CN105688206A - 蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途，属于畜禽免疫佐剂领域。所述蝉花虫草多糖由蝉花子实体或培养基采用热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制得。本发明工艺简单，通过免疫试验证明，蝉花虫草多糖免疫增强剂能显著增强鸡机体的免疫功能；配合新城疫疫苗免疫雏鸡，能显著提高疫苗的免疫应答，而且免疫作用的时间持续较长，该制剂无药物残留、毒副作用等问题，是一种绿色、高效及稳定的鸡免疫增强剂。

Description

蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途
技术领域
本发明涉及蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途，属于畜禽免疫佐剂领域。
背景技术
传染病特别是病毒性传染病，在全世界范围内对畜牧业造成严重损失，接种疫苗是目前控制传染病最有效的手段。然而,养殖场虽然按免疫程序进行了严格的疫苗接种，但在很多情况下，动物免疫之后仍然难以产生有效的免疫应答，致使传染病不能完全被控制。若注射疫苗的同时，配合应用适当的免疫增强剂可以辅助疫苗产生较好的免疫应答，提高其免疫效力，从而提高疫苗免疫的效果。应用免疫增强剂成为目前提高疫苗免疫效果的重要手段之一。现有研究表明，中药及其有效成分能够显著提高疫苗的免疫效果，很多中药及其主要成分作为疫苗的免疫增强剂已开始在动物及人的临床上使用。
近年来，很多研究者从植物和真菌中提取了多糖，通过研究发现多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗衰老等一系列生物学活性。据报道，多糖最主要的活性是其免疫调节活性，其对机体的特异性和非特异性免疫功能均具有增强作用，主要体现在能够促进特异性抗体生成、促进淋巴细胞增殖、提高巨噬细胞系统的吞嚼能力、诱导细胞因子的分泌、激活补体系统等方式提高机体的免疫功能。
蝉花(Paecilomycescicadae(Miq.)Samson)是我国传统的名贵中药材之一，又名金蝉花、蝉花虫草，由麦角菌科虫草属真菌蝉拟青霉寄生于蝉类若虫的干燥复合体。现有研究结果表明，蝉花与多种虫草中的主要成分氨基酸种类相似，具有不同程度的补益作用[2]。蝉花含有多种营养物质，提取的多糖称之为蝉拟青霉多糖、蝉花虫草多糖。有研究表明，蝉拟青霉多糖对老年大鼠免疫功能有调节作用、对大鼠免疫功能和血液生化功能等具有一定的作用。
发明内容
本发明从人工培养蝉花虫草中提取多糖，通过给鸡灌服不同浓度的蝉花虫草多糖，以鸡新城疫弱毒苗、灭活苗刺激，观察不同处理对疫苗免疫后鸡新城疫抗体变化水平的影响，发现蝉花虫草多糖可增强雏仔鸡机体的免疫功能，而且免疫作用的时间持续较长。
本发明的第一个目的在于提供蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途，其特征在于：所述蝉花虫草多糖免疫增强剂由蝉花虫草热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制成，具体步骤如下：(1)将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50％乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液；(2)70℃减压浓缩至原体积的十分之一，得浓缩液；(3)将浓缩液在搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖；(4)经孔径为50纳米与200纳米的陶瓷膜分离得到多糖分子分子量为30-100w之间的粗多糖溶液，对粗多糖用sevage法除蛋白、脱色、过阴离子交换柱后减压浓缩得到的浓缩液；(5)将浓缩液进一步过sephadrose6b凝胶树脂纯化，得到分子量大小在75W左右的目的多糖，经真空干燥、灭菌、获得蝉花虫草多糖。
进一步地，步骤(1)中蝉花虫草可以是天然蝉花或人工栽培的蝉花虫草子实体、蝉花虫草菌丝体或蝉花虫草培养基。
市售的免疫增强剂制备过程复杂，作用效果不确切，免疫作用时间不长。本发明蝉花虫草多糖能有效地促进雏鸡生长性能及免疫机能的提高，增强了雏仔鸡机体的免疫功能，而且免疫作用的时间持续较长，蝉花虫草多糖组成的免疫增强剂是一种安全有效的绿色环保型免疫增强剂。
本发明针对当前动物疫病防控现有技术中急需高效、安全的免疫增强剂或疫苗佐剂的问题，提供一种由蝉花提取得到的多糖制成的新型中药免疫增强剂。
本发明的蝉花虫草多糖免疫增强剂不同剂量对鸡新城疫苗免疫效果的免疫增强作用，证明合适的剂量能显著提高免疫雏鸡的血清抗体效价，增强鸡的细胞免疫和体液免疫，提高新城疫苗的免疫应答；100mg/kg·BW为雏鸡的最佳剂量。
另一方面，本发明提供一种鸡免疫制剂，其特征在于，所述鸡免疫制剂包括蝉花虫草多糖和至少一种鸡的疫苗试剂，所述蝉花虫草多糖免疫增强剂由蝉花虫草热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制成，具体步骤如下：(1)将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50％乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液；(2)70℃减压浓缩至原体积的十分之一，得浓缩液；(3)将浓缩液在搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖；(4)经孔径为50纳米与200纳米的陶瓷膜分离得到多糖分子分子量为30-100w之间的粗多糖溶液，对粗多糖用sevage法除蛋白、脱色、过阴离子交换柱后减压浓缩得到的浓缩液；(5)将浓缩液进一步过sephadrose6b凝胶树脂纯化，得到分子量大小在75W左右的目的多糖，经真空干燥、灭菌、获得蝉花虫草多糖。
与现有技术相比，本发明优点如下：
1.与化学佐剂相比，蝉花虫草多糖增强剂来源于天然中药，成分安全，无毒副作用，无药物残留隐患，可保障动物源食品安全且生产、制备过程对环境无污染，是一种绿色高效的免疫增强剂。
2.与传统中药方剂相比，蝉花虫草多糖增强剂成分明确，质量可控，药效可靠。
3.与同类中药成分方剂相比，蝉花虫草多糖增强剂功效提高，单用或配合新城疫疫苗免疫雏鸡，能显著增强细胞免疫和体液免疫，提高疫苗的免疫应答，可在兽医临床上推广应用。
附图说明
图1：14日龄雏鸡ND-HI抗体水平示意图。
图2:脾脏组织形态学染色(100X)。
图3：法氏囊组织形态学染色(100X)。
具体实施方式
实施例1.蝉花虫草多糖单一组分的分离纯化
1.1蝉花虫草多糖的提取制备
将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50％乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液。70℃减压浓缩至原体积的十分之一；上述浓缩液搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖产品。
1.2蝉花虫草多糖的分离纯化
蝉花虫草多糖提取制备过程中最后一步用3倍体积的乙醇洗涤得到的多糖沉淀用适量去离子水稀释溶解至一定体积，将稀释溶解蝉花虫草多糖的溶液加到陶瓷膜分离机中，先利用截留能力为200纳米的陶瓷膜，将我们先前加入到陶瓷膜分离机中的蝉花虫草多糖溶液分离成两部分，即200纳米陶瓷膜的截流液A(多糖分子直径大小大于200纳米)与透过液B(多糖分子直径大小小于200纳米)，再将200纳米陶瓷膜的透过液加入陶瓷膜分离器中，利用截留能力为50纳米的陶瓷膜，将我们加入到陶瓷膜分离机中的蝉花虫草多糖溶液分离成两部分，即50纳米陶瓷膜的截流液C(多糖分子直径大小大于50纳米)和透过液D(多糖分子直径大小小于50纳米)，最终通过两次过膜，我们将原本的蝉花虫草多糖溶液按多糖分子直径大小分成了三部分，分别是：多糖分子直径大小大于200纳米的溶液A、多糖分子直径大小在50纳米与200纳米之间的溶液C和多糖直径大小小于50纳米的溶液D。将溶液C用sevage法除蛋白、脱色后减压浓缩，进一步过sephadrose6b凝胶柱纯化，得到分子量大小在75W左右的目的多糖，真空干燥、灭菌、获得制剂。
实施例2.蝉花虫草多糖对鸡免疫的影响
2.1材料与方法
2.1.1试验动物
雏鸡由温州科技职业学院家禽繁殖孵化室，采用平地放养，自由采食和饮水，按时清粪。保持各组饲养环境条件一致，定期消毒，保持舍内卫生，按照常规饲养管理。
2.1.2药物及诊断试剂
蝉花虫草多糖提取物、黄芪多糖(广东天宝生物制药有限公司生产)、新城疫标准阳性血清、阴性血清及新城疫病毒血凝抑制抗原(中国兽药药品监制20140301)、新城疫Ⅳ系活疫苗(Lasota株)(病毒疫苗)、新城疫油乳剂灭活疫苗(浙江诺蓓威生物制品有限公司生产，编号分别为2014007和2014003)(病毒疫苗)，流感，鸡瘟，禽流感病毒。
2.2试验设计及方法
2.2.1蝉花虫草多糖对鸡新城疫母源抗体水平的影响试验
0日龄健康雏鸡300只，饲养观察7天后，抽样检测新城疫抗体水平(平均值为5.8)后随机分为5组，分别为对照组Ⅰ、分子量为75w的蝉花虫草多糖实验组(以下简称蝉花组，分别设低Ⅱ、中III、高Ⅳ三个剂量组，具体给药剂量见表1)、黄芪Ⅴ组。每组20只，三个重复，各组平均体重不超过±10克。7-14日龄灌服一定浓度的多糖或生理盐水0.5毫升。14日龄时采血分离血清，通过血凝抑制试验来测定鸡新城疫抗体效价，判定结果以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为鸡新城疫抗体效价[6]，微量HI试验方法:依据GB/T16550-2008进行。
表1：实验分组情况
注：试验2.2.2分组安排同上
2.2.2蝉花虫草多糖对新城疫弱毒苗免疫效果的影响试验
在试验2.2.1的基础上，14日龄后照样维持组别不变，试验Ⅱ、III、Ⅳ组14-28日龄继续灌服蝉花虫草多糖、第Ⅴ组灌服黄芪多糖(药物浓度同上)，14、28日龄采用新城疫Ⅳ系弱毒疫苗滴鼻点眼免疫，免疫对照组用等量生理盐水灌服、滴鼻点眼。在14、21、28、35、42、49、56日龄翅静脉采血，分离血清并测定鸡新城疫抗体效价，判定结果以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为鸡新城疫抗体效价[6]，微量HI试验方法:依据GB/T16550-2008进行。观察鸡群生长情况，每周称重，记录耗料和死亡情况。
2.2.3蝉花虫草多糖对新城疫灭活苗免疫效果的影响试验
取80只53日龄鸡，观察10天后，抽样检测63日龄新城疫抗体水平平均值为3.5。随机分为4组，每组20只，第Ⅰ组设为免疫对照组，试验Ⅱ、III组在63-65日龄时分别灌服蝉花虫草多糖50mg/kg·BW，100mg/kg·BW，Ⅳ组灌服黄芪多糖100mg/kg·BW，各组63日龄皮下注射新城疫油乳剂灭活疫苗2羽份，免疫对照组用等量生理盐水皮下注射。采集70、77、84日龄血样，分离血清并测定鸡新城疫抗体效价，判定结果以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为鸡新城疫抗体效价[6]，微量HI试验方法:依据GB/T16550-2008进行。
2.2.4蝉花虫草多糖对免疫器官指数及免疫器官组织学的影响
于用药后第2周、第3周、第4周，每组各取5只鸡称重，试颈部放血后处死，无菌摘取胸腺、法氏囊和脾脏分别称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数测定：胸腺指数/(mg/g)＝胸腺湿重/体重；法氏囊指数/(mg/g)＝法氏囊湿重/体重；脾脏指数/(mg/g)＝脾脏湿重/体重。
于用药后28日龄无菌采用，采集脾脏、法氏囊，10％甲醛固定，常规石蜡包埋制片，苏木素伊红(HE)染色后镜下观察各脏器的组织形态学变化。
2.2.5蝉花虫草多糖对生长性能指标
饲养实验期间以重复为单位，从试验开始每隔一周进行一次肉鸡称重，称料，称重前一晚，停料不停水。将肉鸡禁食一夜后在第二天清晨8点进行称重、称料，计算一周的增重量和耗重量。以此来计算肉鸡的平均日增重、平均日采食量和料肉比等指标，以便评价蝉花虫草多糖对肉鸡生长性能的影响。
2.2.6蝉花虫草多糖对免疫指标的影响
采用酶联免疫吸附试验(ELIsA)检测细胞因子IL-2、r-IFN、IL-4、a-TNF含量。每个处理设4个观察值，按照说明书方法和步骤进行测定。试剂盒由北京瑞格博科技发展有限公司提供。
2.2.7蝉花虫草多糖对鸡肉营养成分的影响
取8只84日龄鸡，分别为对照组和蝉低组，对其进行基本营养成分测定，水分含量测定：参照GB/T9695.15—2008《肉与肉制品水分含量测定》；蛋白质含量测定：参照GB5009.5—2010《食品中蛋白质的测定》；脂肪含量测定：参照GB/T9695.7—2008《肉及肉制品中脂肪含量测定》；氨基酸测定参照GB/T5009.124—2003《食品中氨基酸的测定》。
2.3结果与分析
2.3.1蝉花虫草多糖对鸡新城疫母源抗体消长影响试验结果
由图1可知，连续灌服7天不同剂量的蝉花虫草多糖之后，试验组Ⅱ、III、ⅣND抗体水平显著高于Ⅰ、Ⅴ组(P<0.05)，说明蝉花虫草粗多糖可以在雏鸡阶段应用，可以延长新城疫苗母源抗体对雏鸡的保护期，可见蝉花虫草粗多糖作为免疫增强剂，具有提高免疫力，延缓抗体下降速度的作用。同等剂量情况下，延长雏鸡阶段ND母源抗体保护效果明显优于黄芪多糖。
2.3.2蝉花虫草多糖对新城疫弱毒苗免疫效果的影响试验结果
表2：14-56日龄鸡ND-HI抗体水平
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
表3：70-84日龄鸡ND-HI抗体水平
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
由表2可知，21-35日龄时，免疫对照Ⅰ组ND抗体水平均显著高于其他各组，蝉花试验三组上升幅度不明显，到35日龄时，各组ND抗体水平达到最高值，这与张进隆[8]等试验结果不大一致，可能产生的原因一是母源抗体干扰，与弱毒抗原中和，造成机体免疫应答能力下降；二是可能蝉花虫草多糖具有抗病毒作用，由于试验14、28日龄免疫用新城疫Ⅳ系活疫苗(Lasota株)，连续7-28日龄多糖作用机体，可能当中含有某些成分具有抗病毒作用，降低了活疫苗的免疫原性，导致产生的抗体水平达不到免疫对照组的效果。因此，要进一步通过体外试验确定蝉花虫草多糖是否具有抗病毒作用。
42日龄之后，发现蝉花试验组与对照Ⅰ组ND抗体水平差异不显著，说明添加蝉花后ND抗体水平下降缓慢，在56日龄时高于免疫对照组。鸡群成活率除蝉花高剂量组由于浓度高灌服操作不当导致死亡外，多糖组成活率均高于免疫对照组。
由不同剂量蝉花试验结果可知，对于应用新城疫弱毒苗免疫，添加100mg/kg·BW蝉花虫草多糖能促使机体产生较好的疫苗保护力，但超过200mg/kg·BW的剂量反而导致免疫效果明显降低[9]，可能无法达到理想的免疫效果。因此，需要进一步通过试验确定剂量范围。
2.3.3蝉花虫草多糖对新城疫灭活苗免疫效果的影响试验结果
在较理想的剂量范围内，蝉花虫草多糖可以协同新城疫油乳剂灭活疫苗提升免疫效果，免疫一周后即70日龄时，试验Ⅱ、III组ND抗体水平显著高于免疫对照Ⅰ组(P<0.05)，Ⅱ组高于III组。由此可见，蝉花虫草多糖与油佐剂灭活苗之间具有协同作用，可短时间内刺激机体发生免疫应答，产生较高的抗体水平。结果表明，添加50mg/kg·BW的蝉花虫草多糖就可以促使机体快速达到抗体最大值。
2.3.4蝉花虫草多糖对免疫器官指数的影响
表4：第四周免疫器官指数
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
从表4中可见通过添加不同水平蝉花多糖均能不同程度的提高法氏囊、胸腺、脾脏指数，饲喂蝉花多糖样品II组、Ⅳ组的鸡的免疫器官指数比对照组和其他实验组高，特别是Ⅳ组在法氏囊指数和脾脏指数中具有显著性的差异，结果提示，蝉花多糖可能通过刺激免疫细胞增殖分化，进而促进免疫器官发育，达到提高免疫指数的目的。
由图2脾脏组织形态学中可见，对照组没有形成明显可辨的白髓和红髓，可将一些小淋巴细胞。蝉花高浓度组发育较快，红髓白髓区分明显，淋巴小结较大，中央动脉周围可见淋巴鞘，黄芪组也可见明显的红髓白髓，发育良好。
由图3法氏囊组织形态学中可见，对照组粘膜上皮较薄，皮质髓质界限不清；蝉花高浓度组，粘膜上皮相对较厚，皮质髓质可见明显分化，滤泡增大；黄芪组可见明显分化，粘膜上可见单层立方上皮细胞。
2.3.5蝉花虫草多糖对生长性能指标的影响试验结果
表5：全期(0-6周)生长速度分析表
组别 全期料肉比 全期日增重g 全期日耗料g
对照1 2.18±0.10 14.60±0.55 31.84±1.10
蝉低2 2.15±0.08 14.54±0.23 31.18±1.21
蝉中3 2.11±0.06 14.67±0.22 30.87±0.65
蝉高4 2.08±0.11 15.23±0.67 31.61±1.51
黄芪5 1.99±0.29 14.93±0.72 29.74±0.42
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
从表5中可见各组间不存在显著性差异，从中可以看出，蝉花多糖不影响鸡的日增重量，总体有减少饲料用粮，可提高饲料转化率，促进生长的良好趋势，各组料肉比比黄芪高，尤其以蝉花低剂量组为佳。
2.3.6蝉花虫草多糖对免疫指标的影响
r-IFN结果如表6所示。
表6：r-TNF细胞因子14-56日龄分析表
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
14-56日试验组相对于对照组有不同程度的升高，试验三组间，以14、42日中剂量组、和28日的低剂量组升高较明显，高剂量反而出现降低的情况。黄芪组除42日稍低于对照组外，其他组都高，到56日时，显著高于对照组(P<0.05)。蝉低组在28日、蝉中组在42日稍高于黄芪组。
IL-2结果如表7所示。
表7：IL-2细胞因子14-56日龄分析表
组别 14日 28日 35日 42日 56日
对照1 0.24±0.12a 0.31±0.04ab 0.40±0.30ab 0.78±0.07b 0.38±0.01a
蝉低2 0.24±0.12a 0.36±0.04ab 0.51±0.07b 0.67±0.01ab 0.48±0.03b
蝉中3 0.33±0.41b 0.44±0.05b 0.36±0.02a 0.57±0.07ab 0.37±0.04a
蝉高4 0.26±0.36ab 0.24±0.56a 0.45±0.43ab 0.59±0.23ab 0.44±0.02ab
黄芪5 0.33±0.26b 0.37±0.03ab 0.39±0.04ab 0.32±0.03a 0.61±0.03c
P<0.05 P<0.05 P<0.05 P<0.05 P<0.05,0.01
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
14日时，蝉中组、黄芪组显著高于对照组和蝉低组，比蝉高组也要高,28日时，蝉中组最高，且显著高于蝉高组。35日时，蝉低组最高，显著高于蝉中组。42日时，对照组最高，显著高于黄芪组，但蝉花实验组也高于黄芪组，以蝉低组较明显，但差异均不显著。相对于对照组，蝉花组14-35日均不同程度地提高了血清中IL-2的水平，而42日出现转折，略低于对照组。与黄芪组相比，蝉花组14-28日蝉中、35-56蝉低组都不同程度地高于黄芪组。
IL-4结果如表8所示。
表8：IL-4细胞因子14-56日龄
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
35日，蝉低组显著高于对照组(P<0.05)，比其他组也都高。42日，蝉高组和黄芪组高于其他3组，个别组出现显著性差异。其他日龄除56日蝉高组外，蝉花实验组均高于对照组，21、56日时还高于黄芪组.
a-TNF结果如表9所示。
表9：a-TNF细胞因子14-56日龄
组别 14日 21日 35日 42日 56日
对照1 0.31±0.02 0.46±0.02 0.51±0.05 0.41±0.06a 0.42±0.04
蝉低2 0.35±0.04 0.46±0.05 0.57±0.04 0.37±0.00a 0.49±0.02
蝉中3 0.41±0.05 0.48±0.06 0.46±0.02 0.51±0.04ab 0.39±0.03
蝉高4 0.32±0.05 0..47±0.05 0.53±0.03 0.40±0.03a 0.42±0.04
黄芪5 0.44±0.06 0.50±0.05 0.45±0.06 0.54±0.05b 0.54±0.05
P<0.05
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
14-21日实验组和黄芪组均不同程度高于对照组,35日时，蝉中组、黄芪组低于对照组，蝉低组和蝉高组2组高于对照组。42日时，黄芪组显著高于除蝉中组外的其他3组。56日，黄芪组最高，蝉低组略低于黄芪组，稍高于其他三组。
2.3.7蝉花虫草多糖对肌肉营养成分的影响
表10：各种氨基酸和营养成分的检测分析
注:同列肩标小写字母相同表示差异不显著(p>0.05),不同表示差异显著(p<0.05)
由表10可见，除PHE(苯丙氨酸)外，蝉花多糖组的各种氨基酸较对照组都有升高，其中GLU(谷氨酸)、ALA(丙氨酸)、MET(甲硫氨酸)、LEU(亮氨酸)、TYR(酪氨酸)、LYS(赖氨酸)和多糖的含量都显著高于多糖组，GLU(谷氨酸)的增加，具有提高肌肉的鲜味。结果提示，饲喂蝉花多糖组的鸡具有良好的营养价值。
本试验表明，在整个试验期间，蝉低组对机体的免疫功能显著，多个试验指标或等于或优于蝉中组和蝉高组，从经济及各方面考虑100mg/kg·BW可为提高鸡免疫的理想剂量，作为免疫增强剂具有很好的研究价值和应用前景。

Claims (4)

1.蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述蝉花虫草多糖免疫增强剂由蝉花虫草热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制成，具体步骤如下：（1）将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50%乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液；（2）70℃减压浓缩至原体积的十分之一，得浓缩液；（3）将浓缩液在搅拌下加入3倍体积的95%乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖；（4）经孔径为50纳米与200纳米的陶瓷膜分离得到多糖分子分子量为30-100w之间的粗多糖溶液，对粗多糖用sevage法除蛋白、脱色、过阴离子交换柱后减压浓缩得到的浓缩液；（5）将浓缩液进一步过sephadrose6b凝胶树脂纯化，得到分子量大小在75W左右的目的多糖，经真空干燥、灭菌、获得蝉花虫草多糖。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤（1）中蝉花虫草是天然蝉花或人工栽培的蝉花虫草子实体、蝉花虫草菌丝体或蝉花虫草培养基。
4.一种鸡免疫制剂，其特征在于，所述鸡免疫制剂包括权利要求1或2所述蝉花虫草多糖和至少一种鸡的疫苗试剂。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107759707A (zh) * 2016-08-23 2018-03-06 浙江泛亚生物医药股份有限公司 一种蝉花多糖及其分离纯化方法
CN109771451A (zh) * 2019-03-26 2019-05-21 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 蝉花醇提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症及相关疾病的制剂中的用途
CN111512831A (zh) * 2020-04-29 2020-08-11 浙江省亚热带作物研究所 蝉花寡糖制备方法、应用及利用其抗病性的植物栽培装置
CN111601513A (zh) * 2017-12-27 2020-08-28 浙江泛亚生物医药股份有限公司 一种提高家禽类生长和免疫力的蝉花饲料
CN114057906A (zh) * 2021-12-16 2022-02-18 浙江省亚热带作物研究所 一种抗辐射作用蝉花多糖的分离纯化方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101003578A (zh) * 2006-01-17 2007-07-25 温州医学院 一种蝉拟青霉多糖分离纯化的方法
CN101230012A (zh) * 2007-06-29 2008-07-30 重庆市中药研究院 蝉花免疫抑制活性有效部位isp提取物的提取分离方法
CN101731461A (zh) * 2009-08-12 2010-06-16 南京南农高科兽药研究所有限公司 黄芪药渣发酵开发的植物源动物用免疫增强剂
CN104069480A (zh) * 2014-06-11 2014-10-01 广州市华南农大生物药品有限公司 一种免疫增强剂及用于鸡新城疫紧急接种的疫苗制剂
CN104490941A (zh) * 2014-12-17 2015-04-08 李豫杰 一种提高免疫力、抗肿瘤、改善肾功能、促进睡眠的金蝉花提取物
CN105147716A (zh) * 2015-06-30 2015-12-16 山东农业大学 一种新城疫疫苗玉屏风多糖免疫增强剂

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101003578A (zh) * 2006-01-17 2007-07-25 温州医学院 一种蝉拟青霉多糖分离纯化的方法
CN101230012A (zh) * 2007-06-29 2008-07-30 重庆市中药研究院 蝉花免疫抑制活性有效部位isp提取物的提取分离方法
CN101731461A (zh) * 2009-08-12 2010-06-16 南京南农高科兽药研究所有限公司 黄芪药渣发酵开发的植物源动物用免疫增强剂
CN104069480A (zh) * 2014-06-11 2014-10-01 广州市华南农大生物药品有限公司 一种免疫增强剂及用于鸡新城疫紧急接种的疫苗制剂
CN104490941A (zh) * 2014-12-17 2015-04-08 李豫杰 一种提高免疫力、抗肿瘤、改善肾功能、促进睡眠的金蝉花提取物
CN105147716A (zh) * 2015-06-30 2015-12-16 山东农业大学 一种新城疫疫苗玉屏风多糖免疫增强剂

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘素贞等: "虫草蝉花废弃培养基对肉鸡免疫因子及生长发育的影响", 《中国家禽》 *
王春花等: "中药多糖抗鸡新城疫病毒的研究进展", 《中国家禽》 *
裘洁等: "蝉花的药理作用研究进展", 《中国民族民间医药》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107759707A (zh) * 2016-08-23 2018-03-06 浙江泛亚生物医药股份有限公司 一种蝉花多糖及其分离纯化方法
CN111601513A (zh) * 2017-12-27 2020-08-28 浙江泛亚生物医药股份有限公司 一种提高家禽类生长和免疫力的蝉花饲料
CN109771451A (zh) * 2019-03-26 2019-05-21 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 蝉花醇提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症及相关疾病的制剂中的用途
CN111512831A (zh) * 2020-04-29 2020-08-11 浙江省亚热带作物研究所 蝉花寡糖制备方法、应用及利用其抗病性的植物栽培装置
CN114057906A (zh) * 2021-12-16 2022-02-18 浙江省亚热带作物研究所 一种抗辐射作用蝉花多糖的分离纯化方法
CN114057906B (zh) * 2021-12-16 2022-09-06 浙江省亚热带作物研究所 一种抗辐射作用蝉花多糖的分离纯化方法

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