CN105566153B - 偶氮苯衍生物及其制法和药物组合物与用途 - Google Patents

Abstract

偶氮苯衍生物及其制法和药物组合物与用途，本发明涉及式I所示的偶氮苯衍生物，其可药用盐，及其制备方法，含有一个或多个这化合物的组合物，和该类化合物在治疗与炎症疾病，免疫失调和肿瘤疾病方面的用途。

Description

偶氮苯衍生物及其制法和药物组合物与用途

发明领域

本发明涉及式I所示的偶氮苯衍生物，其可药用盐，其水合物和溶剂化物，其多晶和共晶，其同样生物功能的前体或衍生物，及其制备方法，含有一个或多个这化合物的组合物，和该类化合物在治疗与炎症疾病，免疫失调和肿瘤疾病方面的用途。

发明背景

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一类病因尚不十分明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，近年来国内外IBD的发病率均呈上升趋势。IBD的发病机制比较复杂，环境、遗传、感染、免疫等因素可能都参与了疾病的发生过程，多种细胞因子参与了肠道过度的免疫反应和致病进程。

原发性IBD如克隆病(CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)在临床上其典型症状和体征来源于肠道强烈的、细胞因子驱动的(非感染性)炎症反应。UC和CD有一些相似的临床表现，并且有10％-15％的病例并不能很好的在这两种疾病中做出区分。但两者在疾病的特征以及损伤部位上还是存在着区别。

此外，近年来研究发现IBD患者存在着血小板形态和功能的异常，表现为血小板体积缩小，活化增加，促炎和促血栓作用增强，在IBD粘膜损伤中起重要作用。血栓形成和炎症是紧密联系的进程，因此在IBD的致病机理和疾病的复杂化上也有着一定的作用。在IBD患者的肠系膜血管中已经发现了血小板激活反应以及血小板-白细胞凝集反应的增加，并有血小板聚集的发生。在UC患者中，血小板.白细胞聚集物(PLA)在肠系膜静脉血中的含量超过了在动脉血中的含量，UC患者中肠系膜静脉循环中PLA的增加证明了被激活的脉管内皮细胞激活了PLA的形成。

细胞因子(cytokine，CK)是具有活性的多肽类或糖蛋白类物质，由免疫细胞分泌，在机体的免疫应答中具有重要作用。IL-1、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor，TNF)是公认能介导UC发病的促炎细胞因子，IL-4、IL一10具有抗炎作用。UC患者的肠黏膜中抗炎CK水平下降，促炎CK水平升高，且升高的水平与UC的严重程度呈正相关，免疫调节失衡的持久性促使炎症慢性化。研究发现TNF-β、IL-1、IL-6诱发的肠道炎症反应主要通过诱导以IL-8为代表的趋化因子而实现。在UC中IL-4对淋巴细胞和巨噬细胞发挥免疫调节作用，抑制单核巨噬细胞产生IL-1β和TNF-α，同时下调活化的单核巨噬细胞分泌氧自由基，该作用存在剂量效应关系。IL-10主要抑制单核巨噬细胞使其失活从而抑制CK表达。UC患者IL-10的循环水平很高，能够下调IL-2、干扰素IFN-γ等促炎CK。IBD患者的IL-22具有促炎作用，其作用于结肠上皮的肌纤维母细胞，能促进炎症前细胞因子和基质降解分子的表达。IL-13可增强上皮细胞的凋亡、降低细胞间紧密连接、减缓上皮细胞重建速度，过量产生能损害上皮细胞屏障作用。UC患者血清中TNF-α、IL-8的浓度明显增高，且与病情呈正相关。TNF-α可激活患者的上皮细胞，诱导趋化因子并促使中性粒细胞在结肠黏膜炎症区域聚集，刺激炎症细胞分泌IL-8；而IL-17在肠道炎性CK的产生过程中起重要作用。UC患者肠道病变固有层单核细胞分泌的IL-6和IL-8浓度明显高于非病变部位，IL-6浓度与该部位黏膜固有层分泌的IL-17浓度呈正比关系，抗IL-17抗体能否有效抑制IL-6和IL-8的分泌作用与抗体剂量有关。

巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)能产生大量TNF-α、IL-1β、IL-6细胞因子，在体外可抑制外周巨噬细胞随意运动，体内可增强巨噬细胞聚集能力，造成肠道黏膜损伤。MIF在严重UC患者血清中浓度明显增高。转化生长因子(transforming growth factor，TGF)-β1是一种抗炎性CK，可调节细胞生长和分化，抑制淋巴细胞的功能和增殖，抑制巨噬细胞激活，促进上皮损伤后修复及基质蛋白合成与分泌。

肠道炎症主要是由于T细胞反应亢进，引起肠道黏膜免疫系统对肠道共生菌产生高反应性。患者的结肠黏膜中可以检测到树突状细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞等。UC患者组织中TLR2、TLR4表达量显著增高并产生更多的IL-12、IL-6。研究表明UC活动性炎症的程度和结肠黏膜树突状细胞DCs浸润的频率显著关联。T淋巴细胞作为最重要的免疫调节剂是免疫反应中抗原呈递的核心环节。调节性T细胞在UC发病机制中也起着重要作用。肠上皮细胞IECs通过将抗原提呈给T细胞并通过分泌CK和化学增活素对入侵细菌作出免疫应答，IECs可能通过其表面的TLRs促进肠道局部炎症的发展。

自然杀伤T细胞NKT是一类表达NK细胞表面分子NKl.1和T-细胞受体(Tcellreceptor，TCR)-CD3复合物的T细胞亚群.非典型性NKT细胞介导的非典型Th2反应是UC发病的重要原因之一.

细胞黏附分子CAM是一类位于细胞膜表面的与UC有密切关系的受体型跨膜糖蛋白分子，参与炎症和免疫反应，介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质问黏附传递信息以及促进淋巴细胞归巢。细胞凋亡又称程序性细胞死亡(programmed cell death，PCD)，是影响UC患者肠黏膜损伤和免疫紊乱的重要机制之一，是细胞接受刺激信号后的一种主动、由凋亡相关基因控制的细胞程序性死亡方式。上皮细胞凋亡加速和炎症细胞凋亡减慢同时存在是造成UC炎症持续的重要原因。IBD肠黏膜病变部位的T细胞凋亡减少使活性T细胞不能及时清除而大量聚集，产生针对自身肠组织的免疫反应。

PPAR-γ高表达于脂肪组织中，参与脂肪细胞的分化和调节胰岛索应答；其次为结肠组织(主要表达于上皮细胞和巨噬细胞)，在胃、小肠，肝脏、胰腺以及软骨、皮肤、神经胶质细胞、气管上皮细胞和肾脏巾呈低水平表达。大多数组织中，PPAR-γl mRNA的表达高于PPAR-γ3mRNA，仅脂肪组织为PPAR-γ2mRNA高表达，PPAR-γ3mRNA的表达局限于结肠上皮和脂肪组织。

PPAR-γ的天然配体包括长链多不饱和脂肪酸、花生四烯酸代谢产物如15-脱氧-△12，14-前列腺素J₂(15d-PGJ₂)等，人工合成配体包括噻唑烷二酮类(罗格列酮、曲格列酮、吡格列酮等)、部分非甾体消炎药(NSAIDs)、L-酪氨酸源性化合物。细胞核内的PPAR-γ与另一核受体维甲酸X受体(RXR)结合形成异二聚体。无PPAR-γ配体存在时，该异二聚体与共抑制因子结合.处于失活状态而不能与DNA结合；PPAR-γ与其配体结合而激活后.共抑制因子的位置为转录共激活因子所取代.异二聚体与靶基因启动子区的序列特异性PPAR反应元件(PPRE)结合，发挥转录调控作用。此外.PPAR-γ激活后还能以非DNA结合的方式，如抑制NF-KB、STAT、NFAT等转录因子的转录活性而调控靶基因表达。

PPAR-γ1在肠上皮细胞、固有层巨噬细胞和淋巴细胞中均有表达。已发现UC患者炎症和非炎症黏膜PPAR-γmRNA表达均显著下调，与CD患者和正常人相比差异有统计学意义。PPAR-γ表达障碍在不同UC疾病活动状态下有一定差异。研究显示活动期UC患者直肠组织PPAR-γmRNA表达较缓解期UC患者显著下调.并与内镜下疾病活动度相关，Pro12AIa为PPAR-γ基因的常见多态性位点，研究证实该位点突变(CCA-GCA)可降低PPAR-γ基因启动子活性。多项研究试图发现Pro12AIa多态性与UC的关系.结果均显示其与UC的发生风险无关。表明UC患者结盲肠组织PPAR-γ表达障碍并非由基因水平的变异所致。

除通过与靶基因启动子区结合发挥转录调控作用，以抑制促炎细胞因子表达外，PPAR-γ激活还可通过抑制NF-kB、STAT、NFAT等的转录括性以抑制肠道炎症反应.维持肠道内稳态.抑制NF-kB活性为PPAR-γ的主要抗炎机制。核转录因子NF-kB的活化可启动一系列免疫、炎症反应相关细胞因子基因表达，而PPAR-γ可通过与NF-kB p50/p65亚基相互作用.抑制NF-kB抑制因子(IkB)降解,以阻止NF-kB的核转位,或通过与NF-kB竞争转录共激活因子而抑制NF-kB活性。研究显示，PPAR-γ激活可抑制结肠炎模型犬鼠的NF-kB p65活化和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生。从而减少结脑黏膜中性粒细胞浸润.减轻结肠炎症。

研究显示PPAR-γ可能参与了T细胞功能的调控，对免疫调节具有重要意义。结肠炎模型小鼠巨噬细胞特异性PPAR-γ表达缺失可损伤脾脏和肠系膜淋巴结的调节性T细胞(Treg)组分.增加固有层巨噬细胞和CD8+T细胞的聚集和活化.从而显著加重结肠炎症的临床活动度和组织学改变。

PPAR-γ配体对结肠炎症的治疗和预防作用已在大量动物模型研究中得到验证。研究显示,对于IL-10缺陷自发性慢性结肠炎模型小鼠.在炎症发生前给予罗格列酮能显著增加结肠组织PPAR-γ蛋白表达，减低IFN-γ、IL-17、TNF-α、iNOS mRNA表达,延缓结肠炎症的发生。

另外，研究发现PPAR-γ可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin以抑制结肠癌变。在APC基因正常的情况下，以配体激活PPAR-γ可使β-catenin稳定维持于低水平，该作用的发挥可能与调控β-catenin降解复合体中的APC、axinl、axin2、GSK3β蛋白以及酪氨酸蛋白激酶的表达量和活性有关。

对于炎症性肠疾病和肠癌的预防与治疗，科学家虽然付出了很大努力，但目前的发病率和死亡率一直处于高位，因此发现和寻找新的更有效的预防及治疗药物是非常必要的。虽然许多发明对本领域作出了很大贡献，但为改进药物治疗效果，本领域仍在继续研究。

发明内容

本发明的目的在于提供式I所示的偶氮苯衍生物，其可药用盐。

本发明的另一目的在于提供通式I所示的偶氮苯衍生物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供一种含有通式I所示的偶氮苯衍生物的药物组合物。

本发明的又一目的在于提供该类化合物在预防和治疗炎症性肠病及消化道癌的药物中的用途。

为了完成本发明之目的，可采用如下技术方案：

本发明是涉及具有式I所示的下列结构偶氮苯衍生物：

或其可药用盐，其水合物和溶剂化物，其多晶和共晶，其同样生物功能的前体或衍生物。

本发明还公开了制备本发明化合物的方法，包括如下路线步骤：

制备权利要求1的所述化合物的方法，包括如下步骤：

路线1

步骤(a)中，先将R1取代的苯胺低温下与酸反应制备成重氮盐。

步骤(b)中，在常见环境条件下，如醋酸钠溶液，重氮盐再与R2取代的苯连接成对称或不对称的偶氮苯，R2一般含有给电子的活化基团。R1和R2一般为酯，最后一步再水解为酸。

路线2

该路线中，R1取代的苯胺在氧化剂作用下直接一步氧化生成对称的偶氮苯衍生物，常用的氧化剂包括：t-BuOCl/NaI,MnO₂,KMnO₄,HBO₃,Hg/I₂，Ag₂CO₃,Ag₂O,AgMnO₄,Niperoxide,Pb(OAc)₄,Ce(OH₃)O₂H,BBCP,KO₂,PhI(OAc)₂,O₂-t-BuOK,O₂-Cu₂Cl₂-pyridine,O₂-Co₃O₄,H₂O2等。R1一般为酯，最后一步再水解为酸。

路线3

该路线中，以R1取代的硝基苯为原料，在催化转移氢化的环境下，直接一步还原生成对称的偶氮苯衍生物，包括HCOOH/Pd/N(Et)₃,葡萄糖/NaOH,Zn/NaOH/乙醇等条件下。R1一般为酯，最后一步再水解为酸。

路线4

该路线中，R1取代的硝基苯与R2取代的苯胺，或R2取代的硝基苯与R1取代的苯胺在强碱的DMF溶液中，惰性气体保护下加热反应直接一步生成对称的或不对称的偶氮苯衍生物，其强碱包括氢氧化钾，氢氧化钠等。R1和R2一般为酯，最后一步再水解为酸。

另外，上述反应中的起始原料及中间体容易得到，或对本领域熟练技术人员来说可以用有机合成中的常规方法很容易合成。

所述偶氮苯衍生物可以溶剂化物或非溶剂化物的形式存在，利用不同的溶剂进行结晶可能得到不同的溶剂化物。式I所述药学上可接受的盐主要包括不同碱的盐，如下列无机碱或有机碱的盐：钠盐，钾盐，镁盐，钙盐，锂盐。在本发明范围内的所有这些盐都可采用常规方法制备。在所述的偶氮苯衍生物及其溶剂化物和其盐的制备过程中，不同结晶条件可能出现多晶或共晶。

本发明还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。

为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.01-100mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。

本发明化合物具有较高的生物利用度，可用于多种人类炎症性肠疾病、过敏性肠综合症及消化道癌的预防和治疗，所述的炎症性肠疾病主要是溃疡性结肠炎，结肠炎，直肠炎，克隆病。消化道癌症是结直肠癌、胃癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌，肝癌。

具体实施方式

以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。

测定仪器：核磁共振光谱用Vaariaan Mercury 300或400型核磁共振仪。质谱用ZAD-2F和VG300质谱仪。

实施例1.(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸甲酯-3-基)偶氮苯

3-对氨苯基-2-甲氧基正丙酸甲酯(1.4g,6.3mmol)溶于40ml THF中，除去空气，加入碘化钠(2.0g,13mmol),t-BuOCl(1.4g,13mmol),氮气保护反应3h,加1N硫代硫酸钠溶液猝灭，加乙酸乙酯萃取，有机相水洗一次，饱和氯化钠洗

一次，无水硫酸钠干燥，过滤柱层析得660mg橙色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:7.83～7.81(d,4H,ArH),7.43-7.41(d,4H,ArH),4.17～4.14(m,2H,-OCH-),3.66(s,6H,2-COOCH₃-),3.29(s,6H,2-OCH₃-),3.11～3.06(m,2H,-CH₂-),3.04～2.85(m,2H,-CH₂-).MS(FAB):m/z 415[M+H]⁺.

实施例2.(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸乙酯-3-基)偶氮苯

参照实施例1，用3-对氨苯基-2-甲氧基正丙酸乙酯(6.3mmol)代替化合物3-对氨基苯基-2-甲氧基正丙酸甲酯，同样操作过程得到(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸乙酯-3-基)偶氮苯橙色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:7.83～7.81(d,4H,-ArH),7.46～7.44(d,4H,-ArH),4.14～4.08(m,6H,-2OCH-,-2COOCH₂-),3.22(s,6H,-2OCH₃-),3.09～2.99(m,4H,-2CH₂-),1.16～1.13(t,6H,2CH₃-).MS(FAB):m/z 443[M+H]⁺.

实施例3.(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸-3-基)偶氮苯

将(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸乙酯-3-基)偶氮苯(0.26g,0.6mmol)溶于甲醇和水(10ml,10:1)中，加入氢氧化钠(0.12g,3.0mmol),室温反应5h,篜除溶剂，加2N HCl调pH＝2，有固体析出，抽滤得200mg(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸-3-基)偶氮苯，橙色固体。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.87(s,2H,2COOH),7.81～7.79(d,4H,ArH),7.46-7.44(d,4H,ArH),4.03～4.00(m,2H,2OCH-),3.26(s,6H,2-OCH₃),3.11～3.06(m,2H,-CH₂-),3.00～2.95(m,2H,-CH₂-).MS(FAB):m/z 387[M+H]⁺.

实施例4.(E)-4-(2-甲氧基正丙酸-3-基)--4’-羟基-3’-羧基偶氮苯

0℃下，向3-对氨苯基-2-甲氧基正丙酸乙酯(0.56g,2.5mmol)的1N HCl(20mL)溶液中滴加亚硝酸钠(0.5g,7.5mmol)的水溶液，滴加完毕,搅拌0.5h。将水杨酸(0.64g,2.3mmol)溶于NaOH(0.5g,12.5mmol)的水溶液中，搅拌20min,将9的盐酸溶液滴加至水杨酸的碱性溶液中，保持温度在17～18℃，pH在9～10，反应2h,加2N HCl调pH＝2,乙酸乙酯萃取，有机相水洗一次，饱和氯化钠洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤柱层析得350mg红色固体，将其溶于甲醇和水(10ml,10:1)中，加入氢氧化钠(0.16g,4.0mmol),室温反应5h,篜除溶剂，加2N HCl调pH＝2，有固体析出，抽滤得(E)-4-(2-甲氧基正丙酸-3-基)-4’-(4-羟基-3-羧基)偶氮苯。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.82(s,2H,-COOH),8.32～8.31(d,1H,ArH),8.08～8.04(dd,1H,ArH),7.80～7.78(d,2H,ArH),7.44～7.42(d,2H,ArH),7.16～7.14(d,1H,ArH),4.04～4.00(m,1H,-OCH-),3.26(s,3H,-OCH₃),3.12～3.05(m,1H,-CH₂-),3.01～2.94(m,1H,-CH₂-).MS(FAB):m/z 345[M+H]⁺.

实施例5.(E)-3-(2-乙氧基正丙酸-3-基)-4’-羟基-3’-羧基偶氮苯

参照实施例4，用3-间氨基苯基-2-乙氧基正丙酸乙酯代替化合物3-对氨基苯基-2-甲氧基正丙酸乙酯，同样操作过程得到(E)-3-(2-乙氧基正丙酸-3-基)-4’-羟基-3’-羧基偶氮苯红色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.71(s,1H,-COOH),8.34～8.33(d,1H,ArH),8.09～8.07(dd,1H,ArH),7.76～7.72(m,2H,ArH),7.51～7.47(m,1H,ArH),7.43～7.40(d,1H,ArH),7.18～7.16(d,1H,ArH),4.11～4.08(m,1H,-OCH-),3.58～3.31(m,2H,-OCH₂-),3.11～3.06(m,1H,-CH₂-),3.03～2.98(m,1H,-CH₂-),1.07～1.04(t,3H,-CH₃).MS(FAB):m/z 359[M+H]⁺.

实施例6.(E)-4-(2-甲氧基正丙酸-3-基)-4’-羟基-3’-羧基偶氮苯二钠盐

将(E)-4-(2-甲氧基正丙酸-3-基)-4’-羟基-3’-羧基偶氮苯(228mg,0.66mmol)溶于10ml乙醇中，滴加碳酸氢钠(111mg,1.32mmol)的水溶液1ml，室温反应6h，反应完毕后蒸除乙醇和水，加丙酮有固体粉末析出，抽滤并用丙酮洗涤得产物245mg。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ:8.23～8.22(d,1H,ArH),7.78～7.74(dd,1H,9.0Hz,ArH),7.69～7.66(d,2H,ArH),7.38～7.35(d,2H,ArH),6.75～6.72(d,1H,ArH),3.57～3.53(dd,1H,-OCH-),3.17(s,3H,-OCH₃),3.04～2.98(dd,1H,-CH₂-),2.83～2.75(dd,1H,-CH₂-).

实施例7.(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸-3-基)偶氮苯二钠盐

将(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸-3-基)偶氮苯(315mg,0.81mmol)溶于20ml乙醇中，滴加碳酸氢钠(137mg,1.63mmol)的水溶液1ml，室温反应6h，反应完毕后蒸除乙醇和水，加丙酮后析出固体，抽滤并用丙酮洗涤得产物292mg。

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ:7.76～7.74(d,4H,ArH),7.41～7.39(d,4H,ArH),3.76～3.73(dd,2H,-OCH-),3.22(s,6H,-OCH3),3.08～3.04(dd,2H,-CH₂-),2.92～2.87(dd,2H,-CH₂-).

药理活性

体内活性评价：

采用结肠粘膜组织致敏模型，将25只大鼠处死，取出整段结肠，刮取结肠粘膜充分研磨，按1：1加入完全弗氏佐剂搅拌成匀浆供大鼠免疫。从110只大鼠中随机取出10只为正常对照组，其余100只大鼠每只均在左足垫内分点注入上述结肠粘膜匀浆0.3毫升进行免疫。间隔15天再在大鼠右足垫同剂量重复免疫1次。30天后随机取5只大鼠处死并取出全部结肠，肉眼观察有明显出血点和糜烂点，同时出现肠壁增厚、结肠淋巴结肿大等现象。经组织病理学确证其病理改变与溃疡性结肠炎一致。除去造模死亡的大鼠，余下造模大鼠按体重随机分为8组，每组10只，分别为阴性对照组和试药组，各组大鼠给药容量为1毫升/100克体重，正常对照组和阴性对照组给同等剂量的0.5％CMC-Na溶液，连续给药3周后处死，称体重，取结肠和直肠，纵向切开清除粪便，生理盐水冲洗，滤纸吸去水分后称重计算处理。并用放大镜肉眼观察粘膜的出血点和糜烂点，并计数编号，固定结肠标本，做组织病理学检查。

结果：阴性对照组大鼠两周后出现软便，三周后出现粘液便，消瘦，个别出现便血。结肠见充血，水肿，肠壁增厚，淋巴组织肿胀。正常对照鼠无上述病变。部分给药组病变均有明显改善，结肠炎症状明显减轻。组织病理学检查发现，阴性对照鼠结肠粘膜呈弥漫性炎症，结肠下段较重呈现不同程度的充血、水肿，上皮坏死剥脱，病变粘膜腺体的杯状细胞明显减少，病变显著部分可见粘膜上皮坏死波及腺体上层形成局部的糜烂和溃疡。部分给药组可见水肿充血明显减少，坏死的上皮及腺体有明显再生修复现象，炎性细胞减少，腺体显著增加，杯状细胞数量明显增多。

对大鼠溃疡性结肠炎模型的抗溃疡作用

MTT法测定肿瘤细胞存活率

将对数生长期的细胞用胰酶消化后配制成浓度为0.8～2×10⁴细胞/ml的细胞液，按1000个/孔接种于96孔板，每孔加100μl。次日加入含不同浓度药物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100μl(DMSO终浓度<0.5％)，每药设5～7个剂量组，每组至少设三个平行孔，于37℃继续培养120hr后，弃上清，每孔加100μl新鲜配制的含0.5mg/ml MTT的无血清培养基，继续培养4hr，弃培养上清，每孔加200μl DMSO溶解MTT甲簪沉淀，用微型振荡器振荡混匀，用MK3型酶标仪在参考波长450nm，检测波长570nm条件下测定光密度值(OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，用下面公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算IC₅₀：

MTT筛选结果

Claims (5)

1.一类偶氮苯化合物及其可药用盐，所述的化合物：

(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸甲酯-3-基)偶氮苯

(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸乙酯-3-基)偶氮苯

(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸-3-基)偶氮苯

(E)-4-(2-甲氧基正丙酸-3-基)--4’-羟基-3’-羧基偶氮苯

(E)-3-(2-乙氧基正丙酸-3-基)-4’-羟基-3’-羧基偶氮苯

(E)-4-(2-甲氧基正丙酸-3-基)--4’-羟基-3’-羧基偶氮苯二钠盐

(E)-4，4’-二(2-甲氧基正丙酸-3-基)偶氮苯二钠盐

2.一种药物的组合物，其特征在于，含有权利要求1的化合物和制剂学可接受的载体。

3.权利要求1的化合物在制备预防和治疗炎症疾病和\或免疫失调和\或肿瘤疾病方面的药物中的应用。

4.根据权利要求3的应用，其特征在于，所述的炎症疾病选自炎症性肠疾病，过敏性肠综合症；所述肿瘤疾病选自消化道癌症。

5.根据权利要求3的应用，其特征在于，所述的炎症性肠疾病选自溃疡性结肠炎，溃疡性直肠炎，克罗恩病；消化道癌症选自结肠癌，直肠癌。