CN105651901A - 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒 - Google Patents

干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN105651901A
CN105651901A CN201610220689.8A CN201610220689A CN105651901A CN 105651901 A CN105651901 A CN 105651901A CN 201610220689 A CN201610220689 A CN 201610220689A CN 105651901 A CN105651901 A CN 105651901A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
vortex
detection
concentration
tandem mass
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610220689.8A
Other languages
English (en)
Inventor
何健
郭玉梅
宋晓涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING LAWKE CLINICAL LABORATORY Co Ltd
Original Assignee
BEIJING LAWKE CLINICAL LABORATORY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BEIJING LAWKE CLINICAL LABORATORY Co Ltd filed Critical BEIJING LAWKE CLINICAL LABORATORY Co Ltd
Priority to CN201610220689.8A priority Critical patent/CN105651901A/zh
Publication of CN105651901A publication Critical patent/CN105651901A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法，其前处理工艺，主要包括样本前处理、衍生、复溶工序，同时采用多反应监测MRM扫描方式，该方法实现干血片中25羟基维生素D的高通量液相色谱串联质谱检测，解决传统液相色谱串联质谱方法样本量需求量量大、采样、运输不方便的问题，通过对检测技术的改进，实现干血片中25羟基维生素D的检测，检测者可在家自行采集，样本需求量减小，采样、运输方便。

Description

干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及25羟基维生素D检测的技术领域，特别涉及一种改良的液相色谱串联质谱法检测25羟基维生素D。
背景技术
近十年来，大量研究显示维生素D在健康和疾病中发挥重要作用(HolickMF.DeficiencyofsunlightandvitaminD.BMJ2008；336:1318–9.HolickMF,ChenTC.VitaminDdeficiency:aworldwideproblemwithhealthconsequences.AmJClinNutr2008；87:1080S–6S.)。维生素D不仅与佝偻病、骨质疏松等密切相关，与癌症、高血压、糖尿病、多发性硬化症、抑郁等也存在关系(HolickMF.VitaminDdeficiency.NEnglJMed2007；357:266–81.)。研究显示幼年时期维生素D水平与童年晚期或者成年时期的许多紊乱疾病存在联系(McGrathJ.Does‘imprinting’withlowprenatalvitaminDcontributetotheriskofvariousadultdisorders？MedHypotheses2001；56:367–71.)，例如研究显示，胎儿期低维生素D水平不仅与新生儿股骨长度有关(MorleyR,CarlinJB,PascoJA,WarkJD.Maternal25-hydroxyvitaminDandparathyroidhormoneconcentrationsandoffspringbirthsize.JClinEndocrinolMetab2006；91:906–12.)，还会在9岁时降低骨密度(JavaidMK,CrozierSR,HarveyNC,etal.MaternalvitaminDstatusduringpregnancyandchildhoodbonemassatage9years:alongitudinalstudy.Lancet2006；367:36–43.)。鉴于维生素D水平与健康息息相关，其水平的评估也越来越引起关注。25羟基维生素D是维生素D的稳定代谢物，能够准确评估维生素D的水平。传统的维生素D检测方法是一些放射免疫的方法，由于存在蛋白交叉反应，定量不准确。有文献报道维生素D2和D3这两种形式的维生素D在生物活性和生物利用率上可能具有差异(Armasetc,(2004)J.Clin.Endocrinol.Metab.89:5387-5391)，而传统的免疫方法不能区分维生素D2和D3。现在越来越多的维生素D检测采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的方法，该方法可以同时定量25羟基维生素D2和25羟基维生素D3，评估体内维生素D2和D3的水平(AsukaMochizukl,YoshioKodera,TatsuyaSaito,etal.Preanalyticalevaluationofserum25-hydroxyvitaminD3and25-hydroxyvitaminD2measurementsusingLC–MS/MS.ClinicaChimicaActa420(2013)114–120)，并且方法专属性和灵敏度性高。传统的25羟基维生素D检测方法有放射免疫法、竞争蛋白结合法、高效液相色谱法等，但是主要存在如下问题：第一、由于25羟基维生素D在人体内主要与血清结合蛋白DBP结合，且人体内存在大量的高亲和力结合蛋白，因此检测存在严重的基质干扰。而传统的放射免疫法和竞争蛋白结合法，不能有效祛除基质干扰；第二，现有检测技术，前处理复杂、分析时间长，方法特异性差；第三，不能同时准确定量25羟基维生素D2和25羟基维生素D3的含量，无法给出准确的25羟基维生素D的含量；第四，整个检测过程时间长、通量低。本发明对25羟基维生素D检测方法进行改良，前处理更加简单、方便，仅仅需要一步溶剂处理过程，达到蛋白沉淀和样本萃取双重效果，时间大大缩短。衍生步骤，显著的提高了样本检测的灵敏度，可以将传统方法几百微升的样本量减少到几微升。
本申请检测的样本是干血片样本，可以居家采样，不用专业人员采样，样本量少，常温保存和运输。不像常规的VD检测，需要到医疗机构，有专业人员采样，而且样本量大，样本需要专业人员离心处理，并冷冻保存和运输。
发明内容
本发明的目的是解决现有25羟基维生素D检测方法技术中存在的部分问题，提供一种干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法，包括如下步骤：
(1)样本前处理：用3/16打孔器打一个血斑样本到含内标溶液10μl的第一离心管中，加入500μl丙酮，超声提取30min后，2500rpm涡旋30min；将提取液转移到第二离心管中，60℃吹干；
衍生：将100μl衍生剂加入到吹干后的残渣中，室温下反应1h后加入80μl乙醇，涡旋5min，60℃吹干；
复溶：将50μl80％甲醇加入衍生吹干后的残渣中进行复溶，涡旋5min，13000rpm离心3min，取上层清液转移到内插管中，进样分析；
(2)检测方法为液相色谱串联质谱法，其中采用的是多反应监测MRM扫描方式，所述色谱条件如下：
流动相C为纯甲醇，流动相D为纯水，柱温30℃，检测时间为5min，进样量为20μl；
采用梯度洗脱方式，洗脱参数见表1；
表1为梯度洗脱参数
25羟基维生素D3衍生物的保留时间为3.6min；
25羟基维生素D2衍生物的保留时间为3.8min；
所述多反应监测MRM质谱参数见表2，
表2为质谱参数
优选地，所述质谱条件还包括正离子模式下，采用APCI离子源，检测离子对m/z分别是：25-OHD3-PTAD558.4→298.2、25-OHD2-PTAD570.4→298.2、内标564.4→298.2，离子源位置为2.0；气帘气(CUR)为10，碰撞气(CAD)为6，离子喷雾电流(NC)为4，温度为600℃，离子源气流(GS1)为60。
优选地，所述内标溶液浓度为50ng/ml。
优选地，所述衍生剂为4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮，浓度为200μg/ml。
优选地，所述涡旋采用涡旋混匀器。
优选地，所述涡旋混匀器的转速为2500rpm。
优选地，所述血斑样本包括干血斑标准曲线样本、质控干血斑样本和需要检测的血斑样本。
优选地，所述干血斑标准曲线样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与4μl、10μl、20μl、50μl、100μl、200μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得2-100ng/ml干血斑标准曲线样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。
优选地，所述质控干血斑样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与16μl、40μl、80μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得8ng/ml(Q1)、20ng/ml(Q2)、40ng/ml(Q3)质控干血斑样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。
优选地，所述处理过的全血通过将全血离心，去除上层血浆，将血细胞用0.9％生理盐水洗涤3次后，与生理盐水1:1混匀即得。
本发明的另一方面是通过以下方案实现的：
干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测的试剂盒，所述试剂盒包含以下溶液：
(1)洗脱液：
洗脱液C：甲醇，纯度为100％；
洗脱液D：纯水；
(2)标准曲线干血片样品：含25羟基维生素D2，25羟基维生素D3的干血片，浓度为0-100ng/ml；
(3)内标溶液：含有d6-25羟基维生素D3的甲醇溶液；
(4)萃取剂：丙酮，纯度为100％；
(5)衍生液：200μg/ml的4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)；
(6)终止液：乙醇，纯度为100％；
(7)复溶液：80％的甲醇；
(8)质控品干血片样品：含有25羟基维生素D2，25羟基维生素D3的干血片样品，浓度分别为QC1：8ng/ml；QC2：20ng/ml；QC3：40ng/ml。
本发明的有益效果：通过对前处理方法的改良，前处理更加简单、快捷，可实现批量处理；同时APCI为大气压力化学电离源，样品先形成雾，然后电晕放电针对其放电，在高压电弧中，样品被电离，然后去溶剂化形成离子，最后检测，对极性小的样品效果较好，大大提高了检测信号的灵敏度；方法学考察结果显示，该方法精密度、准确度、稳定性均满足定量分析要求；柱温为30℃，接近于常温，有利于被检测化合物的稳定，申请人检测的化合物已经是经过衍生后的，这个温度能减少降解，提高检测准确度。
附图说明
图1：标准品中25羟基维生素D3、D2及内标衍生化后总离子流色谱图；
图2：干血片样品中25羟基维生素D3、D2及内标衍生化后总离子流色谱图。
具体实施方式
为了更好地说明本发明，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
一种干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法，包括如下步骤：
(1)样本前处理：用3/16打孔器打一个血斑样本到含内标溶液10μl的第一离心管中，加入500μl丙酮，超声提取30min后，以转速2500rpm涡旋30min；将提取液转移到第二离心管中，60℃吹干；
衍生：将100μl衍生剂加入到吹干后的残渣中，室温下反应1h后加入80μl乙醇，涡旋5min，60℃吹干；
复溶：将50μl80％甲醇加入衍生吹干后的残渣中进行复溶，涡旋5min，13000rpm离心3min，取上层清液转移到内插管中，进样分析；
(2)检测方法为液相色谱串联质谱法，其中采用的是多反应监测MRM扫描方式，所述色谱条件如下：
流动相C为纯甲醇，流动相D为纯水，柱温30℃，检测时间为5min，进样量为20μl；
采用梯度洗脱方式，洗脱参数见表1；
表1为梯度洗脱参数
25羟基维生素D3衍生物的保留时间为3.6min；
25羟基维生素D2衍生物的保留时间为3.8min；
所述多反应监测MRM质谱参数见表2，
表2为质谱参数
所述内标为25-OHD3-26,26,26,27,27,27-d6。
所述质谱条件还包括正离子模式下，采用APCI离子源，检测离子对m/z分别是：25-OHD3-PTAD558.4→298.2、25-OHD2-PTAD570.4→298.2、内标564.4→298.2，离子源位置为2.0；气帘气(CUR)为10，碰撞气(CAD)为6，离子喷雾电流(NC)为4，温度为600℃，离子源气流(GS1)为60。，所述内标溶液浓度为50ng/ml。所述样本前处理中的衍生包括5min涡旋处理。所述衍生剂为4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮，浓度为200μg/ml。所述涡旋采用涡旋混匀器。所述涡旋混匀器的转速为2500rpm。所述血斑样本包括干血斑标准曲线样本、质控干血斑样本和需要检测的血斑样本。所述干血斑标准曲线样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与4μl、10μl、20μl、50μl、100μl、200μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得2-100ng/ml干血斑标准曲线样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。所述质控干血斑样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与16μl、40μl、80μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得8ng/ml(Q1)、20ng/ml(Q2)、40ng/ml(Q3)质控干血斑样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。所述处理过的全血通过将全血离心，去除上层血浆，将血细胞用0.9％生理盐水洗涤3次后，与生理盐水1:1混匀即得。
干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测的试剂盒，所述试剂盒包含以下组分：
(1)洗脱液：
洗脱液C：甲醇，纯度为100％；
洗脱液D：纯水；
(2)标准曲线干血片样品：含25羟基维生素D2，25羟基维生素D3的干血片，浓度为0-100ng/ml；
(3)内标溶液：含有d6-25羟基维生素D3的甲醇溶液；
(4)萃取剂：丙酮，纯度为100％；
(5)衍生液：200μg/ml的4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)；
(6)终止液：乙醇，纯度为100％；
(7)复溶液：80％的甲醇；
(8)质控品干血片样品：含有25羟基维生素D2，25羟基维生素D3的干血片样品，浓度分别为QC1：8ng/ml；QC2：20ng/ml；QC3：40ng/ml；
所述试剂盒的组分如下表：
具体实施例
1、全血基质制备
将全血离心，去除上层血浆，留血细胞待用。将血细胞用0.9％生理盐水洗涤3次后，与生理盐水1:1混匀即得处理过的全血。
干血斑标准曲线样本及质控干血斑样本(QC血片)制备
所述干血斑标准曲线样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与4μl、10μl、20μl、50μl、100μl、200μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得2-100ng/ml干血斑标准曲线样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。
所述质控干血斑样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与16μl、40μl、80μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得8ng/ml(Q1)、20ng/ml(Q2)、40ng/ml(Q3)质控干血斑样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。Q1、Q2、Q3，是三个浓度不同的质控品，分别是低、中、高浓度的质控品。
2、样本前处理
萃取：用3/16打孔器打一个血斑样本到含内标溶液(10μl，50ng/ml)的2ml离心管中，加入500μl丙酮，超声提取30min后，以转速2500rpm在涡旋混匀器中涡旋30min。将提取液转移到2ml离心管中，60℃吹干。
衍生：将100μl衍生剂加入到吹干后的残渣中，室温下反应1h(含5min涡旋)后，加入80μl乙醇，涡旋5min，60℃吹干。
复溶：50μl80％甲醇复溶，以转速2500rpm在涡旋混匀器中涡旋5min，以转速13000rpm离心3min，取上层清液转移到内插管中，进样分析。
3、色谱条件
流动相：C相为纯甲醇—D相为纯水，柱温30℃，检测时间5min，进样量20μl。
表1洗脱梯度
4、质谱条件
正离子模式下，采用APCI离子源，MRM检测方式检测，检测离子对(m/z)分别是：25-OHD3-PTAD558.4→298.2、25-OHD2-PTAD570.4→298.2、内标564.4→298.2，离子源位置为2.0。气帘气(CUR)为10，碰撞气(CAD)为6，离子喷雾电流(NC)为4，温度为600℃，离子源气流(GS1)为60。聚焦电势(DP)、入口电势(EP)、碰撞能量(CE)、碰撞室出口(CXP)电势见表2。
表2质谱相关参数设置
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。

Claims (10)

1.干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)样本前处理：用3/16打孔器打一个血斑样本到含内标溶液10μl的第一离心管中，加入500μl丙酮，超声提取30min后，涡旋30min得到提取液；将提取液转移到第二离心管中，60℃吹干；
衍生：将100μl衍生剂加入到吹干后的残渣中，室温下反应1小时后加入80μl乙醇，涡旋5min，60℃吹干；
复溶：将50μl80％甲醇加入衍生吹干后的残渣中进行复溶，涡旋5min，以13000rpm的转速离心3min，取上层清液转移到内插管中，进样分析；
(2)采用高效液相色谱串联质谱技术检测经上述处理的干血片样品中25羟基维生素D，其中采用的是多反应监测MRM扫描方式，所述色谱条件如下：
流动相C为纯甲醇，流动相D为纯水，柱温30℃，检测时间为5min，进样量为20μl；
采用梯度洗脱方式，洗脱参数见表1；
表1为梯度洗脱参数
25羟基维生素D3衍生物的保留时间为3.6min；
25羟基维生素D2衍生物的保留时间为3.8min；
所述多反应监测MRM质谱参数见表2，
表2为质谱参数
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱条件还包括正离子模式下，采用APCI离子源，检测离子对m/z分别是：25-OHD3-PTAD558.4→298.2、25-OHD2-PTAD570.4→298.2、内标564.4→298.2，离子源位置为2.0；气帘气(CUR)为10，碰撞气(CAD)为6，离子喷雾电流(NC)为4，温度为600℃，离子源气流(GS1)为60。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标溶液浓度为50ng/ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生剂为4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮，浓度为200μg/ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述涡旋采用涡旋混匀器。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述涡旋混匀器的转速为2500rpm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血斑样本包括干血斑标准曲线样本、质控干血斑样本和需要检测的血斑样本。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述干血斑标准曲线样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与4μl、10μl、20μl、50μl、100μl、200μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得2-100ng/ml干血斑标准曲线样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述质控干血斑样本的制备：取2ml处理过的全血，分别与16μl、40μl、80μl浓度为1μg/ml的25-OHD混匀，即得8ng/ml(Q1)、20ng/ml(Q2)、40ng/ml(Q3)质控干血斑样本，分别取75μl制备好的上述样本滴到903滤纸上晾干即得；
所述处理过的全血通过将全血离心，去除上层血浆，将血细胞用0.9％生理盐水洗涤3次后，与生理盐水1:1混匀即得。
10.干血片样品中25羟基维生素D的液相色谱串联质谱检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含以下溶液：
(1)洗脱液：
洗脱液C：甲醇，纯度为100％；
洗脱液D：纯水；
(2)标准曲线干血片样品：含25羟基维生素D2，25羟基维生素D3的干血片，浓度为0-100ng/ml；
(3)内标溶液：含有d6-25羟基维生素D3的甲醇溶液；
(4)萃取剂：丙酮，纯度为100％；
(5)衍生液：200μg/ml的4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)；
(6)终止液：乙醇，纯度为100％；
(7)复溶液：80％的甲醇；
(8)质控品干血片样品：含有25羟基维生素D2，25羟基维生素D3的干血片样品，浓度分别为QC1：8ng/ml；QC2：20ng/ml；QC3：40ng/ml。
CN201610220689.8A 2016-04-11 2016-04-11 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒 Pending CN105651901A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610220689.8A CN105651901A (zh) 2016-04-11 2016-04-11 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610220689.8A CN105651901A (zh) 2016-04-11 2016-04-11 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105651901A true CN105651901A (zh) 2016-06-08

Family

ID=56496305

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610220689.8A Pending CN105651901A (zh) 2016-04-11 2016-04-11 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105651901A (zh)

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106770802A (zh) * 2017-02-23 2017-05-31 广州市丰华生物工程有限公司 一种同时检测干血滤纸片中多种维生素的方法和试剂盒
CN106908554A (zh) * 2017-03-24 2017-06-30 北京爱普益医学检验中心有限公司 一种干血斑中维生素d含量的检测方法
CN107621499A (zh) * 2016-07-14 2018-01-23 上海可力梅塔生物医药科技有限公司 25‑羟基维生素d2和25‑羟基维生素d3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒
CN109001329A (zh) * 2018-08-21 2018-12-14 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 干血片中25-羟基维生素d的高效液相色谱串联质谱检测方法
CN110068615A (zh) * 2018-01-22 2019-07-30 上海可力梅塔生物医药科技有限公司 干血片样品中的25-羟基维生素d2/d3的hplc-ms/ms检测法
CN110174476A (zh) * 2019-06-10 2019-08-27 合肥谱佳医学检验实验室有限公司 一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法
CN110441537A (zh) * 2019-08-23 2019-11-12 北京丹大生物技术有限公司 一种测定25-羟基维生素d含量的方法
CN110824025A (zh) * 2018-08-09 2020-02-21 上海医药临床研究中心 一种维生素d代谢物的检测方法
CN110849959A (zh) * 2019-08-28 2020-02-28 重庆同怡生物技术研究院有限公司 用于维生素d定量检测的衍生试剂使用方法
US10656059B2 (en) 2018-03-07 2020-05-19 Alcala Pharmaceutical, Inc. Method for qualitative and quantitative multiplexing of drug analytes from biological samples
CN111474255A (zh) * 2020-04-16 2020-07-31 上海中科新生命生物科技有限公司 一种基于干血片样本检测25羟基维生素d的方法
CN111830146A (zh) * 2020-05-27 2020-10-27 江苏豪思睦可生物科技有限公司 一种干血片中25-羟基维d的lc-ms/ms高通量检测方法及试剂盒
CN111855832A (zh) * 2020-05-27 2020-10-30 江苏豪思睦可生物科技有限公司 一种维d及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法
CN113640428A (zh) * 2021-08-24 2021-11-12 青岛惠安康生物工程有限公司 干血片中25-羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
CN115980211A (zh) * 2022-12-07 2023-04-18 广州凯普医药科技有限公司 一种定量检测25-羟基维生素d的试剂盒、方法及其应用
CN116381113A (zh) * 2023-04-12 2023-07-04 张义 干血片中同时检测五种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱检测方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103308621A (zh) * 2013-06-18 2013-09-18 广州金域医学检验中心有限公司 高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素d的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103308621A (zh) * 2013-06-18 2013-09-18 广州金域医学检验中心有限公司 高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素d的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DARRYL EYLES等: "Asensitive LC/MS/MS assay of 25OH vitamin D3 and 25OH vitamin D2 in dried blood spots", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 *
EMMA K.LARKIN等: "Agreement of blood spot card measurements of vitamin d levels with serum, whole blood specimen types and a dietary recall instrument", 《PLOS ONE》 *
SHOUJIRO OGAWA 等: "A novel Cookson-type reagent for enhancing sensitivity and specificity in assessment of infant vitamin D status using liquid chromatography/tandem mass spectrometry", 《RAPID COMMUN. MASS SPECTROM.》 *
胡哲益 等: "LC-MS/MS法分析人体内25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3浓度的系统综述", 《上海医药》 *
赵丽 等: "用液相色谱串联质谱法检测脐带血血清25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3浓度", 《检验医学》 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107621499A (zh) * 2016-07-14 2018-01-23 上海可力梅塔生物医药科技有限公司 25‑羟基维生素d2和25‑羟基维生素d3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒
CN106770802A (zh) * 2017-02-23 2017-05-31 广州市丰华生物工程有限公司 一种同时检测干血滤纸片中多种维生素的方法和试剂盒
CN106908554A (zh) * 2017-03-24 2017-06-30 北京爱普益医学检验中心有限公司 一种干血斑中维生素d含量的检测方法
CN110068615A (zh) * 2018-01-22 2019-07-30 上海可力梅塔生物医药科技有限公司 干血片样品中的25-羟基维生素d2/d3的hplc-ms/ms检测法
US11054349B2 (en) 2018-03-07 2021-07-06 Alcala Pharmaceutical, Inc. Method for preparation of dried blood sample for multiplexing of analytes
US10656059B2 (en) 2018-03-07 2020-05-19 Alcala Pharmaceutical, Inc. Method for qualitative and quantitative multiplexing of drug analytes from biological samples
CN110824025A (zh) * 2018-08-09 2020-02-21 上海医药临床研究中心 一种维生素d代谢物的检测方法
CN109001329A (zh) * 2018-08-21 2018-12-14 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 干血片中25-羟基维生素d的高效液相色谱串联质谱检测方法
CN109001329B (zh) * 2018-08-21 2021-05-28 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 干血片中25-羟基维生素d的高效液相色谱串联质谱检测方法
CN110174476A (zh) * 2019-06-10 2019-08-27 合肥谱佳医学检验实验室有限公司 一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法
CN110441537A (zh) * 2019-08-23 2019-11-12 北京丹大生物技术有限公司 一种测定25-羟基维生素d含量的方法
CN110441537B (zh) * 2019-08-23 2022-09-13 北京丹大生物技术有限公司 一种测定25-羟基维生素d含量的方法
CN110849959A (zh) * 2019-08-28 2020-02-28 重庆同怡生物技术研究院有限公司 用于维生素d定量检测的衍生试剂使用方法
CN111474255A (zh) * 2020-04-16 2020-07-31 上海中科新生命生物科技有限公司 一种基于干血片样本检测25羟基维生素d的方法
CN111855832A (zh) * 2020-05-27 2020-10-30 江苏豪思睦可生物科技有限公司 一种维d及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法
CN111830146A (zh) * 2020-05-27 2020-10-27 江苏豪思睦可生物科技有限公司 一种干血片中25-羟基维d的lc-ms/ms高通量检测方法及试剂盒
CN111830146B (zh) * 2020-05-27 2023-09-01 江苏豪思睦可生物科技有限公司 一种干血片中25-羟基维d的lc-ms/ms高通量检测方法及试剂盒
CN113640428A (zh) * 2021-08-24 2021-11-12 青岛惠安康生物工程有限公司 干血片中25-羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
CN115980211A (zh) * 2022-12-07 2023-04-18 广州凯普医药科技有限公司 一种定量检测25-羟基维生素d的试剂盒、方法及其应用
CN116381113A (zh) * 2023-04-12 2023-07-04 张义 干血片中同时检测五种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱检测方法
CN116381113B (zh) * 2023-04-12 2023-11-24 张义 干血片中同时检测五种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105651901A (zh) 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
Begou et al. Hyphenated MS-based targeted approaches in metabolomics
CN103308621B (zh) 高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素d的方法
US7972868B2 (en) Methods for detecting dihydroxyvitamin D metabolites by mass spectrometry
EP3465202B1 (en) Mass spectrometry method for detection and quantitation of metabolites
Mena-Bravo et al. Two-dimensional liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for vitamin D metabolite profiling including the C3-epimer-25-monohydroxyvitamin D3
CN105911160A (zh) 血清或血浆中25-羟基维生素d液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
CN101467048A (zh) 改良的维生素d测量方法
WO2011068707A1 (en) Vitamin d metabolite determination utilizing mass spectrometry following derivatization
US20220349897A1 (en) Amyloid beta detection by mass spectrometry
CN102147397B (zh) 一种采用高效液相色谱检测功能啤酒中牛磺酸的方法
CN107436335A (zh) 一种肉碱类化合物全同位素内标质谱定量方法
Xiao et al. Classification and analysis of corn steep liquor by UPLC/Q-TOF MS and HPLC
Gomes et al. Recent trends in the determination of vitamin D
CN112136043A (zh) 用于检测和定量肝功能代谢产物的质谱测定方法
Bergmann et al. Analysis of catecholamines in urine by unique LC/MS suitable ion-pairing chromatography
CN114414696B (zh) 一种测定干血片中多种雌激素的试剂盒及方法
Yang et al. High-throughput measurement of 25-hydroxyvitamin D by LC–MS/MS with separation of the C3-epimer interference for pediatric populations
Sun et al. Determination of gentamicin C components in fish tissues through SPE-Hypercarb-HPLC-MS/MS
Dagla et al. Analytical methodologies used for the determination of colistin in biological fluids. Is it still a challenge?
Wang et al. A novel fast-dried urine spot-based method for the analysis of EtS and EtG in urine by liquid chromatography tandem mass spectrometry
CN114689771A (zh) 一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒
Yao et al. A sensitive method for the determination of the gender difference of neuroactive metabolites in tryptophan and dopamine pathways in mouse serum and brain by UHPLC-MS/MS
WO2010041459A1 (ja) 薬物代謝物の定量分析方法及び分析装置
CN111487329A (zh) 一种同时测定血液和玻璃体液中乙醇非氧化代谢物的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160608