WO2018096853A1 - 新規なペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステル、その製法、並びにエステルプロドラッグ含有医薬組成物 - Google Patents

Abstract

ペメトレキセドの経口投与を指向したメドキソミル及びヘミアセタール型エステル、それがプロドラッグとして有効であるか否かを検証するために不可欠なメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの製造方法の開発、及びペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグ含有医薬組成物の提供。　（ｉ）ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステル化合物、（ｉｉ）腸管吸収により原薬再生可能なペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグ含有医薬組成物、並びに（ｉｉｉ）Ｌ－グルタミン酸を出発原料として、そのカルボキシル基をメドキソミル及びヘミアセタール型エステル化した後、母骨格のペメトレキセド酸とカプリングさせることでペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグとする製造方法。

Description

新規なペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステル、その製法、並びにエステルプロドラッグ含有医薬組成物

　本発明は、在宅療法を志向した経口抗癌剤の開発に関し、特に、薬学分野のドラッグデリバリーシステム（「ＤＤＳ」と略すことあり。）に関する。

　詳しくは、本発明は、抗がん剤ペメトレキセドの経口投与化を指向したメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグ及びその製造方法、並びにそれのプロドラッグ含有医薬組成物に関する。より詳しくは、本発明は、ペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル、及びピボキシルエステル（以下、これらを「メドキソミル及びヘミアセタール型エステル」と称する）のプロドラッグとしての利用、並びにそれらエステルの製造方法に関する。

　ペメトレキセドは化学式（１）

で現される抗がん剤である。ペメトレキセドは図１に示す様に葉酸代謝に関連するジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）の阻害作用（非特許文献１及び２）のみならず、プリン合成に関連するグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ（ＧＡＲＦＴ）を阻害する（非特許文献３及び４）ことで主として腫瘍内でのＲＮＡ合成阻害作用を有し、更にペメトレキセド特有の性質であるピリミジン合成に関与するチミジル酸合成酵素（ＴＳ）を阻害する（非特許文献５及び６）ことにより腫瘍内でのＤＮＡ合成を阻害することが出来る。ペメトレキセドは、類似薬のメトトレキサート（化学式（２））：

にはない葉酸関連多酵素阻害薬（非特許文献１及び２）であることが最大の特徴である。このようにペメトレキセドは図１に示す様に、がん細胞内における３種の代謝酵素阻害作用を有し、現在、臨床において、悪性胸膜中皮腫、切除不能な進行・再発の非小細胞肺癌に用いられる点滴製剤である。２００８年９月、米国ＮＣＣＮ（米国総合がんセンターネットワーク）の肺癌診療ガイドラインの中に、非小細胞肺癌のファーストライン治療としてこのペメトレキセドとプラチナ製剤との併用療法が記された（非特許文献７）。

　本邦においても、非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に対し、カルボプラチンとペメトレキセドによる導入療法を行い、その後、ペメトレキセドによる維持療法を行うことで、全生存期間（ＯＳ）は２０．２カ月と良好であることが、市販後臨床試験として実施されたＪＡＣＡＬ試験（Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ａｌｉｍｔａ　ａｎｄ　Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ　ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　Ａｌｉｍｔａ）の１８カ月のフォローアップで明らかになった（非特許文献８）。エビデンスの蓄積と共に、非小細胞肺癌の寛解導入療法において、ペメトレキセドとカルボプラチンの点滴がファーストラインとなり、その後の地固め療法では、ゲフィチニブ（イレッサ；登録商標）の内服もしくはペメトレキセドの点滴が繁用されている。

　昨今の医療費の高騰にともない、癌治療においても在宅化学療法が求められるようになってきた。非小細胞肺癌の治療においてはゲフィチニブが内服で繁用されているが、同薬は、投与後８週間以内の急性肺障害・間質性肺炎（以下肺障害）の発症率は約５．８％（１９３例／３３２２例）、肺障害による死亡率は２．３％（７５例／３３２２例）であるなど肺障害が大きな安全性上のネックとなっている（非特許文献９及び１０）。現在、本邦に於いて非小細胞肺癌の内服薬はゲフィチニブを除いて存在せず、この副作用の多いゲフィチニブに替わる非小細胞肺癌の内服薬が求められている現状である。

　ところでカルボン酸部分は極性が高く薬物の吸収を妨げることが知られており、その吸収特性の改善にカルボン酸部分をメドキソミルエステル化する試みがなされている。化学式（３）：

は、アジサルタンメドキソミルの構造式を示すが、同薬は、極性基であるカルボキシル基の存在がその吸収特性を著しく低下させるために、カルボキシル基をメドキソミルエステル化することにより吸収性の向上を見ている。化学式（３）にはアジサルタンのメドキソミル(ｍｅｄｏｘｏｍｉｌ)基を枠内に示している。

　メドキソミルエステル化はアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（ＡＲＢと略すことあり。）においてオルメサルタンでも実施されており、オルメサルタンメドキソミルは化学式（４）：

で示すとおり、イミダゾール環の第５位のカルボキシル基がメドキソミルエステルとなっていて、内服すると消化管内でエステルが切れてカルボキシル基が遊離型となり、活性型のＡＲＢ、即ちオルメサルタンになって作用するように分子内設計されている。

　ペメトレキセドは化学式（１）：

に示す様に葉酸類似部分のＬ－グルタミン酸（カルボキシル基を２個有する）誘導体である。本発明者等は、経口投与可能なペメトレキセドを企図して２つのカルボキシル基に直接メドキソミルブロマイドでアシル反応を試みた結果、全く反応が進まないことを確認した。この理由は、詳細は不明であるが、一つには立体的要因からバルキーなメドキソミル基及びヘミアセタール基によるエステル化が進行しなかったものと考えられる。或いは、エステル化条件下に、メドキソミル基及びヘミアセタールエステル基の分解等の副反応により所望のエステル化が進行しなかったものとも考えられる。一方、ペメトレキセドの単純エステル基（例えば、エチルエステル基やメチルエステル基）は、本発明者等の検討に於いても、さしたる困難もなくペメトレキセドの２つのカルボキシル基に導入することが出来た。事実、ペメトレキセドのエチルエステル体やメチルエステル体については先行文献（特許文献１）が存在するが、メドキソミル及びヘミアセタール型エステル体を開示した先行文献は現在まで皆無である。上述の如く、直接合成が不可能なためと推察される。

　一方、ペメトレキセドの分子構成が、葉酸類似構造部分（４－［２－（２－アミノ－４、７－ジヒドロ－４－オキソ－１Ｈ－ピロロ［２、３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］安息香酸；以後、「ペメトレキセド酸」と略称する）とＬ－グルタミン酸とのカップリング体であることから、ペメトレキセド酸とグルタミン酸ジエチルエステルとの縮合反応によりペメトレキセド酸ジエチルエステルを合成した例が特許文献２（同１６頁のスキームＩＩ、及び同１７頁のスキームＩＩＩ）に開示されている。しかしながら、ここで得られたペメトレキセド酸ジエチルエステルは、このエステル体自体をプロドラッグの目的とするものではなく、加水分解後、ペメトレキセド２ナトリウム塩として注射製剤に用いることを目的とするものであり、経口製剤化を課題としたペメトレキセドエステルプロドラッグの製造を開示も示唆もしていない。また、前述のとおりエチルエステル等の単純エステルとは異なる立体的にバルキーなメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの直接合成が不首尾に終わったことから、グルタミン酸のメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの合成も困難であろうと推察された。

　この様に、メチルエステル体及びエチルエステル体のみが特許文献１及び２に記載されていると云う事実には、ペメトレキセドの経口製剤化を試みたが成功しなかったことを垣間見ることが出来る。更には、ペメトレキセドの経口製剤化という課題自体が有用な課題として認識されていなかったとも云える。

　一方、ペメトレキセドのエチルエステルやメチルエステルは、経口投与した場合に腸管吸収はされるものの、腸管内での酵素による加水分解は起こらず、活性体（又は、原薬）のペメトレキセドが再生されず、このためペメトレキセドの血中濃度が観察されないことを本発明者らは確認した。従って、ペメトレキセドのメドキソミルエステルがプロドラッグとして有効に作用するか否かを検証するためには、ペメトレキセドのメドキソミルエステルを製造しての経口投与実験が必須であるところ、前述のとおり、既存の直接エステル化方法ではメドキソミルエステルの製造が不可能であった。更に加えて、メドキソミルエステルに限らず、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル、及びピボキシルエステル等のヘミアセタール型エステルについても有効な製造方法が存在せず、ペメトレキセドの経口投与を指向したメドキソミル及びヘミアセタール型エステルがプロドラッグとして有効であるか否かを検証する術が無かった。

特許第５８２６３７１号公報 特表２００８－５４３９７３号公報

Ｃ．　Ｓｈｉｎ、　ＶＪ　Ｃｈｅｎ、　ＬＳ．　Ｇｏｓｓｅｔｔ、　ＷＣ．　ＭａｃＫｅｌｌａｒ、　ＬＬ．　Ｈａｂｅｃｋ　ｅｔ．　Ａｌ．、"ＬＹ２３１５１４、　ａ　ｐｙｒｒｏｌｏ［２、３－ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－ｂａｓｅｄ　ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ　ｔｈａｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｆｏｌａｔｅ－ｒｅｑｕｉｒｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅｓ"、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．５７（６）：ｐ１１１６－１１１２３　（１９９７）． Ｄｅｌｐｈｉｎｅ　Ｅｘｉｎｇｅｒ１、　Ｆｒａｎｃｏｉｓｅ　Ｅｘｉｎｇｅｒ２、　Ｂｅｒｔｒａｎｄ　Ｍｅｎｎｅｃｉｅｒ３、　Ｊｅａｎ－Ｍａｒｃ　Ｌｉｍａｃｈｅｒ１、　Ｐａｔｒｉｃｋ　Ｄｕｆｏｕｒ１、　Ｊｅａｎ－Ｅｍｍａｎｕｅｌ　Ｋｕｒｔ、　"Ｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔｅｄ　ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ　（Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）：　Ａ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｏｎ、　ｒｅｃｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　ｆｕｔｕｒｅ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ"、Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ　１、　３１５－３２２、　（２００３）． Ａｖｅｎｄａｎｏ、　Ｃａｒｍｅｎ；　Ｍｅｎｅｎｄｅｚ、　Ｊ．　Ｃａｒｌｏｓ　（Ａｐｒｉｌ　２００８）．　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇｓ．　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ．　ｐ． ３７．　ＩＳＢＮ ０－４４４－５２８２４－５． ＭｃＬｅｏｄ　ＨＬ、　Ｃａｓｓｉｄｙ　Ｊ、　Ｐｏｗｒｉｅ　ＲＨ、　Ｐｒｉｅｓｔ　ＤＧ、　Ｚｏｒｂａｓ　ＭＡ、　Ｓｙｎｏｌｄ　ＴＷ、　Ｓｈｉｂａｔａ　Ｓ、　Ｓｐｉｃｅｒ　Ｄ、　Ｂｉｓｓｅｔｔ　Ｄ、　Ｐｉｔｈａｖａｌａ　ＹＫ、　Ｃｏｌｌｉｅｒ　ＭＡ、　Ｐａｒａｄｉｓｏ　ＬＪ、　Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＪＤ　（Ｊｕｌｙ　２０００）．　"Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇｌｙｃｉｎａｍｉｄｅ　Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　Ｆｏｒｍｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ＡＧ２０３４"．　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ；　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｔｒｉａｌｓ．　６　（７）：　２６７７‐８４．　ＰＭＩＤ １０９１４７０９ Ｆｒｉｎｇｓ　Ｖ１、　ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｖｅｌｄｔ　ＡＡ、　Ｂｏｅｌｌａａｒｄ　Ｒ、　Ｈｅｒｄｅｒ　ＧＪ、　Ｇｉｏｖａｎｎｅｔｔｉ　Ｅ、　Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ　Ｒ、　Ｐｅｔｅｒｓ　ＧＪ、　Ｔｈｕｎｎｉｓｓｅｎ　Ｅ、　Ｈｏｅｋｓｔｒａ　ＯＳ、　Ｓｍｉｔ　ＥＦ、"Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：　ａ　ｐｉｌｏｔ　ｓｔｕｄｙ　ｗｉｔｈ　３’－ｄｅｏｘｙ－３’－［18Ｆ］ｆｌｕｏｒｏｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　ｐｏｓｉｔｒｏｎ　ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．"　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　Ｍａｙ　２４；８（５）：ｅ６３７０５（２０１３）． Ｋ　Ｍ　Ｌｉ１、　Ｌ　Ｐ　Ｒｉｖｏｒｙ　ａｎｄ　Ｓ　Ｊ　Ｃｌａｒｋｅ、　"Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ　ｉｎ　ａ　ｐｈａｓｅ　Ｉ／ＩＩ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｄｏｕｂｌｅｔ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｗｉｔｈ　ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ：　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｏｐｔｉｍｉｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ　ｓｃｈｅｄｕｌｅｓ"、Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　９７、　１０７１-１０７６　（２００７） ＮＣＣＮ　Ｖ２、（２００８）、"Ｐｒａｃｔｉｃｅ　Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、　Ｎｏｎ－Ｓｍａｌｌ　Ｃｅｌｌ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ"． 医学ライター・八倉巻尚子；「日経メディカルＯＮＣＯＬＯＧＹ、２０１２年８月１日（第10回日本臨床腫瘍学会学術集会、2012年7月26日～28日　大阪）」ｈｔｔｐ：／／ｍｅｄｉｃａｌ．ｎｉｋｋｅｉｂｐ．ｃｏ．ｊｐ／ｌｅａｆ／ａｌｌ／ｇａｋｋａｉ／ｓｐ／ｊｓｍｏ２０１２／２０１２０８／５２６１７７．ｈｔｍｌ 宮崎昌樹、岡本勇「肺癌：個別化医療への最先端研究：人種差、性差を考えたゲフィチニブ治療」、『分子呼吸器病』第２号、２００７年、　１５４－１５８頁、　ＩＳＳＮ　１３４２－４３６Ｘ。 厚生労働省医薬食品局　（２００４年１０月）．　"イレッサ錠２５０プロスペクティブ調査（特別調査）調査報告書について"．　医薬品・医療用具等安全性情報　２０６号。 Ｈｏｅｋｓｔｒａ　Ｍ１，　Ｈａａｇｓｍａ　Ｃ，　Ｎｅｅｆ　Ｃ，　Ｐｒｏｏｓｔ　Ｊ，　Ｋｎｕｉｆ　Ａ，ｖａｎ　ｄｅ　Ｌａａｒ　Ｍ．，"Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｈｉｇｈｅｒ　ｄｏｓｅ　ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｏｒａｌ　ａｎｄ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．"Ｊ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．　Ａｐｒ；３１（４）：６４５－８．（２００８）

　前述のとおり、従来はペメトレキセドの経口投与という課題自体が有用な課題として認識されていなかった可能性が高く、且つ、ペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル、及びピボキシルエステル等のメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの有効な製造方法自体が存在せず、ペメトレキセドの経口投与を指向したとしても、メドキソミル及びヘミアセタール型エステルがプロドラッグとして有効であるか否かを検証する術が無かった。

　従って、本発明の課題は、（ｉ）ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルがプロドラッグとして有効に作用するか否かを検証するために必須であるメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの製造方法の開発、（ｉｉ）そこで得られたペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの経口投与による活性体の血中濃度発現の検証を通してのプロドラッグとしての有効性の検証、及び、その結果として、（ｉｉｉ）ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグの提供である。

　前述の通り、本発明の課題は、ペメトレキセドの経口化を実現させることである。即ち、ペメトレキセドは、水溶性化合物のため注射剤としての使用しかできない。また、分子構造中にグアニジノ基と２つのカルボキシル基があるため高極性である。そこで、大腸における細胞膜透過性を向上させるためにペメトレキセド中の２つのカルボキシル基を腸管吸収の際に完全に加水分解され得るメドキソミル及びヘミアセタール型エステル体として低極性に変換することを着想した。即ち、この着想自体が本発明の最大のキーポイントである。

　当初は、ペメトレキセドの２つのカルボキシル基に直接メドキソミル及びヘミアセタール型エステルを導入してペメトレキセドジメドキソミル及びヘミアセタール型エステルを合成することを目的とした。しかしながら、ジエステル化に必要な試薬、量、条件を整えて反応を実施したが、前述の通り、反応は進行せず原料及び複雑な混合物を与えたのみであった。

　そこで、ペメトレキセドの分子構成が、葉酸類似構造部分（４－［２－（２－アミノ－４、７－ジヒドロ－４－オキソ－１Ｈ－ピロロ［２、３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］安息香酸；以後、「ペメトレキセド酸」と略称する）とＬ－グルタミン酸とのアミド縮合体であることに注目し、段階的合成法を用いることを発想し、達成の暁には課題解決に結び付くと考えた。この段階的合成法は、メチルエステルと云った単純エステルでは開示されていた（特許文献２）。しかしながら、バルキーで且つ酸・塩基雰囲気に敏感なメドキソミル基及びヘミアセタール型基のエステル化では、直接エステル化同様に初期のエステル化反応が進行しないのでは、との懸念が強かった。

　そこで本発明者等は、Ｌ－グルタミン酸のアミノ基を保護し、Ｎ－保護アミノ酸の２つのカルボキシル基にメドキソミル及びヘミアセタール型エステル基を導入して、Ｎ－保護グルタミン酸ジメドキソミル及びジヘミアセタール型エステルとし、続いて、アミノ基の脱保護、更にペメトレキセド酸との縮合（トリアジン、塩基など）によりペメトレキセドジメドキソミル及びジヘミアセタール型エステルの合成を行うという着想に至った。この方法が実現できれば、当初の問題点は解決され、目的物が合成されることになる。

　しかし、ほぼ同時に新たな課題が発生すると考えられた。この課題は、二次的なもので当初の課題が達成されて初めて出現する課題である。即ち、ペメトレキセドジメドキソミル及びジヘミアセタール型エステルは、原薬のペメトレキセドに比べ極性が低すぎる可能性がある。（カルボキシル基２つが一挙にエステル構造となり、極性の変化が激しい。これは、経口薬にする場合でも、ある程度の水溶性は必要であることを意味する）。そこで、この課題に対しては、ペメトレキセド構造中の１つのカルボキシル基のみをメドキソミル及びヘミアセタール型エステル化したペメトレキセド誘導体の合成を発想させるものである。ペメトレキセド誘導体にある程度の水溶性を持たせることで課題解決が図れる可能性がある。このようにして、ペメトレキセドモノメドキソミル及びモノヘミアセタール型エステルの合成の着想に至った。

　上記の様な発想でペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルを製造した例は現在まで知られていない。

　本発明で云う「ペメトレキセド酸」は化学式（ＶＩ）：

で表される。

　この着想を検証すべく、本発明者らは先ず、ペメトレキセドのモノメドキソミル及びモノヘミアセタール型エステルの製造方法を検討した。本発明で云うメドキソミル及びヘミアセタール型エステルとは、前述のとおり、メドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル、及びピボキシルエステルを指す。以下の説明では、各々に対応するメドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基及びピボキシル基を化学式中で総括的に「Ｒ」と表示するが、それらは以下に示すとおりである：

　その結果、驚くべきことに、
（１）化学式（Ｖ）：

（式中、Ｒはメドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基又はピボキシル基を表し、Ｒ^１は、Ｌ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基の保護基を表す）で表されるカルボキシル保護エステルであるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）と、
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）と、を脱水縮合して、化学式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｒ及びＲ^１は前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＶＩＩ）を製造する工程、及び
（２）得られたペメトレキセド－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＶＩＩ）を接触還元的に脱保護して、化学式（ＶＩＩＩ）：

（式中、Ｒは前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル（ＶＩＩＩ）を得る工程を含んでなる、ペメトレキセドのモノＲエステル（Ｒはメドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基又はピボキシル基を表す）の製造方法を見出し、本発明に到達した。

　ここで、上記で用いるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸エステル（Ｖ）は、Ｌ－グルタミン酸（Ｉ）の３つの反応性基（α位及びγ位のカルボキシル基並びに２位のアミノ基）を適切に保護しつつ選択的エステル化を行なうことにより、製造することに成功した。即ち、
（１）化学式（Ｉ）：

で表されるＬ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基をＲ^１で保護して、化学式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は、カルボキシル基の保護基を表す）で表されるＬ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩ）を得る工程、
（２）Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩ）のアミノ基をＲ^２で保護して、化学式（ＩＩＩ）：

（式中、Ｒ^２は、アミノ基の保護基を表す）で表されるアミノ保護・カルボキシル保護エステルであるＮ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩＩ）を得る工程、
（３）Ｎ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩＩ）と化学式（ＸＩ）：

（式中、Ｒは前記と同義であり、Ｘは脱離基（例えばハロゲン原子）を表す）で表される化合物とを反応させて、化学式（ＩＶ）：

で表されるＮ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＩＶ）を得る工程、及び、
（４）Ｎ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＩＶ）をＮ－脱保護して、化学式（Ｖ）：

で表されるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）を得る工程を含んでなる、α－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）を製造する方法を見出し、本発明に到達した。

　本発明者等は次に、ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型ジエステルの製造方法を検討した。その結果、驚くべきことに、化学式（ＸＩＩＩ）：

（式中、Ｒは、メドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基又はピボキシル基を表す）で表されるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）と
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）をＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）溶媒中、Ｎ－メチルモルホリン塩基中で２－クロロ－４、６－ジメトキシ－［１、３、５］トリアジンによるアミド化反応によりカップリングさせることにより、化学式（ＸＩＶ）：

（式中、Ｒは、前記と同義である）で表されるペメトレキセドのジＲエステル（ＸＩＶ）が製造できることを見出し、本発明に到達した。

　ここで、上記で用いるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）は、
（１）化学式（Ｉ）：

で表されるＬ－グルタミン酸のアミノ基をＲ^３で保護して、化学式（ＩＸ）：

（式中、Ｒ^３はアミノ基の保護基を表す）で表されるＮ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸（ＩＸ）を得る工程、
（２）得られたＮ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸（ＩＸ）と化学式（ＸＩ）：

（式中、Ｒは前記と同義である）で示される化合物との脱ＨＢｒエステル化によって、化学式（ＸＩＩ）：

（式中、Ｒ及びＲ^３は前記と同義である）で表されるα、γ－ジＲ－Ｎ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ）を得る工程、及び
（３）得られたα、γ－ジＲ－Ｎ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ）を脱保護して、
化学式（ＸＩＩＩ）：

で表されるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）を製造する方法を見出し、本発明に到達したものである。

　本発明は、好ましくは、ペメトレキセドのモノメドキソミルエステルの製造方法であって、
（１）化学式（Ｖ－１）：

で表される１－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸エステル（Ｖ－１）と、
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）を脱水縮合カップリングして、化学式（ＶＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＶＩＩ－１）を製造する工程、及び
（２）得られたペメトレキセド－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＶＩＩ－１）を接触還元的に脱ベンジルして、化学式（ＶＩＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル（ＶＩＩＩ－１）を得る工程を含んでなる、ペメトレキセドのモノメドキソミルエステルの製造方法である。

　ここで、上記で用いるα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸エステル（Ｖ－１）は、Ｌ－グルタミン酸（Ｉ）の３つの反応性基（α位及びγ位のカルボキシル基並びに２位のアミノ基）を適切に保護しつつ選択的エステル化を行なうことにより、製造することに成功した。即ち、本発明は、好ましくは、
（１）化学式（Ｉ）：

で表されるＬ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基をベンジル基で保護して、化学式（ＩＩ－１）：

で表されるＬ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩ－１）を得る工程、
（２）得られたＬ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩ－１）のアミノ基をｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基で保護して、化学式（ＩＩＩ－１）：

で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）を得る工程、
（３）得られたＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）と化学式（ＸＩ－１）：

で表されるメドキソミルブロミド（ＸＩ－１）を反応させて、化学式（ＩＶ－１）：

で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＩＶ－１）を得る工程、及び、
（４）得られたＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＩＶ－１）をＮ－脱保護して、化学式（Ｖ－１）：

で表されるα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）を得る工程を含んでなる、α－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸エステル（Ｖ－１）の製造方法である。

　本発明は好ましくは、ペメトレキセドのジメドキソミルエステルの製造方法であって、
化学式（ＸＩＩＩ－１）：

で表されるα、γ－ジメドキソミル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（ＸＩＩＩ－１）と
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）をアミド化反応によりカップリングさせて、化学式（ＸＩＶ－１）：

で表されるペメトレキセドのジメドキソミルエステル（ＸＩＶ－１）の製造方法である。

　ここで、上記で用いるα、γ－ジメドキソミル－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）は、
（１）化学式（Ｘ－１）：

で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸（Ｘ－１）と化学式（ＸＩ－１）：

で表されるメドキソミルブロミド（ＸＩ－１）との脱ＨＢｒエステル化によって、化学式：

で表されるα、γ－ジメドキソミル－Ｎ－Ｂｏｃ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ－１）を得る工程、及び
（２）得られたα、γ－ジメドキソミル－Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ－１）を脱Ｂｏｃして、
化学式（ＸＩＩＩ－１）：

で表されるα、γ－ジメドキソミル－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）を得る工程、を含んでなる、α、γ－ジメドキソミル－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）の製造方法である。

　かくして、本発明は、従来製造が不可能であったペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル及びピボキシルエステルと云ったメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの製造を始めて可能にしたのである。言い換えれば、本発明は、新規な化合物であるペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル及びピボキシルエステルと云った、ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルを始めて実現したのである。

　即ち、本発明は、ペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル及びピボキシルエステルと云った、ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルに係る新規化合物発明である。

　具体的には、本発明は、化学式（ＶＩＩＩ）：

（式中、Ｒはメドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基又はピボキシル基を表す）で表されるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル化合物の発明である。

　ペメトレキセド－α－Ｒモノエステル化合物を具体的に示せば、本発明は、
化学式（ＶＩＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル、
化学式（ＶＩＩＩ－２）：

で表されるペメトレキセド－α－シレキセチルモノエステル、
化学式（ＶＩＩＩ－３）：

で表されるペメトレキセド－α－プロキセチルモノエステル、及び
化学式（ＶＩＩＩ－４）：

で表されるペメトレキセド－α－ピボキシルモノエステルの化合物である。なお、ペメトレキセド－α－プロキセチルモノエステルやペメトレキセド－α－シレキセチルモノエステルは、それぞれのプロキセチルモノエステル基やシレキセチルモノエステル基が光学活性であることにより単一のジアステレオマーであってもよい。それぞれのプロキセチルモノエステル基やシレキセチルモノエステル基のヘミアセタール部位の非光学活性であることによってジアステレオマーの等量又は非等量の混合物であってもよい。

　本発明は、好ましくは、化学式（ＶＩＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル化合物の発明である。

　本発明は又、化学式（ＸＩＶ）：

（式中、Ｒはメドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基又はピボキシル基を表す）で表されるペメトレキセドのジＲエステル化合物の発明である。

　具体的には、本発明は、化学式（ＸＩＶ－１）：

で表されるペメトレキセドのジメドキソミルエステル、化学式（ＸＩＶ－２）：

で表されるペメトレキセドのジシレキセチルエステル、化学式（ＸＩＶ－３）：

で表されるペメトレキセドのジプロキセチルエステル、及び化学式（ＸＩＶ－４）： 

で表されるペメトレキセドのジピボキシルエステルの化合物発明である。

　本発明は好ましくは、化学式（ＸＩＶ－１）：

で表されるペメトレキセドのジメドキソミルエステル化合物の発明である。

　更には、本発明は、従来製造が不可能であったペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル及びピボキシルエステルと云ったメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの製造を初めて可能にしたことから、本発明のもう一つの課題であるペメトレキセドの経口投与化と云う観点から言えば、本発明はペメトレキセドのプロドラッグとしての医薬用途発明である。従来、肺癌の地固め療法に該当する経口剤は変異型ＥＧＦＲの肺癌患者を限定してゲフィチニブ（イレッサ）しか存在せず、ＥＧＦＲ野生型の肺癌患者への経口剤は存在していない現況であった。その為、野生型ＥＧＦＲ患者の地固め療法ではペメトレキセドの点滴を施行するしか術はなく、在宅癌化学療法を推進する上でも、また医療経費を節減するうえでもペメトレキセドの経口剤は医療サイドで強く求められていた現状である。このような状況下、本発明の実施例で述べる様に、これらの新規なメドキソミル及びヘミアセタール型エステル化合物は、ラットへの経口投与（６ｍｇ／ｋｇ）によるｉｎ－ｖｉｖｏ実験に於いて、腸管内で加水分解を受けて活性体（即ち、原薬）のペメトレキセドが再生され、投与後１時間でのペメトレキセドの血中濃度が２００ｎｇ／ｍｌに達し、更に投与量を１０倍にしたラットへの経口投与（６０ｍｇ／ｋｇ）では、その最高血中濃度も１０倍の２５００ nｇ/ｍＬ（臨床での有効濃度）を示すなど、吸収や加水分解プロセスにおいて飽和性を示すことなく血中濃度－投与量間に良好な直線性（線形性）が認められ、本プロドラッグの優れた性能を示すことが確認された。従って、本発明は、ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルのプロドラッグとしての医薬用途発明でもある。

　以上のとおり、本発明はＬ－グルタミン酸を出発原料として、そのカルボキシル基をメドキソミル及びヘミアセタール型エステル化した後、母骨格のペメトレキセド酸とカップリングさせることでペメトレキセドの経口化を志向したメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグ、及びその製造方法を提供する。ここで、本発明で言うペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグとは、ペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル、及びピボキシルエステルを指し、それらのモノエステル及びジエステルを含むプロドラッグである。より具体的には、本発明は、ペメトレキセドの経口投与を指向したメドキソミル及びヘミアセタール型エステルがプロドラッグとして有効であるか否かを検証するために不可欠なメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの製造方法の提供、及び、ペメトレキセドメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの腸管吸収によるペメトレキセド原薬（即ち、活性体）再生の有無の検証（即ち、ペメトレキセドの血中濃度の検証）を通してのペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグを提供するものである（図２参照）。

　即ち、本発明は、化学式（ＶＩＩＩ）：

（式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるペメトレキセド－１－Ｒモノエステルをプロドラッグとして含有する経口投与用の医薬組成物発明である。

　また、本発明は、化学式（ＶＩＩＩ－Ｎａ）：

（式中、Ｒは前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－ＲモノエステルＮａ塩をプロドラッグとして含有する注射用の医薬組成物発明である。

　本発明は、好ましくは、化学式（ＶＩＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステルをプロドラッグとして含有する経口投与用の医薬組成物発明である。

また、本発明は、化学式（ＶＩＩＩ－１－Ｎａ）：

（式中、Ｒは前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステルＮａ塩をプロドラッグとして含有する注射用の医薬組成物発明である。

　本発明は又、化学式（ＸＩＶ）：

（式中、Ｒはメドキソミル基、シレキセチル基、プロキセチル基又はピボキシル基を表す）で表されるペメトレキセドのジＲエステルをプロドラッグとして含有する経口投与用の医薬組成物発明である。

　本発明は好ましくは、化学式（ＸＩＶ－１）：

で表されるペメトレキセドのジメドキソミルエステルをプロドラッグとして含有する経口投与用の医薬組成物発明である。

　以下、本発明に係る新規なペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステル、その製造方法、及びそれを含有するペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物について、発明の具体的態様を説明する。

　即ち、［１］本発明の第一の態様は、化学式（ＶＩＩＩ）：

（式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるペメトレキセド－１－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩である。

　［２］本発明の更なる態様は、前記化学式（ＶＩＩＩ）が、化学式（ＶＩＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩である、［１］に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩である。

　［３］本発明の更なる態様は、前記薬学的に許容し得る塩が、ナトリウム塩である、［１］又は［２］に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩である。

　［４］本発明の更なる態様は、化学式（ＸＩＶ）：

（式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルである。

　［５］本発明の更なる態様は、前記化学式（ＸＩＶ）が、化学式（ＸＩＶ－１）：

で表されるペメトレキセドのα、γ－ジメドキソミルエステルである、［４］に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルである。

　［６］本発明の更なる態様は、［１］～［３］のいずれか一つに記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩を含有する、ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［７］本発明の更なる態様は、［４］～［５］のいずれか一つに記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルを含有する、ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［８］本発明の更なる態様は、経口投与用である、［６］又は［７］に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［９］本発明の更なる態様は、前記プロドラッグがペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの薬学的に許容し得る塩であり、注射投与用である、［６］に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１０］本発明の更なる態様は、前記塩がナトリウム塩である、［９］に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１１］本発明の更なる態様は、ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物が抗癌剤である、［６］～［１０］のいずれか１つに記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１２］本発明の更なる態様は、抗癌剤が悪性胸膜中皮腫又は非小細胞肺癌の治療用である、［１１］に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１３］本発明の更なる態様は、抗癌剤が大腸癌の治療用である、［１１］に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１４］本発明の更なる態様は、大腸癌の治療用であって、オキサリプラチンとの併用療法用である、［１３］に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１５］本発明の更なる態様は、ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物が抗リウマチ剤である、［６］～［８］のいずれか１つに記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物である。

　［１６］本発明の更なる態様は、ペメトレキセド－α－Ｒモノエステル（Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）の製造方法であって、
（１）化学式（Ｖ）：

（式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表し、Ｒ^１は、Ｌ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基の保護基を表す）で表されるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸エステル（Ｖ）と、
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）を脱水縮合カップリングして、化学式（ＶＩＩ）：

（式中、Ｒ及びＲ^１は前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＶＩＩ）を製造する工程、及び
（２）得られたペメトレキセド－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＶＩＩ）を接触還元的に脱保護して、化学式（ＶＩＩＩ）：

（式中、Ｒは前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル（ＶＩＩＩ）を得る工程を含んでなる、ペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法である。

　［１７］本発明の更なる態様は、［１６］に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
（１）化学式（Ｉ）：

で表されるＬ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基をＲ^１で保護して、化学式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^１は、カルボキシル基の保護基を表す）で表されるＬ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩ）を得る工程、
（２）Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩ）のアミノ基をＲ^２で保護して、化学式（ＩＩＩ）：

（式中、Ｒ^２は、アミノ基の保護基を表す）で表されるＮ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩＩ）を得る工程、
（３）Ｎ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩＩ）と化学式（ＸＩ）：

（式中、Ｒは前記と同義であり、Ｘは脱離基（例えばハロゲン原子）を表す）で表される化合物とを反応させて、化学式（ＩＶ）：

で表されるＮ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＩＶ）を得る工程、及び、
（４）Ｎ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＩＶ）をＮ－脱保護して、化学式（Ｖ）：

で表されるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）を得る工程を含んでなる製造方法によって得られたα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）を用いる、［１６］に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法である。

　［１８］本発明の更なる態様は、［１６］に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルが、ペメトレキセド－α－モノメドキソミルエステルであって、
（１）化学式（Ｖ－１）：

で表されるα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸エステルと、
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）を脱水縮合カップリングして、化学式（ＶＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＶＩＩ－１）を製造する工程、及び
（２）得られたペメトレキセド－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＶＩＩ－１）を接触還元的に脱ベンジルして、化学式（ＶＩＩＩ－１）：

で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル（ＶＩＩＩ－１）を得る工程を含んでなる、［１６］に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法である。

　［１９］本発明の更なる態様は、［１８］に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
（１）化学式（Ｉ）：

で表されるＬ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基をベンジル基で保護して、化学式（ＩＩ－１）：

で表されるＬ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩ－１）を得る工程、
（２）得られたＬ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩ－１）のアミノ基をｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基で保護して、化学式（ＩＩＩ－１）：

で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）を得る工程、
（３）得られたＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）と化学式（ＸＩ－１）：

で表されるメドキソミルブロミド（ＸＩ－１）を反応させて、化学式（ＩＶ－１）：

で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＩＶ－１）を得る工程、及び、
（４）得られたＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＩＶ－１）をＮ－脱保護して、化学式（Ｖ－１）：

で表されるα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）を得る工程を含んでなる、α－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）の製造方法、によって得られたα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）を用いる、［１６］に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法である。

　［２０］本発明の更なる態様は、ペメトレキセドのジＲエステル（Ｒは、メドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）の製造方法であって、
化学式（ＸＩＩＩ）：

（式中、Ｒは、メドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）と
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）をアミド化反応によりカップリングさせることにより、化学式（ＸＩＶ）：

（式中、Ｒは、前記と同義である）で表されるペメトレキセドのα、γ－ジＲエステル（ＸＩＶ）を得る、ペメトレキセドのα、γ－ジＲエステルの製造方法である。

　［２１］本発明の更なる態様は、［２０］に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
（１）化学式（Ｉ）：

で表されるＬ－グルタミン酸のアミノ基をＲ^３で保護して、化学式（ＩＸ）：

（式中、Ｒ^３はアミノ基の保護基を表す）で表されるＮ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸（ＩＸ）を得る工程、
（２）得られたＮ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸（ＩＸ）と化学式（ＸＩ）：

（式中、Ｒは前記と同義である）で示される化合物との脱ＨＢｒエステル化によって、化学式（ＸＩＩ）：

（式中、Ｒ及びＲ^３は前記と同義である）で表されるα、γ－ジＲ－Ｎ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ）を得る工程、及び
（３）得られたα、γ－ジＲ－Ｎ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ）を脱保護して、
化学式（ＸＩＩＩ）：

で表されるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）を製造する方法、によって得られたα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）を用いる、［２０］に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルの製造方法である。

　［２２］本発明の更なる態様は、［２０］に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルが、ペメトレキセド－α、γ－ジメドキソミルエステルであって、
化学式（ＸＩＩＩ－１）：

で表されるα、γ－ジメドキソミル－グルタミン酸ジエステル（ＸＩＩＩ－１）と
化学式（ＶＩ）：

で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）をアミド化反応によりカップリングさせて、化学式（ＸＩＶ－１）：

で表されるペメトレキセド－α、γ－ジメドキソミルエステル（ＸＩＶ－１）を得る工程を含んでなる、［２０］に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルの製造方法である。

　［２３］本発明の更なる態様は、［２２］に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
（１）化学式（Ｘ－１）：

で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸（Ｘ－１）と化学式（ＸＩ－１）：

で表されるメドキソミルブロミド（ＸＩ－１）との脱ＨＢｒエステル化によって、化学式：

で表されるα、γ－ジメドキソミル－Ｎ－Ｂｏｃ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ－１）を得る工程、及び
（２）得られたα、γ－ジメドキソミル－Ｎ－Ｂｏｃ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ－１）を脱Ｂｏｃして、
化学式（ＸＩＩＩ－１）：

で表される１、γ－ジメドキソミル－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）を得る工程、を含んでなる方法によって得られたα、γ－ジメドキソミル－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）を用いる、［２０］に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルの製造方法である。

　本発明は、ペメトレキセドの吸収特性を向上させたメドキソミル及びヘミアセタール型エステル体、好ましくは、ペメトレキセドモノメドキソミルエステルならびにペメトレキセドジメドキソミルエステルに係る発明であり、ペメトレキセドの経口剤に道を拓く合成体を提起したものとして特筆できる。また、モノエステル体又はジエステル体のプロドラッグを投与後の活性体であるペメトレキセドの血中濃度は、他の葉酸拮抗薬でリウマチに経口投与されるメトトレキサートを当量投与した場合よりも高い。したがって、高投与量で懸念される副作用が抑制し得ることから、低用量で抗リウマチ薬としても利用できることを示している。また、ペメトレキセドモノエステル体、例えばモノメドキソミルエステルは、遊離のカルボン酸をナトリウム塩化することにより水溶性となり、ペメトレキセドの注射性プロドラッグとしても使用でき、広範囲の応用性が考えられる。

　またペメトレキセドモノエステル体、例えばモノメドキソミルエステル経口薬を打錠後、セラセフェートのようなフタル酸系の高分子で被覆したものを作製して、経口投与すると大腸癌の発生部位であるＳ字結腸や下行結腸で吸収され、大腸癌細胞中で加水分解されて、点滴より高濃度で大腸癌にペメトレキセドを降り注ぎえる。ペメトレキセドがチミジル酸合成酵素も強く阻害するので腺癌である大腸癌にも有効である。実際にＺＥＲＯＸ療法は、フッ化ピリミジン系のカペシタビンとオキサリプラチンのレジメンで大腸癌に高い奏効率を示していることを考えあわせると、ペメトレキセドの経口剤（即ち、本発明のペメトレキセドメドキソミル又はヘミアセタール型エステル経口剤）とオキサリプラチンのレジメンは魅力的なものと考えられる。

　また、従来のペメトレキセドは点滴静脈投与であるためにリウマチに対する用法は省かれていたが、ペメトレキセドがＧＡＲＦＴ（プリン合成に関連するグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ）阻害によるプリン塩基生成阻害作用を示すので、経口投与剤（即ち、本発明のペメトレキセドメドキソミル又はヘミアセタール型エステル経口剤）の小用量使用において、メトトレキサートよりも効果的なリウマチの治療薬として臨床使用し得る点も特筆できる。

図１は、ペメトレキセドの作用部位を表す図である。 図２は、本発明を適用するペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステル基の特徴を表す図である。 図３は、本発明を適用するペメトレキセドの血中濃度測定に用いたペメトレキセドの検量線のグラフを示す図である。 図４は、本発明を適用するペメトレキセドモノメドキソミルエステル（分子量５４０．２）を経口投与した場合の活性体（ペメトレキセド）の血中濃度の経時変化曲線のグラフを示す図である。投与量は５ｍｇ／ｋｇである。投与後１時間で２４０ｎｇ／ｍｌと高い値を示した後に、徐々に減衰することがわかる。 図５は、本発明を適用するペメトレキセドジメドキソミルエステル（分子量６５２．２）を経口投与した場合の活性体（ペメトレキセド）の血中濃度の経時変化曲線のグラフを示す図である。投与量は６ｍｇ／ｋｇである。投与後１時間で２１０ｎｇ／ｍｌと高い値を示した後に、徐々に減衰することがわかる。 図６は、本発明を適用するペメトレキセドジメドキソミルエステル（分子量６５２．２）を経口投与した場合の活性体（ペメトレキセド）の血中濃度の経時変化曲線のグラフを示す図である。投与量は６０ｍｇ／ｋｇである。投与後１時間で２５００ｎｇ／ｍｌと高い値を示した後に、徐々に減衰することがわかる。 図７は、メトトレキサート２ｍｇ／ｋｇ経口投与時の血中濃度変化を表すグラフを示す図である（２０１１年２月改訂（第４版）インタビューフォーム第２０頁、から転載）。

　以下、本発明を実施する形態をより具体的に説明する。

　本発明に係るペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステル及びその製造方法を、まず代表的エステルであるペメトレキセドモノメドキソミルエステルとペメトレキセドジメドキソミルエステルについて、その構造を反応チャート（１）：

に示す。

　本発明に係るペメトレキセドモノメドキソミルエステルの合成ルートを単純化して具体例で示せば以下の様になる。即ち、ペメトレキセドのフラグメントであるＬ－グルタミン酸を合成原料として、反応チャート（２）：

に示す如く、Ｌ－グルタミン酸とベンジルアルコールを硫酸存在下、γ炭素に隣接するカルボキシル基と脱水縮合してベンジルエステルを一旦、作製し、その後グルタミン酸のアミノ基をＢｏｃで保護した後にメドキソミルブロマイドを作用させてα－炭素に隣接するカルボン酸のメドキソミルエステル化を行った。その後、ＣＨ_２Ｃｌ_２溶媒に於いて０℃条件下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）でＢｏｃを加水分解して除去後、ペメトレキセドの母核たるペメトレキセド酸とＤＭＦ中で塩基条件（Ｎ－メチルモルホリン）下、２－クロロ－４、６－ジメトキシ－［１、３、５］トリアジンを加えて１４時間室温反応して脱水縮合した後に、ベンジルエステル部分をパラジウムで接触還元することによりペメトレキセドモノメドキソミルエステルを得ることができる。

　一方、本発明に係るペメトレキセドジメドキソミルエステルの合成ルートを単純化して具体例で示せば以下の様になる。即ち、反応チャート（３）：

に示す如く、一旦、Ｌ－グルタミン酸をＢｏｃで保護した化合物をスタート化合物として作製し、その後、メドキソミルブロマイドで両カルボキシル基をアシル化し、その後、ＴＦＡ／ＣＨ_２Ｃｌ_２にて０℃でＢｏｃを加水分解後、反応物のアミノ基とペメトレキセド酸のカルボキシル基をＤＭＦ中で塩基条件（Ｎ－メチルモルホリン）下、２－クロロ－４、６－ジメトキシ－［１、３、５］トリアジンを加えて１４時間室温反応して脱水縮合した後に反応チャート（３）に示すペメレキセドジメドキソミルエステルを得ることができる。

　以下、本発明に係るペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルの製造方法を、前記反応チャート（２）及び（３）に沿って、より具体的に説明する。

　まずペメトレキセドヘミアセタールのメドキソミル及びヘミアセタール型モノエステルの製造方法につき、工程毎に説明する。

（１）Ｌ－グルタミン酸のγ位カルボキシル基の保護工程

　この工程で用いるγ位カルボキシル基のエステル形成による保護基としては、アルキル基、ベンジル基等の通常の保護基が使用し得るが、ベンジル基が好ましい。但し、α位カルボキシル基とは反応しない選択性に留意してエステル化条件を設定する必要がある。具体的には、硫酸等の酸触媒を用い、エステル結合を形成するアルコールを過剰量用いて溶媒とするのが最も適しており、通常室温から緩やかな加温条件で反応を行い、グルタミン酸の等電点ｐＨを考慮しながら炭酸水素ナトリウムなどの弱アルカリで処理する、などの方法をとることが好ましい。

（２）アミノ基の保護工程

　この工程でのアミノ基の保護基としては、通常αアミノ酸のアミノ基保護に使用されるｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基や９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基など、ウレタン型の保護基がラセミ化抑制の観点から好ましく使用し得る。アミノ基の保護反応は、通常、ＤＭＦ等の非プロトン性極性溶媒を用い、Ｂｏｃ－Ｃｌ及び（Ｂｏｃ）_２ＯなどのＢｏｃ化試薬を当量、あるいは小過剰量用いる。アミノ基の活性化は弱い塩基を当量あるいは小過剰量用いるが、無機塩基である炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム水溶液、有機塩基としてはトリエチルアミン、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）、ジイソプロピルエチルアミンなどを用いると良好な収率で反応が進行することが多い。反応温度は、試薬の混合時は、氷冷下あるいは、水冷下で行う。その後は、室温で撹拌することが好ましい。

（３）α位カルボキシル基のＲエステル化（Ｒ：メドキソミル、シレキセチル、プロキセチル、及びピボキシル）工程

　このエステル化工程は、前記（１）及び（２）によって、競合的なカルボキシル基及びアミノ基が保護されているため、通常のエステル化法が適用し得る。例えば、ＲＢｒによる脱ＨＢｒエステル化や、アルキルあるいはアリールスルホン酸エステル、又は、リン酸エステル、炭酸エステル、クロロアルキルアルキルあるいはアリールエーテル類、クロロアルキルアルキルカーボネート類等を用いるものである。反応条件としては、ＤＭＦ等の非プロトン性極性溶媒が一般的に挙げられるがハロアルカン類も溶媒として使用可能である。更には、エステルを形成するアルコールとＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド）などの縮合剤を塩基性条件下で混合することでも同一物質の合成が可能である。

（４）アミノ基脱保護工程

　アミノ基の脱保護工程は、保護基の種類によって脱保護の方法も異なる。Ｂｏｃ保護基の場合には、トリフルオロ酢酸や塩酸／酢酸エチル溶液などの強酸性条件下で脱保護することができ、Ｆｍｏｃ保護基の場合には、ピペリジン等の二級アミンによって脱保護でき、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）保護基の場合には、パラジウム触媒存在下、アミンを添加して脱保護する。Ｂｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で脱保護する方法が好ましい。脱保護の反応条件としては、トリフルオロ酢酸をハロアルカン溶媒中で氷冷下加え、その後室温で撹拌する、というのが一般的であるが、原料の溶解性によっては、ハロアルカン中、６Ｍ－ＨＣｌを加えてアミノ基の保護基を除去することも可能である。トリフルオロ酢酸及び６Ｍ－ＨＣｌはいずれも触媒量では、良い結果は得られず、当量、あるいは小過剰量の酸を用いるのが一般的である。反応時間については、通常１時間から４時間までで完了するが、基質の構造的特徴に影響されることがあり、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）などで反応の進行をモニターすることが好ましい。

（５）ペメトレキセド酸とグルタミン酸ジエステルのアミノ基とのアミド化カップリング工程

　この工程はペメトレキセド酸のカルボキシル基とグルタミン酸ジエステルのアミノ基との直接アミド化反応である。反応溶媒には非プロトン性極性溶媒のＤＭＦやＤＭＳＯを用い、Ｎ－メチルモルホリンやトリエチルアミン等の塩基存在下、２－クロロ－４、６－ジメトキシトリアジン（ＣＤＭＴ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、又は１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等の脱水縮合促進剤を用いて実施し得る。更には、塩基としては、有機塩基としてほかに、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＢＵなども使用できる。縮合剤は、常用されるＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）やＷＳＣＩ（水溶性カルボジイミド）なども使用可能である。本反応は、反応の進行に合わせて低温下で試薬の添加を行った後、室温で反応をＴＬＣ等でモニターしながら進めていくのが望ましい。

（６）接触還元法によるγ位カルボン酸エステルの脱保護工程によるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル取得工程

　この工程はパラジウムや白金等の触媒存在下、分子状水素による接触水素化分解反応による脱保護反応であり、γ位のエステル基が選択的に水素化分解を受けてカルボン酸が再生され、α位のエステル基は未反応で回収される優れた選択性を示す。反応は、白金炭素、あるいはパラジウム炭素（５％あるいは１０％パラジウム含有）等が使用可能である。また、状態としてもウエット、ドライ、いずれの触媒も有効に機能する。更に、反応溶媒は、プロトン性中性溶媒であるメタノール、エタノールなどが有効であるが、ＤＭＦ、テトラヒドロフラン、酢酸エチルなどの脂溶性溶媒も可能である。水素ガスの添加には、常圧のガスビュレットを使用する。加えて天然ゴム製のガスパック（風船）を用いる方法でも不飽和結合の還元を起こすことなく、脱ベンジル化を有効に進めることが可能である。

　この工程によって、本発明の目的化合物の一つであるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル（ＶＩＩＩ）が得られる。得られた生成物は、通常の分離精製方法（例えば、カラムクロマトグラフィ）によって精製後、^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲ、ＧＣ－ＭＡＳＳ、ＩＲ、ＵＶ、等での分析によって同定される。このペメトレキセド－１－Ｒモノエステル（ＶＩＩＩ）は、経口剤として有利に投与することができる。

（７）生成したペメトレキセド－α－Ｒモノエステル－γ－カルボン酸の中和によるナトリウム塩の製造工程

　注射剤への適用を考える場合には、ペメトレキセド－αＲモノエステル－γ－カルボン酸を苛性ソーダ水で中和してペメトレキセド－α－Ｒモノエステル－γ－カルボン酸ナトリウムとし、水性溶液として注射投与することもできる。

　次に、ペメトレキセドメドキソミル及びヘミアセタール型ジエステルの製造方法につき、工程毎に説明する。

　（１）Ｌ－グルタミン酸のアミノ基の保護工程

　この工程でのアミノ基の保護基としては、通常αアミノ酸のアミノ基保護に使用されるｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基や９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基など、ウレタン型の保護基がラセミ化抑制の観点から好ましく使用し得る。アミノ基の保護反応は、通常、ＤＭＦ等の非プロトン性極性溶媒を用い、Ｂｏｃ－Ｃｌ及び（Ｂｏｃ）_２ＯなどのＢｏｃ化試薬を当量、あるいは小過剰量用いる。アミノ基の活性化は弱い塩基を当量あるいは小過剰量用いるが、無機塩基である炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム水溶液、有機塩基としてはトリエチルアミン、ＤＢＵ、ジイソプロピルエチルアミンなどを用いると良好な収率で反応が進行することが多い。反応温度は、試薬の混合時は、氷冷下あるいは、水冷下で行う。その後は、室温で撹拌することが好ましい。

　（２）アミノ基保護Ｌ－グルタミン酸のα、γ－ジカルボキシル基のジＲエステル化（Ｒ：メドキソミル、シレキセチル、プロキセチル、及びピボキシル）工程

　このジエステル化工程は、α及びγ位のカルボキシル基の識別は不要であり、且つアミノ基は保護されているため、通常のエステル化法が適用し得る。例えば、２当量のＲＢｒを使用した脱ＨＢｒエステル化や、アルキルあるいはアリールスルホン酸エステル、又は、リン酸エステル、炭酸エステル、クロロアルキルアルキルあるいはアリールエーテル類、クロロアルキルアルキルカーボネート類等によるエステル化である。反応条件としては、ＤＭＦ等の非プロトン性極性溶媒が一般的に挙げられるがハロアルカン類も溶媒として使用可能である。更には、エステルを形成するアルコールとＤＣＣなどの縮合剤を塩基性条件下で混合することでも同一物質の合成が可能である。

　（３）アミノ基脱保護工程

　アミノ基の脱保護工程は、保護基の種類によって脱保護の方法も異なる。Ｂｏｃ保護基の場合には、トリフルオロ酢酸や塩酸／酢酸エチル溶液などの強酸性条件下で脱保護することができ、Ｆｍｏｃ保護基の場合には、ピペリジン等の二級アミンによって脱保護でき、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）保護基の場合には、パラジウム触媒存在下、アミンを添加して脱保護する。Ｂｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で脱保護する方法が好ましい。脱保護の反応条件としては、トリフルオロ酢酸をハロアルカン溶媒中で氷冷下加え、その後室温で撹拌する、というのが一般的であるが、原料の溶解性によっては、ハロアルカン中、６Ｍ－ＨＣｌを加えてアミノ基の保護基を除去することも可能である。トリフルオロ酢酸及び６Ｍ－ＨＣｌはいずれも触媒量では、良い結果は得られず、当量、あるいは小過剰量の酸を用いるのが一般的である。反応時間については、通常１時間から４時間までで完了するが、基質の構造的特徴に影響されることがあり、ＴＬＣなどで反応の進行をモニターすることが好ましい。

（４）ペメトレキセド酸とグルタミン酸ジエステルのアミノ基とのアミド化カップリング工程

　この工程はペメトレキセド酸のカルボキシル基とグルタミン酸ジエステルのアミノ基との直接アミド化反応である。反応溶媒には非プロトン性極性溶媒のＤＭＦやＤＭＳＯを用い、Ｎ－メチルモルホリンやトリエチルアミン等の塩基存在下、２－クロロ－４、６－ジメトキシトリアジン（ＣＤＭＴ）、Ｎ、Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、又は１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等の脱水縮合促進剤を用いて実施し得る。この工程によって、本発明の目的化合物であるペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルが得られる。

　この工程によって、本発明の目的化合物であるペメトレキセド－α、γ－ジＲエステル（ＸＩＶ）が得られる。得られた生成物は、通常の分離精製方法（例えば、カラムクロマトグラフィ）によって精製後、^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲ、ＧＣ－ＭＡＳＳ、ＩＲ、ＵＶ、等での分析によって同定される。このペメトレキセド－α、γ－ジＲエステル（ＸＩＶ）は、経口剤として有利に投与できる。

　以下、本発明に係るペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物について説明する。本発明に係るペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルは、具体的には、ペメトレキセドのメドキソミルエステル、シレキセチルエステル、プロキセチルエステル、及びピボキシルエステルであり、それらのモノエステル、モノエステルＮａ塩、及びジエステルを含む。これらは経口投与又は注射によりの腸管内等の生体内に取り込まれた後、酵素的加水分解を経て原薬のペメトレキセドを再生して、血漿中で活性体（ペメトレキセド）として作用するプロドラッグである。ペメトレキセドは多酵素阻害薬として作用し、葉酸代謝に関連するジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）阻害作用のみならずプリン合成に関連するグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ（ＧＡＲＦＴ）の阻害薬として腫瘍内でのＲＮＡ合成阻害作用により、更にペメトレキセド特有の性質であるピリミジン合成に関与するチミジル酸合成酵素（ＴＳ）を阻害することにより、腫瘍内でのＤＮＡ合成を阻害することが出来る。このように本発明に係るペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物は、活性体ペメトレキセドが持つがん細胞内における３種の代謝酵素阻害作用を有し、悪性胸膜中皮腫、及び切除不能な進行・再発の非小細胞肺癌に用いられる。

　またペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型モノエステル体、例えば、ペメトレキセドモノメドキソミルエステル経口薬を打錠後、セラセフェートのようなフタル酸系の高分子で被覆したものを作製して経口投与すると、大腸癌の発生部位であるＳ字結腸や下行結腸で吸収され、次いで大腸癌細胞中で加水分解されて、点滴より高濃度で大腸癌にペメトレキセドを降り注ぐことも可能である。ペメトレキセドがチミジル酸合成酵素をも強く阻害するので、腺癌である大腸癌にも有効である。

　また、両プロドラッグ投与後の活性体であるペメトレキセドの血中濃度は、他の葉酸拮抗薬でリウマチに経口投与されるメトトレキサートを当量投与した場合よりも高く、抗リウマチ薬としても使用できる。また、従来のペメトレキセドは点滴投与であるためにリウマチに対する用法は省かれていたが、本発明の経口剤ペメトレキセドプロドラッグは、ＧＡＲＦＴ阻害によるプリン塩基生成阻害作用を示すので、経口投与剤の小用量使用において、メトトレキサートよりも効果的なリウマチの治療薬として臨床使用できる可能性も高い。

　次に、プロドラッグ経口投与後の活性体である血中ペメトレキセド濃度の分析方法について説明する。以下、ペメトレキセドを「ＰＥＭ」と略すことあり。

　＜ラットへの投与方法＞
（Ａ）ラットに投与する薬物ＰＥＭ－モノメドキソミル２．５ｍｇ／ｍＬの作製方法
　　　（ペメトレキセドとして５ｍｇ／ｋｇ投与）
　　（ｉ）ＰＥＭ－モノメドキソミル（１５．７８ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのエタノールで溶解し、更に４．５ｍＬの生理食塩水で溶解する（これを「ＰＥＭ溶液」と総称する）。
　　（ｉｉ）ラットの重さを量る（例としてラットの重さを２５０ｇと仮定する）。
　　（ｉｉｉ）ラット２５０ｇの時、ＰＥＭ溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬをシリンジに取り投与する。
（Ｂ）ラットに投与する薬物ＰＥＭ－ジメドキソミル２．５ｍｇ／ｍＬの作製方法
　　　（ペメトレキセドとして５ｍｇ／ｋｇ投与）
　　（ｉ）ＰＥＭ－ジメドキソミル（１９．０５ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）を５ｍＬの生理食塩水で溶解し、更にツイーンを加え懸濁させる（これを「ＰＥＭ溶液」と総称する）。
　　（ｉｉ）ラットの重さを量る（例としてラットの重さを２５０ｇと仮定する）。
　　（ｉｉｉ）ラット２５０ｇの時、ＰＥＭ溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを、シリンジに取り投与する。
（Ｃ）ラットへのＰＥＭ溶液経口投与の仕方
　　（ｉ）ラットの重さを量る（例としてラットの重さを２５０ｇと仮定する）。
　　（ｉｉ）ラット２５０ｇの時、ＰＥＭ溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを、シリンジに採取する。
　　（ｉｉｉ）ラットに採取したＰＥＭ溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを、経口ゾンデを用いて経口投与する。
（Ｄ）ラットからの採血
　　（ｉ）ＰＥＭプロドラッグを経口投与後、０ｈ，０．５ｈ，１ｈ，３ｈ，４ｈ，６ｈ，及び２４ｈに頚静脈カテーテルで１ｍｌ採血し、速やかに血清を分離する。

　＜検量線作成方法＞
（ｉ）５、１０、５０、及び１００ｎｇ／ｍＬそれぞれの濃度のペメトレキセドを用意する。
（ｉｉ）前記各濃度のペメトレキセドを１００μＬずつチューブにとり、血漿を１００μＬずつ加える。内標としてメトトレキサート（５０ｎｇ／ｍｌ）を１００μＬずつ加え、ＬＣＭＳ（「液体クロマトグラフィー質量分析法」）用メタノールを７００μＬずつ添加する。

　＜ラットサンプルの測定方法＞
（ｉ）コントロール用に血清１００μＬとメタノール９００μＬを加えたものをコントロールとする。
（ｉｉ）ペメトレキセドプロドラッグを投与したラットの血漿１００μＬに内標のメトトレキサート（５０ｎｇ／ｍｌ）を１００μＬ添加後、８００μＬのメタノールを加え遠心分離機（１５０×１００ｒｐｍ，４℃，１０分間）にかけ、脱タンパクを行い、上澄みを新たに用意した１．５ｍｌチューブに取り、溶媒を蒸発乾固する。蒸発乾固後のサンプルにＬＣＭＳ用メタノール１００μＬを加えて溶解後、限外ろ過チューブに移し、遠心（１５０×１００ｒｐｍ，４℃，５分間）を行った後、ＬＣＭＳにより分析する。

　＜ＬＣＭＳ条件＞
　移動相Ａ：０．４％ギ酸水溶液　移動相Ｂ：アセトニトリル
Ａ：Ｂ＝７５：２５
ｃｏｌｕｍｎ　：Ｃ１８　（２５０ｍｍ×２ｍｍ、３μｍ）
ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐ．：５０℃
ペメトレキセド：　（［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４２８．１、４２８．１→２８１．０）、コリジョンエネルギー＝１８．２９２、６ｍｉｎ
メトトレキサート（［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４５５．１１→３０８．１）、コリジョンエネルギー＝１７．７、ＲＦ＝１０９．１８、４．８ｍｉｎ。

　次に、本発明のペメトレキセドプロドラッグ及び薬学的に許容される賦形剤を含有するプロドラッグ組成物について説明する。

　本発明のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物は、非毒性で、不活性の薬学的に許容しうる賦形剤、例えば固体状、半固体状もしくは液状の希釈剤、充填剤及び担体と混合することにより投与用として製剤化することができる。このような製剤の例は錠剤、トローチ剤、カプセル剤、顆粒剤、座剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の形態である。

　錠剤、トローチ剤、カプセル剤及び顆粒剤の場合、本発明のプロドラッグ組成物は慣用の賦形剤、例えば澱粉、ラクトース、スクロース、グルコースマンニトール等のような充填剤及び増量剤；カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等のような結合剤；炭酸カルシウム、重炭酸ナトリウム等のような崩壊剤；第４アンモニウム化合物等のような吸収促進剤；セチルアルコール、グリセリンモノステアレート等のような湿潤剤；カオリン、ベントナイト等のような吸着剤；タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール等のような潤滑剤又はこれらの混合物と混合することができる。錠剤、トローチ剤、カプセル剤、丸剤及び顆粒剤は慣用の被覆剤例えば何れかの不透明化剤（ｏｐａｃｉｆｉｅｒ）を用いて被覆することができる。

　経口投与用液剤又は乳剤は本発明のペメトレキセドプロドラッグの他に慣用の溶媒、可溶化剤及び乳化剤等、例えば水、エチルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングルコール、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、オリーブ油、脂肪エステル例えばグリセリン、ポリエチレングリコールもしくはソルビタン、又はこれらの混合物を含有してもよい。

　本発明のプロドラッグ組成物は、プロドラッグを約０．１～９９．５重量％、好ましくは０．５～９５重量％含有することができ、そして更に慣用的に許容しうる量の染料、保存剤、甘味剤及び添加剤を含んでもよい。

　本発明のプロドラッグ組成物は経口的に、又は経腸的に投与することができる。一般に、活性成分（プロドラッグが加水分解された後のペメトレキセドとして）を１回の又は分割した投与量で１日あたり約１００～２００ｍｇ／ｍ^２（体表面積）の量を間欠投与することが有利であることがわかっている。抗がん剤として投与する場合には約５００ｍｇ／ｍ^２（体表面積）、抗リウマチ薬としては、メトトレキサートの投与量と等しい１～２ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の投与量が好ましい。

　本発明の組成物は、単位剤形で与えるのが好ましい。本明細書で用いる「単位剤形（ｕｎｉｔ　ｄｏｓａｇｅ　ｆｏｒｍ）」は、良好な医療の実施にしたがい、１回の投与用量に於いてヒトに投与するのに適しているペメトレキセドの量を含有する本発明のプロドラッグ組成物である。これらの投与量は、臨床試験を経て詳細が決定される。

　本発明者らはペメトレキセドのフラグメントであるグルタミン酸をメドキソミル化（モノメドキソミル化、ジメドキソミル化）した後に、母核のペメトレキセド酸とＤＭＦ中で塩基条件（Ｎ－メチルモルホリン）下、２－クロロ－４、６－ジメトキシ－［１、３、５］トリアジンを加えて１４時間室温反応して脱水縮合した後、ペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタール型エステルプロドラッグ２種の合成に成功した。ペメトレキセドにメドキソミルブロマイドを直接反応してもメドキソミル化は進行しない。しかしながら、フラグメントのＬ－グルタミン酸にメドキソミルブロマイドを反応させてＬ－グルタミン酸のメドキソミルエステルとした後に、母核のペメトレキセド酸とカップリングして生成せしめる点に本発明の独創性がある。従来、ペメトレキセドのカルボン酸エステル化は、エチルエステルとメチルエステル体が知られているが、これらのエステル体は腸管移行中に加水分解はせず、経口ペメトレキセドにはなり得ない欠点がある。腸管内吸収後、腸管内で迅速に加水分解されるペメトレキセドのメドキソミル及びヘミアセタールエステル体はこれまでに成功例が無く、ＡＲＢ（アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬）のアジサルタンやオルメサルタンに使用されている環状ヘミアセタール体たるメドキソミル基を用いたエステル合成は極めて困難とされ、本発明以前には成功した例は無い。

　本発明の具体的態様を以下の実施例で説明するが、本発明はこれ等に限定されるものではない。

　［実施例１］
１－１．ペメトレキセドモノメドキソミル誘導体の合成
　反応試薬であるメドキソミルブロマイド（ＸＩ－１）は以下の方法により調製した。
（ｉ）４、５－ジメチル－１、３－ジオキソール－２－オンのモノブロム化

＜操作＞
　３００ｍＬナスフラスコに４，５－ジメチル－１，３－ジオキソール－２－オン、ブロム化剤のＮ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、及び開始剤のアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）を表１に示す量で入れ、四塩化炭素（ＣＣｌ_４）溶媒中で加熱還流を３５分間実施した。反応後、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でチェックし、反応液中の浮遊物質（フタルイミド）をろ過し、分液抽出した。重曹水溶液洗浄、ハイポ洗浄、及び水洗を経て硫酸マグネシウムで乾燥し、ひだ折りろ紙でろ過後に濃縮した。粗生成物１６．６ｇを得た。（未精製のまま次反応に使用した。）

　（ｉｉ）グルタミン酸γ-カルボキシル基のベンジルエステル化（フィシャーエステル化）

＜操作＞
　１００ｍＬナスフラスコにＬ－グルタミン酸、ベンジルアルコール、及び６０％硫酸を加えてオイルバス中７０℃で４５分間加熱した。反応液上部はジムロート冷却管で冷やした。白色懸濁液が透明になった後、回転子を取り除き減圧濃縮した。４０℃程度に加温した。粘性のある溶液の周りを氷冷して重曹水溶液を加えた。ＣＯ_２ガスの発生に留意した。白色沈殿を撹拌し続け、落ち着いたら吸引ろ過した。粗生成物（グルタミン酸γベンジルエステル（ＩＩ－１））１０．４ｇ（収率＜５０％）を水洗後、検体乾燥器を用いて乾燥した。次のステップに未精製のまま使用した。

　（ｉｉｉ）γ－ベンジルエステルＬ－グルタミン酸（ＩＩ－１）のＢｏｃ化

＜操作及び結果＞
　ナスフラスコに、グルタミン酸γベンジルエステル（ＩＩ－１）１０．３５ｇ（４３．７ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５０ｍＬ）及び水（３６ｍＬ）の懸濁溶液とし、氷冷した。トリエチルアミン（ＴＥＡ）（１２．１ｍＬ、８７．３ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、続いてジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ_２Ｏ）（１０ｇ、４６ｍｍｏｌ）を加える。室温で４時間撹拌した。ＤＭＦ及び水を減圧留去して濃縮し、酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）を使って分液ロートに移行し、１Ｍ－ＨＣｌを加えた。抽出後、水層は更にＡｃＯＥｔで２度抽出し、ＡｃＯＥｔ層を水洗、飽和食塩水洗、乾燥、濃縮を経て、残さ１５．０ｇを得た。カラム精製（ＣＨＣｌ_３：ＥｔＯＨ＝１０：１）により、１１．５ｇの目的物（ＩＩＩ－１）を得た。
＜分析結果＞
　^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：１．４３（ｓ、９Ｈ）、２．０３（ｍ、１Ｈ）、２．２４（ｍ、１Ｈ）、２．５１（ｍ、２Ｈ）、４．３３（ｂｓ、１Ｈ）、５．１２（ｓ、２Ｈ）、５．１７（ｂｓ、１Ｈ）、７．３５（ｍ、５Ｈ）．

　（ｉｖ）Ｂｏｃ－グルタミン酸γベンジルエステル（ＩＩＩ）のαメドキソミルエステル化

＜操作と結果＞
　１００　ｍＬナスフラスコにＢｏｃ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）（３．０ｇ、９ｍｍｏｌ）を入れ、ＤＭＦ（６ｍＬ）及びトリエチルアミン（ＴＥＡ）（１．８７ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）を加えた。一方、別のナスフラスコに４－ブロモメチル－５－メチル－［１、３］ジオキソール－２－オン（ＩＸ－１）（メドキソミル基の臭素化体）（３．０ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液を作る。氷冷下、グルタミン酸誘導体の溶液にメドキソミル基の臭素化体をカニュレーションにより加えた。室温で１時間撹拌し、原料消失後、氷冷下、水と酢酸エチルを加えて処理をした。水層を酢酸エチルで更に抽出し有機層を併せて水洗、飽和食塩水洗、乾燥、濃縮を行い、４．０５ｇの残渣を得た。カラム精製（ヘキサン：酢エチ＝２：１）の結果、目的物（ＩＶ－１）２．１ｇ（５２％）を得た。
＜分析結果＞
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）；δ：１．４３（ｓ、９Ｈ）、１．９８（ｍ、１Ｈ）、２．１８（ｍ、１Ｈ）、２．４５（ｍ、２Ｈ）、４．３３（ｂｓ、１Ｈ）、４．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ）、４．８８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ）、５．１２（ｓ、２Ｈ）、７．３５（ｍ、５Ｈ）．

（ｖ）Ｂｏｃ-グルタミン酸γベンジル-αメドキソミルエステル（ＩＶ－１）の脱Ｂｏｃ化（Ｖ－１の合成）

＜操作と結果＞
　Ｂｏｃ－グルタミン酸－γ－ベンジル－α－メドキソミルエステル（ＩＶ－１）（２．１１ｇ、４７ｍｍｏｌ）を１００ｍＬナスフラスコに入れ、塩化メチレン（３２ｍＬ）を加えた。氷冷下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）３．６ｍＬ（４７ｍｍｏｌ）を加えてそのまま５分間、０℃で撹拌し、その後室温で３時間撹拌を続けた。原料消失を確認してＣＨＣｌ_３を加えて水とともに分液ロートを用いて抽出した。ＣＨＣｌ_３層は、水洗、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で洗浄後、乾燥、濃縮を経て粗生成物（Ｖ－１）１．５６ｇを得た。未精製のまま次のステップに進んだ。

　（ｖｉ）ペメトレキセド酸（ＶＩ）と（Ｖ－１）のカップリング反応によるペメトレキセド酸γ－ベンジル－α－メドキソミルエステル（ＶＩＩ－１）の合成

＜操作と結果＞
　フラスコ（１）にペメトレキセド酸（ＶＩ）（１．６８ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＭＦ（８７ｍＬ）を加えた。氷冷下、Ｎ－メチルモルホリン（ＮＭＯ）（１．２５ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）と２－クロロ－４、６－ジメトキシ－［１、３、５］トリアジン（ＣＤＭＴ）（１．０ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）を加えて２０分間撹拌した。氷冷下、フラスコ（２）にグルタミン酸－γ－ベンジル－α－メドキソミルエステル（Ｖ－１）（１．５６ｇ、４．７ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（３ｍＬ）を加えて撹拌した。氷冷下のまま、（１）のフラスコに（２）の溶液を、パスツールピペットを使って加えた。その後、反応液を室温で１４時間撹拌した。原料消失を確認し、処理した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加えてＣＨＣｌ_３とともに抽出し、水洗、乾燥、濃縮を経て粗生成物２．９８ｇを得た。カラム精製（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝５：１）の結果、１．１２ｇ（３８％）黄色粉末の目的物（ＶＩＩ－１）を得た。
＜分析結果＞
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ）；δ２．１４（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｍ、１Ｈ）、２．３０（ｍ、１Ｈ）、２．５４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、３．００（ｍ、４Ｈ）、４．６２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．５、９．０Ｈｚ）、４．９７（ｓ、２Ｈ）、５．０９（ｓ、２Ｈ）、６．３１（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．３１（ｍ、５Ｈ）、７．７０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）．
ＨＲＭＳ　（ＦＡＢ^＋、Ｇｌｙ）　Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒＣ_３２Ｈ_３２Ｎ_５Ｏ_９：６３０．２２００　（ＭＨ^＋）．　Ｆｏｕｎｄ：６３０．２１９９．

　（ｖｉｉ）（ＶＩＩ－１）の接触還元による目的物、ペメトレキセド－α－メドキソミルエステル（ペメトレキセドモノメドキソミルエステル（ＶＩＩＩ－１）の合成

＜操作と結果＞
　ペメトレキセド－γ－ベンジル－α－メドキソミルエステル（ＶＩＩ－１）（３１５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をナスフラスコに入れ、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）を加えた。１０％Ｐｄ－Ｃ、１５０　ｍｇを加えて懸濁し、ガスビュレット装置をつけて水素添加を行った。３時間後、水素ガスの吸収が止まったところで、原料消失を確認し、自然ろ過により触媒を除去した。溶液を濃縮して再度ＭｅＯＨを適量加えて自然ろ過を再度行い、触媒を完全に除去した。濃縮後、残さ２３０ｍｇをカラム精製（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝２：１）し、１２０．７ｍｇ（４５％）の目的物（ＶＩＩＩ－１）を白い粉末として得た。
＜分析結果＞
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ）；δ：２．１０（ｍ、１Ｈ、Ｈ３）、２．１５（ｓ、３Ｈ、Ｈ１）、２．２４（ｍ、１Ｈ、Ｈ３）、２．４４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、Ｈ４）、３．００（ｍ、４Ｈ、Ｈ８）、４．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、９．０Ｈｚ、Ｈ５）、４．９８（ｓ、２Ｈ、Ｈ２）、６．３０（ｓ、１Ｈ、Ｈ９）、７．２７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ７）、７．７１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ６）．
ＨＲＭＳ　（ＦＡＢ^＋）　Ｃａｌｃｄ．Ｃ_２５Ｈ_２６Ｎ_５Ｏ_９：５４０．１７３１　（ＭＨ^＋）．　Ｆｏｕｎｄ：５４０．１７２９．

　＜合成物：ペメトレキセドモノメドキソミル（ＶＩＩＩ－１）のＮＭＲシグナルアサインメント＞

^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ）；δ：２．１０（ｍ、１Ｈ、Ｈ３）、２．１５（ｓ、３Ｈ、Ｈ１）、２．２４（ｍ、１Ｈ、Ｈ３）、２．４４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、Ｈ４）、３．００（ｍ、４Ｈ、Ｈ８）、４．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、９．０Ｈｚ、Ｈ５）、４．９８（ｓ、２Ｈ、Ｈ２）、６．３０（ｓ、１Ｈ、Ｈ９）、７．２７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ７）、７．７１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ６）．
ＨＲＭＳ　（ＦＡＢ^＋）Ｃａｌｃｄ．　Ｃ_２５Ｈ_２６Ｎ_５Ｏ_９：５４０．１７３１　（ＭＨ^＋）．Ｆｏｕｎｄ：５４０．１７２９．

　［実施例２］
　２－１．ペメトレキセドジメドキソミルの合成
（ｉ）４、５－ジメチル－１、３－ジオキソール－２－オンのモノブロム化

＜操作＞
　３００ｍＬナスフラスコに上記試薬を入れ、四塩化炭素（ＣＣｌ_４）中で加熱還流を３５分間実施した。反応後（薄層クロマトグラフで確認）、反応液中の浮遊物質（フタルイミド）をろ過し、分液抽出した。ＮａＨＣＯ_３水溶液洗浄、ハイポ洗浄、及び水洗を経てＭｇＳＯ_４で乾燥し、ヒダろ紙でろ過後濃縮して、粗生成物（ＸＩ－１）１６．６ｇを得た。未精製のまま次反応に使用した。

　（ｉｉ）Ｂｏｃ－Ｇｌｕ（Ｂｏｃ保護グルタミン酸）へのジメドキソミル基導入反応
　　　　（反応条件を表３に示す。）

＜操作＞
　２００ｍＬナスフラスコにＢｏｃ化グルタミン酸（Ｘ－１）、ＤＭＦ（１５ｍＬ）及びＥｔ_３Ｎを入れた。アルゴン雰囲気下で３０分撹拌後、４－（ブロモメチル）－５－メチル－１、３－ジオキソール－２－オン（ＸＩ－１）のＤＭＦ溶液（８ｍＬ）をカニュレーションにより滴下した。その後室温で１．５ｈ撹拌し、処理した。
処理法：氷冷下、水と酢酸エチルを加えて希釈し、分液した。水層は、酢酸エチルで２回抽出して有機層を合わせた。有機層は、水洗２回、１％チオ硫酸ナトリウム水溶液で１回、飽和食塩水で１回洗浄して、乾燥後ヒダ付きろ紙でろ過し、濃縮した。未精製化合物１２．９ｇを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィによる精製の結果、７．７ｇ（６３％）で目的物（ＸＩＩ－１）を得た。
＜分析＞
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）；δ：１．４３（ｓ、９Ｈ）、１．９４（ｍ、１Ｈ）、２．１７（ｓ、６Ｈ）、２．２０（ｍ、１Ｈ）、２．４５（ｍ、２Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、４．９０（ｍ、４Ｈ）、５．０３（ｍ、１Ｈ）
ＬＲＭＳ　（ＦＡＢ^＋、ｍ／ｚ）　４７２（ＭＨ^＋）、４１６、３７２、３０４、２６０、１９２．
ＨＲＭＳ　ｃａｌｃｄ．　ｆｏｒ　Ｃ_２０Ｈ_２６ＮＯ_１２：４７２．１４５５．　Ｆｏｕｎｄ：　４７２．１４５６．

　（ｉｉｉ）Ｂｏｃ基の除去（反応条件を表４に示す。）

＜操作＞
　Ｂｏｃ化グルタミン酸誘導体（ＸＩＩ－１）を５０ｍＬナスフラスコに入れ、ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液とした。氷冷下ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を加え、その後室温にして２ｈ撹拌した。反応後の処理法は次の通りである。
　回転子を取り除いて溶媒及びＴＦＡを減圧留去した。残さにＣＨＣｌ_３を加えて分液ロートに移した後、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で洗浄及び飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄の後、水洗して乾燥、脱水を経て減圧濃縮した。残渣（ＸＩＩＩ－１）６１８．５ｍｇ（収率：８３％）を得た。本化合物は精製することなく次ステップに使用した。
＜分析＞
^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）；δ：２．１９（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２、３５－２．６０（ｍ、３Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、３．５０（ｂｓ、２Ｈ）、３．７０（ｍ、４Ｈ）、４．４１（ｍ、１Ｈ）．

　（ｉｖ）ペメトレキセド酸（ＶＩ）とグルタミン酸ジメドキソミル誘導体（ＸＩＩＩ－１）のカップリング反応（反応条件を表５に示す。）

＜操作＞
　乾燥した３００ｍＬナスフラスコに（ＶＩ）のＤＭＦ溶液をつくり、アルゴン置換し、次いで氷冷下、（ａ）及び（ｂ）を加えて１ｈ撹拌した。
（ＸＩＩＩ－１）のＤＭＦ溶液に（ａ）を加えた氷冷溶液を上記の反応溶液に氷冷下、注入した。氷浴を外して室温にして１６ｈ撹拌した。反応処理は次のとおりである。
　飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液を加え、続いてＣＨＣｌ_３を加えて２層とし、分液ロートに移す。水槽については、ＣＨＣｌ_３を用いて追加で３回の抽出を行い、有機層は水洗後、乾燥、濃縮した。
　粗生成物を３．６７ｇ得る。カラムクロマトグラフィの後目的物（ＸＩＶ－１）６２２ｍｇ（Ｍｗ　６５１）を得た（黄色の粉末）。

　＜合成物：ペメトレキセドα、γ－ジメドキソミルエステル（ＸＩＶ－１）のＮＭＲシグナルアサイメント＞

^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ）；δ：２．１１（ｓ、３Ｈ、Ｈ１）、２．１７（ｓ、３Ｈ、Ｈ１）、２．３４（ｍ、２Ｈ、Ｈ４）、２．５０（ｍ、２Ｈ、Ｈ３）、３．００（ｍ、４Ｈ、Ｈ８）、４．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、９．０Ｈｚ、Ｈ５）、４．８８（ｓ、２Ｈ、Ｈ２）、５．００（ｓ、２Ｈ、Ｈ２）、６．３０（ｓ、１Ｈ、Ｈ９）、７．２８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ７）、７．７０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ６）．
ＨＲＭＳ　（ＦＡＢ^＋）　Ｃａｌｃｄ．　ｆｏｒ　Ｃ_３０Ｈ_３０Ｎ_５Ｏ_１２　（ＭＨ^＋）６５２．１８９１．　Ｆｏｕｎｄ：６５２．１８９６．

　［実施例３］プロドラッグ経口投与後の活性体である血中ペメトレキセド濃度
＜検量線作成方法＞
　（ｉ）　５、１０、５０、及び１００ｎｇ／ｍＬそれぞれの濃度のペメトレキセドを用意する。
　（ｉｉ）　（ｉ）で用意したペメトレキセドを１００μＬずつチューブにとり、血漿を１００μＬずつ加える。内標としてメトトレキサート（５０ｎｇ／ｍｌ）を１００μＬずつ加え、ＬＣＭＳ用メタノールを７００μＬずつ添加する。
＜ラットサンプルの測定＞
（ｉ）　コントロール用に血清１００μＬとメタノール９００μＬとを加えたものをコントロールとする。
（ｉｉ）　ペメトレキセドプロドラッグを投与したラットの血漿１００μＬに内標のメトトレキサート（５０ｎｇ／ｍｌ）を１００μＬ添加後、８００μＬのメタノールを加え除蛋白後、液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣＭＳ）でペメトレキセド濃度を測定する。
＜ＬＣＭＳ条件＞
移動相Ａ：０．４％ギ酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
Ａ：Ｂ＝７５：２５
カラム　：Ｃ１８　（２５０ｍｍ×２ｍｍ、　３μｍ）
カラム温度　５０℃
ペメトレキセド　（［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４２８．１、４２８．１→２８１．０）；衝突エネルギー＝１８．２９２、６ｍｉｎ.
メトトレキサート　（［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４５５．１１→３０８．１）；衝突エネルギー＝１７．７；ＲＦ＝１０９．１８、４．８ｍｉｎ.

＜ラットへの経口投与実験結果及び考察＞
　図３はペメトレキセドの検量線である。横軸はペメトレキセドの濃度を示し、縦軸は内標のメトトレキサートに対する換算係数を示す。
　図４は、５ｍｇ／ｋｇのペメトレキセドモノメドキソミルエステルを経口投与後の、活性体であるペメトレキセドの血中濃度経時変化曲線を示す。
　図５は、６ｍｇ／ｋｇのペメトレキセドジメドキソミルエステルを経口投与後の、活性体であるペメトレキセドの血中濃度経時変化曲線を示す。
　図６は、６０ｍｇ／ｋｇのペメトレキセドジメドキソミルエステルを経口投与後の、活性体であるペメトレキセドの血中濃度経時変化曲線を示す。
　図４及び図５の結果より、ペメトレキセドモノメドキソミルエステル及びペメトレキセドジメドキソミルエステル投与後の活性本体である血中ペメトレキセド濃度は全く有意差がなかった。なお、ペメトレキセドモノメドキソミルエステルは水溶性であるために溶液として投与したが、ペメトレキセドジメドキソミルエステルは０．５％　ツイーン２０懸濁液として投与した。本プロドラッグの投与で（ペメトレキセドモノメドキソミルエステルは５ｍｇ／ｋｇ、及びペメトレキセドジメドキソミルエステルは当量の６ｍｇ／ｋｇ）、最高血中濃度は２２０－２５０ｎｇ／ｍＬに達し、図７（２０１１　年２月改訂（第４版）インタビューフォーム２０頁参照）に示すメトトレキサート２ｍｇ／ｋｇを経口投与時の最高血中濃度の５７ｎｇ／ｍＬよりも高い値を示した。メトトレキサートの生物学的利用率（Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）は０．６と報告されており（非特許文献１１）、本プロドラッグの活性体のペメトレキセドへの変換率の高さを示しているものと考えられる。
　また、図５及び図６の結果より、ペメトレキセドジメドキソミルエステルの経口投与量を６ｍｇ／ｋｇから６０ｍｇ／ｋｇと１０倍に増加することにより、活性体ペメトレキセドの最高血中濃度は２２０－２５０ｎｇ／ｍＬから２．５μｇ／ｍｌへと、１０倍の増加を示した。換言すると、投与量と血中濃度の間に良好な線形性を認め、本発明化合物のペメトレキセドジメドキソミル体は非常に優れたプロドラッグであることが実証された。

　ペメトレキセドの吸収特性を向上させたメドキソミル及びヘミアセタール型エステルであるペメトレキセドモノＲエステル及びペメトレキセドジＲエステル（Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル、又はピボキシルを表す）を開発したことから、ペメトレキセドの経口剤に道を拓く合成体を提起したものとして特筆できる。また、これらのプロドラッグ投与後の活性体であるペメトレキセドの血中濃度は、他の葉酸拮抗薬でリウマチに経口投与されるメトトレキサートを当量投与した場合よりも高く、抗リウマチ薬としても使用できることを示している。また、ペメトレキセドモノメドキソミルエステルは遊離のカルボン酸をナトリウム塩化することにより水溶性となり、ペメトレキセドのプロドラッグとして注射薬としても使用でき、広範囲の応用性が考えられる。更に、ペメトレキセドモノエステル経口薬を打錠後、セラセフェートのようなフタル酸系の高分子で被覆したものを作製して、経口投与すると大腸癌の発生部位であるＳ字結腸や下行結腸で、吸収され、大腸癌細胞中で加水分解されて、点滴より高濃度で大腸癌にペメトレキセドを降り注ぐことも可能である。ペメトレキセドがチミジル酸合成酵素も強く阻害するので腺癌である大腸癌にも有効であることを示している。

Claims (23)

1. 　化学式（ＶＩＩＩ）：
   

   

   （式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩。
2. 　前記化学式（ＶＩＩＩ）が、化学式（ＶＩＩＩ－１）：
   

   

   で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩である、請求項１に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩。
3. 　前記薬学的に許容し得る塩が、ナトリウム塩である、請求項１又は２に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩。
4. 　化学式（ＸＩＶ）：
   

   

   （式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるペメトレキセド－α、γ－ジＲエステル。
5. 　前記化学式（ＸＩＶ）が、化学式（ＸＩＶ－１）：
   

   

   で表されるペメトレキセドのα、γ－ジメドキソミルエステルである、請求項４に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステル。
6. 　請求項１～３のいずれか一つに記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステル又はその薬学的に許容し得る塩をプロドラッグとして含有する、ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
7. 　請求項４～５のいずれか一つに記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルをプロドラッグとして含有する、ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
8. 　経口投与用である、請求項６又は７に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
9. 　前記プロドラッグがペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの薬学的に許容し得る塩であり、注射投与用である、請求項６に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
10. 　前記塩がナトリウム塩である、請求項９に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
11. 　ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物が抗癌剤である、請求項６～１０のいずれか１つに記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
12. 　抗癌剤が悪性胸膜中皮腫又は非小細胞肺癌の治療用である、請求項１１に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
13. 　抗癌剤が大腸癌の治療用である、請求項１１に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
14. 　大腸癌の治療用であって、オキサリプラチンとの併用療法用である、請求項１３に記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
15. 　ペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物が抗リウマチ剤である、請求項６～８のいずれか１つに記載のペメトレキセドプロドラッグ含有医薬組成物。
16. 　ペメトレキセド－α－Ｒモノエステル（Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）の製造方法であって、
    （１）化学式（Ｖ）：
    

    

    （式中、Ｒはメドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表し、Ｒ^１は、Ｌ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基の保護基を表す）で表されるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）と、
    化学式（ＶＩ）：
    

    

    で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）と、を脱水縮合カップリングして、化学式（ＶＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｒ及びＲ^１は前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＶＩＩ）を製造する工程、及び
    （２）得られたペメトレキセド－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＶＩＩ）を接触還元的に脱保護して、化学式（ＶＩＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｒは前記と同義である）で表されるペメトレキセド－α－Ｒモノエステル（ＶＩＩＩ）を得る工程を含んでなる、ペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法。
17. 　請求項１６に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
    （１）化学式（Ｉ）：
    

    

    で表されるＬ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基をＲ^１で保護して、化学式（ＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｒ^１は、カルボキシル基の保護基を表す）で表されるＬ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩ）を得る工程、
    （２）Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩ）のアミノ基をＲ^２で保護して、化学式（ＩＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｒ^２は、アミノ基の保護基を表す）で表されるＮ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩＩ）を得る工程、
    （３）Ｎ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－γ－Ｒ^１エステル（ＩＩＩ）と化学式（ＸＩ）：
    

    

    （式中、Ｒは前記と同義であり、Ｘは脱離基を表す）で表される化合物とを反応させて、化学式（ＩＶ）：
    

    

    で表されるＮ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＩＶ）を得る工程、及び、
    （４）Ｎ－Ｒ^２－Ｌ－グルタミン酸－α－Ｒ－γ－Ｒ^１エステル（ＩＶ）をＮ－脱保護して、化学式（Ｖ）：
    

    

    で表されるα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）を得る工程を含んでなる製造方法、によって得られたα－Ｒ－γ－Ｒ^１－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ）を用いる、請求項１６に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法。
18. 　請求項１６に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルが、ペメトレキセド－α－モノメドキソミルエステルであって、
    （１）化学式（Ｖ－１）：
    

    

    で表されるα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸エステルと、
    化学式（ＶＩ）：
    

    

    で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）を脱水縮合カップリングして、化学式（ＶＩＩ－１）：
    

    

    で表されるペメトレキセド－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＶＩＩ－１）を製造する工程、及び
    （２）得られたペメトレキセド－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＶＩＩ－１）を接触還元的に脱ベンジルして、化学式（ＶＩＩＩ－１）：
    

    

    で表されるペメトレキセド－α－メドキソミルモノエステル（ＶＩＩＩ－１）を得る工程を含んでなる、請求項１６に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法。
19. 　請求項１８に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
    （１）化学式（Ｉ）：
    

    

    で表されるＬ－グルタミン酸のγ位のカルボキシル基をベンジル基で保護して、化学式（ＩＩ－１）：
    

    

    で表されるＬ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩ－１）を得る工程、
    （２）得られたＬ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩ－１）のアミノ基をｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基で保護して、化学式（ＩＩＩ－１）：
    

    

    で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）を得る工程、
    （３）得られたＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－γ－ベンジルエステル（ＩＩＩ－１）と化学式（ＸＩ－１）：
    

    

    で表されるメドキソミルブロミド（ＸＩ－１）を反応させて、化学式（ＩＶ－１）：
    

    

    で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＩＶ－１）を得る工程、及び、
    （４）得られたＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸－α－メドキソミル－γ－ベンジルエステル（ＩＶ－１）をＮ－脱保護して、化学式（Ｖ－１）：
    

    

    で表されるα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）を得る工程を含んでなる、α－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）の製造方法、によって得られたα－メドキソミル－γ－ベンジル－Ｌ－グルタミン酸ジエステル（Ｖ－１）を用いる、請求項１６に記載のペメトレキセド－α－Ｒモノエステルの製造方法。
20. 　ペメトレキセドのジＲエステル（Ｒは、メドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）の製造方法であって、
    化学式（ＸＩＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｒは、メドキソミル、シレキセチル、プロキセチル又はピボキシルを表す）で表されるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）と
    化学式（ＶＩ）：
    

    

    で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）をアミド化反応によりカップリングさせることにより、化学式（ＸＩＶ）：
    

    

    （式中、Ｒは、前記と同義である）で表されるペメトレキセドのα、γ－ジＲエステル（ＸＩＶ）を得る、ペメトレキセドのα、γ－ジＲエステルの製造方法。
21. 　請求項２０に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
    （１）化学式（Ｉ）：
    

    

    で表されるＬ－グルタミン酸のアミノ基をＲ^３で保護して、化学式（ＩＸ）：
    

    

    （式中、Ｒ^３はアミノ基の保護基を表す）で表されるＮ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸（ＩＸ）を得る工程、
    （２）得られたＮ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸（ＩＸ）と化学式（ＸＩ）：
    

    

    （式中、Ｒは前記と同義である）で示される化合物との脱ＨＢｒエステル化によって、化学式（ＸＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｒ及びＲ^３は前記と同義である）で表されるα、γ－ジＲ－Ｎ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ）を得る工程、及び
    （３）得られたα、γ－ジＲ－Ｎ－Ｒ^３－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ）を脱保護して、
    化学式（ＸＩＩＩ）：
    

    

    で表されるα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）を製造する方法、によって得られたα、γ－ジＲ－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ）を用いる、請求項２０に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルの製造方法。
22. 　請求項２０に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルが、ペメトレキセド－α、γ－ジメドキソミルエステルであって、
    化学式（ＸＩＩＩ－１）：
    

    

    で表されるα、γ－ジメドキソミル－グルタミン酸ジエステル（ＸＩＩＩ－１）と
    化学式（ＶＩ）：
    

    

    で表されるペメトレキセド酸（ＶＩ）をアミド化反応によりカップリングさせて、化学式（ＸＩＶ－１）：
    

    

    で表されるペメトレキセド－α、γ－ジメドキソミルエステル（ＸＩＶ－１）を得る工程を含んでなる、請求項２０に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルの製造方法。
23. 　請求項２２に記載の製造方法であって、出発原料として以下の製造方法：
    （１）化学式（Ｘ－１）：
    

    

    で表されるＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－グルタミン酸（Ｘ－１）と化学式（ＸＩ－１）：
    

    

    で表されるメドキソミルブロミド（ＸＩ－１）との脱ＨＢｒエステル化によって、化学式：
    

    

    で表されるα、γ－ジメドキソミル－Ｎ－Ｂｏｃ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ－１）を得る工程、及び
    （２）得られたα、γ－ジメドキソミル－Ｎ－Ｂｏｃ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩ－１）を脱Ｂｏｃして、
    化学式（ＸＩＩＩ－１）：
    

    

    で表されるα、γ－ジメドキソミル－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）を得る工程、を含んでなる方法によって得られたα、γ－ジメドキソミル－Ｌ－グルタミン酸エステル（ＸＩＩＩ－１）を用いる、請求項２０に記載のペメトレキセド－α、γ－ジＲエステルの製造方法。
    
     

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