝进行多次浸渍，即将第一次浸渍得到灵芝固渣进行第二次浸渍，第二次浸渍得到的灵芝固渣进行第三次浸渍，以此类推。在本发明提供的一个实施例中，优选对灵芝进行两次浸渍。在本发明中，每次浸渍过程中，灵芝或其固渣的质量与水的质量的比为1：(15～25)，优选为1：20；浸渍的温度优选为75～85℃，更优选为80℃；浸渍的时间优选为1.5～2.5h，更优选为2h。最后合并每次浸渍得到的浸渍液。得到浸渍液后，将所述浸渍液进行浓缩，得到灵芝提取液。其中，浸渍液和灵芝提取液的体积比为(5～15)：1，优选为10:1。
在本发明提供的灵芝发酵液的制备方法中，所述果糖和灵芝提取液的质量比优选为(3～6)：100，更优选为5:100。所述NH4Cl和灵芝提取液的质量比优选为(6～9)：100，更优选为7.5:100。所述灵芝提取液、果糖和NH4Cl混合均匀后进行灭菌。所述灭菌的温度优选为110～130℃，更优选为121℃；所述灭菌的时间优选为10～30min，更优选为20min。灭菌完毕后，得到灭菌混合液。
在本发明中，得到灭菌混合液后，在所述灭菌混合液中接种纳豆芽孢杆菌。在本发明中，所述纳豆芽孢杆菌优选按照以下方式接种：
首先将纳豆芽孢杆菌在液体牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养，得到纳豆芽孢杆菌种子液；
然后将所述纳豆芽孢杆菌种子液添加到所述灭菌混合液中。
在本发明提供的上述接种方式中，首先将纳豆芽孢杆菌在液体牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养。其中，本发明对所述纳豆芽孢杆菌的来源没有特别限定，采用活化后的市售商品即可。在本发明中，所述液体牛肉膏蛋白胨培养基中含有牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水。其中，所述牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水的质量比优选为2～5：8～15：3～7：800～1200，更优选为3：10：5：1000。在本发明中，所述纳豆芽孢杆菌在液体牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养的温度优选为35～40℃，更优选为37℃；所述培养的时间优选为0.5～2d，更优选为1d。培养结束后，得到纳豆芽孢杆菌种子液。在本发明中，所述纳豆芽孢杆菌种子液中的活菌量优选为5×109～6×1010cfu/mL。得到纳豆芽孢杆菌种子液后，将所述纳豆芽孢杆菌种子液添加到所述灭菌混合液中，完成纳豆芽孢杆菌的接种。其中，所述纳豆芽孢杆菌种子液的添加量(体积)优选为所述灭菌混合液体积的3～8％。
在本发明中，将纳豆芽孢杆菌接种到灭菌混合液后，进行发酵。其中，所述发酵的温度优选为28～33℃，更优选为31℃；所述发酵的时间为14～18h，更优选为16h。所述发酵过程优选在摇床中进行，所述摇床的转速优选为150～170r/min。发酵结束后，得到发酵产物。所述发酵产物进行后处理，得到灵芝发酵液。在本发明中，所述后处理的方式为离心分离，所述离心分离的转速优选为4000～6000r/min；所述离心分离的时间优选为10～15min。
在本发明中，制备得到的灵芝发酵液优选在进行加热灭菌后，低温保存。其中，所述加热灭菌的温度优选为65～70℃；所述加热灭菌的时间优选为30～40min；所述低温保存的温度优选为4℃。
本发明采用纳豆芽孢杆菌对灵芝提取液进行发酵，得到了具有出色保湿效果的灵芝发酵液。与现有技术相比，本发明得到的灵芝发酵液制备方法有以下优点：1)、灵芝发酵液是基于传统中医药，生命科学等综合科学，将药食两用灵芝大型担子菌通过生物发酵所产生的灵芝多糖等多种活性成分，制备出具有保湿效果的发酵液；2)、本发明所提供的方法将灵芝发酵液全部充分利用，工艺简单，操作简便，成本低，能实现大规模生产。3)、灵芝发酵液原料来源广泛，所得产品香味浓郁，不含任何添加剂，绿色健康，此外，其还具有良好的抗氧化和保湿等功能；4)、本发明采用纳豆芽孢杆菌对灵芝萃取清液进行发酵，更加有效释放了灵芝的活性和营养成分，提高了灵芝的利用率；5)、本发明对发酵工艺的条件进行了优化，不仅提高了发酵速度，缩短了发酵时间，此外发酵液的抗氧化和保湿等功能得到显著提高。
实验结果表明，灵芝发酵液的保湿效果优于阳性对照组和10％甘油。
本发明提供了一种上述技术方案制得的灵芝发酵液在皮肤保湿的应用。在本发明提供的应用中，以所述方法制得的灵芝发酵液作为美容护肤品涂抹在皮肤表层，可以对皮肤起到良好的保湿功效。实验结果表明，本发明制备得到的灵芝发酵液的保湿效果优于阳性对照组和10％甘油。
为更清楚起见，下面通过以下实施例进行详细说明。
实施例1
一种具有保湿功效的灵芝发酵液的制备方法，包括以下步骤：
(1)先将干燥的灵芝粉碎，过40目筛；
(2)用20倍重量的水，在80℃对粉碎后的灵芝进行搅拌提取，提取时间为2h，过滤得到滤液；重复提取2次，合并滤液；将滤液浓缩至原体积的10％，得到灵芝提取液。
(3)将一环活化好的纳豆芽孢杆菌菌种(湖南省微生物研究所菌种保藏室，BacillusnattoSawamura，菌株编号106001)加入到液体牛肉膏蛋白胨培养基中，培养基为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、自来水定容至1000mL，溶解均匀，121℃灭菌20min，冷却至室温后接种。在温度37℃条件下培养1天，得到活菌量为6×1010cfu/mL纳豆芽孢杆菌种子液。
(4)向灵芝提取液中加入果糖和NH4Cl，果糖加入量为灵芝提取液质量的5％，NH4Cl加入量为灵芝提取液质量的6％，然后混匀，之后121℃灭菌20min，冷却至室温后，在无菌条件下加入纳豆芽孢杆菌种子液，加入量为灵芝提取液体积的6％，在150r/min摇床上于31℃发酵16h，得到发酵产物。
(5)将发酵产物取出，倒入离心管中，4000r/min离心10min，弃下层沉淀，得到灵芝发酵液；所述灵芝发酵液置于65℃水浴锅中杀菌30min，冷却后，4℃冰箱保存。
实施例2
一种具有保湿功效的灵芝发酵液的制备方法，包括以下步骤：
(1)先将干燥的灵芝粉碎，过40目筛；
(2)用15倍重量的水，在75℃对粉碎后的灵芝进行搅拌提取，提取时间为2.5h，过滤得到滤液；重复拌提取3次，合并滤液；将滤液浓缩至原体积的10％，得到灵芝提取液。
(3)将一环活化好的纳豆芽孢杆菌菌种(湖南省微生物研究所菌种保藏室，BacillusnattoSawamura，菌株编号106001)加入到液体牛肉膏蛋白胨培养基中，培养基为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、自来水定容至1000mL，溶解均匀，121℃灭菌20min，冷却至室温后接种。在温度37℃条件下培养1天，得到活菌量为5×1010cfu/mL纳豆芽孢杆菌种子液。
(4)向灵芝提取液中加入果糖和NH4Cl，果糖加入量为灵芝提取液质量的4％，NH4Cl加入量为灵芝提取液质量的7.5％，然后混匀，之后121℃灭菌20min，冷却至室温后，在无菌条件下加入纳豆芽孢杆菌种子液，加入量为灵芝提取液体积的4％，在150r/min摇床上于29℃发酵17h，得到发酵产物。
(5)将发酵产物取出，倒入离心管中，4000r/min离心10min，弃下层沉淀，得到灵芝发酵液；所述灵芝发酵液置于65℃水浴锅中杀菌30min，冷却后，4℃冰箱保存。
实施例3
一种具有保湿功效的灵芝发酵液的制备方法，包括以下步骤：
(1)先将干燥的灵芝粉碎，过40目筛；
(2)用25倍重量的水，在85℃对粉碎后的灵芝进行搅拌提取，提取时间为1.5h，过滤得到滤液；重复提取2次，合并滤液；将滤液浓缩至原体积的10％，得到灵芝提取液。
(3)将一环活化好的纳豆芽孢杆菌菌种(湖南省微生物研究所菌种保藏室，BacillusnattoSawamura，菌株编号106001)加入到液体牛肉膏蛋白胨培养基中，培养基为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、自来水定容至1000mL，溶解均匀，121℃灭菌20min，冷却至室温后接种。在温度37℃条件下培养1天，得到活菌量为5×109cfu/mL纳豆芽孢杆菌种子液。
(4)向灵芝提取液中加入果糖和NH4Cl，果糖加入量为灵芝提取液质量的6％，NH4Cl加入量为灵芝提取液质量的9％，然后混匀，之后121℃灭菌20min，冷却至室温后，在无菌条件下加入纳豆芽孢杆菌种子液，加入量为灵芝提取液体积的8％，在150r/min摇床上于32℃发酵15h，得到发酵产物。
(5)将发酵产物取出，倒入离心管中，4000r/min离心10min，弃下层沉淀，得到灵芝发酵液；所述灵芝发酵液置于65℃水浴锅中杀菌30min，冷却后，4℃冰箱保存。
实施例4
本实施例旨在对实施例1制得的灵芝发酵液进行保湿效果评价
保湿效果评价方法：在玻璃板(50×100mm)贴上3M胶带，取200mg样品均匀的涂抹在胶带表面，放进干燥器中，干燥器中湿度控制在60％左右。放进干燥器一定时间后称重(时间间隔为0、0.5h、1h、2h、4h)，计算保湿率，保湿率＝M2÷M1×100％，其中，M2为放置后水分重量，M1为放置前的水分重量。
按照上述方法分别对实施例1制得灵芝发酵液、阳性对照组(阳性对照组选用市售A护肤精华露，市售A护肤精华露含有酵母成分，具有润肤、保湿和抗老功效)和10％甘油的保湿率进行计算，结果如图1所示。图1是本发明实施例4提供的保湿率柱状图。通过图1可以看出，本发明制备得到的灵芝发酵液的保湿效果优于阳性对照组和10％甘油。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种灵芝发酵液的制备方法，包括以下步骤：
a)、灵芝提取液、果糖和NH4Cl按照质量比100：(3～6)：(6～9)混合后灭菌，得到灭菌混合液；
b)、在所述灭菌混合液中接种纳豆芽孢杆菌，进行发酵，得到灵芝发酵液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灵芝提取液按照以下方法制备得到：
首先将灵芝在75～85℃的水中浸渍1.5～2.5h，得到浸渍液；所述灵芝和水的质量比为1：(15～25)；
然后将所述浸渍液进行浓缩，得到灵芝提取液；所述浸渍液和灵芝提取液的体积比为(5～15)：1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳豆芽孢杆菌的接种方式为：
首先将纳豆芽孢杆菌在液体牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养，得到纳豆芽孢杆菌种子液；
然后将所述纳豆芽孢杆菌种子液添加到所述灭菌混合液中。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述纳豆芽孢杆菌种子液中的活菌量为5×109～6×1010cfu/mL。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述纳豆芽孢杆菌种子液在所述灭菌混合液中的添加量为所述灭菌混合液体积的3～8％。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述液体牛肉膏蛋白胨培养基中含有牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水；所述牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水的质量比为2～5：8～15：3～7：800～1200。
7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为28～33℃；所述发酵的时间为14～18h。
8.权利要求1～7任一项所述的制备方法制得的灵芝发酵液在皮肤保湿的应用。
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