CN111855832A - 一种维d及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法 - Google Patents

一种维d及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法；其包括了空白基质制备，以及维生素D滤纸干血片校准品和质控品的制备过程；本发明制备的滤纸干血片校准品和质控品主要是应用于维生素D串联质谱法的检测，具体包括空白血基质的制备、采血量的选择，滤纸干血片校准品及质控品的制备，干血片样本量的选择，本发明提供的校准品和质控品与现有技术相比能更好满足临床检测维D干血片样本的校准和质量控制的需求。

Description

一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法
技术领域
本发明涉及一种维生素D的检测领域，尤其涉及一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法。
背景技术
滤纸干血片(dried blood spot，DBS)采样法，又称微量滤纸全血测定法，是使用一次性采血针或毛细管从指间或足跟采血后滴在预先规定好体积的滤纸上，即采集末梢血于滤纸片上，是一种微创采集技术。与传统的静脉采血相比，DBS采样法对样本采集者的技术要求低，血样采集的过程被简化，采血量通常小于100微升，干燥后的样本具有很好的生物稳定性，可在室温下储存和运输，更适合于婴幼儿群体的检测。目前DBS法已广泛应用在新生儿遗传疾病筛查、治疗药物监测及药动力学等领域中。随着液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)技术对分析灵敏度和重现性的不断提高，采用LC-MS/MS技术能够检测滤纸干血片样品的25-羟基维生素D含量，非常适合大规模人群样本的维生素D检测，尤其便于当地不具备检测条件的偏远地区的25-羟基维生素D检测。
现有方法需采集人体的血清样本，而婴幼儿很难采集足量血清，因此现有方法无法满足婴幼儿等特殊人群的需求。干血片法采集方便，用血量少，保存简单，易于运输，更适合于婴幼儿群体的检测。
本发明采用滤纸干血片作为载体，通过空白血基质制备，添加标准溶液后制备滤纸干血斑，得到维D干血斑的校准品和质控品，改善了校准品、质控品和临床干血斑样本的基质互通性，可更好的满足临床干血斑样本中维生素D的准确定量。
发明内容
本发明目的在于提供了一种提取率高、提取时间短的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，包括以下步骤：
(1)空白血基质制备：
取健康人抗凝全血，离心后除去上层血浆，加入生理盐水后得到红细胞洗涤液,混匀洗涤后,离心，弃上层生理盐水，重复洗涤多次后得到红细胞，加入红细胞稀释液，混匀后得到空白血基质；
(2)制备维D滤纸干血片校准品：
精密吸取若干份2mL空白血基质，分别加入不同浓度水平的维生素D标准溶液，涡旋混匀后，得到浓度分别为2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml和100ng/ml的维D校准品中间液，分别取等量体积滴加到滤纸上，待液体扩散后置于平坦干燥处过夜，干燥后即得维D滤纸干血片校准品，密封2-8℃保存；
(3)制备维D滤纸干血片质控品：
精密吸取若干份2mL空白血基质，分别加入不同浓度水平的维生素D标准溶液，涡旋混匀后，得到浓度分别为8ng/ml和40ng/ml的质控品中间液，分别取等量体积滴加到滤纸上，待液体扩散后置于平坦干燥处过夜，干燥后即得维D滤纸干血片质控品，密封2-8℃保存。
(4)维D滤纸干血片校准品和质控品的使用
进一步的，所述步骤(1)的红细胞洗涤液中生理盐水的比例为1:1或者1：2或者1：3或者1：4，所述红细胞与红细胞稀释液的比例为1:1或者1:2或者3：2，所述红细胞稀释液为含5～15％的BSA的生理盐水。
进一步的，所述步骤(1)中红细胞洗涤步骤需用滴管轻轻地反复吹吸混匀，重复洗涤次数为2-4次。
进一步的，所述步骤(1)反复洗涤多次后得到红细胞与生理盐水的体积比为6:4。
进一步的，所述步骤(1)中洗涤红细胞的离心参数为3000rpm，离心5-10min，所述步骤(1)的离心参数为保证红细胞和血浆完全分离且红细胞不破裂的转速和时间。
进一步的，所述步骤(1)的离心参数为3000rpm离心5-10min，重复的次数为3次。
进一步的，滴加到滤纸上制作滤纸干血片的所述校准品中间液的体积为50-75μ1。
进一步的，所述步骤(2)和/或步骤(3)中用到的25-羟基维生素D浓度为1μg/ml-5μg/ml。
更进一步的，所述25-羟基维生素D的浓度为1μg/ml。
进一步的，所述步骤(2)和(3)制备得到的滤纸干血片校准品和滤纸干血片质控品分别用打孔器取直径为3.2mm的滤纸干血片两片。
本发明提供了维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，在本发明中，通过生理盐水洗涤全血，保证标准品的纯度和均一性，利用BSA来稀释红细胞保证了标准曲线的线性和稳定性。本发明提供的制备方法使用方便、结果更加准确而且成本大大降低了，特别适用于各级新生儿疾病筛查中心使用。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。
附图说明
图1是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中实施例一的色谱组图；
图2是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例二中含50ul血液的滤纸干血片的色谱组图；
图3是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例二中含75ul血液的滤纸干血片的色谱组图；
图4是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例二中含100ul血液的滤纸干血片的色谱组图；
图5是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例三中打孔器取两个滤纸干血片的色谱组图；
图6是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例三中打孔器取三个滤纸干血片的色谱组图；
图7是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例三中打孔器取四个滤纸干血片的色谱组图；
图8是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法的实施例四的色谱组图；
图9是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中滤纸干血片标准品中25-羟基维生素D2的标准曲线图；
图10是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中滤纸干血片标准品中25-羟基维生素D3的标准曲线图；
图11是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中滤纸干血片样本中25-羟基维生素D2的线性图；
图12是本发明提供的一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中滤纸干血片样本中25-羟基维生素D3的线性图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图1-12，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例一
(1)洗涤红细胞：
先将抗凝血以3000r/min离心10min，吸去血浆层，在离心管中加2～3倍的生理盐水用毛细滴管轻轻地反复吹吸混匀，再以3000r/min离心10min，弃上清液，如此反复三次，最后一次可适当延长离心时间至10min。这样获得压积后的红细胞，上清液透明无色，弃上清液后得到洗涤后的红细胞；
(2)稀释红细胞：
将含7％的BSA生理盐水的红细胞稀释液和洗涤后的红细胞按照3：2的比例混匀后得到处理过的全血空白基质；
(3)滤纸干血片标准品的制备：
取2ml处理过的全血空白基质，分别与4μ1、10μL、20μ1、50μL、100μl、200μ1浓度为1μg/ml的25-羟基维生素D混匀，即得2-100ng/ml滤纸干血片标准品，将制备好的上述标准品滴加到903滤纸上，待液体向四周自然扩散后至于通风橱中放置8小时，晾干即到得带有标准品的滤纸干血片，晾干后密封2-8℃保存；
(4)滤纸干血片质控品的制备：
取2ml处理过的全血空白基质，分别与16μ1和80μ1浓度为1μg/ml的25-羟基维生素D混匀，即得8ng/ml(Q1)和40ng/ml(Q2)的滤纸干血片质控品，分别取75μ1制备好的上述质控品滴加到903滤纸上，待液体向四周自然扩散后至于通风橱中放置8小时，晾干即得低值质控品(Q1)和高值质控品(Q2)。
实施例二
在实施例一中维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中，在步骤(3)中分别制备含50μl、75μl、100μl血液的滤纸干血片进行维生素D的LC-MS/MS检测，检测结果表明采用75μ滴加到903滤纸上，制备的滤纸干血片效果最好。
实施例三
在实施例一中维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中，使用同一批次的滤纸干血片，用打孔器打孔后，处理2个、3个、4个、6个干血片的样本进行LC-MS/MS检测，检测结果表明用打孔器选取2个3.1毫米直径的两个滤纸干血片的效果最好。
实施例四
在实施例一中维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法中，采用优选的上述实施例二和三中方法制备的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品。
制备待检测样本
1)加校准品溶液：用3.2mm打孔器将S1～S6血片各打2个血斑，分别加入到96孔U型板的待用孔中；
2)加质控品溶液：用3.2mm打孔器将质控血片各打2个血斑，分别加入到96孔U型板的待用孔中；
3)加血片样本：用3.2mm打孔器将血片样本各打2个血斑，分别加入到96孔U型板的待用孔中；
4)加内标准品溶液：精密移取200μL内标准品溶液，分别加入到已使用的各孔中；
5)震荡：盖上粘性封板膜，于室温500rpm振荡30min；
6)移液：静置5min，小心打开粘性封板膜，取150μL上清液置于另一块96孔V型板中；
7)氮吹：将步骤6)的96孔板置于氮吹仪中，氮气吹干；
8)衍生：精密移取50μL衍生剂，分别加到步骤7)已使用的各孔中；盖上粘性封板膜，于室温振荡30min；
9)终止：精密移取50μL终止剂，分别加到步骤8)已使用的各孔中；盖上96孔板垫，于室温振荡10min；
10)检测：将96孔板置于LC-MS/MS中，进行检测。
实施例四中检测结果的色谱图见图8，其他检测结果的数据如下：
1)空白限：本发明中25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的空白限分别不高于0.40和0.43ng/ml。
2)线性：在线性区间内，25-羟基维生素D2标准品和25-羟基维生素D3标准品的标准曲线的相关系数(r)不低于0.9900。
标准曲线的绘制方法：以6个标准品的标示浓度为横坐标(x)，以6个标准品的实际检测峰面积与各自内标峰面积的比值为纵坐标(y)，绘制标准曲线。
标准曲线方程的拟合以6个标准品的峰面积比值(y)对标示浓度(x)进行线性回归可获得回归方程：y＝a+bx，其中y为纵坐标，x为横坐标，a为截距，b为斜率，因此25-羟基维生素D2标准品和25-羟基维生素D3标准品的标准曲线图分别见图9和图10所示，25-羟基维生素D2标准品和25-羟基维生素D3标准品的标准曲线数据如下表1和表2所示。
表1 25-羟基维生素D2标准品的标准曲线数据
Figure BDA0002510744490000071
表2 25-羟基维生素D3标准品的标准曲线数据
Figure BDA0002510744490000072
3)准确度：在滤纸干血片的线性区间范围内检测维生素D的国家标准品，其测量结果的相对偏差在±10％范围内。
滤纸干血片样本中25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的线性图分别见图11和图12，其数据分别如下表3和表4所示，。
表3滤纸干血片样本中25-羟基维生素D2的线型图的数据
Figure BDA0002510744490000073
Figure BDA0002510744490000081
表4滤纸干血片样本中25-羟基维生素D3的线型图的数据
Figure BDA0002510744490000082
4)定量限：对含有已知浓度被测物的样品进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况下，确定25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3能被定量的最小量分别是1ng/ml和2ng/ml，数据见表5。
表5 25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的检测限
Figure BDA0002510744490000083
5)批内精密度和批间精密度：平行测定滤纸干血片一定范围内不同浓度的质控品，测定结果的变异系数(CV)均不高于15％；在3个不同批次产品之间，平行测定滤纸干血片一定范围内不同浓度的纸片质控品，测定结果的变异系数(CV)均不高于20％，具体数据见表6，其中S1～S6即为线性系列浓度点，其中25OH-VD2的S1＝2ng、S2＝4ng、S3＝8ng、S4＝16ng、S5＝32ng和S6＝64ng，25OH-VD3的S1＝4ng、S2＝8ng、S3＝16ng、S4＝32ng、S5＝64ng和S6＝128ng。
表6 25OH-VD2和25OH-VD3的批内精密度和批间精密度数据
Figure BDA0002510744490000084
Figure BDA0002510744490000091
Figure BDA0002510744490000101
本发明的有益效果为：
滤纸干血片为血液极好的载体，本文发明提供一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，与现有血清样本为对象的检测结果具有高度的一致性，检测具有稳定性好和准确度高等优点。
其中，准确度高主要体现在：
1)有良好的线性：在线性区间内，相关系数(r)不低于0.9900；
2)准确度：在滤纸干血片规定的线性区间范围内检测维生素D国家标准品，其测量结果的相对偏差在±10％范围内；
3)批内精密度：平行测定滤纸干血片一定范围内的不同浓度的质控品，测定结果的变异系数(CV)不高于20％；
4)批间精密度：在两个不同批次产品之间，平行测定滤纸干血片样本一定范围内的不同浓度的质控品，测定结果的变异系数(CV)不高于20％。
以滤纸干血片为检测样本，一滴血(约50μl)即可形成约10mm的血斑，本发明所需要的样本只有3.0mm-3.2mm的血斑，现有技术以血清为检测样本，通常单次取血量在1ml～5ml。由此可知，相比血清样品，本发明可以明显降低采血量，降低待检者疼痛感和不适感，减少心理负担，可以推广至新生儿、低龄儿童的疾病筛查，达到疾病早发现、早干预、早治疗的意义。
以滤纸干血片为检测样本，样品递送较血清样品便捷，尤其适用偏远地区样品运输。另外滤纸干血片为检测样本保存起来也较为便利，有利于潜在医疗纠纷的处理。
术语
1、检测方法
①如本文所用，“液相层析”(LC)是指当流体均一地通过细微分开的物质的柱或者通过毛细管道过滤时流体溶液的一种或多种组分选择性延迟的方法延迟是由于当该流体相对于固定相(或多个)移动时混合物的组分在一个或多个固定相和本体流体(bulkfluid)(即流动相)之间的分布“液相层析”包括反相液相层析(RPLC)、高效液相层析(HPLC)和高湍流液相层析(HTLC)。
②如本文所用，术语“HPLC”或“高效液相层析”是指这样的液相层析，其中，分离程度是通过使流动相在压力下穿过固定相通常为紧密填充柱而增加的。
③如本文所用，“质谱法”(MS)是指通过它们的质量鉴定化合物的分析技术MS技术一般包括(1)使化合物电离以形成带电化合物；和(2)检测带电化合物的分子量并计算质荷比(m/z)化合物可通过任何合适的方式电离并检测“质谱仪”一般包括电离器和离子检测器。
2、试剂盒
本发明还提供了一种指含有本发明的质控品、同位素内标提取液、稀释液、转化液、复溶液、流动相添加剂A、流动相添加剂B的试剂盒，在本发明的一个优选例中，所述的试剂盒还包括容器、使用说明书、对照品等该试剂盒可用于同时检测样品中25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3含量。
综上，除非另外定义，否则本文中所用的术语具有与本发明所属领域的技术人员的通常所理解相同的含义。应进一步理解，术语应被解释为具有与其在相关技术以及本发明的上下文中的含义一致的含义，并且不应以理想化或过度形式化意义进行解释，除非本文中明确地这样定义。
须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。
以上仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)空白血基质制备：
取健康人抗凝全血，离心后除去上层血浆，加入生理盐水后得到红细胞洗涤液，混匀洗涤后，离心，弃上层生理盐水，重复洗涤多次后得到红细胞，加入红细胞稀释液，混匀后得到空白血基质；
(2)制备维D滤纸干血片校准品：
精密吸取若干份2mL空白血基质，分别加入不同浓度水平的维生素D标准溶液，涡旋混匀后，得到浓度分别为2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml和100ng/ml的维D校准品中间液，分别取等量体积滴加到滤纸上，待液体扩散后置于平坦干燥处过夜，干燥后即得维D滤纸干血片校准品，密封2-8℃保存；
(3)制备维D滤纸干血片质控品：
精密吸取若干份2mL空白血基质，分别加入不同浓度水平的维生素D标准溶液，涡旋混匀后，得到浓度分别为8ng/ml和40ng/ml的质控品中间液，分别取等量体积滴加到滤纸上，待液体扩散后置于平坦干燥处过夜，干燥后即得维D滤纸干血片质控品，密封2-8℃保存。
(4)维D滤纸干血片校准品和质控品的使用
2.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的红细胞洗涤液中生理盐水的比例为1:1或者1:2或者1:3或者1:4，所述红细胞与红细胞稀释液的比例为1:1或者1:2或者3:2，所述红细胞稀释液为含5～15％的BSA的生理盐水。
3.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中红细胞洗涤步骤需用滴管轻轻地反复吹吸混匀，重复洗涤次数为2-4次。
4.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)反复洗涤多次后得到红细胞与生理盐水的体积比为6:4。
5.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中洗涤红细胞的离心参数为3000rpm，离心5-10min，所述步骤(1)的离心参数为保证红细胞和血浆完全分离且红细胞不破裂的转速和时间。
6.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的离心参数为3000rpm离心5-10min，重复的次数为3次。
7.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：滴加到滤纸上制作滤纸干血片的所述校准品中间液的体积为50-75μ1。
8.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)和/或步骤(3)中用到的25-羟基维生素D浓度为1μg/ml-5μg/ml。
9.根据权利要求8所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述25-羟基维生素D的浓度为1μg/ml。
10.根据权利要求1所述的维D及其代谢物的质谱检测用校准和质控品的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)和(3)制备得到的滤纸干血片校准品和滤纸干血片质控品分别用打孔器取直径为3.2mm的滤纸干血片两片。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113884358A (zh) * 2021-10-09 2022-01-04 壹生检康(杭州)生命科技有限公司 一种干血片制备方法
CN115343379A (zh) * 2022-04-20 2022-11-15 杭州谱聚医疗科技有限公司 空白血基质和标准品的制备方法、维生素的检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012136720A1 (de) * 2011-04-04 2012-10-11 Immundiagnostik Ag Bestimmung von vitamin-d-metaboliten in trockenblut
CN105651901A (zh) * 2016-04-11 2016-06-08 北京洛奇临床检验所股份有限公司 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
CN109001329A (zh) * 2018-08-21 2018-12-14 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 干血片中25-羟基维生素d的高效液相色谱串联质谱检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012136720A1 (de) * 2011-04-04 2012-10-11 Immundiagnostik Ag Bestimmung von vitamin-d-metaboliten in trockenblut
CN105651901A (zh) * 2016-04-11 2016-06-08 北京洛奇临床检验所股份有限公司 干血片样品中25羟基维生素d的液相色谱串联质谱检测方法及试剂盒
CN109001329A (zh) * 2018-08-21 2018-12-14 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 干血片中25-羟基维生素d的高效液相色谱串联质谱检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DARRYL EYLES 等: "A sensitive LC/MS/MS assay of 25OH vitamin D3 and 25OH vitamin D2 in dried blood spots", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 *
彭红 等: "《药物分析》", 31 August 2018, 中国健康传媒集团 中国医药科技出版社 *
韩吉春 等: "液相色谱-串联质谱法检测干血点样本中25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3", 《分析化学研究报告》 *
马欢 等: "特殊基质样品及内源性物质生物分析方法的验证", 《中国医药工业杂质》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113884358A (zh) * 2021-10-09 2022-01-04 壹生检康(杭州)生命科技有限公司 一种干血片制备方法
CN115343379A (zh) * 2022-04-20 2022-11-15 杭州谱聚医疗科技有限公司 空白血基质和标准品的制备方法、维生素的检测方法

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