CN105748496B - 大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物及其制备方法和应用，该提取物包含以下质量百分比的成分：环烯醚萜单苷油甙甲酯2.25mg/g、环烯醚萜单苷油甙对羟基乙酯2.93mg/g、环烯醚萜双苷油甙葡萄糖酯377.28mg/g、羟基环烯醚萜单苷油甙甲酯11.24mg/g、环烯醚萜三葡萄糖苷330.96mg/g、环烯醚萜双葡萄糖苷27.37mg/g、对羟基乙基葡萄糖苷26.06mg/g。本发明所得的EtOH‑Water提物可以用来制备预防和治疗肝损伤药物，填补了此方面的研究空白。

Description

大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物及其制备方法和 应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物及其制备方法和应用。

背景技术

大叶白蜡树(Fraxinus rhynchophylla Hance)又称作大叶梣、花曲柳、苦枥白蜡树，是木樨科白蜡树属，落叶大乔木，树皮灰褐色或暗灰色，《中国药典》收录为秦皮。它是护堤、固沙及城市绿化的良好树种，主要分布于东北和黄河流域各省，此外苏联、朝鲜也有分布。其根皮，秦皮作为常用中药，具有清热燥湿、明目、收涩的功效，传统上用于泄泻、热痢、目赤肿痛、赤白带下、目生翳膜。现代药理学研究表明秦皮具有抗肿瘤、抗糖尿病、保肝等活性。

大叶白蜡树种子，据《药物之园》载：“大叶白蜡树籽是一种树的种子，叶与巴旦杏叶相似，翅果众多，长约3指，形状为倒被针形，与麻雀舌头相似，故称之为‘力萨努里’即为汉语中的麻雀舌头之意，翅果内有种子，种子棕黑色，仁白黄色，味辛，平喘止咳、祛寒止痛、利尿排石等。治哮喘，旧咳，腹痛，子宫疼痛，尿少结石等。”《注医典》记载：“安心除悸，增强性欲等。”《拜地依药书》记载：“填精壮腰，溶石排石，治腰部酸痛，内脏结石等。”中药材基源取其干燥种子，药效为生干生热，填精壮阳，补肾固精，补神安心，止咳平喘，利尿消石，祛寒助孕；主治湿寒性或黏液质性疾病，如腰痛阳痿，造精早泄，神衰心悸，久咳气喘，尿闭结石，宫寒不孕。

近年来对大叶白蜡树化学成分和药理作用研究较多的是其树皮部分，而对大叶白蜡树种子的化学成分及药理活性方面尚未报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物及其制备方法和应用，所得EtOH-Water提物可以用来制备预防和治疗肝损伤药物，填补了此方面的研究空白。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物，包含以下质量百分比的成分：

环烯醚萜单苷油甙甲酯2.25mg/g、环烯醚萜单苷油甙对羟基乙酯2.93mg/g、环烯醚萜双苷油甙葡萄糖酯377.28mg/g、羟基环烯醚萜单苷油甙甲酯11.24mg/g、环烯醚萜三葡萄糖苷330.96mg/g、环烯醚萜双葡萄糖苷27.37mg/g、对羟基乙基葡萄糖苷26.06mg/g。

其中，环烯醚萜苷类化合物含量为1-766.85mg/g。

为解决上述问题，本发明还提供了大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物的制备方法，包括如下步骤：

S1、取大叶白蜡树种子5kg，粉碎，过40目筛，得种子粉剂；

S2、将所得的种子粉剂先用无水乙醇渗漉提取两次，每次24h，过滤，将两次乙醇提取液合并得到大叶白蜡树种子-EtOH提取液；滤渣再用水提取两次，每次24h，合并后得到大叶白蜡树种子-Water提取液；

S3、将上述两种提取液合并，浓缩，即得到大叶白蜡树种子EtOH-Water提取物。

本发明以四氯化碳所致急性肝损伤小鼠为模型，对大叶白蜡树种子化学成分标准化的EtOH-Water提取物进行肝保护评价。结果显示，大叶白蜡树种子化学成分标准化的EtOH-Water提取物能够显著抑制四氯化碳所致小鼠急性肝损伤。因此，本发明中的大叶白蜡树种子化学成分标准化的EtOH-Water提物可用于预防和治疗肝损伤药物的开发和应用。

本发明具有以下有益效果：

对大叶白蜡树种子EtOH-Water提取物的主要化学成分进行了标准化，此标准化EtOH-Water提取物能够有效预防和治疗肝损伤。

附图说明

图1为本发明实施例中6个环烯醚萜类化合物结构图；

图2为本发明实施例中EtOH-Water提取物的HPLC谱图；

图3为本发明实施例中EtOH-Water提取物的保肝活性示意图。

图中，小鼠控制组(A)，四氯化碳诱导的小鼠组(B)，水飞蓟素预处理的CCl₄诱导小鼠(C)，2.0g/kg大叶白蜡种子EtOH-Water提取物预处理的CCl₄诱导小鼠(D)4.0g/kg大叶白蜡种子EtOH-Water提取物预处理的CCl₄诱导小鼠(E)。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

如图1所示，本发明实施例提供了一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的EtOH-Water提物，包含以下质量百分比的成分：

环烯醚萜单苷油甙甲酯(1)2.25mg/g、环烯醚萜单苷油甙对羟基乙酯(2)2.93mg/g、环烯醚萜双苷油甙葡萄糖酯(3)377.28mg/g、羟基环烯醚萜单苷油甙甲酯(4)11.24mg/g、环烯醚萜三葡萄糖苷(5)330.96mg/g、环烯醚萜双葡萄糖苷(6)27.37mg/g、对羟基乙基葡萄糖苷(7)26.06mg/g。

本发明实施例中，所使用的大叶白蜡树种子采自陕西宝鸡，甲醇(色谱纯)；使用的水为纯净水；

供试样品溶液的制备

取大叶白蜡树种子5kg，粉碎，过40目筛后得种子粉剂；将大叶白蜡树种子粉剂先用无水乙醇渗漉提取两次，每次24h，过滤，将两次乙醇提取液合并得到大叶白蜡树种子-EtOH提取液；滤渣再用水提取两次，每次24h，合并后得到大叶白蜡树种子-Water提取液；将上述两种提取液合并，取1mL上清液经0.45μm微孔滤膜过滤后备用。

分别精密称取环烯醚萜单苷油甙甲酯(1)、环烯醚萜单苷油甙对羟基乙酯(2)、环烯醚萜双苷油甙葡萄糖酯(3)、羟基环烯醚萜单苷油甙甲酯(4)、环烯醚萜三葡萄糖苷(5)、环烯醚萜双葡萄糖苷(6)、对羟基乙基葡萄糖苷(7)对照品适量，分别用甲醇配置成不同质量浓度，见表1，分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，按柱温：30℃；柱压：19.11MPa；流速：1mL/min；波长：230nm；进样量：10μL；色谱柱：Synergi 4u Hydro-RP 80R；柱长：250×4.6mm4μm；流动相A：1％磷酸水溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱程序为：0min：A为95％，B为5％，2min：A为95％，B为5％，5min：A为80％，B为20％，25min：A为75％，B为25％，27min：A为95％，B为5％，30min：A为95％，B为5％的色谱条件测定峰面积，以对照品质量浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，标准曲线、相关系数和线性范围见表2，7个成分均呈良好线性关系(R²＞0.99)。

表1 7个对照品溶液浓度mg/ml

表2 7个成分线性关系考察

以化合物3为例。采用加样回收法(1∶1加入)，精密量取已知含量的6份75％甲醇提取液，精密加入适量对照品，按柱温：30℃；柱压：19.11MPa；流速：1mL/min；波长：240nm；进样量：10μL；色谱柱：Synergi 4u Hydro-RP 80R；柱长：250×4.6mm 4μm；流动相A：1％磷酸水溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱程序为：0min：A为95％，B为5％，2min：A为95％，B为5％，5min：A为80％，B为20％，25min：A为75％，B为25％，27min：A为95％，B为5％，30min：A为95％，B为5％的色谱条件测定，分别计算回收率，结果表明平均回收率为为95.67％，RSD为0.16％。

表3 回收率试验结果

取同一化合物3对照品溶液，连续测定6次，结果表明仪器有良好的精密度。

表4 精密度试验结果

取同一批号的样品5份，分别精密称重，照拟定的方法试验，结果证明此方法重现性良好。

表5 重现性试验结果

表6 样品含量测定结果

通过以下公式计算提取率，并分别进样20μL，以特定色谱条件进行HPLC分析，所得结果如图2所示。

提取率＝提取液中的固体含量/样品量

以四氯化碳所致急性肝损伤小鼠模型，对大叶白蜡树种子化学成分标准化的EtOH-Water提取物进行肝保护评价。结果如图3所示，大叶白蜡树种子化学成分标准化的EtOH-Water提取物能够显著抑制四氯化碳所致小鼠急性肝损伤。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物，其特征在于，该提取物包含以下质量百分比的成分：

环烯醚萜单苷油甙甲酯2.25mg/g、环烯醚萜单苷油甙对羟基乙酯2.93mg/g、环烯醚萜双苷油甙葡萄糖酯377.28mg/g、羟基环烯醚萜单苷油甙甲酯11.24mg/g、环烯醚萜三葡萄糖苷330.96mg/g、环烯醚萜双葡萄糖苷27.37mg/g、对羟基乙基葡萄糖苷26.06mg/g。

2.一种大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取大叶白蜡树种子5kg，粉碎，过40目筛，得种子粉剂；

S2、将所得的种子粉剂先用无水乙醇渗漉提取两次，每次24h，过滤，将两次乙醇提取液合并得到大叶白蜡树种子-EtOH提取液；滤渣再用水提取两次，每次24h，合并后得到大叶白蜡树种子-Water提取液；

S3、将上述两种提取液合并，浓缩，即得到大叶白蜡树种子EtOH-Water提取物。

3.如权利要求1所述的大叶白蜡树种子化学成分标准化的提取物的应用，其特征在于，用于制备和开发保肝药物。