CN105682660A - 通过与亲脂性他汀类药物的组合使用加强甲氨蝶呤的作用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及二氢叶酸还原酶的抑制剂在制备用于治疗或预防疾病复发的药剂中的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗或预防包括将亲脂性他汀类药物和二氢叶酸还原酶的抑制剂同时地、分开地或依次地给予患者。本发明还涉及药物组合物，其包含二氢叶酸还原酶的抑制剂、亲脂性他汀类药物和药学上可接受的载体和/或媒介物。

Description

通过与亲脂性他汀类药物的组合使用加强甲氨蝶呤的作用
技术领域
本发明涉及临床医学领域，特别是肿瘤学和自身免疫疾病(例如银屑病和类风湿性关节炎)领域。具体而言，本发明提供了通过甲氨蝶呤与亲脂性他汀类药物的组合对于上述这些疾病的改进的治疗。
背景技术
甲氨蝶呤((2S)-2-[(4-{[(2,4-二氨基蝶啶-6-基)甲基](甲基)氨基}苯甲酰基)氨基]戊二酸,CAS编号59-05-2,式I简写为MTX)是一种通过竞争性抑制二氢叶酸还原酶(DHFR)而具有抗增殖和抗炎活性的抗代谢物，其中所述二氢叶酸还原酶为在细胞周期的S期时调节可用于核酸合成的细胞内叶酸并且在蛋白质合成过程中阻止高半胱氨酸转化成蛋氨酸的酶。
MTX作为一线化疗用于治疗某些肿瘤疾病，例如骨肉瘤。在具有正常肾功能的患者中，对于多种肿瘤紊乱给予高度升高剂量(3至12g/m2患者表面积)的MTX，并且在过度水化(31/m2患者表面积)和碱化下给予MTX。MTX还用于治疗一些炎性疾病，包括银屑病关节炎和类风湿性关节炎。
但是，MTX为偶尔会产生明显的且严重的不利副作用的药品，其是使用该药品的患者死亡率升高的确定因素。尽管使用亚叶酸的适当的救援被包含在内，但是在一些情况下，甚至迫使三分之一患者的化疗提前中段。
在使用MTX治疗的患者中，已经描述了伴有急性或慢性脑病的骨髓抑制、粘膜炎和神经毒性。急性脑病通常在治疗开始后最初的5至14天在3％-15％患者中发生，并且其可以包括头痛、恶心、呕吐、昏睡、神经状态改变、视力模糊、失语症、轻偏瘫和抽搐。在这些情况下，大部分患者使用MTX重新开始他们的治疗而未产生永久性的神经后果，但是10％-56％的患者可以经历需要重新阐述的复发(recurrenceswithreexposition)。还可以发生缓慢发展的慢性脑病，其可以进展并且其可以永久性地损失神经功能。
给予高剂量的MTX在受到骨肉瘤影响的儿童中是至关重要的。在这些情况下，MTX消除的延迟以及延长地暴露于该药品下可以导致显著的毒性，主要是由于MTX晶体及其代谢物(17-羟基-甲氨蝶呤)在肾小管中的沉积产生的继发性肾梗阻或者甚至由于所述药物对所述这些肾小管的直接毒性而导致的急性肾衰竭。
因此，这些问题需要发现能够降低使用MTX治疗的有害副作用、同时保持或改善其抗炎、免疫调节和抗肿瘤活性的治疗。
发明描述
本发明人发现亲脂性他汀类药物与二氢叶酸还原酶(DHFR)的抑制剂(例如甲氨蝶呤(MTX))的组合使用在治疗癌症和自身免疫疾病中会产生协同作用，其中使用这些抑制DHFR的药品对所述疾病的治疗已经明确。如下文提供的实施例中所示，亲脂性他汀类药物与MTX的组合治疗的使用会加强MTX的抗肿瘤作用，从而可以在不影响治疗功效的条件下降低MTX的剂量。这种组合治疗为患有疾病的患者(例如患有癌症或一些自身免疫疾病的患者)提供极大的益处，其中已经明确的治疗是给予DHFR抑制剂，这是因为由于患者暴露于较低剂量的DHFR抑制剂，所以这些患者在不影响治疗功效的条件下具有较低的副作用。
因此，本发明的第一个方面提供选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞的DHFR酶抑制剂、或者它们可药用的盐用于治疗疾病，该疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗包括将亲脂性他汀类药物、以及二氢叶酸还原酶的抑制剂同时地、分开地或依次地给予受试对象，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐。这一方面可以再形成二氢叶酸还原酶的抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐)用于制备治疗疾病的药剂的用途，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗包括将亲脂性他汀类药物和DHFR酶的抑制剂同时地、分开地或依次地给予受试对象。本发明还提供在有需要的患者中用于治疗疾病的方法，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗方法包括将亲脂性他汀类药物、以及二氢叶酸还原酶的抑制剂同时地、分开地或依次地给予受试对象，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐。
亲脂性他汀类药物为微溶于水中的那些。在本发明的特定的实施方案中，在与MTX组合的治疗中使用的亲脂性他汀类药物为辛伐他汀(CAS编号：79902-63-9，式II)或其药物的盐。在另一个特定的实施方案中，亲脂性他汀类药物为阿托伐他汀(CAS编号：134523-00-5，式V)或其药物的盐。在另一个特定的实施方案中，亲脂性他汀类药物为氟伐他汀(CAS编号：93957-54-1，式IV)或其药物的盐。在另一个特定的实施方案中，亲脂性他汀类药物为洛伐他汀(CAS编号：75330-75-5，式III)。
此外，本发明还提供使用亲脂性他汀类药物与MTX的任何类似物或衍生物在组合治疗中的用途，其中所述MTX的类似物或衍生物可以用作MTX的治疗备选方法，并且以与MTX的作用机制等同的或极为相似的方式起作用。这些类似物或衍生物包括二氢叶酸还原酶的其他药物抑制剂，例如三甲曲沙(5-甲基-6-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基甲基]喹唑啉-2,4-二胺,式VI中的化合物)和培美曲塞((2S)-2-{[4-[2-(2-氨基-4-氧代-1,7-二氢吡咯[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基]氨基}戊二酸，式VII中的化合物)。对于本领域的专业人员显而易见的是，MTX的这些等价物、类似物和衍生物按照与MTX相同的方式易于与亲脂性他汀类药物作用，并且可见所述这些等价物、类似物和衍生物被亲脂性他汀类药物增强的作用，因此，这些等价物、类似物和衍生物在与亲脂性他汀类药物的组合治疗中使用时，显示相同的益处。
就本发明的目的而言，可以使用DHFR抑制剂或亲脂性他汀类药物的抑制剂的任何药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指由非毒性的药学上可接受的碱制备的盐。对于这些盐没有限定，除非当它们用于治疗目的时，它们必须是药学上可接受的。
可以使用本领域水平下公知的方法来制备用于本发明的组合治疗的化合物的药学上可接受的盐。例如可以使用化学实践中常规的方法由母体化合物制备所述的盐，其中所述母体化合物包含酸性或碱性部分。例如通常使这些母体化合物的游离酸或碱与化学计量足量的酸或药学上可接受的盐在水平和/或有机溶剂存在下反应来制备所述的这些盐。当由碱性母体化合物制备所述盐时，由非毒性药学上可接受的酸(包括有机酸或无机酸)制备这些盐。这些酸包括例如乙酸,苯磺酸,苯甲酸,樟脑磺酸,柠檬酸,乙磺酸,富马酸,葡萄糖酸,谷氨酸,氢溴酸,盐酸,乳酸,马来酸,苹果酸,扁桃酸,甲磺酸,磷酸,琥珀酸,硫酸,酒石酸,对甲苯磺酸等。
本发明还引入了所述这些化合物用于组合治疗，所述这些化合物可以为它们的晶体形式(自由溶剂化中的化合物，或者作为溶液(例如水合物))。用于溶剂化的方法是本领域水平已知的。
本发明还提供了DHFR抑制剂或亲脂性他汀类药物的前药的用途。“前药”可以理解为以非活性形式(或低活性)给予、但是在给予后转化成其相应的药物活性组分(其为患者正常代谢过程的结果)的物质。具体而言，术语前药是指可接受的和生理学可水解的酯。
术语“可接受的和生理学可水解的酯”可以理解为其中羟基被酯化并且在生理学条件下可以水解从而在给予剂量下得到生理学耐受的酸的酯。这些酯的实例包括MTX或亲脂性他汀类药物的乙酸酯和苯甲酸酯。
本发明还提供了给予与以下物质形成缀合形式的DHFR抑制剂，其中所述物质例如为脂质体，甘油，白蛋白，甘油二酯，氨基酸(例如苯丙氨酸或脯氨酸)或肽(例如精氨酸-甘氨酸-天冬酰胺或“发夹”肽)。所述药品与这些物质的缀合可以增加它们的生物利用度。
在特定的实施方案中，在本发明的组合治疗中的DHFR抑制剂为MTX。在另一个实施方案中，本发明的组合治疗是使用MTX和辛伐他汀进行的。
本发明的组合治疗提供了其他益处，这些益处由以下可能性组成：使用组合治疗不仅用于治疗目的，还用于预防目的，具体而言为在对癌症或自身免疫疾病的先前治疗产生令人满意的应答的患者中，预防复发(或再发)的目的。
此外，本发明的另一个方面提供选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的DHFR抑制剂，其用于预防疾病的复发，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗包括将亲脂性他汀类药物和DHFR抑制剂同时地、分开地或依次地给予受试对象。这一方面可以再形成二氢叶酸还原酶的抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐)用于制备预防疾病复发的药剂的用途，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗包括将亲脂性他汀类药物和二氢叶酸还原酶的抑制剂同时地、分开地或依次地给予受试对象。本发明还提供在有需要的患者中用于预防疾病复发的方法，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗方法由以下组成：将亲脂性他汀类药物、以及二氢叶酸还原酶的抑制剂以同时的、分开的或依次的方式给予受试对象，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐。
根据目前的临床实践，使用和给予DHFR抑制剂(例如MTX)的副作用应考虑至以下的程度：在其中病理学减轻或者由于之前的治疗而消失的患者中不考虑它们的用途。本发明的组合治疗具有使用较低浓度的具有更高治疗功效的(例如)MTX的能力，可以用于在对用于治疗疾病的之前的治疗产生应答的患者中避免复发，其中所述疾病受益于MTX的给予，例如癌症。就此而言，重要的是表明本发明人发现通过亲脂性他汀类药物增强DHFR的作用在低剂量下是特别相关的，特别是在包含1至3mg/m2患者的肌体表面积的MTX剂量。
容易受益于本发明的目前的组合治疗的疾病包括已经表明对其给予DHFR抑制剂(例如MTX)的那些疾病，特别是癌症和一些自身免疫疾病。在特定的实施方案中，本发明的组合治疗可以用于治疗选自骨肉瘤、破坏性绒毛腺瘤(chorioademomadestruens)、绒毛膜癌、葡萄胎、急性淋巴细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、大细胞淋巴瘤、高级淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴肉瘤、Burkitt淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、胸膜间皮瘤、乳腺癌、卵巢癌、鳞状头部肿瘤、鳞状颈部肿瘤、小细胞肺癌、膀胱癌中的癌症。在特定的实施方案中，本发明的组合治疗用于治疗骨肉瘤。在另一个特定的实施方案中，所述癌症为急性淋巴细胞性白血病。
可以受益于本发明的组合治疗(包含DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物)的另一组疾病由一些自身免疫疾病组成，特别是银屑病,银屑病关节炎,青少年多发性关节炎,类风湿性关节炎,Crohn疾病,多肌炎,皮肌炎和肉状瘤病。
如本领域的专业人员显而易见的那样，本发明的目前的组合治疗不仅在活性组分(DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物)在单一组合物中使用时是有效的，而且在使用2种不同的组合物时也是有效的，而且与同时的或以任何顺序分开给予以及治疗有效范围无关。此外，本领域的专业人员应该理解的是在目的在于治疗或预防疾病(受益于DHFR抑制剂的给予)的复发的组合治疗中，可以由专科医生对DHFR抑制剂开处方，将其与亲脂性他汀类药物一起使用，反之亦然。
因此，本发明的一个方面涉及选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的DHFR酶抑制剂，当其与亲脂性他汀类药物用于组合治疗时，用于治疗选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病中的疾病。这一方面可以再形成DHFR抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞其药学上可接受的盐)或用于制备治疗疾病的药剂的用途，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述药剂与亲脂性他汀类药物用于组合治疗中。本发明还指在有需要的患者中用于治疗疾病的方法，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗方法包括将DHFR抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐)、与亲脂性他汀类药物在组合治疗中给予受试对象。
本发明的另一个方面是指选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞的DHFR酶抑制剂，或其药学上可接受的盐，当其与亲脂性他汀类药物用于组合治疗时，用于预防癌症的复发。这一方面可以再形成MTX、前药或其药学上可接受的盐用于制备预防疾病的复发的药剂的用途，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述药剂与亲脂性他汀类药物用于组合治疗中。本发明还指在有需要的患者中用于预防疾病的复发的方法，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗方法包括将DHFR抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐)与亲脂性他汀类药物在组合治疗中给予受试对象。
此外，本发明提供选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的DHFR抑制剂、以及亲脂性他汀类药物，其用于治疗选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病中的疾病。这一方面可以再形成选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的DHFR抑制剂、以及亲脂性他汀类药物用于制备治疗疾病的药剂的用途，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病。本发明还提供在有需要的患者中用于治疗疾病的方法，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述方法包括将DHFR抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐)以及亲脂性他汀类药物给予受试对象。
在另一个方面中，本发明提供选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的DHFR抑制剂、以及亲脂性他汀类药物，其用于预防选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病中疾病的复发。这一方面可以再形成选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的DHFR抑制剂、以及亲脂性他汀类药物用于制备预防疾病复发的药剂的用途，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病。本发明还提供在有需要的患者中用于预防疾病复发的方法，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述方法包括将DHFR抑制剂(选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐)、以及亲脂性他汀类药物给予受试对象。
本发明设想，在组合治疗中，将DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物同时给予。本发明还涉及将DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物以任何顺序并且在治疗有效范围内分开给予。很大程度上，治疗有效范围取决于所考虑的疾病以及所述目的是治疗、预防或复发，但是总是考虑以下事实：由于与亲脂性他汀类药物组合，所以给予患者的DHFR抑制剂的量比常规治疗中低很多。
当在本发明的组合治疗中使用的DHFR抑制剂为MTX时，所给予的该药品的剂量可以包含0.5mg/m2患者的表面积至20mg/m2患者的表面积，并且亲脂性他汀类药物的剂量可以由10至100mg组成。近似剂量将取决于患者的疾病以及治疗的目的是治疗、预防或复发。因此，对于急性淋巴细胞性白血病的治疗而言，所给予的MTX的剂量可以包含1mg/m2患者的表面积至3mg/m2患者的表面积。对于骨肉瘤的治疗而言，可以给予包含12mg/m2患者的表面积至15mg/m2患者的表面积的MTX的剂量。在上述2种情况下，可以给予包含40mg至80mg的初始高剂量的亲脂性他汀类药物，以及包含10mg至30mg(例如20mg)的维持剂量。对于骨肉瘤复发的预防而言，可以给予剂量包含3mg/m2患者的表面积至20mg/m2患者的表面积的MTX和20mg亲脂性他汀类药物。相似地，给予方案将取决于所考虑的疾病以及所述目的是这种疾病的复发的治疗或预防。通常，在本发明的组合治疗中，可以在包含1至5周的频率下给予MTX，并且可以在包含1至7天的频率下给予亲脂性他汀类药物。例如当组合治疗的目的是急性淋巴细胞性白血病的治疗时，可以在4至6周内给予包含1mg/m2患者的表面积至3mg/m2患者的表面积的MTX剂量。例如当组合治疗的目的是骨肉瘤的治疗时，可以每14天给予包含12mg/m2患者的表面积至15mg/m2患者的表面积的MTX剂量。在上述2种情况下，可以给予包含40mg至80mg的初始高剂量的亲脂性他汀类药物以及包含10mg至30mg的维持剂量。例如当本发明的治疗目的是骨肉瘤的复发的预防时，可以每周给予剂量包含3–20mg/m2患者的表面积的MTX和20(mg)亲脂性他汀类药物。
如上文提及的那样，就本发明的组合治疗的意义而言，MTX和亲脂性他汀类药物可以同时地、依次地或分开地给予。在其中给予可以是同时的情况下，所述药品可以形成相同药物组合物的一部分，或者每一种药品都可以形成不同药物组合物的一部分。
本发明的一个方面提供了药物组合物，其包含选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的二氢叶酸还原酶的抑制剂；和亲脂性他汀类药物，以及赋形剂和/或药学上可接受的媒介物。该组合物有效地用于本发明的组合治疗中，用于治疗或预防上文提及的疾病的复发。
表达“赋形剂和/或药学上可接受的媒介物”是指材料、组合物或药学上可接受的媒介物。就与药物组合物中的其他组分相容的意义而言，每一种成分必须是药学上可接受的。它们还必须适合于与人类和动物的组织和器官接触使用，而不会产生符合合理的利益/风险比的过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或者其他问题或并发症。
在特定的实施方案中，在本发明的组合物中的亲脂性他汀类药物选自于甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐。在另一个特定的实施方案中，DHFR抑制剂为MTX。在特定的实施方案中，所述组合物包含MTX和辛伐他汀。
本发明的组合物可以配制成用于口服给予的剂量单位。在特定的实施方案中，用于口服给予的剂量单位为片剂、药丸、糊剂、锭剂、胶囊、溶液、悬液、凝胶或胶状物。在另一个实施方案中，本发明的组合物配制成用于静脉给予、肌肉给予、经皮给予、直肠给予、通过腔内注射途径或通过吸入的剂量单位。
在特定的实施方案中，用于治疗上述疾病的本发明的组合物的给予方案将取决于剂量单位中的DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物的含量、以及其适应症。在建立本发明的组合物的给予方案中，必须考虑用于组合治疗的上述剂量建议。
当在本发明的组合治疗中使用的DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物的给予是依次的或分开的时，在不同的组合物中配制每一种药品，并且在上述疾病的复发的治疗或预防中，根据合适的药品给予的说明书在试剂盒中给予它们。
相似地，本发明的另一个例子提供了由以下部分组成的试剂盒：第一药物组合物，其由选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐的二氢叶酸还原酶的抑制剂组成；第二药物组合物，其由亲脂性他汀类药物组成；以及在用于治疗或预防癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病的复发的组合治疗中，用于上述药物组合物的说明书。
在一个实施方案中，本发明的试剂盒中的亲脂性他汀类药物选自阿托伐他汀,氟伐他汀,洛伐他汀及其药学上可接受的盐。在特定的实施方案中，他汀类药物为辛伐他汀。在另一个实施方案中，DHFR抑制剂为MTX。
本发明的试剂盒中的每一种活性组分(DHFR抑制剂和亲脂性他汀类药物)可以配制成用于口服给予的剂量单位。在特定的实施方案中，用于口服给予的剂量单位为片剂、药丸、糊剂、锭剂、胶囊、溶液、悬液、凝胶或胶状物。在另一个实施方案中，本发明的试剂盒中的每一种活性组分配制成用于静脉给予、肌肉给予、经皮给予、直肠给予、通过腔内注射途径或通过吸入的剂量单位。
特定的实施方案提供了由以下步骤组成的试剂盒：以剂量单位配制的组合物中的MTX，所述组合物包含0.5mg至20gMTX以及赋形剂和药学上可接受的媒介物；以剂量单位配制的组合物中的亲脂性他汀类药物，所述组合物包含10mg至100mg亲脂性他汀类药物以及赋形剂和药学上可接受的媒介物；以及在用于治疗上述疾病之一的复发的治疗或预防的组合治疗中，用于给予上述药物组合物所需的说明书。在一个实施方案中，MTX的剂量单位包含1mg至3mg的MTX。在另一个实施方案中，MTX的剂量单位包含12mg至15mg的MTX。在2种情况下，亲脂性他汀类药物的剂量单位可以包含40mg至80mg的高的初始剂量，或者10mg至30mg(例如20mg)的维持剂量。在组合治疗中用于给予所述组合物的这些说明书可以表明(除了其他方面)MTX和亲脂性他汀类药物的组合物可以同时给予，或者甚至，根据治疗有效范围分开给予所述组合物。所述说明书还可以表明用于组合治疗的给予方案，其详细说明了待给予的剂量单位以及每一种成分应该给予时的时间间隔。剂量和时间间隔将取决于所述试剂盒是用于治疗所述疾病还是用于预防患者的再发。为了建立本发明的组合物的给予方案，必须考虑用于本发明的组合治疗的上述剂量建议。
所述说明书还可以表明待使用组合治疗来治疗的疾病。在一个实施方案中，所述试剂盒用于癌症的治疗。在另一个实施方案中，所述试剂盒用于预防患者的复发，其中所述患者是针对癌症进行治疗。在特定的实施方案中，癌症选自骨肉瘤、破坏性绒毛腺瘤、绒毛膜癌、葡萄胎、急性淋巴细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、大细胞淋巴瘤、高级淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴肉瘤、Burkitt淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、胸膜间皮瘤、乳腺癌、卵巢癌、鳞状头部肿瘤、鳞状颈部肿瘤、小细胞肺癌、膀胱癌。在特定的实施方案中，癌症为骨肉瘤。在一个实施方案中，所述试剂盒用于治疗自身免疫疾病。在特定的实施方案中，自身免疫疾病为银屑病,银屑病关节炎,青少年多发性关节炎,类风湿性关节炎,Crohn疾病,多肌炎,皮肌炎和肉状瘤病。
在整个说明书和权利要求书中，词语“包含”及其变体不排除其他的技术特征、添加剂、成分或步骤。此外，词语“包含”包括“由……组成”。对于本领域的专业人员而言，本发明的其他目的、益处和特征部分来源于本说明书，并且部分来源于本发明的操作。以下实施例和附图以举例说明的方式提供，并且无意于限定本发明。此外，本发明包含本文所述特定和优选的实施方案的所有可能的组合。
附图简述
图1：包含MTX和辛伐他汀的组合治疗对HOS细胞的毒性作用的图示。使用未达到最佳固定剂量的0.5μM辛伐他汀并组合MTX(黑色柱，图A；黑色圆圈，图B)，或者仅使用剂量增加的MTX(白色柱，图A；以及白色圆圈，图B)(在48小时内达到最大浓度100nM)而未使用辛伐他汀，通过针对磺酰罗丹明B进行检验来评价。测量均进行三个重复，并使用平均值±标准偏差来表示数据。Y轴表示以百分率表达的存活率，而X轴为MTX浓度。
图2：表的图示，其概括了针对HOS细胞，未使用辛伐他汀(A列)和使用辛伐他汀(B列)进行处理的存活百分率，以及它们之间的差异(C列)，其中所述HOS是使用浓度为0.5μM的辛伐他汀处理的。左侧的一列表示使用的MTX的剂量。
图3：包含MTX和辛伐他汀的组合治疗对HOS细胞的毒性作用的图示。使用未达到最佳固定剂量的1μM辛伐他汀并组合MTX(黑色柱，图A；黑色圆圈，图B)，或者仅使用剂量增加的MTX(白色柱，图A；以及白色圆圈，图B)(在48小时内达到最大浓度100nM)而未使用辛伐他汀，通过针对磺酰罗丹明B进行检验来评价。测量均进行三个重复，并使用平均值±标准偏差来表示数据。Y轴表示以百分率表达的存活率，而X轴为MTX浓度。
图4：图示(A)和表(B)，其概括了未使用辛伐他汀(1)和使用辛伐他汀(2)进行处理的HOS细胞的存活百分率，以及它们之间(3)的差异，其中辛伐他汀的浓度达到1μM。左侧的一列表示使用的MTX的剂量。
图5：图示(A)和表(B)，其概括了使用浓度为0.5μM的辛伐他汀(1)和使用浓度为1μM的辛伐他汀(2)进行处理的HOS细胞的存活百分率之间的差异(3)。左侧的一列表示使用的MTX的剂量。
图6：在72小时内(X轴)，评价与对照细胞(1)相关的骨肉瘤细胞(HOS)的繁殖能力的图示，其中所述骨肉瘤细胞经过0.5μM辛伐他汀(2)、50nM甲氨蝶呤(3)或者这二者(4)的处理。使用台盼蓝的染色技术，通过计数Neubauer室中细胞(有活力的和无活力的)的总数(Y轴)来评价所述作用。测量均进行三个重复，并使用平均值±标准偏差来表示数据。
图7：在72小时内(X轴)，评价与对照细胞(1)相关的骨肉瘤细胞(HOS)的细胞死亡的诱导的图示，其中所述骨肉瘤细胞经过0.5μM辛伐他汀(2)、50nM甲氨蝶呤(3)或者这二者(4)的处理。使用台盼蓝的染色技术，通过计数Neubauer室中无活力细胞的总数(Y轴)来评价所述作用。测量均进行三个重复，并使用平均值±标准偏差来表示数据。
图8：在48小时(面板A)和72小时(面板B)内，与对照细胞(1)相关的骨肉瘤细胞(HOS)的形态学改变的图示，其中所述骨肉瘤细胞经过0.5μM辛伐他汀(2)、50nM甲氨蝶呤(3)或者这二者(4)的处理。可见，MTX(3)产生增大的细胞，甚至具有2个核(实箭头)的那些细胞；SV(2)产生圆形的细胞(虚箭头)；而2种药品(4)会产生2种作用。
图9：在48小时内(X轴)，与对照细胞(1)相关的骨肉瘤细胞(HOS)(A)的总数或死亡细胞的数量(B)变化的图示，其中所述骨肉瘤细胞或死亡细胞经过1μM辛伐他汀(2)、100nM甲氨蝶呤(3)或者这二者(4)的处理。使用台盼蓝的染色技术，通过计数Neubauer室中细胞(Y轴，图A中)和台盼蓝阳性细胞(Y轴，图B中)的总数来评价所述作用。测量均进行三个重复，并使用平均值±标准偏差来表示数据。
图10：在72小时内(X轴)，与对照细胞(1)相关的骨肉瘤细胞(HOS)(A)的总数或死亡细胞的数量(B)变化的图示，其中所述骨肉瘤细胞或死亡细胞经过0.5μM辛伐他汀(2)、50nM甲氨蝶呤(3)或者这二者(4)的处理。使用台盼蓝的染色技术，通过计数Neubauer室中细胞(Y轴，图A中)和台盼蓝阳性细胞(Y轴，图B中)的总数来评价所述作用。测量均进行三个重复，并使用平均值±标准偏差来表示数据。
图11：HOS细胞的细胞周期的变化的图示，其中所述HOS细胞经过剂量增加的MTX处理24小时。G1.1＝对照(在所有的图中，对照表示0nM)；2＝10nM；3＝50nM；4＝100nM；5＝200nM。注意S期和G2/M期的细胞数量减少，并且随后在G1期累积。
图12：(A)HOS细胞的细胞周期的变化的图示，其中所述HOS细胞经过剂量增加的MTX处理24小时。X轴显示MTX的浓度：1＝对照；2＝10nM；3＝50nM；4＝100nM；5＝200nM。(B)在上述MTX浓度下，在细胞周期的各期中的绝对值。(C)在细胞周期的各期所获得的值与对照相比的差异百分率。a＝10nM与对照；b＝50nM与对照；c＝100nM与对照；d＝200nM与对照。与对照相比，S期的减少在9.38％至35.46％之间改变。与对照相比，G2/M期的减少在6.30％至55.46％之间，而与对照相比，G1期的细胞数量的增加在1.89％至42.00％之间。
图13：HOS细胞的细胞周期的变化的图示，其中所述HOS细胞经过剂量增加的SV处理24小时。1＝对照；2＝0.2μM；3＝0.5μM；4＝1μM；5＝2μM；6＝5μM和7＝10μM。S期和G1期细胞数量的减少是值得注意的，并且随后在G2/M期累积。
图14：(A)HOS细胞的细胞周期的变化的图示，其中所述HOS细胞经过剂量增加的SV处理24小时。X轴显示SV的浓度：1＝对照；2＝0.2μM；3＝0.5μM；4＝1μM；5＝2μM；6＝5μM和7＝10μM。(B)在上述SV浓度下，在细胞周期的各期中的绝对值。(C)在细胞周期的各期所获得的值与对照相比的差异百分率。a＝0.2μM与对照；b＝0.5μM与对照；c＝1μM与对照；d＝2μM与对照；e＝5μM与对照；以及f＝10μM与对照。与对照相比，S期的减少在0.41％至22.53％之间改变。与对照相比，G1期的减少在7.85％至48.28％之间。与对照相比，G2/M期的细胞数量的升高在9.32％至97.65％之间。
图15：(A)HOS细胞的细胞周期的变化的图示，其中所述HOS细胞经过SV和MTX的组合处理24小时。X轴显示药品的浓度：1＝对照；2＝SV1μM；3＝MTX50nM；4＝SV1μM+MTX50nM。(B)在上述浓度下，在细胞周期的各期中的绝对值。(C)在细胞周期的各期所获得的值与对照相比的差异百分率。a＝SV1μM与对照；b＝MTX50nM与对照；c＝上述2者与对照。与对照相比，S期的减少在4.10％至12.10％之间改变。在使用SV的情况下，G1期减少19.60％，但是当与MTX组合时，与对照相比，增加15.11％。当单独使用SV处理时，G2/M期细胞的数量增加40.92％，但是当与MTX组合时，与对照相比，减少33.90％。
图16：HOS细胞的SubG0峰值的图示，其中所述HOS细胞经过MTX处理48小时。1＝对照；2＝MTX10nM；3＝MTX20nM；4＝MTX50nM；5＝MTX100nM；6＝MTX200nM。在20nM的MTX浓度下，G1-G2/M区的图谱和SubG0峰值的初始外观的明显显著的改变(3)，表明通过细胞凋亡的细胞死亡。
图17：(A)在HOS细胞的G1-G2/M区中SubG0峰值的变化的图示，其中所述HOS细胞经过剂量增加的MTX处理48小时。X轴显示MTX的浓度：1＝对照；2＝10nM；3＝20nM；4＝50nM；5＝100nM；6＝200nM。(B)在上述MTX浓度下研究的各区的绝对值。(C)在所研究的各区所获得的值与对照相比的升高或降低。a＝10nM与对照；b＝20nM与对照；c＝50nM与对照；d＝100nM与对照和e＝200nM与对照。最明显的结果是在剂量高于50nMMTX下在SubG0期中定量的细胞数量显著升高。
图18：在HOS细胞的SubG0峰值的变化的图示，其中所述HOS细胞经过SV处理48小时。1＝对照；2＝SV0.2μM；3＝SV0.5μM；4＝SV1.0μM；5＝SV2.0μM；6＝SV5.0μM和7＝SV10μM。G1-G2/M区的图谱的显著变化以及在浓度低于SV0.2μM下SubG0峰值的外观(2)，并且在SV浓度为10μM时具有最大值，表明通过细胞凋亡的细胞死亡。
图19：(A)HOS细胞的SubG0峰值和G1-G2/M区的变化的图示，其中所述HOS细胞经过剂量升高的SV处理48小时。X轴显示SV的浓度：1＝对照；2＝0.2μM；3＝0.5μM；4＝1.0μM；5＝2.0μM；6＝5.0μM和7＝10μM。(B)在上述SV浓度下研究的各区的绝对值。(C)在所研究的各区所获得的值与对照相比的升高或降低。a＝0.2μM与对照；b＝0.5μM与对照；c＝1.0μM与对照；d＝2.0μM与对照；e＝5.0μM与对照和f＝10μM与对照。在高于0.2μMSV的剂量下，在SubG0期中定量的细胞数量显著升高。
图20：(A)HOS细胞的SubG0峰值和G1-G2/M区的变化的柱状图，其中所述HOS细胞使用SV和MTX的组合处理48小时。1＝对照；2＝MTX30nM；3＝SV0.5μM；4＝MTX30nM+SV0.5μM。
图21：(A)HOS细胞的SubG0峰值和G1-G2/M区的变化的图示，其中所述HOS细胞使用SV和MTX的组合处理48小时。X轴显示药品的浓度：1＝对照；2＝MTX30nM；3＝SV0.5μM；4＝MTX30nM+SV0.5μM。(B)在上述浓度下SubG0峰值和G1-G2/M区的绝对值。(C)在所研究的各区所获得的值与对照相比的升高或降低。a＝MTX30nM与对照；b＝SV0.5μM与对照；c＝both与对照。当2种处理组合时，在SubG0峰值(细胞死亡)中细胞数量显著增加高达6倍。
图22：使用DNA梯度技术，在24小时(A)和36小时(B)后得到的HOS细胞的细胞凋亡的变化的图示。1＝对照；2＝SV0.5μM；3＝MTX50nM；4＝MTX50nM+SV0.5μM。
实施例
提供以下实施例，从而更好地说明所要求的发明，并且这些实施例不应该解释为限定本发明的范围。就提及特定的材料而言，这完全是为了说明的目的，并且其无意于限定本发明。在无需发挥创造性能力和不脱离本发明的范围的条件下，本技术领域的专业人员可以研发等价的测量或试剂。
实施例1.骨肉瘤细胞系的培养
在RPMI1640培养基上培养大鼠骨肉瘤细胞系UMR-106和人骨肉瘤细胞系HOS。在DMEN培养基上培养人骨肉瘤细胞系MG-63。所有的培养基均补充有10％FBS、2mM谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100μg/mL链霉素。对于所有的细胞系所使用的保持条件均为37℃，并且在具有5％CO2的潮湿的气氛中。肿瘤系得自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)，并根据建议的条件进行培养。
实施例2.细胞存活的检验
在剂量为10,20,30,40,50,60,80和100nM的MTX下和在0.5μM和1.0μM的辛伐他汀下培养骨肉瘤细胞系。使用磺酰罗丹明B(SRB)测试来定量细胞的存活，所述磺酰罗丹明B(SRB)测试是基于SRB与碱性氨基酸(使用三氯乙酸固定(TCA))的静电结合，用于分光光度法定量的非放射性比色检验。
就此而言，在96孔板上，在补充10％FBS的200μL培养基中，在5x103个细胞/孔的密度下培养UMR-106,HOS和MG-63肿瘤细胞系，并生长24,48或72小时。一旦完成试验，便通过倾倒，除去培养基。在向每孔加入50μL冷的TCA10％(100mLTCA100％(w/v)+900mLElixH2O,2-5℃)之后，在4℃下将细胞温育30分钟，从而使细胞完全固定在孔的基底上。然后通过倾倒，除去TCA，并使用冷的流水将孔温和地洗涤4次，从而确保所有的孔都被均等地洗涤。接着倒置平板，并将其朝下放置在多层吸水纸上，直至第二天，从而确保除去几乎所有的水。接着，将40μL磺酰罗丹明B溶液(SigmaS-9012,4grSRB+1L乙酸(vol/vol)，在环境温度下)加入至1％(vol/vol)乙酸中至0.4％(wt/vol)，在如此操作中避免直射光(SRB是光敏的)。在环境温度下将平板温育30分钟。然后，倾倒染料，并使用1％乙酸(vol/vol,100mL乙酸+10LElixH2O)将孔洗涤至少4次，确保未与细胞结合的所有痕量的染料被除去。通过在黑暗中将【平板靠在多层吸水纸上过夜稳固地摇动，从而除去所有剩余的乙酸。接着，加入150μLTRIS:BASE10mM(pH10.5,100mLTRIS:BASE100mM+900mLHellixH2O)，并将其在环境温度下放置10分钟，以确保染料完全溶解。最后，在492nm(SRB的吸收峰)和620nm(从而除去由平板中的体积、污垢或缺陷的小变化而引起的可能的干扰)下，使用双层板DualReader进行测量。测量前，必须快速地摇动平板。
细胞生存检验的结果提供于图1-5中。结果显示当共同给予辛伐他汀和MTX时，辛伐他汀显著地减少MTX的有效剂量。所述作用在低浓度的MTX(0nM至30nM的MTX)下是特别相关的。
实施例3.细胞活力检验
在37℃、95％湿度和5％大气CO2下，在补充有5-10％热灭活的胎牛血清和2mML-谷氨酰胺的培养基中培养HOS。使用0.5μM辛伐他汀和50nMMTX将细胞处理24、48和72小时。通过胰蛋白酶化作用收集细胞。这涉及：首先抽吸培养基；然后使用2-3mLPBS(无菌的)洗涤细胞；加入0.5-1mL胰蛋白酶-EDTA溶液(无菌的)；在37℃下温育5分钟；使用5mL新鲜的培养基收集细胞；以及将悬液置于无菌15mL管中。使用台盼蓝以测定细胞活力。台盼蓝为通过细胞膜上的破裂而进入细胞的胶体。因此，在图像中显现的细胞(清楚地染成蓝色)被认为是无活力的。就测量而言，将50μL台盼蓝溶液和50μL细胞悬液的混合物置于1.5mL管中。该混合物经均化，并将10μL混合物置于Neubauer室中。计数总细胞和无活力细胞(完全染成蓝色)。
细胞活力检验的结果在图6,7,8,9和10中可见。
由这些试验来开，可以得出结论：辛伐他汀对细胞死亡的诱导具有主导作用；甲氨蝶呤优选地发挥减慢细胞繁殖的作用；以及当实施2种处理时，繁殖大幅减慢，并且细胞死亡比分开给予2种处理时增加得更多。
实施例4.细胞凋亡的检测
通过DNA片段的检验，并通过使用Annexin-V/PI染色的流式细胞仪来实施细胞凋亡的检测和定量。
4.1用于DNA片段的检验(阶梯DNA)。将UMR-106肿瘤细胞系以2x105个细胞/孔的密度在具有6个孔的平板上培养2或3天。接着，将细胞培养物与0.5μM辛伐他汀和50nMMTX温育24小时和48小时。在各试验条件下，在微量离心管中获得所述细胞，并在包含Tris/HCl10mMpH8.0,EDTA1mM,TritonX-1000.2％的200μL缓冲液中溶解细胞，并在BiofugeStratos微量离心机(HeraeusInstruments)中在12,000xg下离心20分钟。将样品与RNase(Sigma)在37℃下在最终浓度为5mg/mL下温育1小时，并在37℃下与蛋白酶K(Sigma)(20mg/mL)温育1小时，从而除去其RNA内含物。在使用大量洗涤剂(其基本成分为苯酚)之后，使用2体积的纯乙醇在-20℃下将样品沉淀至少12小时。然后，将样品在12,000xg下再次离心，并使用70％乙醇洗涤试验的条件，从而加入包含Tris/HCl10mMpH8.0,EDTA1mMpH8.0的50μLTE缓冲剂。在1％琼脂糖凝胶上分析样品。使用溴化乙锭染色123bp的DNA内含物，并使用UV光系统(BioImagingSystem-Syngene)可视化。使用用于Windows的公共流通软件的theScionImageBeta4.02进行密度计分析。
DNA片段的检验结果示于图22中。注意当使用SV和MTX处理细胞时，细胞凋亡的应答加强。
4.2使用Annexin-V/PI的流式细胞仪。使用AnnexinV-FITCApoptosisDetectionKit(Ref:556547,BectonDickinson,Pharmingen,TM)来检测和定量处于细胞凋亡条件下的细胞。将细胞接种于具有6个孔的平板上，为期3天。然后，使用0.5μM辛伐他汀和50nMMTX将细胞处理24小时和48小时。接着，在黑暗下并且在环境温度下，将它们与100μL结合缓冲剂温育15分钟，其中所述结合缓冲剂包含4μL与异硫氰酸荧光素缀合的Annexin(AnnexinV-FITC)和10μL碘化丙啶。随后，将细胞再次悬浮于400μL相同的结合缓冲剂中并保持在黑暗中。使用FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson,SanJose,CA)分析溶液，并使用theCellQuest软件(BectonDickinson)定量柱状图。在这些条件下，并且为了区分细胞凋亡过程和坏死过程和为了扣除细胞活力，使用以下公式来计算每一个结果：
细胞％＝AnnexinV-FITC+PI-/PI-
其中PI-是被认为有活力的细胞(AnnexinV-FITC–PI-)和发现处于细胞凋亡状态下的细胞(AnnexinV-FITC+PI-)的总和。
使用流式细胞仪的细胞凋亡检验结果示于图16-22中。结果表明2种药品的组合比当它们分开给予时诱导了更多的细胞死亡。
5.细胞周期的分析
为了分析细胞周期的分布的变化，接种细胞，并使用AnnexinV染料在所用的相同的条件下进行处理。将处理的和未处理的细胞以3x105个细胞/样品的密度再次悬浮于NP-40中，其中所述NP-40以1％溶解于额外包含50μg/mLPI的PBS中。然后，根据在细胞凋亡试验中使用的相同的方法学，使用Annexin-V染色(FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件)，在黑暗中和环境温度下温育15分钟后实施每个试验条件的分析和定量。
图11-15中提供了针对细胞周期的分别变化的研究结果。该结果表明MTX基本上激发了细胞周期中G1期的中断；SV将细胞周期中断在G2/M期；以及2种药品的组合中断了细胞周期的2个期，并且DNA的合成显著减少，因此，所述组合防止细胞在细胞周期上逃离控制。

Claims (19)

1.二氢叶酸还原酶的抑制剂用于制备治疗或预防疾病复发的药剂的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐，所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述治疗或预防包括将亲脂性他汀类药物和二氢叶酸还原酶的抑制剂同时地、分开地或依次地给予受试对象。
2.二氢叶酸还原酶的抑制剂用于治疗或预防疾病复发的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐，所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病，其中所述药剂用于与亲脂性他汀类药物的组合治疗。
3.权利要求1-2的任意一项所述的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂与所述亲脂性他汀类药物同时给予。
4.权利要求1-2的任意一项所述的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂和所述亲脂性他汀类药物是以任何顺序和治疗有效范围分开给予的。
5.二氢叶酸还原酶的抑制剂以及亲脂性他汀类药物用于制备治疗或预防疾病复发的药剂的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐，其中所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病。
6.根据权利要求1-5的任意一项所述的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂为甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求1-6的任意一项所述的用途，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂以由1至5周构成的频率给予，所述亲脂性他汀类药物以由1至7天构成的频率给予。
8.根据权利要求1-7的任意一项所述的用途，其中所述亲脂性他汀类药物选自辛伐他汀,氟伐他汀,阿托伐他汀,洛伐他汀及其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1-8的任意一项所述的用途，其中所述癌症选自骨肉瘤、破坏性绒毛腺瘤、绒毛膜癌、葡萄胎、急性淋巴细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、大细胞淋巴瘤、高级淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴肉瘤、Burkitt淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、胸膜间皮瘤、乳腺癌、卵巢癌、鳞状头部肿瘤、鳞状颈部肿瘤、小细胞肺癌、膀胱癌。
10.根据权利要求9所述的用途，其中当所述癌症为急性淋巴细胞性白血病时，给予一定量的二氢叶酸还原酶的抑制剂，还给予一定量的亲脂性他汀类药物，其中所述一定量的二氢叶酸还原酶的抑制剂由1至3mg/m2肌体表面积构成，所述一定量的亲脂性他汀类药物由20至80mg/m2肌体表面积构成。
11.根据权利要求9所述的用途，其中当所述癌症为骨肉瘤时，给予一定量的二氢叶酸还原酶的抑制剂，还给予一定量的亲脂性他汀类药物，其中所述一定量的二氢叶酸还原酶的抑制剂由12至15g/m2肌体表面积构成，所述一定量的亲脂性他汀类药物由20至80mg/m2肌体表面积构成。
12.一种组合物，其由二氢叶酸还原酶的抑制剂、亲脂性他汀类药物以及赋形剂和/或药学上可接受的媒介物构成，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述二氢叶酸还原酶的抑制剂为甲氨蝶呤或其药学上可接受的盐。
14.根据权利要求12-13的任意一项所述的组合物，其用于口服给予。
15.根据权利要求14所述的组合物，其被配制成片剂的形式。
16.根据权利要求12-13的任意一项所述的组合物，其用于静脉内给予、肌内给予、经皮给予、直肠给予、通过腔内注射途径或通过吸入给予。
17.根据权利要求12-16的任意一项所述的组合物，其被配制成包含1mg至15g二氢叶酸还原酶的抑制剂和20-80mg亲脂性他汀类药物的剂量单位。
18.根据权利要求12-17的任意一项所述的组合物，其中所述亲脂性他汀类药物选自辛伐他汀,氟伐他汀,阿托伐他汀,洛伐他汀及其药学上可接受的盐。
19.一种试剂盒，其包含第一药物组合物、第二药物组合物以及说明书，用于在组合疗法中使用两种药物组合物以治疗或预防疾病复发，其中所述第一药物组合物包含二氢叶酸还原酶的抑制剂，所述二氢叶酸还原酶的抑制剂选自甲氨蝶呤、三甲曲沙和培美曲塞或其药学上可接受的盐，所述第二药物组合物包含亲脂性他汀类药物，所述说明书用于组合疗法中两种药物组合物的使用以治疗或预防疾病复发，所述疾病选自癌症、银屑病、银屑病关节炎、青少年多发性关节炎、类风湿性关节炎、Crohn疾病、多肌炎、皮肌炎和肉状瘤病。
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