CN110951698A - 禽流感病毒tj株、禽流感灭活疫苗及其制备方法 - Google Patents
禽流感病毒tj株、禽流感灭活疫苗及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110951698A CN110951698A CN201911358729.5A CN201911358729A CN110951698A CN 110951698 A CN110951698 A CN 110951698A CN 201911358729 A CN201911358729 A CN 201911358729A CN 110951698 A CN110951698 A CN 110951698A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- avian influenza
- virus
- vaccine
- influenza virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims abstract description 32
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 21
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 25
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims 8
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 22
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 abstract description 18
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 abstract description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 9
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 9
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 5
- 101150080862 NA gene Proteins 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 241001473386 H9N2 subtype Species 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 2
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 1,3,2,4$l^{2}-dioxathiaplumbetane 2,2-dioxide Chemical group [Pb+2].[O-]S([O-])(=O)=O KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000000998 shell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2760/16163—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了禽流感病毒TJ株、禽流感灭活疫苗及其制备方法。本发明从来自天津市郊某养殖场分离得到一株禽流感病毒TJ株，其微生物保藏编号是CGMCC NO.14323。本发明所提供的病毒分离株TJ株与现有的JY株和HZ株HA、NA氨基酸序列存在一定的差异，在HI抗体滴度上，本发明分离的禽流感病毒TJ株比现有的HZ株高出4个滴度，比现有的JY株与高出3个滴度。本发明进一步应用所述禽流感病毒TJ株制备得到禽流感灭活疫苗。灭活疫苗的效力检验结果为两组免疫组鸡HI抗体效价几何平均值分别为7.5log2和8.2log2，灭活疫苗的免疫保护效力评估试验结果表明灭活疫苗对禽流感病毒的攻击能够提供良好的保护。
Description
技术领域
本发明涉及禽流感病毒分离株，本发明进一步涉及禽流感病毒TJ株以及由其制备的禽流感灭活疫苗，属于禽流感病毒株及其应用领域。
背景技术
禽流感(Avian Influenza.AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)引起的能够诱发家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的一种传染病。禽流感病毒属于正黏病毒科A型流感病毒属。禽流感病毒具有众多血清型，因此不同的禽流感病毒毒株间存在很大的毒力差异，给临床防控和诊断带来很大的困难。H9N2疫苗技术成熟，能够有效抑制H9流感的爆发，但近年来中国亚型禽流感病毒传播速度快，能够感染多种不同宿主，不同毒株的血清学众多，不同毒株间毒力差异大，基因变异性强。并且H9N2亚型禽流感病毒的部分毒株能够突变为高致病性毒株，部分基因可以突变为哺乳动物受体，因此防治困难。
中国的H9部分地区的鸡场H9免疫失败，出现了非典型性H9N2禽流感的爆发。通过疫苗免疫接种防控低致病力的禽流感仍然是目前采用的主要手段。现有疫苗已经不能产生完全免疫保护。
发明内容
本发明的目的之一是提供一株禽流感病毒TJ株；
本发明的目的之二是提供由所述禽流感病毒TJ株制备的禽流感灭活疫苗；
本发明的目的之三是提供一种制备所述禽流感灭活疫苗的方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
本发明从来自天津市郊某养殖场，采集濒死鸡的肝脏及脾脏从中分离得到一株禽流感病毒TJ株。本发明所分离的禽病毒TJ株的红细胞凝集试验呈阳性；分离病毒能被禽流感H9亚型阳性血清所抑制；不能被EDS76阳性血清、新城疫阳性血清所抑制。病毒分离株TJ株与JY株和HZ株HA、NA基因氨基酸序列对比结果发现，与现有的JY株和HZ株HA、NA氨基酸序列存在一定的差异。在HI抗体滴度上，本发明分离的禽流感病毒TJ株比现有的HZ株高4个滴度，比现有的JY株与高3个滴度。
本发明将分离的禽流感病毒TJ株已于2017年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.14323，分类命名：禽流感病毒H9亚型。
本发明进一步提供了一种应用所分离的禽流感病毒TJ株制备禽流感灭活疫苗的方法，包括：
(1)将权利要求1所述的禽流感病毒TJ株进行病毒增殖；(2)将增殖后的病毒灭活；(3)将疫苗佐剂混合在一起加热溶解得到油相；(4)向灭活后的病毒液中加入吐温-80使吐温-80溶解得到水相；(5)将水相与油相混合搅拌、乳化，即得。
作为本发明一种优选的实施方式，步骤(3)中将白油，司本-80和硬脂酸铝按照94:6:1.5的质量比例混合在一起加热溶解得到油相；进一步优选的，将熔解后的混合物在115℃灭菌40分钟，冷至室温备用。
作为本发明一种优选的实施方式，步骤(4)中每96ml病毒液加入4ml吐温-80。
作为本发明一种优选的实施方式，步骤(5)中将水相与油相按照1:2的体积比例进行混合搅拌；其中，将油相分别注入预混罐中，低温搅拌的同时，分别缓慢加入水相，再注入乳化罐乳化5分钟。
本发明用血清学方法进行灭活疫苗的效力检验，两组免疫组鸡HI抗体效价的几何平均值分别为7.5log2和8.2log2。
本发明用免疫攻毒法进行灭活疫苗的免疫保护效力评估，试验结果表明本发明制备的灭活疫苗对禽流感病毒的攻击能够提供良好的保护。
附图说明
图1禽流感病毒TJ株与JY株和HZ株HA、NA基因氨基酸序列比对结果。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1禽流感病毒TJ株的分离和鉴定
1病毒株的分离 病料来自天津市郊某养殖场，采集濒死鸡的肝脏及脾脏，无菌条件下剪碎，离心，取上清接种鸡胚，收集72h-120h鸡胚尿囊液。至-20℃保存备用。
2病毒分离株的初步鉴定 分离病毒的红细胞凝集试验呈阳性；分离病毒能被禽流感H9亚型阳性血清所抑制；不能被EDS76阳性血清、新城疫阳性血清所抑制。
本发明的病毒分离株TJ株与JY株和HZ株HA、NA基因氨基酸序列比对结果见图1(ref是NCBI网上参考序列)。
本发明将所分离的病毒分离株TJ株提交到专利认可的保藏机构进行保藏，其微生物保藏编号是CGMCC NO.14323。
实施例2禽流感灭活疫苗的制备及检验
1病毒原液的制备
1.1接种 取生产用种毒，用灭菌生理盐水稀释103～104倍，尿囊腔内接种10～11日龄易感鸡胚，每胚0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋。
1.2孵育与观察 鸡胚接种后，将48小时前死亡的鸡胚弃去不用。此后，每6小时照蛋1次，死亡的鸡胚随时取出，直至96小时，取出所有胚，置2～8℃冷却4～24小时。
1.3收获 将冷却的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后无菌方法剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，挑破绒毛尿囊膜及羊膜(勿使卵黄破裂)，吸取胚液。在吸取胚液前对每枚鸡胚进行检查，凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何可疑污染者，弃去不用；死胚和活胚分别收获，每若干个鸡胚分为一组，吸取的胚液放于同一灭菌的容器内，每组抽样测定每个容器中病毒的红细胞凝集价，低于1:128者弃去。同时按现行《中国兽药典》附录进行无菌检验，应无菌生长。留样测定EID50。收获的胚液灭活前在2～8℃保存，应不超过5日。
2灭活
2.1将病毒浓缩液注入灭活灌，开启灭活罐的搅拌器，加入称量准确的10％甲醛溶液，充分混匀。使甲醛溶液终浓度不超过0.1％。
2.2将灭活罐升温至37℃(以罐内温度达到37℃开始计时)，维持灭活时间均为16小时，期间不停缓慢搅拌。
2.3灭活结束后，加入终止灭活剂(A液+B液)作用24小时，终止灭活反应。各取样10ml，分别进行灭活检验和无菌检验。灭活后的病毒液置2～8℃保存，应不超过15日。
3.油乳剂灭活疫苗的制备
3.1水相制备 取检验合格的TJ株病毒液，分别按每96ml病毒液加入4ml吐温-80，各自于灭菌容器内充分振摇使吐温-80完全溶解为止。
3.2油相制备 按注射用白油94份，司本-80 6份，硬脂酸铝1.5份的比例配制油相，混合加热完全熔解后，在115℃灭菌40分钟，冷至室温备用。
3.3乳化 按水相和油相1:2的体积比例，将油相分别注入预混罐中，低温搅拌的同时，分别缓慢加入水相，再注入乳化罐乳化5分钟。即成为禽流感TJ株灭活疫苗，共制备2组灭活疫苗。
4.分装定量分装：加盖密封，2～8℃保存。
5.成品检验
5.1性状
5.1.1外观 为乳白色乳剂，久置后上层有少量油质，摇匀后呈均匀乳状液。
5.1.2剂型 呈油包水(W/O)型。
5.1.3稳定性 吸取疫苗10ml加入离心管中，以3000r/min离心15分钟，管底析出水相应不多于0.5ml。
5.1.4黏度 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应符合规定。
5.2装量检查 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应符合规定。
5.3无菌检验 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长。
5.4支原体检验 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无支原体生长。
5.5安全性检验 用21～28日龄SPF鸡10只，每只颈部皮下注射疫苗1.0ml，观察14日。应不出现因注射疫苗引起的任何局部或全身反应
试验例1灭活疫苗的效力检验试验
1检验方法
1.1血清学方法
用鸡检验：用21日龄SPF鸡30只，第1组15只，10只各颈部皮下注射疫苗0.5ml，另5只作对照。第2组15只，10只各颈部皮下注射疫苗0.5ml，另5只作对照。接种后21日，每只鸡分别采血，分离血清，进行HI抗体效价测定。免疫鸡HI抗体效价的几何平均值应不低于1:90，对照鸡HI抗体效价均应不高于1:4。
1.2疫苗的免疫持续期试验 将免疫后鸡只每个月进行抗体测定，记录疫苗的免疫持续期。
1.3疫苗的保存期试验 将制备的疫苗放入4℃冰箱中保存，第6个月、12个月、15个月、18个月、21个月分别取出进行效力检验。
2检验结果
2.1外观 第1组和第2组均为乳白色乳剂。
2.2剂型 第1组和第2组均呈油包水(W/O)型。
2.3稳定性 第1组吸取疫苗10ml加入离心管中，以3000r/min离心15分钟，管底析出水相0.1ml。第2组吸取疫苗10ml加入离心管中，以3000r/min离心15分钟，管底析出水相0.15ml。7.4黏度按现行《中国兽药典》附录进行检验，第1组为27.3cP，符合规定。第2组为27.5cP，符合规定。
2.4无菌检验 按现行《中国兽药典》附录进行检验，第1组10/10无菌生长。第2组10/10无菌生长。
2.5安全性检验
第1组，用21～28日龄SPF鸡10只，每只颈部皮下注射疫苗1.0ml，观察14日。没有出现因注射疫苗引起的任何局部或全身反应。
第2组，用21～28日龄SPF鸡10只，每只颈部皮下注射疫苗1.0ml，观察14日。没有出现因注射疫苗引起的任何局部或全身反应。
2.6疫苗的效力检验
2.6.1血清学检验
第1组，免疫组10只鸡HI抗体效价的几何平均值为7.5log2，对照组5只鸡的HI抗体效价均为0。
第2组，免疫组10只鸡HI抗体效价的几何平均值为8.2log2，对照组5只鸡的HI抗体效价均为0。
表1灭活疫苗的血清学检验结果
| <u>组别编号</u> | <u>1</u> | <u>2</u> | <u>3</u> | <u>4</u> | <u>5</u> | <u>6</u> | <u>7</u> | <u>8</u> | <u>9</u> | <u>10</u> | <u>平均值</u> |
| <u>第1组</u> | <u>7</u> | <u>7</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>7</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>7</u> | <u>8</u> | <u>7</u> | <u>7.5</u> |
| <u>第2组</u> | <u>8</u> | <u>9</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>9</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>8</u> | <u>8.2</u> |
2.6.2免疫持续期测定
表2灭活疫苗的免疫持续期测定结果
2.6.3保存期试验
表3灭活疫苗的保存期试验结果
试验结果：本发明所制备的灭活疫苗加入终止灭活剂后，可提高抗体效价，延长疫苗的保存期，将原有疫苗的保存期12个月可延长至18个月。
Claims (10)
1.一株禽流感病毒TJ株，其特征在于，其微生物保藏编号是CGMCC NO.14323。
2.权利要求1所述的禽流感病毒TJ株在制备禽流感疫苗中的用途。
3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的疫苗为灭活疫苗。
4.一种预防禽流感的疫苗组合物，其特征在于，含有预防上有效量的权利要求1所述的禽流感病毒TJ株。
5.一种制备禽流感灭活疫苗的方法，其特征在于，包括：
(1)将权利要求1所述的禽流感病毒TJ株进行病毒增殖；(2)将增殖后的病毒灭活；(3)将疫苗佐剂混合在一起加热溶解后得到油相；(4)向灭活后的病毒液中加入吐温-80使吐温-80溶解得到水相；(5)将水相与油相混合搅拌、乳化，即得。
6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述将注射用白油，司本-80和硬脂酸铝按照94:6:1.5的质量比例混合在一起加热溶解得到油相。
7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于，将熔解后的混合物在115℃灭菌40分钟，冷至室温备用。
8.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)中每96ml病毒液加入4ml吐温-80。
9.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(5)中将水相与油相按照1:2的体积比例进行混合搅拌。
10.按照权利要求5所述的方法，其特征在于，将油相分别注入预混罐中，低温搅拌的同时，分别缓慢加入水相，再注入乳化罐乳化5分钟。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911358729.5A CN110951698A (zh) | 2019-12-25 | 2019-12-25 | 禽流感病毒tj株、禽流感灭活疫苗及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911358729.5A CN110951698A (zh) | 2019-12-25 | 2019-12-25 | 禽流感病毒tj株、禽流感灭活疫苗及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110951698A true CN110951698A (zh) | 2020-04-03 |
Family
ID=69984040
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911358729.5A Pending CN110951698A (zh) | 2019-12-25 | 2019-12-25 | 禽流感病毒tj株、禽流感灭活疫苗及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110951698A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113736749A (zh) * | 2021-08-25 | 2021-12-03 | 福建圣维生物科技有限公司 | 一株禽流感病毒毒株及其应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130033043A (ko) * | 2011-09-26 | 2013-04-03 | 건국대학교 산학협력단 | Ｈ9 조류 인플루엔자 바이러스 유사입자 백신 및 그 응용 |
| CN103396999A (zh) * | 2013-06-18 | 2013-11-20 | 北京中联康生物科技有限公司 | H9n2亚型病毒、h9n2亚型病疫苗及其制备方法 |
| CN103736088A (zh) * | 2013-11-08 | 2014-04-23 | 广东大华农动物保健品股份有限公司 | 一种禽流感h9亚型灭活疫苗及其制备方法和应用 |
| CN104928259A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-23 | 杨凌绿方生物工程有限公司 | 一种h9亚型禽流感病毒、灭活疫苗及其制备方法 |
| CN106075424A (zh) * | 2016-06-05 | 2016-11-09 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种禽流感病毒疫苗 |
| CN106466478A (zh) * | 2015-08-17 | 2017-03-01 | 洛阳惠中兽药有限公司 | 一种免疫组合物、含有该组合物疫苗及其应用 |
-
2019
- 2019-12-25 CN CN201911358729.5A patent/CN110951698A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130033043A (ko) * | 2011-09-26 | 2013-04-03 | 건국대학교 산학협력단 | Ｈ9 조류 인플루엔자 바이러스 유사입자 백신 및 그 응용 |
| CN103396999A (zh) * | 2013-06-18 | 2013-11-20 | 北京中联康生物科技有限公司 | H9n2亚型病毒、h9n2亚型病疫苗及其制备方法 |
| CN103736088A (zh) * | 2013-11-08 | 2014-04-23 | 广东大华农动物保健品股份有限公司 | 一种禽流感h9亚型灭活疫苗及其制备方法和应用 |
| CN104928259A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-23 | 杨凌绿方生物工程有限公司 | 一种h9亚型禽流感病毒、灭活疫苗及其制备方法 |
| CN106466478A (zh) * | 2015-08-17 | 2017-03-01 | 洛阳惠中兽药有限公司 | 一种免疫组合物、含有该组合物疫苗及其应用 |
| CN106075424A (zh) * | 2016-06-05 | 2016-11-09 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种禽流感病毒疫苗 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李梅等: "禽流感(H9)疫苗免疫间隔期探讨" * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113736749A (zh) * | 2021-08-25 | 2021-12-03 | 福建圣维生物科技有限公司 | 一株禽流感病毒毒株及其应用 |
| CN113736749B (zh) * | 2021-08-25 | 2023-07-28 | 福建圣维生物科技有限公司 | 一株禽流感病毒毒株及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104922663B (zh) | 一种鸡新城疫和h9亚型禽流感二联疫苗 | |
| CN111000993B (zh) | 一种鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN103820397B (zh) | 一种番鸭细小病毒及其应用 | |
| CN104946600B (zh) | 一种h9亚型禽流感病毒株 | |
| CN103833848B (zh) | 一种用于预防治疗番鸭细小病毒病的卵黄抗体 | |
| CN102068695B (zh) | 鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(h9亚型)、传染性法氏囊病四联灭活疫苗的生产方法 | |
| CN105582533B (zh) | 一种禽流感病毒、禽腺病毒二联灭活疫苗 | |
| CN105031638A (zh) | 一种鸡新城疫、禽流感和传染性法氏囊三联灭活疫苗 | |
| CN109097340B (zh) | 一种禽腺病毒、一种四联疫苗及其制备方法 | |
| CN102038949A (zh) | 鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感（h9亚型）四联灭活疫苗的生产方法 | |
| CN108465107B (zh) | 一种鸭2型腺病毒和番鸭细小病毒病二联灭活疫苗 | |
| CN105920596B (zh) | 一种番鸭细小病毒病、小鹅瘟二联疫苗 | |
| CN110951698A (zh) | 禽流感病毒tj株、禽流感灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN105802918B (zh) | 鸡肾型传染性支气管炎病毒毒株及其疫苗组合物、制备方法和应用 | |
| CN109055320B (zh) | 一株传染性支气管炎病毒分离株及在疫苗制备中的应用 | |
| CN107320721B (zh) | 一种疫苗组合物及其制备方法 | |
| CN103396999B (zh) | H9n2亚型病毒、h9n2亚型病疫苗及其制备方法 | |
| CN113755454B (zh) | 一种8a型禽腺病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法和应用 | |
| CN104195114A (zh) | 一种禽肺病毒及其应用 | |
| EP0009277B1 (en) | Combined vaccine active against newcastle disease and egg production drop caused by adeno-like viruses, process for preparing it, adeno-like and newcastle disease virus strains | |
| CN102688487A (zh) | 鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、病毒性关节炎四联灭活疫苗的生产方法 | |
| CN103497933B (zh) | 一株h9n2型禽流感毒株在疫苗开发上的应用 | |
| CN113376387A (zh) | 一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品及其制备方法 | |
| CN106075426B (zh) | 一种小鹅瘟病毒疫苗 | |
| CN106075424B (zh) | 一种禽流感病毒疫苗 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200403 |