CN105586420A - 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法 - Google Patents

一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105586420A
CN105586420A CN201610065001.3A CN201610065001A CN105586420A CN 105586420 A CN105586420 A CN 105586420A CN 201610065001 A CN201610065001 A CN 201610065001A CN 105586420 A CN105586420 A CN 105586420A
Authority
CN
China
Prior art keywords
donkey
raw material
primer
hide gelatin
derived component
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610065001.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105586420B (zh
Inventor
罗晖明
肖炳燚
聂平
李文莉
刘丽
丁野
舒毕琼
孙辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Institute For Drug Control
Original Assignee
Hunan Institute For Drug Control
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan Institute For Drug Control filed Critical Hunan Institute For Drug Control
Priority to CN201610065001.3A priority Critical patent/CN105586420B/zh
Publication of CN105586420A publication Critical patent/CN105586420A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105586420B publication Critical patent/CN105586420B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种准确鉴别阿胶原料驴源性成分的特异性引物对及其方法。所述引物对包括引物PF和引物PR，所述引物PF的序列如SEQ？ID？NO.1所示，所述引物PR的序列如SEQ？ID？NO.2所示。使用此方法能准确鉴别阿胶原料驴源性成分，只通过简单的DNA提取、PCR特异性扩增、酶切、电泳检测即可完成对样品的鉴别，具有操作简单、特异性强、重复性好等优点，可用于阿胶原料驴源性成分的快速鉴定。

Description

一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法
技术领域
本发明涉及名贵中药阿胶原料的品质鉴定技术领域，具体涉及一种鉴定阿胶原料驴源性成分的特异引物对及其方法。
背景技术
阿胶为《中国药典》2015版的收录品种，为马科动物驴EquusasinmL.的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。其药用历史悠久，始载于《神农本草经》，被列为“上品”，称其“可久服轻身益气”，是药食同源的重要物种，尤其在治未病方面功效显著。关于阿胶的医方医案有3200多个，其中包括200多个膏方和200多个食疗方。现代研究表明阿胶能调节身体机能，增强免疫力，在肿瘤辅助治疗、血液病等重大疾病防治上，其治疗优势也正逐步凸显。仅《中国药典》2015版收载的含阿胶的成药即多达34个。我国驴养殖业发展严重滞后，驴的存栏数呈逐年下滑之势。以致近年制胶原料驴皮短缺、原料价格上涨，造成目前阿胶市场混乱，掺杂使假情况屡屡发生，主要掺假成分包括猪皮、牛皮胶、马皮胶甚至皮革下脚料等，给大众用药安全带来重大隐患。传统的阿胶真伪鉴别方法，采用外观性状和理化性质等方法，需要极为丰富的个人经验和深厚的专业知识，而各种杂皮胶的制备工艺与正品相似，故其外观性状极为相近，更大大增加了鉴别的难度。近来有采用近红外光谱技术对阿胶真品和伪品进行快速区分的报道，但由于正品和伪品之间缺乏特征性指标，易对未知样品造成误判。故把好原料关对于阿胶及其制品的质量控制相当关键。驴Equus.asinusL.和马Equus.caballusorientalisNoack为同科同属动物，骡子为马和驴的杂交种。驴皮与马皮、骡皮在毛色、性状等方面十分相近，肉眼很难区分，故市场上以马皮等作为驴皮伪品制造阿胶较为常见。
因此，寻找一种简单、快速且准确可靠的鉴定阿胶原料驴源性成分的方法显得尤为迫切。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种鉴定阿胶原料驴源性成分的特异引物对及其方法。
为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：
所述鉴定阿胶原料驴源性、马源性成分的共用特异性引物对包括引物PF和引物PR：
引物PF的序列为5'-TTTGCCTTCCACTTTATTCTA-3'(SEQIDNO.1)；
引物PR的序列为5'-GTGTAGGGTAGGGATGAGTG-3'(SEQIDNO.2)。
所述鉴定阿胶原料驴源性成分的方法包括如下步骤：
(1)按常规动物组织基因组DNA提取法提取待测皮张的DNA；用上述的引物对对待测阿胶原料皮张的DNA进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；
(2)阿胶原料驴源性成分鉴别：向PCR扩增产物中加入限制性内切酶BamHI进行酶切，限制性内切酶BamHI的酶切位点为5'…G^GATCC…3'；将酶切后的产物进行琼脂糖凝胶电泳，若在50—350bp出现两个片段(约76bp和314bp)，则供试品为驴源性，若不出现上述两个片段，则供试品不为驴源性。
步骤(1)中所述扩增体系及条件如下：
聚合酶链式反应以25μL为参考，各种物品的用量分别为：
PCR反应条件：反应在PCR仪上进行，反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环后，72℃延伸10min。
下面对本发明设计原理等作进一步说明：
本发明首先检索Genbank驴、马及猪、牛、羊等其他物种Cytb相关序列(见表1)，下载代表性序列进行比对分析，在此基础上以Oligo软件设计仅能对驴、马获得目的扩增的特异引物，并经由NEBCutter针对驴与其他物种DNA序列的差异选择合适的DNA限制性内切酶切位点，通过分析聚合酶链式反应产物的限制性酶切图谱差异，达到快速、准确鉴别驴源性成分的目的。
表1引物设计参考序列
经比对驴与其它8种动物的Cytb序列，仅驴、猪和羊在614bp处均有BamHI酶切位点(图2)，又由于所设计的引物是驴特异性的(图1)，故其他物种一般没有目的PCR产物，即使有，其PCR产物也不能被BamHI酶切。
从供试皮张中提取其DNA，在给定的PCR条件下，用一对引物(PF、PR)，驴、马、驴骡、马骡能够扩增出一段DNA片段；进一步用限制性内切酶BamHI(酶切位点为5'…G^GATCC…3')对供试品的PCR扩增产物进行酶切后，通过琼脂糖凝胶电泳检测，仅驴、驴骡会在50-350bp出现两个片段(约76bp和314bp)，而马皮、马骡不会出现上述两片段。当供试样品经用本法进行PCR扩增，并对PCR产物进行限制性内切酶酶切后，经琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段的大小，便可以准确地鉴定驴源性成分。
该阿胶原料驴源性成分的PCR-RFLP鉴别方法是综合利用基因序列比对、特异性酶切位点分析和引物设计等生物信息学技术，并经过反复的实验验证才得以建立。使用此方法，只需通过简单的DNA提取、PCR特异性扩增、酶切、电泳检测即可完成对驴源性成分的鉴别，具有操作简单、特异性强、重复性好等优点。
本发明的有益效果是：解决了非驴皮充当原料伪制阿胶而当下对此无力鉴别的难题，提供了鉴定所需的一对PCR引物、PCR反应条件、一种限制性内切酶。本发明利用驴与其他近似物种DNA序列的差异，建立了快速、便捷、可靠的PCR-RFLP鉴别方法，对于保证阿胶质量，打击市场上阿胶及其制剂的伪劣品、保障人民用药安全具有重要价值。
附图说明
图1：驴源、马源性成分的特异引物设计图；
图2：驴源性成分的酶切位点设计图；
图3：驴皮PCR产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P1：MP01；1-43：LP01-43；B：空白对照；
图4：马皮PCR产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P2：LP01；1-6：MP01-06；B：空白对照
图5：驴骡皮PCR产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P1：MP01；1-3：LL01-03；B：空白对照；
图6：马骡皮PCR产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P2：LP01；1-16：ML01-16；B：空白对照；
图7：待定皮张PCR产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P1：MP01；P2：LP01；1-13：DD01-13；B：空白对照；
图8：其他物种PCR产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；B：空白对照；1-7：QT01-07(依次为鹅、鸭、羊、鸡、猪、兔、牛)；P1：MP01
图9：驴皮酶切产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P1：MP01；1-43：LP01-43；B：空白对照；
图10：马皮酶切产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P2：LP01；1-6：MP01-06；B：空白对照；
图11：驴骡皮酶切产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P1：MP01；1-3：LL01-03；B：空白对照；
图12：马骡皮酶切产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P2：LP01；1-16：ML01-16；B：空白对照；
图13：待定皮张酶切产物电泳图；M:50bpDNALadderMarker(条带大小自下而上依次为50bp、100bp、150bp、200bp、250bp、300bp、350bp、400bp、500bp)；P1：MP01；P2：LP01；1-13：DD01-13；B：空白对照。
具体实施方式
实施例1
所述阿胶原料驴源性成分的方法包括如下步骤：
1、药材DNA的提取：采用天根生化科技有限公司的血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒按常规进行，用无离子水将供试样品的DNA浓度调节至0.2～0.5μg/μL；
2、聚合酶链式反应：
(1)聚合酶链式反应以25μL为参考，各种物品的用量分别为：
(2)PCR反应条件：反应在PCR仪上进行，反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环后，72℃延伸10min。
(3)PCR产物的电泳检测：取上述反应液5μL，与1.0μL载样缓冲液混合，用2％琼脂糖凝胶(含0.5μg/μLGelRed)电泳检测扩增结果，各种DNA样品均能扩增出一条约390bp的DNA条带；
3、阿胶原料驴源性成分聚合酶链式反应产物的限制性内切酶酶切反应：
DNA限制性内切酶酶切反应：反应液总体积为30μL，其中PCR产物10μL，10×PCR缓冲液2μL，限制性内切酶BamHI1μL，去离子水补齐至30μL，将反应液置37℃酶切反应3h，反应结束后置于65℃水浴20分钟，使酶失活；
4、电泳观察酶切结果：酶切产物用2.5％琼脂糖凝胶(含0.5μg/μLGelRed)，在4V/cm电泳强度下电泳60～90分钟，观察电泳结果；
5、鉴定结果的判断，使用限制性内切酶BamHI对聚合酶链式反应扩增产物进行酶切，产生对驴源性成分与非驴源性成分具有鉴别特征的酶切DNA片段长度图谱。若供试品出现76bp和314bp的两个片段，则供试品为驴源性成分，若不出现上述两个片段，则供试品不为驴源性成分。
实施例2
为了保证分子鉴定结果的可靠性，本实验收集了驴皮、马皮、骡皮及猪、牛、羊等物种，以对本实验方法进行适用性验证，确保本方法准确、可靠。
1材料(见表2)
表2本发明所有样品来源表
2DNA提取
取本品除去表面毛发，以灭菌超纯水清洗，取约0.2g，再依次以75％乙醇1ml、灭菌超纯水1ml清洗，吸干表面水分，剪细。取约20mg，置1.5ml离心管中，用天根生化科技有限公司的血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA，分别加入300uL缓冲液GA，40uLProteinaseK，10uLRnaseA(100mg/ml)，混匀。56℃水浴过夜，并不时摇动。加入300uL缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min使溶液变清亮。加入300uL无水乙醇，充分混匀15sec。将混匀液加入吸附柱CB3中，12000rpm离心30sec，弃掉废液；将吸附柱放回收集管中，加入500uL缓冲液GD，12000rpm离心30sec，弃去废液；将吸附柱放回收集管中，加入600uL漂洗液PW，12000rpm离心30sec，弃去废液，重复洗脱一次；将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟后，弃去废液，开盖室温放置以除去残留漂洗液；将吸附柱放入新的洁净1.5mL离心管中，在柱中央加入50uL洗脱液TE，室温放置5min，12000rpm室温离心2min，离心管中的液体即为基因组DNA，4℃保存备用。
3PCR-RFLP反应
鉴别引物：5'TTTGCCTTCCACTTTATTCTA-3'(SEQIDNO.1)，所述引物PR的序列为5'-GTGTAGGGTAGGGATGAGTG3'(SEQIDNO.2)。PCR反应体系：在200uL离心管中进行，反应总体积为25uL，反应体系包括10×PCRbuffer2.5uL，dNTP(2.5mmol·L-1)2.0uL，非高保真TaqDNA聚合酶(2.5U·uL-1)0.5uL，模板1uL，引物对(10uM)0.5uL，无菌超纯水18.5uL。将离心管置PCR仪，PCR反应参数：94℃预变性5分钟，循环反应35次(94℃30秒，53℃30秒，72℃45秒)，72℃延伸10分钟。
驴源性成分鉴别：取PCR反应液，置500ul离心管中，进行酶切反应，反应总体积为30ul，反应体系包括10×酶切缓冲液2.0ul，PCR反应液10ul，BamHI(10U/ul)1.0ul，无菌超纯水17.0ul，酶切反应在37℃水浴中反应3小时。另取无菌超纯水，同法上述PCR-RFLP反应操作，作为空白对照。
扩增产物电泳结果如图3～8，对应的酶切产物电泳结果如图9～13。结果表明，驴皮、马皮、骡皮能够得到扩增，并且PCR产物分别经BamHI酶切后，仅驴、驴骡在50-350bp出现两个片段(约76bp和314bp)，牛、羊等其他样本则为阴性扩增。这表明本专利能够准确地鉴别阿胶原料驴源性成分。

Claims (3)

1.一种鉴定阿胶原料驴源性成分的特异性引物对，其特征在于，所述引物对包括引物PF和引物PR；所述引物PF的序列如SEQIDNO.1所示，所述引物PR的序列如SEQIDNO.2所示。
2.一种阿胶原料驴源性成分的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)采用权利要求1所述的引物对对待测阿胶原料皮张的DNA进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；
(2)向PCR扩增产物中加入限制性内切酶BamHI进行酶切，将酶切后的产物进行琼脂糖凝胶电泳，若在50—350bp出现两个片段，则供试品为驴源性成分，若在50—350bp不出现两个片段，则供试品不为驴源性成分。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述阿胶原料驴源性成分鉴别中，若出现76bp和314bp两个片段，则供试品为驴源性成分，若不出现76bp和314bp两个片段，则供试品不为驴源性成分。
CN201610065001.3A 2016-01-29 2016-01-29 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法 Active CN105586420B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610065001.3A CN105586420B (zh) 2016-01-29 2016-01-29 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610065001.3A CN105586420B (zh) 2016-01-29 2016-01-29 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105586420A true CN105586420A (zh) 2016-05-18
CN105586420B CN105586420B (zh) 2020-08-28

Family

ID=55926319

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610065001.3A Active CN105586420B (zh) 2016-01-29 2016-01-29 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105586420B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106701750A (zh) * 2017-03-01 2017-05-24 深圳华大基因股份有限公司 一种鉴定地方驴品种的方法及其专用试剂盒

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101974635A (zh) * 2010-11-01 2011-02-16 中国检验检疫科学研究院 用于阿胶真伪鉴别的组合物、试剂盒、方法及应用
CN102311999A (zh) * 2011-08-31 2012-01-11 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 驴或驴源性成分实时荧光pcr检测方法及检测用引物和探针
CN103154268A (zh) * 2010-07-23 2013-06-12 耶迪特普大学 用于检测存在于肉中的驴肉的试剂盒
CN104250667A (zh) * 2014-10-09 2014-12-31 北京农学院 肉与肉制品中马源成分的检测方法及驴源成分的检测方法
CN104531884A (zh) * 2015-01-14 2015-04-22 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴别阿胶中多种动物源性的引物探针组合物、试剂盒及多重实时荧光定量pcr检测方法
CN104561327A (zh) * 2015-01-16 2015-04-29 北京市食品安全监控和风险评估中心 一种同时检测马和驴源性成分的双重荧光pcr方法
CN104774958A (zh) * 2015-04-27 2015-07-15 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴别驴、马、狐狸动物源性的引物探针组合物、试剂盒和多重实时荧光定量pcr检测方法
CN104988231A (zh) * 2015-07-01 2015-10-21 山东世通检测评价技术服务有限公司 一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重pcr法
CN104046700B (zh) * 2014-07-08 2015-11-11 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种快速鉴定驴皮、马皮和骡子皮的检测试剂盒
CN105112417A (zh) * 2015-09-30 2015-12-02 山东中医药大学 一种应用线粒体coⅰ序列片段鉴别驴皮与混伪品的方法及其扩增特异性引物
CN105132543A (zh) * 2015-08-26 2015-12-09 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物、试剂盒及多重荧光pcr检测方法

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103154268A (zh) * 2010-07-23 2013-06-12 耶迪特普大学 用于检测存在于肉中的驴肉的试剂盒
CN101974635A (zh) * 2010-11-01 2011-02-16 中国检验检疫科学研究院 用于阿胶真伪鉴别的组合物、试剂盒、方法及应用
CN102311999A (zh) * 2011-08-31 2012-01-11 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 驴或驴源性成分实时荧光pcr检测方法及检测用引物和探针
CN104046700B (zh) * 2014-07-08 2015-11-11 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种快速鉴定驴皮、马皮和骡子皮的检测试剂盒
CN104250667A (zh) * 2014-10-09 2014-12-31 北京农学院 肉与肉制品中马源成分的检测方法及驴源成分的检测方法
CN104531884A (zh) * 2015-01-14 2015-04-22 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴别阿胶中多种动物源性的引物探针组合物、试剂盒及多重实时荧光定量pcr检测方法
CN104561327A (zh) * 2015-01-16 2015-04-29 北京市食品安全监控和风险评估中心 一种同时检测马和驴源性成分的双重荧光pcr方法
CN104774958A (zh) * 2015-04-27 2015-07-15 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴别驴、马、狐狸动物源性的引物探针组合物、试剂盒和多重实时荧光定量pcr检测方法
CN104988231A (zh) * 2015-07-01 2015-10-21 山东世通检测评价技术服务有限公司 一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重pcr法
CN105132543A (zh) * 2015-08-26 2015-12-09 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物、试剂盒及多重荧光pcr检测方法
CN105112417A (zh) * 2015-09-30 2015-12-02 山东中医药大学 一种应用线粒体coⅰ序列片段鉴别驴皮与混伪品的方法及其扩增特异性引物

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TALIB AHMED JAAYID: "Rapid and Sensitive Identification of Horse and DonkeyMeat in Iraqi Markets Using SSR and PCR-RFLP Based on Mitochondrial DNA Cytochrome B Gene", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY》 *
宗卉等: "饲料中马、驴源性成分的分子生物学检测技术", 《深圳特区科技》 *
李金莲等: "三大不同品种马mtDNA Cytb基因PCR RFLP分析", 《遗传》 *
汪小龙等: "细胞色素B基因PCR-RFCP鉴定阿胶原料", 《中国海洋大学学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106701750A (zh) * 2017-03-01 2017-05-24 深圳华大基因股份有限公司 一种鉴定地方驴品种的方法及其专用试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN105586420B (zh) 2020-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103898235B (zh) 一种水蛭的dna条形码分子鉴定方法
CN102676514B (zh) 与中国荷斯坦奶牛产奶性状相关的snp标记及其应用
CN106591473B (zh) 一种人mthfr和mtrr基因多态性检测引物、探针、试剂盒及方法
CN103045727B (zh) 一种与中国荷斯坦奶牛产奶性状及体细胞评分相关的snp标记及其应用
CN104031992B (zh) 人类B-raf基因V600突变检测试剂盒
CN103060427A (zh) 一种用于健康风险评估的飞行质谱生物芯片及其检测方法
CN109680071B (zh) 鉴别水蛭品种的成套引物及方法
CN104120182A (zh) 基于dna条形码鉴定金钱白花蛇的特异引物及pcr法和试剂盒
KR102009712B1 (ko) 대추 복조 품종 판별용 프라이머 세트 및 이의 용도
CN104962637A (zh) 用于检测药物性耳聋易感基因突变位点的试剂盒及引物对组
CN105586420A (zh) 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法
CN104894265A (zh) 海马的鉴定方法
CN109628599B (zh) 基于夹心法高分辨熔解曲线分析的alk融合基因检测及分型试剂盒
CN110029172B (zh) 马、驴源性成分二重pcr检测试剂盒
CN105734156A (zh) 一种阿胶中驴、猪源性巢式荧光pcr检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法与应用
CN109897900A (zh) Epb42基因在肝癌sbrt疗效评估中的应用
CN106566891A (zh) 一种利用特定引物组鉴别两种梅童鱼幼鱼的方法
CN105803084A (zh) 一种阿胶中驴、马源巢式荧光pcr检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法及应用
CN105586339A (zh) 一种鉴定新菠萝灰粉蚧的引物对及其应用
CN111434781A (zh) 一种康复新液的pcr鉴定方法
CN114369684B (zh) 用于马病毒性动脉炎病毒实时荧光rt-pcr检测的引物、探针、试剂盒、方法及其应用
CN110468197A (zh) 一种aldh2基因g1510a多态性快速分析检测试剂盒及方法
CN110016506A (zh) Adipor1基因在肝癌sbrt疗效评估中的应用
US20140087388A1 (en) Methods of Nucleic Acid Liquid-phase Extraction and Detection
CN109266749A (zh) 一种检测rnaset2基因启动子甲基化的引物及其检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant