CN105749271A - 一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用 - Google Patents

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邵华斌
罗青平
汪宏才
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张蓉蓉
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艾地云
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Abstract

本发明公开了一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用，其制备方法包括以下步骤：将新城疫病毒TS09?C株生产用毒种作适当稀释，接种发育良好的9～10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml；接种后密封针孔，继续孵育，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，将鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，吸取鸡胚液。收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入适宜的抗生素，留样后，结冻保存。将检验合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一容器内，按规定羽份，加一定比例的蔗糖脱脂牛奶作稳定剂，同时加入适宜的抗生素，定量分装，迅速进行冷冻真空干燥。本发明鸡胚免疫方法具有安全、无任何毒副反应、减少应激、免疫效果好和成本低等优点。

Description

一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用
技术领域
本发明属于鸡病防控技术领域，具体地说，涉及一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用。
背景技术
新城疫的防控以免疫预防为主。国内外己广泛推广和使用的有灭活苗、中等毒力活疫苗(Ⅰ系)及低毒力活疫苗(Ⅱ系、IV系等)。灭活疫苗免疫效果较好，但需要肌肉注射，费工费时，且影响鸡肉品质；中等毒力活疫苗对雏鸡有较强的毒副反应；低毒力活疫苗使用较方便，毒副作用小，但冷藏条件要求高，常因保存或使用不当而影响疫苗免疫效果；而且现有疫苗均不能用于鸡胚免疫。因此，研发一种可18日龄鸡胚免疫疫苗，使雏鸡提前获得特异性免疫力(即超前免疫)，成为当前防控鸡新城疫的研究热点。现有技术中，急需一种鸡胚接种疫苗的制备方法及应用。
发明内容
为了弥补现有技术中的空白，本发明提出了一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用，采用本发明的疫苗进行鸡胚免疫，具有安全、无任何毒副反应、减少应激、免疫效果好和成本低等优点。
其技术方案如下：
一种鸡胚接种疫苗的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：接种：将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种进行适当稀释，接种发育良好的9～10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；
步骤2：孵育和观察：鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却；
步骤3：收获：将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入抗生素，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；
步骤4：疫苗配制：将无菌检验、病毒含量测定合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一无菌容器内，按规定羽份，加入7％蔗糖、16％脱脂牛奶作稳定剂，同时加入抗生素充分摇匀，定量分装，每羽份病毒含量应不低于103.0EID50，分装后迅速进行冷冻真空干燥；
步骤5：疫苗检验：主要包括物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验和效力检验。
优选地，步骤1中将新城疫病毒TS09-C株稀释至10－3或10－4。
优选地，步骤3中抗生素的用量为1000u/ml。
优选地，步骤4中抗生素的用量为1000u/ml。
本发明同时还提供一种上述鸡胚接种疫苗在预防鸡新城疫中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
鸡胚接种方法相对于传统的疫苗接种方法(如滴鼻或点眼、注射、喷雾、饮水、拌料等)来说，具有安全、无任何毒副反应、减少应激、免疫效果好等优点，同时，在养禽业中经鸡胚接种疫苗与雏鸡孵出后接种疫苗相比，因为实现了疫苗接种的机械化和自动化(使用自动消毒、注射、封孔于一体的多头蛋内注射器，与孵化场的落盘同步进行)，免疫剂量仅为现有活疫苗的1/1000，所以不仅节省了疫苗免疫成本，而且减少了劳动力开支。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种鸡胚接种疫苗的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：接种。将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种稀释至10－3，接种发育良好的9日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；
步骤2：孵育和观察。鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却。
步骤3：收获。将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入适宜的抗生素(1000u/ml)，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；
步骤4：疫苗配制。将无菌检验、病毒含量测定合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一无菌容器内，按规定羽份，加入7％蔗糖、16％脱脂牛奶作稳定剂，同时加入适宜的抗生素(1000u/ml)，充分摇匀，定量分装，每羽份病毒含量应不低于103.0EID50，分装后迅速进行冷冻真空干燥。
步骤5：疫苗检验。主要包括物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验和效力检验。
实施例2
一种鸡胚接种疫苗的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：接种。将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种稀释至10－4，接种发育良好的10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；
步骤2：孵育和观察。鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却。
步骤3：收获。将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入适宜的抗生素(1000u/ml)，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；
步骤4：疫苗配制。将无菌检验、病毒含量测定合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一无菌容器内，按规定羽份，加入7％蔗糖、16％脱脂牛奶作稳定剂，同时加入适宜的抗生素(1000u/ml)，充分摇匀，定量分装，每羽份病毒含量应不低于103.0EID50，分装后迅速进行冷冻真空干燥。
步骤5：疫苗检验。主要包括物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验和效力检验。
实施例3
一种鸡胚接种疫苗的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：接种。将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种稀释至10－3，接种发育良好的10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；
步骤2：孵育和观察。鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却。
步骤3：收获。将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入适宜的抗生素(1000u/ml)，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；
步骤4：疫苗配制。将无菌检验、病毒含量测定合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一无菌容器内，按规定羽份，加入7％蔗糖、16％脱脂牛奶作稳定剂，同时加入适宜的抗生素(1000u/ml)，充分摇匀，定量分装，每羽份病毒含量应不低于103.0EID50，分装后迅速进行冷冻真空干燥。
步骤5：疫苗检验。主要包括物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验和效力检验。
实施例4
实施例1、2、3制备所得的鸡胚接种疫苗的用法与用量：按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释，稀释为每1羽份0.1ml(含103.0EID50)。鸡胚接种：选取发育良好的18日龄鸡胚，检卵后，标出气室边缘和胚胎位置，用碘酊消毒气室上方的蛋壳，在气室上方靠近胚胎侧的卵壳上钻一孔，用7号针头(针长3cm)经孔垂直刺入羊膜腔(避开胚胎)，注入0.1ml疫苗，熔蜡封孔；置于37℃继续孵育。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种鸡胚接种疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：接种：将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种进行适当稀释，接种发育良好的9～10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；
步骤2：孵育和观察：鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却；
步骤3：收获：将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入抗生素，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；
步骤4：疫苗配制：将无菌检验、病毒含量测定合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一无菌容器内，按规定羽份，加入7％蔗糖、16％脱脂牛奶作稳定剂，同时加入抗生素充分摇匀，定量分装，每羽份病毒含量应不低于103.0EID50，分装后迅速进行冷冻真空干燥；
步骤5：疫苗检验：主要包括物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验和效力检验。
2.根据权利要求1中所述的鸡胚接种疫苗的制备方法，其特征在于，步骤1中将新城疫病毒TS09-C株稀释至10－3或10－4。
3.根据权利要求1中所述的鸡胚接种疫苗的制备方法，其特征在于，步骤3中抗生素的用量为1000u/ml。
4.根据权利要求1中所述的鸡胚接种疫苗的制备方法，其特征在于，步骤4中抗生素的用量为1000u/ml。
5.一种权利要求1所述鸡胚接种疫苗在预防鸡新城疫中的应用。
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