CN101801919A - 治疗胃肠疾病的靶向重氮前药 - Google Patents

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Abstract

本文中提供了用于降低患者体内NFκB DNA-结合活性的化合物、组合物和方法，该方法包括向患者给药治疗有效剂量的本申请化合物或组合物而降低、缓解或治疗各种肠胃疾病，如发炎性肠疾病(IBD)。

Description

治疗胃肠疾病的靶向重氮前药
本申请要求享有2007年6月29日提交的名为“Targeting Prodrugs for theTreatment of Gastrointestinal Diseases”的美国临时专利申请60/947,104的受益，其公开内容以其全文结合于本文中作为参考。
技术领域
本申请涉及可以用于治疗胃肠疾病的化合物和药物组合物，该胃肠疾病包括但不限于炎症性疾病如发炎性肠疾病(IBD)。
背景技术
药物靶向可以定义为药物向特定器官、组织或细胞群的输送(Schreier2001)。仍然处于其新生阶段，这个领域提供了在增强药物治疗效能的同时降低系统性影响或副作用的前景。尽管这种方法前途光明，人们也正为之努力，但是迄今为止只有极少成功案例，部分原因是由于药物转运和潜在的靶向载体表达的基本因素理解有限所致。化学药物靶向涉及使该化学药物在靶组织中累积的药物结构(通常是生物可逆的)的精心修饰；前药的位点特异性释放通过在身体中其他部位并不存在的化学或酶条件引发。
结肠是药物靶向方法有效性的一个重要挑战，因为在结肠中的条件很大程度上类似于胃肠(GI)系统中别的普遍存在的那些条件，而经过胃肠道的鲁米诺(luminal)pH梯度对于根据严格的化学理论进行的有效的局部药物释放而言，过于平缓(Bauer，2001)。另一方面，结肠对于结肠自身如发炎性肠疾病(IBD)和结肠癌的病理学的治疗和对于需要类鸦片药物治疗的慢性便秘的缓解而言，是一种重要的药物靶。结肠作为不能从胃肠道其它区域吸收或在释放点存在十二指肠蛋白酶而非常不稳定的肽和蛋白药物的潜在入口位点，也是很重要的(Saffran，1986；Bai，1995)。
结肠和可能用作位点特异性药物释放的载体的小肠之间一个关键的差异是结肠丰富的微生物群。人的胃肠系统寄居着400-500种细菌，最高达1014个生物体的活的群落。与构成人体的1013个真核细胞相比，这是很奇特的。胃肠道随着从胃经过小肠下行，细菌浓度呈梯度逐渐稳定升高，接着在结肠极大地增加。在小肠中细菌浓度典型地为103-104 CFU ml-1，而在结肠中浓度为1011-1012 CFU ml-1，并且粪便干重的三分之一由细菌组成(Moore andHoldeman，1974and 1975；Simon and Gorbach，1984)。这些生物体需要通过从小肠进入而未消化的物质(特别是多糖)发酵获取它们的能量，而对于这个目的已经进化出复杂的一系列酶，如偶氮还原酶、葡萄糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-木糖苷酶、硝基还原酶、半乳糖苷酶和脱氨酶(Scheline，1973)。
这种细菌酶表达中的急剧增长已经作为结肠靶向药物，尤其是对于治疗IBD的那些药物的一个方式进行了研究。这些努力的一个成功的成果是开发出5-氨基水杨酸(5-ASA)1的偶氮基前药(图示1)，该偶氮基前药因为其亲水性和极性在通过与结肠微生物群有关的偶氮还原酶还原偶氮连接子时释放其5-氨基水杨酸‘有效载荷’之前完整穿过胃肠系统。几种基于这个概念的药物，如伊普柳氮(ipsalizide)，巴柳氮(balsalazide)2(Chan et al.1983)，柳氮磺胺吡啶(sulphasalazine)(原型)和奥沙拉嗪(奥柳氮，olsalazide)3(Willoughbyet al.，1982)，在临床上用于治疗IBD(Green，1998)。
图示1
其它靶向结肠的药物类型如用于结肠的抗炎性类固醇(激素)，还不太成功(Sinha & Kumria 2001)。同时，因为类固醇在口服给药时由于其从胃和小肠都易于吸收而具有多种系统性副作用，在这些情况下对于适合的系统的需要则更加迫切。慢性发炎性肠疾病包括两种主要的功能障碍，即溃疡性结肠炎和克罗恩病。这两种病症都以腹泻、减重和潜在严重的和威胁生命的并发症的形式产生显著的发病率。在欧洲的发病数估计高达8千万例/年(Logan，1998)，而在美国的绝对发病数据称也约为1百万，每年报道15-30,000个新病例(DiPirio and Bowden，1997)。因此，对于揭开IBD根本的病因学和开发新疗法并改进现存的药物疗法而产生巨大的成果，一点也不令人惊讶。这些成果仅限于5-ASA衍生物和类固醇。
对结肠的靶向类固醇的成果尤其巨大。已经研究的技术包括：生物可降解聚合物(Basit，2000)，定时释放系统，用pH敏感材料涂层，胃肠压力控制释放(Hu et al，1998)和化学药物靶向。
属于后一类型的方法围绕附着亲水载体的类固醇而运行，该载体或许起到细菌多糖加工酶(反应酶)(图示2)底物的作用。所研究的载体实例包括：糖苷(例如，4，参考符号a-g)；葡糖苷酸(Haeberlin，1993；Cui1994)；聚-(L-天冬氨酸)衍生物(Leopold，1995)；α、β和γ-环糊精共轭物(Yano，2002)；聚合物共轭物(例如，5，McLeod et al.，1994)。尽管这些设计中的一些是有前景的，但是迄今它们满足的成功有限，一部分是由于糖苷酶在胃肠道中广泛分布(导致无位点特异性释放；Sinha & Kumria，2001)，而在一些情况下，是因为在结肠中释放缓慢的特性(对于一些多糖高达12h，Yang；2002)所致。因此，成功的偶氮还原酶方法的使用迄今仅限于包含初级芳香胺的药物，如5-ASA。
发明内容
本文提供了一种用于将含羟基化合物药物靶向至结肠的新策略。设计了这种将含羟基药物靶向至结肠的新策略来克服糖苷酶靶向方法中的设计缺陷。实现含羟基药物位点特异性递送的一种方法，示意性地表示于图示3中。在一方面，药物选自包括抗炎药，抗癌药，显影剂，尤其是在结肠病造影中所用的药剂；疫苗，抗原，抗感染药，肽，反义分子和蛋白的组。
在本申请的一方面，该方法提供了候选药物在IBD小鼠样本中抗炎疗效的评价。在另一方面，该方法对偶氮化合物的胃肠渗透性和其穿过胃肠道的能力提供了见解。
在本申请中，发明人发现了如本文中所公开的前药的化合物和作为选择性药物降低患者体内NFκB DNA-结合活性的有效组合物的需要。在一方面，提供了一种包括给药治疗有效量的化合物或组合物而有效降低、缓解或治疗各种肠胃疾病，包括发炎性肠疾病(IBD)的方法。
在一方面，药物经由酯基连接到载体基团，其是通过偶氮键连接到第二载体基团。载体基团可以直接连接到偶氮基团或间接连接到偶氮基团。正如本文中所提供的那样，载体基团设计为最大限度地抑制胃和上部肠的吸收。这种方法探讨了选择性还原结肠中的偶氮连接子，释放化学不稳定的潜在前药，这种前药随后经过环化，如内酰胺化作用，而释放出药物有效载荷，如类固醇。在某些化合物中，环化反应基本上自发进行。这种设计的整体效果是制成具生物稳定性或耐性的酯基团，将药物连接到仅仅在结肠中找到的化学敏感性的载体基团。
一般而言，本申请的前药指的是“载体-药物”。该“载体”可以包括化合物如5-ASA或对-氨基苯甲酸(PABA)。当载体具有治疗作用时，例如5-ASA，则该前药一般指的是“协同前药”。这种协同前药在本文中可以指5-ASA-药物，其中，该药物可以是任何合适的治疗剂，包括本文中所公开的那些治疗剂。这种协同前药可以包括但不限于，5-ASA-环丙沙星，5-ASA-贝伐单抗(bevacizumab)，5-ASA-泼尼松(prednisolone)，5-ASA-5-ASA，等。当该载体并不具有治疗作用时，如PABA，则该化合物可以单纯的指“前药”。这种前药可以在本文中称为PABA-药物，如，例如PABA-环丙沙星，PABA-贝伐单抗(bevacizumab)，PABA-泼尼松，PABA-5-ASA等。
Figure GSB00000036637000051
图示3
这是可以确定的，前药的物理化学特性能够通过改变化合物，包括取代基S1和S2的性质，对胃肠渗透到结肠进行优化，其中可以采用在芳基环上的一个或多个取代基S1和S2，如本文中所公开的。
偶氮键还原易于进行，因为这是基于与底物有关的存在于结肠中的偶氮还原酶的混杂性，这通过它们与伊普柳氮不同的有效还原底物的能力来证明，其中载体基团是对-氨基马尿酸盐[酯]，巴柳氮(对-氨基苯甲酰基-β-丙氨酸载体)，柳氮磺吡啶(磺胺吡啶载体)，位阻(空间)体积大的PAF拮抗剂(Carceller et al.，2001)，9-氨基喜树碱(aminocamphothecin)(Sakuma et al.，2001)和5-ASA-N-甲基丙烯酰胺，丙烯酰氧基乙基和丙烯酰胺基共聚物(例如，Van den Mooter et al.，1994)。在肠中存在巨大数量的微生物群导致在氧化还原潜力方面从远端小肠中的-67±90到右半结肠中-415±72的变化(Wilding et al.1994)。对于酶的相对分布和在偶氮药物释放中的化学还原，理解还并不充分。
环化或环闭合取决于胺基团如酯上的苯胺氨基的亲核攻击。这种酯的一个实例是类固醇酯。尽管苯胺所具有的亲核性较低(相比于脂族胺)，但是分子内的高效摩尔浓度将充分促进迅速的环闭合。通过苯胺分子内氨解酯的报道，在大致相若的条件下，已经进行了描述。Kirby et al.(1979)研究了3-(2-氨基苯基)丙酸甲酯的自发环化作用，发现在中性(大致等于结肠中的pH)和39℃下，反应按照表观一级速率常数2×10-4sec-1进行，对应的一级反应半衰期为57分钟。Fife和Duddy(1983)报道了(2-氨基苯基)乙酸甲酯和三氟乙基-(2-氨基苯基)乙酸酯(产生吲哚酮)的环闭合在微碱性条件(pH 7-8)下遵循类似的动力学。这些半衰期对于结肠中的药物释放是理想的，其中滞留时间趋向是稍微延长的。
在本申请的化合物中的酯键发现在胃肠道中的条件下是高度稳定的。在胃肠道腔中的酯酶活性受限于胰腺丝氨酸蛋白酶，这种酶对有限数量的底物，一般是芳香氨基酸的酯，表现出后效酯酶活性。类固醇21-酯(参见以上编号的图示2)，例如，已经证明在模拟肠流体样本中是稳固的。例如，Fleisher et al.(1986)报道了在小鼠肠灌注液中氢化可的松-21-琥珀酸酯水解的一级速率常数为0.003min-1。这个数字对应于12h的半衰期，其明显比预期到达结肠的穿过时间更长。Jhunjhunwala(1981)报道了在24h后小于5％氢化可的松-21-琥珀酸酯在pH7(45℃)时消失。
胃肠吸收是分子量、亲脂性和极性在起作用；一般而言，极性的亲水性分子吸收并不充分。在包括由S1表示的取代基的载体基团处变化的可能性中，例如，存在连接载体的偶氮键，这些载体包括但不限于5-ASA和类固醇，由此产生药物的协同前药，如类固醇。这种协同前药因为质量、极性和亲水性，可以对其穿过肠提供理想的或有益的物理化学特性。
在本申请中公开的位阻类固醇酯比氢化可的松-21-琥珀酸酯对于水解作用更加脆弱(参见Jhunjhunwala，1981)。而且，这种酯也可以连接在类固醇核上的几个不同羟基基团之一上。例如，不受本文中所提出的任何理论所束缚，置于高度位阻的11β轴向羟基位的酯(参见图示2)比该21-酯更稳定。
本申请公开了能够用两步过程释放靶向结肠的药物，如抗炎类固醇，的新型系统和化合物。本申请也公开了各种化合物及其衍生物的合成，包括类固醇化合物(例如氢化可的松，地塞米松或布地缩松的酯)，硝基咪唑类药(例如，甲硝唑)，抗生素(例如，喹啉类药如萘啶酸，氟喹啉酮类药，如环丙沙星或左氧氟沙星，胺基糖甙，如丁胺卡那霉素，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龙霉素，链霉素，托普霉素和阿泊拉霉素)，化学疗法(例如，甲酰四氢叶酸，拓扑替康，依立替康，氨甲叶酸)，和抗体(例如，贝伐单抗，西妥昔单抗(cetuximab)，帕尼单抗(panitumumab)，英夫利西单抗(infliximab))。本申请进一步公开了环闭合动力学的测定，采用酶和肠灌注液体外筛选肠内稳定性，在结肠细菌存在下体外药物释放，以及在合适动物样本中的治疗疗效，例如抗炎疗效。在一方面，在21-和17-位制备了一系列抗炎类固醇氢化可的松、地塞米松和布地缩松的酯作为前药。在另一方面，本申请公开了氨基酯的各种偶氮衍生物的合成。
以下图示提供了典型生物活性剂和药物，包括抗肿瘤药物(安曲霉素，环肽类化合物(sansalvamide)衍生物，卡培他滨)，COX-2抑制剂(白藜芦醇，姜黄素，美洛昔康，替诺昔康，吡罗昔康)，抗生素药(甲硝唑)，免疫抑制剂(环孢霉素)和化学保护作用药(URSO)，都可以制备而应用于本申请中：
Figure GSB00000036637000071
Figure GSB00000036637000081
在另一方面，本发明提供了用于确定或判断氨基中间体化合物的环闭合速率的分析方法。本文中也提供了用于判断环闭合速率，和测定由于载体基团如苯胺衍生物中的取代作用，其对内消旋效应的依赖性的方法。在本申请还有的另一方面，提供了化合物在含水条件(pH1-8)和胰腺丝氨酸蛋白酶(体外)和内脏中存在的其它酶的存在下，以及小鼠肠流体存在下的测定稳定性的方法。
在另一方面，本发明提供了用于这些化合物在微生物群存在下在体外还原速率的判断方法。在还有的另一方面，本发明提供了一种用于采用患结肠炎的小鼠样本判断这些化合物在体内疗效的方法。在另一方面，本发明提供了采用小鼠灌注样本测定本文中提供的化合物渗透性的方法，其可以评价穿过胃肠道的渗透能力。对于潜在的结肠靶向作用，采用了可以忽略渗透性的化合物。
附图说明
图1是在pH8(37℃)时前药A的浓度对时间的曲线图。
图2是在pH8(37℃)时前药A浓度的自然对数对时间的曲线图。
图3是在pH7.4(37℃)时前药A的浓度对时间的曲线图。
图4是在pH7.4(37℃)时前药A浓度的自然对数对时间的曲线图。
图5是在pH9(37℃)时氨基前药B内酰胺化的数据分布图，显示出前药的消失以及可的松和喹啉酮的出现。
图6是在pH9(37℃)时氨基前药B浓度的自然对数对时间的曲线图。
图7是在pH8(37℃)时氨基前药B内酰胺化的数据分布图。
图8是在pH8时氨基前药B浓度的自然对数对时间的曲线图。
图9是在pH9(37℃)时氨基前药B在PBS中内酰胺化的数据分布图。显示出前药的消失以及可的松和喹啉酮的出现。
图10是pH7.4(37℃)时氨基前药B浓度的自然对数对时间的曲线图。
图11是健康小鼠(未治疗)和以5mg/kg剂量治疗的右旋葡聚糖硫酸钠诱发型结肠炎(DSS-诱导结肠炎)小鼠的体重损失百分数的数据分布图。
图12是以5mg/kg剂量治疗的DSS-诱导结肠炎小鼠结肠段的疾病活动指数(DAI)评价的数据分布图。
图13是以5mg/kg剂量治疗的DSS-诱导结肠炎小鼠结肠长度的数据分布图。
图14是健康小鼠(未治疗)和以5mg/kg剂量治疗的DSS-诱导结肠炎小鼠胸腺重/体重比(T/BW)的数据分布图。
图15显示了图11中所提示数据的重制图和重新分析。
图11采用了学生T-检验(students T test)比较数据组。在该图中，采用单向ANOVA检验接着Tukey后检验法进行数据组比较。也在统计学上有效的比较了在4-6天时的数据，如三个放大图所示。当与普通的对照标准比较时，所有接受DSS的小鼠都明显减重。然而，当小鼠用泼尼松或协同前药2治疗时，该体重损失相对于仅给予对照标准的赋形剂(vehicle)的小鼠发生了下降。在接受泼尼松或协同前药2的组之间没有统计学上的差别。
图16显示了采用上述的统计学方法对图12中所示数据重制图和重新分析。接受DSS的所有小鼠相对于未治疗的小鼠显示出结肠炎的临床征兆。相比那些仅仅接受赋形剂的小鼠，接受泼尼松或协同前药2的小鼠中疾病的严重度发生了显著降低。在接受泼尼松或协同前药2的组之间没有统计学上的差别。
图17是采用上述的统计学方法对图13中所示数据重制图和重新分析。结肠短缩是结肠炎严重度的临床数据信息显示。所有接受DSS的小鼠都呈现出结肠短缩。相比那些仅仅接受赋形剂的小鼠，接受泼尼松或协同前药2的小鼠中结肠短缩发生了显著降低。在接受泼尼松或协同前药2的组之间没有统计学上的差别。
图18是采用上述的统计学方法对图14中数据重制图和重新分析，附加数据显示了胸腺重量：最终体重的比率。在对照实验中，未治疗小鼠相对于赋形剂治疗小鼠的胸腺重量对初始体重或对最终体重没有观察到显著差异。如所预期，氢化可的松治疗组相比于赋形剂治疗的小鼠，证明T/BW比率显著降低。相反，在协同前药2治疗组中的T/BW比率与赋形剂治疗组的T/BW比率统计学上并没有差别。
具体实施方式
方法
以下方法描述了在21-、11-和17-位含氨基酯的偶氮衍生物的一系列抗炎类固醇氢化可的松、地塞米松或布地缩松的酯的制备。
环闭合动力学化合物
在一个具体实施方式中，对地塞米松的合成方法进行如下概括(图示4)。2-硝基肉桂酸通过催化还原而还原成氨基苯丙酸并立即用BOC酸酐处理。在21位最暴露的类固醇羟基采用N，N’-二环己基碳二酰亚胺/二甲基氨基吡啶选择性酰化(Johnson et al，1985)。BOC保护可以通过鼓泡穿过二氯甲烷(DCM)溶液的无水HCl来去除，苯胺6以盐酸盐回收。该盐使用前在-80℃下储存。3-(2-氨基苯基)丙酸甲酯自发环闭合即使在-20℃下储存也会发生(Kirby et al.，1979)。
Figure GSB00000036637000101
图示4：(i)Zn粉，然后是PtO2，MeOH；(ii)BOC2O，(iii)类固醇，DCC，DMAP，DCM；(iv)HCl气/DCM
类固醇氨基苯基乙酸酯可以通过采用(邻-硝基苯乙酸)酯化接着采用Zn粉在甲醇中还原硝基获得，并如上所述产生盐酸盐。适合评价在环闭合上的内消旋/位阻效应的化合物，以类似方法获得。因此，例如，异构体类固醇21-甲氧基-氨基苯基乙酸酯7和8可以经由3-甲氧基苯乙酸的2-硝化接着酯化和还原获得(图示5)。肉桂酸系列化合物可以以类似的方法获得，甲氧基肉桂酸的硝化、还原、BOC保护、酯化和去保护。氨基邻位和对位的甲氧基可以用于区别在内酰胺化时的空间影响和电子影响(electronic influence)。
Figure GSB00000036637000111
图示5：(i)HNO3，AC2O(ii)类固醇，DCC，DMAP，DCM；(iii)Zn粉，MeOH
位阻更大的11-羟基可以通过在更强烈条件下进行酰化之前保护17α-和21-OH基团(Sloan et al，1978)(或通过采用苯乙酰氯(Spratt et al.，1985))接着还原和去保护的操作，而获得11-苯基乙酸酯。
图示6：(i)丙酮，TsOH，加热(ii)2-硝基苯乙酸，DCC，DMAP，DCM；(iii)H3O+；(iv)Zn，MeOH
本申请的偶氮前药可以通过由偶氮偶联单元酯化类固醇而获得。例如，5-ASA-类固醇协同前药9，5-ASA-地塞米松，(图示4)可以通过化合物10酯化地塞米松然后去保护水杨酸酯而获得。类似地，许多偶氮载体共轭物可以产生以证明肠的渗透性。
Figure GSB00000036637000121
图示7：(i)NaNO2，HCl，然后是叔丁基水杨酸
环化动力学
环化动力学可用通过合适的UV、HPLC或NMR进行监控。类固醇丙酸酯自发环化的喹啉酮产物在340nm具有λmax，这容许在酯原料和类固醇产物存在下对其进行测定。皮质类固醇一般在240-250nm区域具有λmax值。可替代地，在缓冲的D2O中通过1H NMR监控反应。尽管实时分析是优选的，但是反应也可以通过冷却快速短柱HPLC(RT＜1min)以抑制环化来进行监控。在一个具体方面，对于乙酸酯系列和丙酸酯系列，在11位和12位两种情况下，反应可以在pH 5-8范围内进行监控。在苯胺环上的取代效果也可以采用这种方法进行测定而确定这些化合物及其衍生物的最佳治疗活性。
肠内稳定性
候选偶氮化合物的相对稳定性可以在体外一些纯化的胰腺内肽酶如羧酸肽酶的存在下进行评价(Gilmer et al，2002)。表现出最大稳定性的化合物可以选择进行小鼠肠灌注样本的评价(Friend et al.，1985；Yano et al.，2002)。小鼠胃肠道的部分，从生物源获得，TCD(Ireland)可以进行轻微冲洗并以合适的pH缓冲。混合物可以进行培养并不定时等分试样取出。由于这些基质的复杂本质特性，剩余药物可以通过反相HPLC进行测定。半衰期可以采用米曼氏动力学(Michelis Menten kinetics)进行测定。所选化合物的肠内稳定性特性可以进一步采用肠组织匀浆和人CACO-2细胞匀浆进行探测。
结肠细菌体外偶氮还原
要还原的候选化合物的偶氮键的敏感性可以采用简单体外细菌降解样本进行评价。这种细菌降解样本采用商购获得的乳酸菌培养基(Azad Khanet al，1983)培养的介质(该生物表达与结肠细菌类似的偶氮还原酶)。介质可以用辅酶NADPH和FAD补充。还原可以进一步采用小鼠或豚鼠的CO2饱和的结肠灌注液进行研究(参见，例如，Yano，2002)。
抗炎活性
体内的前药疗效可以在动物样本中进行评价。在急性鼠科右旋葡聚糖硫酸钠诱发型(DSS)结肠炎中，NFκB DNA-结合活性增加，而所观察的炎症病理学对应于人类发炎性肠疾病/结肠炎中所观察的炎症病理学(Okayasu etal.，1990)。
balb/c小鼠是适用于该实验的合适品种，因为其是已知的对口服DSS易感的，并产生结肠炎(Egger et al.，2000)。雌鼠6-8周龄可以使用以确保该动物是成熟的并且体重相当。基于资源方程的方法(Resource Equation Method)，其中E(自由误差度)＝N(实验单元数)-T(治疗数)，总计21组，每组3只动物认为是合适的样品大小(E＝42)(Festing et al.，2002)。12组小鼠可以以7天的时间周期任意给药2.5％DSS的蒸馏水溶液。先前的实验显示，DSS的这个浓度足以诱发轻度结肠炎，低水平减重或III级病灶，这是典型的广泛粘膜损坏(Egger et al.，2000)。其余9个对照组可以仅仅接受蒸馏水。然后通过口服给药用前药对小鼠进行治疗。8个已给DSS的组连续1-4天，每日两次接受2种不同剂量的前药。在接受最后的剂量之后1h通过颈部错位杀死小鼠。作为由诱发结肠炎自然恢复的小鼠的对照，可以在杀死前药治疗的小鼠的同时每四天杀死DSS治疗的组。对照小鼠，仅仅接受水，可以给DSS治疗的动物相同剂量的前药。一个对照组可以保持不治疗。
取出肠进行组织学检测和RNA提取，因此另3只未处理的小鼠需要实施解剖、组织学和RNA提取技术。结肠部分可以在10％的锌-福尔马林中固定并包埋于石蜡中。横截面可以采用苏木精和曙红进行常规染色。粘膜损伤的严重度按评分分成0-III级：0级：正常；I级：腺体末梢三分之一变形和/或毁坏；II级：所有具有剩余表面上皮细胞的腺体末梢的三分之二腐蚀/损毁或完全丢失；III级：所有腺体丢失(Egger et al.，2000；Festing et al.，2002；Egger et al.，1997)。根据所提取的RNA可以进行逆转录酶聚合物酶的链反应以检测NFκB-依赖性前炎细胞因子IL-1和TNF-α的水平，其在DSS诱发结肠炎中是上调的(Egger et al.，2000)。根据这些研究而获得的结果，如果有必要，这些实验可以采用不同前药浓度和不同剂量数目而重复进行实验。
GI(胃肠)渗透性评价
前药已经设计为排除在吸收过程之外，因此，容许其转至结肠。用于进一步评价的化合物可以基于其较差的渗透性特性进行选择。化合物的胃肠表现方式可以首先采用外翻肠内囊进行评价(Wilson and Wiseman，1954)，这可以直接评价和对比药物转移穿过体外障碍和下述的肠灌注样本。
体内样本-单向灌注：肠内灌注
这基本是一个独立的肠(内脏，gut)循环样本，其中对腔管的药物耗损进行了监控(Komiya et al.，1980)。在麻醉的动物中原位保持肠，以尽可能不影响正常功能。该样本的限制在于内脏血流速自然可变的，并且在麻醉状态下会降低。中线切割动物可以轻微暴露肠内20-40cm的midileal部分。选择该部分是因为其可接近性和合适的脉管系统有利于插入导管。邻近部分的肠系膜动脉弓(arcades)可以扎紧。切除肠并用灌注Tygon管插入。肠系膜静脉用合适尺寸的硅橡胶或聚乙烯管插入，而静脉血收集在抗凝结的(肝素化的，heparinized)(或相当的)、标准的离心管中。在37℃用等张的磷酸盐缓冲液轻微冲洗肠内腔之后，药物溶液灌注到该段的近端部分并容许以0.2mL/min流过该段肠，并在该段肠远端处收集。将分离的肠保温，并频繁使用温(37℃)盐水施加到覆盖肠的网垫进行保湿，其可以通过牙科用橡皮障覆盖。也可用小灯维持配制品(preparation)为37℃。灌注药物穿过肠达到120分钟后以规律间隔收集灌注液。分析灌注液并在实验过程中全程监控灌注流体中药物的消失。
本申请的实施方式和各个方面
在上述的一个具体方面中，实验提供了用抗炎类固醇，包括IBD之中所用的两种主要疗法的新型协同前药，靶向结肠的方法的评价。
在本申请的另一方面，提供了一种用于合成几类新的新型含苯胺和偶氮载体的类固醇酯的方法。该方法提供了氨基苯基乙酸酯和丙酸酯在模拟生理条件下的环化动力学的综合研究以及对环闭合动力学的电子和空间环取代效应的理解。另外，该方法提供了对21-和11-皮质类固醇酯的水、酶和肠内稳定性的测定。在还有一方面，该方法可以测定类固醇偶氮共轭物还原速率和类固醇上的依赖性和环取代效应。
在一个实施方式中，提供了通式Ia的化合物：
Figure GSB00000036637000151
其中：A是氢或是含羟基药物的残基；Z选自由-C(O)-，-S(O)-，-OC(O)-，-OC(O)NR13-，-S-C(O)-，-SC(O)NR13-，-C(O)NR13-，-NR13C(O)NR13-，-OS(O)-，-OS(O)2-，-S(O)2NH-和-OPO(OH)-组成的组；每个R1，R2，R5和R6独立地是氢或各自独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，每一个都是取代的或未取代的；每一个R3和R4独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；R11选自由氢，羟基，(C1-3)烷氧基和-C(O)OR10组成的组；每一个R9和R12独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，-SO3R13，-PO3R13，(C1-3)烷氧基组成的组，每一个烷基，环烷基，芳基和杂芳基是取代的或未取代的；或R11和R12当在苯环上邻位取代时，一起形成可选取代的杂环的环；R10是氢或(C1-3)烷基；每一个R13独立地是氢或(C1-3)烷基，而每一个a、b和c独立地是0，1或2；或其药物可受盐，可选地以单个立体异构体或多个立体异构体的混合物形式。在一个变型中，R11和R12一起形成可选取代的杂环的环。在另一变型中，R11和R12一起形成丙酮基-4-酮。在还有的另一变型中，R11是C(O)O-R10，而每一个R12和R10都是氢。在另一实施方式中，提供了通式I的化合物：
Figure GSB00000036637000161
其中：A是氢或是含羟基药物的残基；每一个R1，R2，R5和R6独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个都是取代的或未取代的；每一个R3和R4独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；R7是氢或(C1-3)烷基；R8是氢或(C1-3)烷基；R9选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；而每一个a、b和c独立地是0，1或2；或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或多个立体异构体的混合物的形式。在一个变型中，R7和R8是氢，而c为1或2。在另一变型中，a和b都为0，而c为1或2。在还有的另一变型中，R9是氢；在另一变型中，R7和R8是氢，R9是氢，而a和b都为0。
在另一实施方式中，提供了通式II的化合物：
其中：A是氢或是含羟基药物的残基；每一个R1，R2，R5和R6独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；每一个R3和R4独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10))环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；R7是氢或(C1-3)烷基；R8是氢或(C1-3)烷基；每一个a、b和c独立地是0，1或2；或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或多个立体异构体的混合物的形式。在一个变型中，R7和R8是氢，而c为1或2；在另一实施方式中，a和b都为0，而c为1或2。在还有的另一变型中，R7和R8是氢，而a和b都为0。
在还有的另一实施方式中，提供了通式III的化合物：
Figure GSB00000036637000171
其中：A是氢或是含羟基药物的残基；R5和R6独立地是氢，或独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，每一个是取代的或未取代的；R7是氢或(C1-3)烷基；R8是氢或(C1-3)烷基；或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或多个立体异构体的混合物的形式。在一个变型中，R5和R6是氢；在另一实施方式中，每一个R5，R6，R7和R8都是氢。在另一变型中，每一个R7和R8都是(C1-3)烷基。
在本申请的一方面中，对于每一个以上的实施方式、变型和方面，A或任何已公开化合物的含羟基药物选自由抗炎药，抗癌药，显影剂，疫苗，抗原，抗感染药，肽，反义分子和蛋白组成的组。在一个变型中，含羟基药物是一种抗炎药。在另一变型中，抗炎药是一种类固醇。在还有的另一变型中，类固醇选自由氢化可的松，地塞米松，分别在21-、11-和17-位酯化的布地缩松和泼尼松组成的组。
在每一个上述的实施方式、方面和其变型的一个变型中，R11和含有偶氮基团(即，-N＝N-)的连接子(linker)是苯环上1，4-二-取代的(即，对位)。在另一变型中，R12是H。在以上还有的另一变型中，a为0；或a和b都为0。在以上的另一变型中，R9是H。
在本申请的另一方面，A或任何已公开化合物的含羟基药物选自由硝基咪唑类药，喹啉类药如萘啶酸，氟喹啉酮类药，如环丙沙星或左氧氟沙星，胺基糖甙，如丁胺卡那霉素，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龙霉素，链霉素，托普霉素和阿泊拉霉素，甲酰四氢叶酸，拓扑替康，依立替康，氨甲叶酸，贝伐单抗，西妥昔单抗(cetuximab)，帕尼单抗(panitumumab)和英夫利西单抗(infliximab)组成的组。在上述的某些变型中，该药物是含胺的药物(即，含胺基的药物)如塞来昔布(celecoxib)，或含硫醇的药物。
在一方面，本申请的化合物选自以下化合物组成的组：
Figure GSB00000036637000191
在一方面中，提供了一种药物组合物，其含有本文中提供的治疗有效剂量的任何已公开化合物和药物可受赋形剂。
在一个实施方式中，提供了一种用于降低患者NFκB DNA-结合活性的方法，该方法包括向患者给药治疗有效剂量的本申请的任何化合物或组合物。在一个变型中，治疗有效剂量对于降低、缓解或治疗发炎性肠疾病(IBD)是有效的。在另一变型中，治疗有效剂量对于降低、缓解或治疗溃疡性结肠炎或克隆氏病是有效的。
在一方面中，提供了一种治疗发炎性肠疾病(IBD)的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的本申请的任何化合物或组合物。在另一方面中，提供了一种治疗克隆氏病或溃疡性结肠炎的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的本申请的任何化合物或组合物。在以上方法的一个变型中，给药的化合物或组合物的用量足以维持(病症)的缓解。在以上方法的另一个变型中，给药5ASA-5ASA。
在另一方面中，提供了一种降低、缓解或治疗急性溃疡性结肠炎的方法，包括给药治疗有效剂量的5ASA-类固醇，其中该类固醇是氢化可的松，地塞米松，分别在21-、11-和17-位酯化的布地缩松，或泼尼松。在一个变型中，该类固醇是泼尼松。
在另一实施方式中，提供了一种治疗胶原性结肠炎，淋巴细胞性结肠炎，缺血性结肠炎，改道性结肠炎，贝塞氏综合症，感染性结肠炎，或未定型性结肠炎的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的本申请的任何化合物或组合物。在另一方面中，提供了一种治疗阿米巴病，难辨梭菌感染，伪膜性结肠炎，憩室炎，肠胃炎，肠胃癌，或肠易激综合症(IBS)的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的本申请的任何化合物或组合物。在另一实施方式中，提供了一种治疗或缓解哺乳动物中发炎性病症的方法，该方法包括向结肠递送有效剂量的COX2抑制剂，其中该COX2抑制剂是本文中提供的任何化合物或组合物的含羟基药物的残基。在另一实施方式中，提供了一种治疗哺乳动物中胃肠癌的方法，该方法包括向结肠递送有效剂量的COX2抑制剂，其中该COX2抑制剂是本文中提供的任何化合物或组合物的含羟基药物的残基。
在以上实施方式、方面和变型中也包括氨基酸的盐如精氨酸盐等、葡萄糖酸盐和半乳糖醛酸盐(galacturonate)。本申请的一些化合物可以形成内盐或两性离子。本申请的一些化合物能够以未溶剂化的形式以及溶剂化的形式，包括水化的形式存在，这些都包括在本申请的范围内。本发明也提供含有药用赋形剂和治疗有效剂量的本申请的至少一种化合物的药物组合物。
本申请的化合物，或其衍生物的药物组合物，可以配制成肠胃外给药的溶液或冻干粉末。粉末可以通过在使用前加入合适的稀释剂或其它药用赋形剂进行重构。液体制剂一般是缓冲的等张水溶液。合适的稀释剂的实例是标准等张盐水溶液，5％葡萄糖水溶液或缓冲的乙酸钠或乙酸铵溶液。这种制剂特别适合于肠胃外给药，但也可以用于口服给药。赋形剂，如聚乙烯吡咯烷酮、凝胶、羟基纤维素、阿拉伯树胶、聚乙二醇、甘露醇、氯化钠或柠檬酸钠，都可以添加。可替代地，这些化合物可以制成胶囊、片剂，或以乳液或糖浆制剂而用于口服给药。可以加入药用固体或液体赋形剂以增强或稳定组合物，或有助于组合物制剂。液体赋形剂包括糖浆、花生油、橄榄油、甘油、盐水、醇或水。固体赋形剂包括淀粉、乳糖、硫酸钙、二水合物、石膏粉、硬脂酸镁或硬脂酸、滑石、果胶、阿拉伯树胶、瓜尔胶或白明胶。赋形剂也可以包括缓释物质如单硬脂酸甘油酯或双硬脂酸甘油酯，单独使用或与蜡一起使用。固体赋形剂的用量可以变化，但优选为每剂量单位约20mg-约1g。药物制剂按照以下传统制药技术进行配制：当必要时，涉及碾磨、混合、造粒和压片而制成片剂形式；或碾磨、混合和填充而制成硬凝胶胶囊形式。当采用液体赋形剂时，制剂可以是糖浆、酏剂、乳液，或含水或无水悬浮液的形式。这种液体制剂可以直接p.o.给药或填充到软凝胶胶囊中给药。对于这些方法的每一种给药方法的合适制剂，可以在例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，A.Gennaro，ed.，20th edition，Lippincott，Williams & Wilkins，Philadelphia，Pa中找到。
在一个变型中，提供了上述化合物，或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或多个立体异构体的混合物的形式。
定义：
除非在本文中另外明确说明，本文中所用术语的定义都是在有机合成和制药科学领域中所用的标准定义。
“烷基”基团是直链的、支链的、饱和的或不饱和的、含有碳原子链的脂族基团，可选地在链中的碳原子之间插入氧、氮或硫原子或如所表明的。(C1-C10)烷基，例如，包括含有1-10个碳原子链的烷基，并包括，例如，这些基团：甲基，乙基，丙基，异丙基，乙烯基，烯丙基，1-丙烯基，异丙烯基，乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1，3-丁二烯基，戊-1，3-二烯基等。烷基也可以表示为，例如，-(CR1R2)a-基团，其中R1和R2独立地是氢，或按照本文中所提供的独立地被取代的；而且例如，a为0，1或2。
表现为具有另一基团如芳基的烷基，表示为″芳烷基″例如，目的是直链的、支链的、饱和的或不饱和的、含有在烷基(例如，(C1-C10)烷基中)和/或芳基基团中所表明原子数的脂族二价基团，或当没有表明出原子时是指芳基和烷基之间的一个键。这种基团的非排他性实例包括苄基、苯乙基等。
“亚烷基”基团是直链的、支链的、饱和的或不饱和的，具有在烷基基团中所示原子数的脂族二价基团；例如，-(C1-C3)亚烷基-或-(C1-C3)偏亚烷基-。
“芳基”基团是环中具有5-8个原子的单环或双环芳香烃基，如苯基。单环芳基典型地是5-7元环，而双环芳基典型地是7-8元环。
本文中所用术语“杂芳基”是指含有例如约3-约30个原子，优选从约6到约18个原子，更优选从约6到约14个原子，最优选从约6到约10个原子且含有1到3个杂原子(例如，N、O或S)的芳基。这种基团的实例包括吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、喹啉基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、三唑基和苯并三唑基。
“环基”如单环基或多环基包括单环，或线稠合(linearly fused)，角稠合(angularly fused)或桥接多环烷基，或其组合。这种环基目的是包括杂环类似物。环基可以是饱和的，部分饱和的或芳香性的。
“卤素”或“卤原子”是指氟、氯、溴或碘。
“杂环基”或“杂环”是指这种环烷基，其中成环的一个或多个原子是N、O或S的杂原子。环烷基可以是饱和的、部分饱和的或芳香性的。杂环基的非排他性实例包括哌啶基、4-吗啉基、4-哌嗪基、吡咯烷基、1，4-二氮杂全氢卓基(1，4-diazaperhydroepinyl)，丙酮基(acetonidyl)-4-酮、1，3-二噁烷基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡喃基等。
术语“烷氧基”包括连接二价氧的直链或支链烷基基团。烷基如上定义。这种取代基的实例包括甲氧基、乙氧基、叔丁氧基等。术语“烷氧基烷基”是指烷基被一个或多个烷氧基取代的基团。术语“杂芳氧基”是指杂芳基被一个或多个烷氧基取代的基团。术语“芳氧基”是指连接氧的芳基基团，如苯基-O-，等。
如本文中所用的，其中二价基团表示为如本文中所描述的基团-Z-，或一般表示为-A-B-，如以下例所示，其目的表示可以以两种可能的排列连接的基团，如下所示的两种结构。
Figure GSB00000036637000231
也可以是
Figure GSB00000036637000232
例如，当提供二价基团如“-NR13C(O)-”时，例如，该基团的目的是包括二价基团-NR13C(O)-和二价基团-C(O)NR13-这两种基团。
“含羟基药物”是指用羟基(基，-OH)功能化或用羟基取代的药物或生物活性化合物。因此，含羟基药物的残基是不含羟基的药物或生物活性化合物的组分。在本申请中所用药物可以包括抗炎药，抗癌药，显影剂，尤其是在结肠疾病造影中所用的显影剂；疫苗，抗原，抗感染药，肽，反义分子和蛋白。这些药物可以包括但不限于，类固醇化合物(例如，氢化可的松、地塞米松或布地缩松的酯)，硝基咪唑类药(例如，甲硝唑)，抗生素，(例如，喹啉类药如萘啶酸，氟喹啉酮类药，如环丙沙星和左氧氟沙星)，化学治疗剂(例如，甲酰四氢叶酸，拓扑替康)，和抗体，(例如，贝伐单抗(bevacizumab)，西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼单抗(panitumumab))。
“药学上可接受的盐”是指一般认为具有所需药物活性，被认为是安全的，无毒性的和对于动物疾病和人类制药应用可接受的盐组合物。这种盐包括酸加成盐，用无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等形成的盐；或用有机酸如乙酸、丙酸、己酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、葡糖酸、水杨酸等形成的盐。
本文中所用的“前-药”或“前药”是指在体内尤其是结肠中可以转化或可降解而产生本发明的生物活性化合物(例如，中加提苯胺或内酰胺和活性药物)的生物前体或药学上可接受的化合物。具体而言，本申请的化合物可以通过体内偶氮还原酶如微生物群偶氮还原酶进行还原。
“治疗有效剂量”是指药物用量能够发挥在说明书中所列的任何生物效应。治疗有效剂量也表示本文中所公开化合物/药物(制剂，agent)或前药的组合物的量，是有效的或能够支持化合物/药物或前药一种或多种生物活性特性水平的可观察到的变化，或足以赋予有益效应的剂量用量。这种有益效应可以包括接受者或患者症状的缓解。在某些方面，治疗有效剂量可以与疾病的治愈或康复有关。正如本领域所知的，许多考虑因素都应该考虑在内而确定治疗有效剂量。这些考虑因素的实例可以在例如文献Gilman，A.G.，et al，Goodman andGilman ′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，8th ed.，McGraw-Hill(1990)，and Remington ′s Pharmaceutical Sciences，17thed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990)中找到。
“取代的”或“未取代的”或“可选取代的”是指基团如例如，烷基、芳基、杂环基、(C1-C8)环烷基、杂环基(C1-C8)烷基、芳基(C1-C8)烷基、杂芳基、杂芳基(C1-C8)烷基等，除非另外明确指出，可以被1、2或3个选自卤素、硝基、三氟甲基(-CF3)、三氟甲氧基、甲氧基、羧基、-NH2、-OH、-SH、-SCH3、-NHCH3、-N(CH3)2、-SMe，氰基等基团取代。
实验
可以采用以下步骤和方法制备本申请的典型化合物。这些化合物的制备中所用的原料和试剂要么是从商业上的供货商如Aldrich Chemical Company(Milwaukee，Wis.)，Bachem(Torrance，Calif)处商购获得，要么通过本领域那些技术人员众所周知的方法制备，以下步骤和工艺过程描述于这些参考文献中如Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，vols.1-17，John Wiley andSons，New York，N.Y.，1991；Rodd′s Chemistry of Carbon Compounds，vols.1-5and supps.，Elsevier Science Publishers，1989；Organic Reactions，vols.1-40，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，1991；March J.：Advanced OrganicChemistry，4th ed.，John Wiley and Sons，New York，N.Y.；和Larock：Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers，New York，1989。
在一些情况下，可以引入保护性基团再最后除去。合适的氨基、羟基和羧基保护基团描述于文献Greene et al，Protective Groups in Organic Synthesis，Second Edition，John Wiley and Sons，New York，1991中。标准的有机化学反应能够通过采用许多不同试剂实现，例如，描述于文献Larock：ComprehensiveOrganic Transformations，VCH Publishers，New York，1989之中的那些试剂。
在一个变型中，本申请的化合物能够通过以下图示8-11中概述的步骤进行合成。这些图示举例说明了这些前药的不同同系物的制备。
通用实验步骤
采用
Figure GSB00000036637000251
熔点SMPl 1熔点仪测得未修正的熔点。采用Perking Elmer205FT红外Paragon 1000光谱仪获得红外(IR)光谱图。以cm-1给出带位。固体样品通过KBr盘获得；油在NaCl板上形成纯膜(neat film)进行分析。UV光谱在Cary 3E UV-VIS分光光度计上检测。在CDCl3或CD3OD之一中，1H和13C谱图在27℃下于Bruker DPX 400MHz FT NMR光谱仪(400.13MHz1H，100.16MHz13C)上记录，(四甲基硅烷作为内标)。对于CDCl3，1H NMR谱图相对于在0.00δ的TMS峰进行赋值，而13C NMR谱图相对于77.00ppm处中间CDCl3三重峰进行赋值。
对于CD3OD，1H和13C谱图分别相对于3.30δ和49.00ppm多重峰的中心峰进行赋值。耦合常数以赫兹(Hz)报告。对于1H NMR赋值，报道化学位移：位移值(质子数，吸收描述(s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，可应用的耦合常数，质子赋值)。LRMS在Department ofChemistry，Trinity College的质谱仪(EI模式)上实施。快速色谱在MerckKieselgel 60粒径0.040-0.063mm薄层色谱(TLC)上实施，为之引证Rf值，或在硅胶Merck F-254板上实施。化合物在254nm+/或香兰素染色下通过吸光度进行可视检测。
图示8a
Figure GSB00000036637000261
i)Pd/C 10％，H2，乙酸乙酯；ii)过硫酸氢钾；iii)DCC，DMAP，叔丁醇；iv)Pd/C 10％，H2；v)AcOH
图示8b
Figure GSB00000036637000271
协同前药1
vi)DIAD，Ph3P，THF；vii)TFA
2-亚硝基苯乙酸
向2-硝基苯乙酸(5g，0.0276mol)在乙酸乙酯100mL的溶液中，加入催化量(5％，0.25g)的10％钯碳。反应混合物在氢气氛下室温搅拌2h，在此时间之后，TLC分析显示反应完成(乙酸乙酯-二氯甲烷40∶60)。反应混合物在过滤剂上过滤除去10％钯碳并减压下除去溶剂。粗产物2-氨基苯丙酸溶解于50mL蒸馏水和50mL二氯甲烷中。2当量的
Figure GSB00000036637000272
(过硫酸氢钾)(33.9g，0.0552mol)溶解于50mL蒸馏水中并加入反应混合物中。在此时反应pH＝4，因此2-亚硝基苯乙酸一生成就转移到有机层。2小时后，反应混合物转移至分液漏斗。收集有机层，而水相用25mL二氯甲烷冲洗2次。收集有机相并用Na2SO4干燥。减压下除去溶剂而获得4.21g黑色油状产物.粗产物混合物用二氯甲烷∶乙酸乙酯(70∶30)快速柱色谱洗脱而得到3.48g褐色晶体产物(70％)：IRvmax(KBr)：1691.86(C＝O)cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：9.00(1H，s，COOH)，7.24(2H，t，J 8.54和7.53Hz)，7.04(1H，t，J 7.53和7.53Hz)，6.92(1H，d，J 7.53Hz)，3.57(2H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：178.02(C，C-8，C＝O)，141.86(C，C-1)，127.50(CH，C-4)，124.77(C，C-2)，124.15(CH，C-3)，122.05(CH，C-5)，109.50(CH，C-6)，35.84(CH2，C-7)。5-(2-羧甲基-苯基偶氮)-2-羟基苯甲酸  叔丁酯
向2-亚硝基苯乙酸(1.0g，0.0061mol)的冰乙酸(20mL)溶液中，15min内逐滴加入另一种5-氨基水杨酸叔丁酯(1.26g，0.0061mol)的冰乙酸(20mL)溶液。反应保持搅拌48h直至通过TLC二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)检测反应完成。减压下除去溶剂而获得黑色油状产物。以二氯甲烷作流动相快速柱色谱分离而获得1.49g橙色晶体产物(69％)。mp：108-110℃。IRvmax(KBr)：3434.51cm-1，1714.14cm-1，1670.39cm-1，1587.05cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：11.49(1H，s)，8.37(1H，d，J 2.48Hz)，7.95(1H，dd，J 9和2.48Hz)，7.76(1H，d，J 8.04Hz)，7.40(3H，m)，6.97(1H，d，J 9.04Hz)，4.10(2H，s)，1.64(9H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：177.05(C，C-8，C＝O)，169.14(C，C-15，C＝O)，163.83(C，C-12)，149.40(C，C-2)，144.84(C，C-9)，133.26(CH，C-1)，131.01(CH，C-5)，130.49(CH，C-6)，127.82(CH，C-10)，127.62(CH，C-4)，127.26(CH，C-14)，117.99(CH，C-13)，115.53(CH，C-3)，113.32(C，C-11)，83.24(C，C-16)，37.40(CH2，C-7)，27.69(3×CH3，C-17)。
叔丁酯保护的协同前药1
在反应温度升高到40℃之后，向5-(2-羧甲基-苯基偶氮)-2-羟基苯甲酸叔丁酯(0.40g，0.0011mol)，泼尼松(1.1当量，1.18g，0.0013mol)和三苯基膦(3当量，0.88g，0.0033mol)的超干THF(50mL)溶液中，在12min内逐滴加入偶氮二甲酸二异丙酯95％(DIAD)(3当量，0.66mL，0.0033mol)。反应在40℃搅拌1h，反应保持在氮气氛下室温过夜。TLC分析(二氯甲烷)显示反应完成。减压下除去溶剂而获得橙色油状产物。采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)快速柱色谱分离，在该柱色谱之后除去三苯基膦氧化物，需要己烷(200mL)进行第二次柱色谱分离，己烷∶乙酸乙酯(70∶30)分离得到橙色晶体(43％)产物0.33g：mp：124-126℃.IRvmax(KBr)：3436.29cm1，1726.17cm1，1659.61cm1，1616.09cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：11.49(1H，s)，8.44(1H，s)，8.05(1H，d，J 9Hz)，7.75(1H，d，J 7.52Hz)，7.40(3H，m)，7.24(1H，d，J 10.04)，7.06(1H，d，J 9Hz)，6.25(1H，s)，5.98(1H，s)，4.27(2H，s)，2.68-0.84(泼尼松包膜，19H)，1.67(9H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：204.40(C，C-20，C＝O)，186.26(C，C-3，C＝O)，171.36(C，C-22，C＝O)，170.10(C，C-5)，169.09(C，C-13，C＝O)，163.85(C，C-10′)，156.25(CH，C-1)，149.53(C，C-2′)，145.07(C，C-7′)，133.25(C，C-1′)，130.98(CH，C-5′)，130.53(CH，C-6′)，129.89(CH，C-8′)，127.85(CH，C-2)，127.17(CH，C-4′)，125.52(CH，C-12′)，121.79(CH，C-4)，118.14(CH，C-11′)，115.14(CH，C-3′)，113.26(C，C-9′)，89.17(C，C-17)，83.30(C，C-14′)，69.51(CH，C-11)，67.98(CH2，C-21)，54.86(CH，C-9)，50.86(CH，C-14)，47.26(C，C-13)，43.68(C，C-10)，38.85(CH2，C-12)，36.44(CH2，C-23)，33.92(CH2，C-6)，33.58(CH2，C-7)，31.56(CH2，C-16)，30.71(CH，C-8)，27.78(3×CH3，C-15′)，23.36(CH2，C-15)，20.56(CH3，C-19)，16.37(CH3，C-18)。
协同前药1(5-{2-2[2(11，17-二羟基-10，13-二甲基-10，13-二甲基-3-氧代-6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氢-3H-环戊[a]菲-17-基)-2-氧代-乙氧基羰基甲基]苯基偶氮}-2-羟基-苯甲酸)
向叔丁酯保护的协同前药1(0.1g，0.000155mol)的二氯甲烷(1mL)溶液中，加入三氟乙酸(1mL)，反应在室温保持4小时。TLC分析二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)表明反应完成，并采用氮气吹走溶剂和三氟乙酸，而获得橙色油状产物。粗产物采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)快速柱色谱分离，获得0.078g橙色晶体产物(78％)。mp：154-156℃。MS：665.2503，理论质量665.2475。IRvmax(KBr)：3436.40cm-1，1654.62cm-1，1H NMRδ(CDCl3)：8.48(1H，s)，8.10(1H，d，J 9.04Hz)，7.75(1H，d，J 7.52Hz)，7.46(4H，m)，7.08(1H，d，J 9Hz)，6.24(1H，d，J 10Hz)，6.00(1H，s)，5.03(2H，d，J 17.56Hz)，4.35(1H，s)，4.31(2H，d，J 8.52Hz)，2.68-0.8(泼尼松包膜，19H)。13C NMRδ(MeOD)：205.18(C，C-20，C＝O)，187.15(C，C-3，C＝O)，172.99(C，C-22，C＝O)，171.82(C，C-5)，164.11(C，C-13，C＝O)，158.38(C，C-10)，156.35(CH，C-1)，149.62(C，C-2)，144.93(C，C-7)，133.49(C，C-1)，133.36(CH，C-5)，130.90(CH，C-6)，129.97(CH，C-8)，127.39(CH，C-2)，127.07(CH，C-4)，126.20(CH，C-12)，125.88(CH，C-4)，120.57(CH，C-11)，117.01(CH，C-3)，114.64(C，C-9)，88.75(C，C-17)，68.91(CH，C-11)，67.95(CH2，C-21)，55.40(CH，C-9)，50.91(CH，C-14)，MeOD剩余峰掩蔽了C，C-13的峰，44.19(C，C-10)，38.19(CH2，C-12)，36.09(CH2，C-23)，33.70(CH2，C-6)，32.75(CH2，C-7)，31.31(CH2，C-16)，27.66(CH，C-8)，22.95(CH2，C-15)，19.72(CH3，C-19)，15.36(CH3，C-18)。
图示9a
i)Pd/C 10％，H2，2％NaOH；ii)过硫酸氢钾(Oxone)；iii)DCC，DMAP，叔丁醇；iv)Pd/C 10％，H2；v)乙酸
图示9b
Figure GSB00000036637000311
协同前药2
2-亚硝基苯丙酸
向2-硝基肉桂酸(5g，0.0259mol)的100mL水溶液和2当量2％NaOH(103mL)的溶液中，加入催化量(5％，0.25g)的10％钯碳。反应混合物在氢气氛下室温搅拌48小时，在此时间之后，TLC分析显示反应完成(乙酸乙酯)。反应混合物在过滤剂上过滤除去10％钯碳，并在减压下除去溶剂。粗产物2-氨基苯丙酸溶解于50mL蒸馏水和50mL二氯甲烷中。2当量
Figure GSB00000036637000312
(过硫酸氢钾)(31.8g，0.0518mol)溶解于50mL蒸馏水中并加入反应混合物。在此时的反应pH＝4，因此2-亚硝基苯丙酸一旦生成就转移到有机层。2小时后反应混合物转移至分液漏斗，收集有机层，水相用2×25mL二氯甲烷冲洗。收集有机相并用Na2SO4干燥。减压下除去溶剂以获得4.12g黑色油状产物。粗产物混合物采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(70∶30)快速柱色谱分离而获得3.48g褐色晶体状产物(67％)：mp：112-114℃，IRvmax(KBr)：1699.29(C＝O)cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：7.99(1H，d，J 8Hz)，7.65(1H，t，J 7.52Hz)，7.57(1H，t，J 8.04Hz)，7.43(1H，m)，3.24(2H，t，J 7.52Hz)，2.81(2H，t，J 7.52Hz)。13C NMRδ(CDCl3)：177.96(C，C-9，C＝O)，170.91(C，C-2)，132.88(CH，C-5)，131.70(CH，C-6)，131.63(C，C-1)，127.30(CH，C-4)，124.56(CH，C-3)，34.09(CH2，C-8)，27.61(CH2，C-7)。
5-硝基水杨酸叔丁酯
溶解于超干THF(50mL)的二环己基碳二酰亚胺(DCC)(6.2g，0.030mol)在30min内逐滴加入到搅拌的5-硝基水杨酸(5g，0.0273mol)和4-(二甲基氨基)吡啶(DMAP)(3.3g，0.0273mol)的超干叔丁醇(125mL)溶液中。混合物搅拌过夜并过滤除去生成的二环己基脲(DCU)；减压下除去溶剂以获得黄色油状产物。采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(90∶10)快速柱色谱分离，获得5.29g淡黄色晶体状产物(81％)：mp：58-60℃，IRvmax(KBr)：3417.06cm-1，2118.35cm-1，1715.88cm-1，1673.77cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：11.73(1H，s)，8.63(1H，d，J 2.52Hz)，8.26(1H，dd，J 9和2.48Hz)，7.01(1H，d，J 9.04Hz)，1.61(9H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：168.01(C，C-2)，166.09(C，C-7，C＝O)，139.24(C，C-5)，129.54(CH，C-4)，126.19(CH，C-6)，117.98(CH，C-3)，112.95(C，C-1)，84.45(C，C-8)，27.57(3×CH3，C-9)。
5-氨基水杨酸叔丁酯
向5-硝基水杨酸叔丁酯(4.21g，0.0176mol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中加入催化量(0.41g，10％)的10％钯碳。反应在氢气氛下搅拌3小时。在此时TLC分析(二氯甲烷∶乙酸乙酯60∶40)表明反应完成。反应混合物在过滤剂上过滤除去10％钯碳，减压下除去溶剂，而获得3.2g淡绿色晶体状产物(86％)：mp：48-50℃，IRvmax(KBr)：3372.92cm-1，1668.16cm-1，1490.72cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：10.49(1H，s)，7.12(1H，d，J 2.52Hz)，6.8(2H，m)，3.5(2H，NH2)，1.61(9H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：169.13(C，C-7)，154.44(C，C-2)，137.63(C，C-5)，123.30(CH，C-4)，117.57(CH，C-3)，114.71(CH，C-6)，113.24(C，C-2)，82.12(C，C-8)，27.74(3×CH3，C-9)。
5-[2-(2-羧基-乙基)苯基偶氮]-2-羟基-苯甲酸叔丁酯(t-Bu-Azo-2)
向2-亚硝基肉桂酸(1.27g，0.0063mol)的冰乙酸(20mL)溶液，在15min内逐滴加入另一5-氨基水杨酸叔丁酯(1.32g，0.0063mol)的冰乙酸(20mL)溶液。反应保持搅拌48小时直至TLC二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)检测反应完成。减压下除去溶剂而获得黑色油状产物。采用二氯甲烷作为流动相快速柱色谱分离获得1.68g橙色晶体状的标题化合物(72％)：mp：86-88℃，IRvmax(KBv)：1700.66cm-1，1665.87cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：11.52(1H，s)，8.46(1H，s)，8.08(1H，s)，7.72(1H，s)，7.42(3H，m)，7.13(1H，s)，3.48(2H，s)，2.82(2H，s)，1.70(9H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：179.00(C，C-9，C＝O)，169.18(C，C-16，C＝O)，163.79(C，C-13)，149.57(C，C-2)，145.09(C，C-10)，139.21(C，C-1)，130.54(CH，C-5)，130.08(CH，C-6)，127.65(CH，C-11)，127.08(CH，C-4)，126.97(CH，C-15)，118.10(CH，C-14)，115.07(CH，C-3)，113.40(C，C-12)，83.21(C，C-17)，35.68(CH2，C-8)，27.74(CH3，C-18)，26.54(CH2，C-7)。
叔丁基保护的协同前药2
在反应温度升至40℃后，向偶氮化合物2(1.21g，0.0033mol)，泼尼松(1.1当量，1.18g，0.0033mol)和三苯基膦(3当量，2.59g，0.0099mol)的超干THF(50mL)溶液中，在12min内逐滴加入DIAD(3当量，1.9mL，0.0099mol)。反应在40℃下搅拌1小时，反应保持在氮气氛下室温过夜，TLC分析(二氯甲烷)表明反应完成。减压下除去溶剂以获得橙色油状产物。采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)快速柱色谱分离，在该次柱色谱分离后除去三苯基膦氧化物，需要己烷(200mL)进行第二次柱色谱分离，己烷∶乙酸乙酯(70∶30)洗脱而得到橙色晶体状产物1.60g(40％)：mp：116-118℃，IRvmax(KBr)：3435.94cm-1，1724.53cm-1，1658.49cm-1，1615.49cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：8.40(1H，d，J 2Hz)，8.10(1H，dd，J 8.52和2Hz)，7.68(1H，d，J 8.04Hz)，7.44(3H，m)，7.33(1H，t，J 6.52Hz)，7.09(1H，d，J 8.52Hz)，6.27(1H，d，J 10.04Hz)，6.01(1H，s)，5.00(1H，d，J 17.56Hz)，4.88(1H，d，J 17.56Hz)，4.39(1H，s)，3.49(2H，t，J 9.52)，2.82(2H，t，J 8.04Hz)，2.66-0.9(泼尼松包膜，19H)，1.69(9H，s)。13C NMRδ(CDCl3)：204.83(C，C-20，C＝O)，186.46(C，C-3，C＝O)，172.51(C，C-22，C＝O)，170.73(C，C-5)，169.08(C，C-13，C＝O)，163.73(C，C-10)，156.77(CH，C-1)，149.48(C，C-2)，145.09(C，C-7)，139.31(C，C-1)，130.55(CH，C-5)，130.00(CH，C-6)，129.26(CH，C-8)，127.04(CH，C-2)，126.91(CH，C-4)，125.72(CH，C-12)，121.65(CH，C-4)，118.18(CH，C-11)，114.99(CH，C-3)，113.29(C，C-9)，89.20(C，C-17)，83.27(C，C-14)，69.56(CH，C-11)，67.74(CH2，C-21)，54.90(CH，C-9)，50.87(CH，C-14)，47.22(C，C-13)，43.84(C，C-10)，38.96(CH2，C-12)，35.45(CH2，C-23)，33.83(CH2，C-6)，33.59(CH2，C-7)，31.61(CH2，C-16)，30.73(CH，C-8)，27.75(3×CH3，C-15)，26.66(CH2，C-24)，23.41(CH2，C-15)，20.54(CH3，C-19)，16.42(CH3，C-18)。
协同前药2(5-(2-{2[2-(11，17-二羟基-10，13-二甲基-10，13-二甲基-3-氧代-6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氢-3H-环戊[a]菲-17-基)-2-氧代-乙氧基羰基]乙基}-苯基偶氮}-2-羟基-苯甲酸)
向叔丁基偶氮2(0.9g，0.00126mol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，加入三氟乙酸(3mL)，反应在室温下保持4小时。TLC分析(二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50))显示反应完成，采用氮气吹走溶剂和三氟乙酸，而获得橙色油状产物。粗产物采用二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)快速柱色谱分离，获得0.7g橙色晶体产物(84％)。mp：176-178℃，IRvmax(KBr)：3437.19cm-1，1718.06cm-1，1654.23cm-1，1587.93cm-1。MS1H NMRδ(CDCl3)：8.55(1H，s)，8.00(1H，dd，J 6.04和1.48Hz)，7.65(1H，d，J 5.28Hz)，7.50(1H，6.76Hz)，7.45(1H，4.52Hz)，7.41(1H，m)，7.34(1H，t，J 4.76Hz)，6.28(1H，dd，J 6.76和1Hz)，6.02(1H，s)，4.90(2H，d，J 29.84Hz)，4.41(1H，s)，3.50(2H，t，J 5.04Hz)，2.85(2H，t，J 5Hz)，2.67-0-93(泼尼松包膜，19H).13C NMRδ(MeOD)：205.37(C，C-20，C＝O)，187.17(C，C-3，C＝O)，173.05(C，C-22，C＝O)，172.05(C，C-5)，164.03(C，C-13，C＝O)，161.33(C，C-10)，158.41(CH，C-1)，149.62(C，C-2)，144.93(C，C-7)，139.12(C，C-1)，129.85(CH，C-6)，128.63(CH，C-8)，126.47(CH，C-2)，125.93(CH，C-4)，124.54(CH，C-12)，120.61(CH，C-4)，117.65(CH，C-11)，116.80(CH，C-3)，114.51(C，C-9)，88.71(C，C-17)，68.93(CH，C-11)，67.48(CH2，C-21)，55.45(CH，C-9)，50.94(CH，C-14)，MeOD剩余峰掩蔽了C，C-13的峰，44.23(C，C-10)，38.37(CH2，C-12)，35.19(CH2，C-23)，33.72(CH2，C-6)，32.79(CH2，C-7)，31.33(CH2，C-16)，30.78(CH，C-8)，26.26(CH2，C-24)，22.97(CH2，C-15)，19.73(CH3，C-19)，15.45(CH3，C-18)。
图示11a
Figure GSB00000036637000351
i)Pd/C，H2在2N NaOH中；ii)过硫酸氢钾(Oxone)在DCM/H2O；iii)TFA，丙酮在TFAA中，回流，8h；iv)Pd/C，H2在EA中，室温；v)乙酸(AcOH)
图示11b
vi：Ph3P，DIAD在THF中。
5-硝基水杨酸二噁英-4-酮
5-硝基水杨酸(20g，109.2mmol)置于装备有磁力搅拌器和回流冷凝器的500mL圆底烧瓶中，加入200mL三氟乙酸接着加入三氟乙酸酐(45.54mL，327.7mmol)和超干丙酮(16.04mL，218.4mmol)。反应混合物保持回流2h。每小时再向沸腾的溶液中滴加8.02mL超干丙酮(1当量/小时)直至反应在8h内完成。然后反应物在约55℃水浴温度下减压浓缩，加入甲苯再3次移除以消除任何痕量的三氟乙酸，而最后在45℃的真空下干燥残余固体1小时。褐色固体粗产物在丙酮-石油醚混合物(1∶4)中重结晶2次，以获得20.5g白色晶体(84.1％)。(当采用更小量时可选地采用丙酮-石油醚(1∶4)或二氯甲烷作为流动相快速柱色谱分离：m.p.92-94℃，IRvmax(KBr)：1738.92(C＝O)，1616.23和745.94(NO2)cm-1。1H NMRδ(CDCl3)：8.88(1H，d，J 2.51Hz)，8.46(1H，dd，J 6.52和3.01Hz)，7.16(1H，d，J 9.53Hz)，1.80(6H，s，2×CH3)。13C NMRδ(CDCl3)：159.82(C，C-7，C＝O)，158.50(C，C-4)，142.33(C，C-1)，130.79(CH，C-6)，125.57(CH，C-2)，118.09(CH，C-5)，112.93(C，C-3)，107.36(C，C-8)，25.45(CH3，C-9和C-10)。
丙酮化物保护的5-氨基水杨酸
在室温下向5-硝基水杨酸二噁英-4-酮(2g，8.96mmol)的乙酸乙酯(30mL)溶液中加入10％活性钯碳(0.5g)。混合物在氢气氛下搅拌直至二氯甲烷作流动相的TLC检测反应完成。通过过滤剂除去钯，在减压下除去溶剂以获得1.44g黄色晶体状产物(83.2％)：m.p.122-124℃，IRvmax(KBr)：1710.37(C＝O)，3469.02和1324.22(NH2)cm-1。MS：216.0616(M++23)，194.0814(M++1)。1H NMRδ(CDCl3)：7.24(1H，d，J 3.01Hz)，6.91(1H，dd，J 5.52和3.01Hz)，6.79(1H，d，J 9.04Hz)，3.61(2H，s，NH2)，1.69(6H，s，2×CH3)。13C NMRδ(CDCl3)：161.16(C，C-7，C＝O)，148.15(C，C-4)，141.36(C，C-1)，123.38(CH，C-6)，117.41(CH，C-2)，113.54(CH，C-5)，113.51(C，C-3)，105.75(C，C-8)，25.20(CH3，C-9和C-10)。
2-(2，2-二甲基-4-氧代-4H-苯并[1，3]二噁英-6-基偶氮)-苯基]-乙酸(丙酮化物保护的载体)
向2-亚硝基苯乙酸(0.5g，2.58mmol)的冰乙酸(25mL)溶液中加入另一5-氨基水杨酸二噁英-4-酮(0.42g，2.58mmol)的冰乙酸(25mL)溶液。反应混合物在氮气氛下剧烈搅拌48小时；通过TLC采用二氯甲烷-乙酸乙酯(50∶50)作流动相检测反应完成。减压下除去溶剂，两次加入甲苯除去任何痕量乙酸，获得橙色粗产物。通过快速柱色谱采用二氯甲烷-乙酸乙酯(70∶30)作为流动相进行分离以获得0.78g橙色晶体状产物(89％)：m.p.124-126℃，IRvmax(KBr)：1734.84和1698.18(C＝O)cm-1。MS：363.0950(M++23)。1H NMRδ(CDCl3)：8.52(1H，d，J 2.51Hz)，8.05(1H，dd，J 8.54和2.51Hz)，7.77(1H，d，J 7.53Hz)，7.47(1H，t，J 6.57Hz)，7.43(2H，m)，7.05(1H，d，J 9.03Hz)，4.16(s，2H)，1.80(6H，s，2×CH3)。13C NMRδ(CDCl3)：177.67(C，C-8，C＝O)，160.42(C，C-15，C＝O)，157.85(C，C-12)，149.66(C，C-1)，147.86(C，C-9)，133.78(C，C-2)，131.55(CH，C-4)，131.45(CH，C-3)，128.93(CH，C-5)，128.39(CH，C-14)，126.64(CH，C-10)，118.14(CH，C-6)，116.07(CH，C-13)，113.61(C，C-11)，106.90(C，C-16)，37.28(CH2，C-7)，25.86(CH3，C-17和C-18)。
丙酮化物保护的协同前药1
室温下向2-(2，2-二甲基-4-氧代-4H-苯并[1，3]二噁英-6-基偶氮)-苯基]-乙酸(1g，5.16mmol)的超干四氢呋喃(30mL)溶液中，加入泼尼松(2.23g，6.19mmol)，接着加入三苯基膦(4.11g，15.5mmol)。反应混合物在氮气氛下搅拌并升温直至40℃。在此时，12分钟内逐滴加入偶氮二甲酸二异丙酯95％(DIAD)(3.2mL，15.5mmol)。混合物搅拌2小时，减压下除去挥发物，获得黑色油状粗产物。需进行两次快速柱色谱(二氯甲烷-乙酸乙酯1∶1和己烷-乙酸乙酯80∶20)分离以获得2.21g橙色晶体状纯净产物(63％)。m.p.136-138℃，IRvmax(KBr)：1655.56(C＝O)，1724.45(C＝O)，3462.94(O-H)cm-1。MS 705.2784(M++23)。1H NMRδ(CDCl3)：8.43(1H，d，J 2.01Hz)，8.18(1H，dd，J 9.03和2.51Hz)，7.73(1H，d，J 8.03Hz)，7.43(2H，m)，7.38(1H，m)，7.25(1H，d，J 10.04Hz)，7.11(1H，d，J 8.53Hz)，6.21(1H，d，J 10.04Hz)，5.95(1H，s)，5.01(1H，d，J 17.56Hz)，4.92(1H，d，J 17.57Hz)，4.31(1H，s)，4.22(2H，s)，2.64-0.84泼尼松包膜，19H)，1.75(6H，s，2×CH3)。13C NMRδ(CDCl3)：204.67(C，C-20，C＝O)，186.36(C，C-3，C＝O)，171.35(C，C-22，C＝O)，170.53(C，C-13，C＝O)，160.46(C，C-5)，157.30(C，C-10′)，156.67(CH，C-1)，149.24(C，C-2′)，147.64(C，C-7′)，134.04(C，C-1′)，131.66(CH，C-6′)，131.28(CH，C-12′)，131.22(CH，C-4′)，127.88(CH，C-2)，127.00(CH，C-5′)，123.35(CH，C-8′)，121.65(CH，C-4)，117.67(CH，C-11′)，115.24(CH，C-3′)，113.17(C，C-9′)，106.59(C，C-14′)，89.18(C，C-17)，69.44(CH，C-11)，68.19(CH2，C-21)，54.88(CH，C-9)，50.84(CH，C-14)，47.15(C，C-13)，43.80(C，C-10)，38.65(CH2，C-12)，37.02(CH2，C-23)，33.70(CH2，C-6)，33.61(CH2，C-7)，31.57(CH2，C-16)，30.76(CH，C-8)，25.41(CH3，C-15′和C-16′)，23.39(CH2，C-15)，16.24(CH3，C-19)，14.81(CH3，C-18)。2-(2，2-二甲基-4-氧代-4H-苯并[1，2]二噁英-6-基偶氮)-苯基]-丙酸
向2-亚硝基苯丙酸(1g，4.97mmol)的冰乙酸(40mL)溶液中加入另一5-氨基水杨酸二噁英-4-酮(0.9g，4.97mmol)的冰乙酸(40mL)溶液。反应混合物在氮气氛下剧烈搅拌48小时；通过TLC采用二氯甲烷-乙酸乙酯(50∶50)作为流动相检测反应完成。减压下除去溶剂，两次加入甲苯除去痕量乙酸，获得橙色粗产物。通过快速柱色谱采用二氯甲烷-乙酸乙酯(70∶30)作为流动相分离以获得1.17g橙色晶体状产物(68％)：m.p.108-110℃，IRvmax(KBr)：1703.48和1740.04(C＝O)cm-1。MS 377.1102(M++23)。1H NMRδ(CDCl3)：8.57(1H，d，J 2Hz)，8.17(1H，dd，J 6.52和2.51Hz)，7.72(1H，d，J 7.53Hz)，7.43(2H，m)，7.15(1H，d，J 9.03Hz)，3.50(2H，t，J 8.03和7.53Hz)，2.79(2H，t，J8.03和7.53Hz)，1.81(6H，s，2xCH3)。13C NMRδ(CDCl3)：176.97(C，C-9，C＝O)，160.11(C，C-16，C＝O)，157.37(C，C-13)，149.39(C，C-1)，147.64(C，C-10)，139.80(C，C-2)，131.16(CH，C-4)，130.15(CH，C-3)，129.01(CH，C-5)，126.99(CH，C-15)，125.60(CH，C-11)，117.75(CH，C-6)，115.20(CH，C-14)，113.32(C，C-12)，106.51(C，C-17)，35.46(CH2，C-8)，26.43(CH2，C-7)，25.48(CH3，C-17和C-18)。
丙酮化物保护的协同前药2
室温下向2-(2，2-二甲基-4-氧代-4H-苯并[1，2]二噁英-6-基偶氮)-苯基]-丙酸(0.2g，0.56mmol)的超干四氢呋喃(10mL)溶液中，加入泼尼松(0.2g，0.85mmol)，接着加入三苯基膦(0.44g，1.68mmol)。反应混合物在氮气氛下搅拌，温度升高至40℃。在此时，12分钟内逐滴加入偶氮二甲酸二异丙酯95％(DIAD)(0.35mL，1.68mmol)。混合物搅拌2小时，减压除去挥发物质，获得黑色油状粗产物。需要两次快速柱色谱(二氯甲烷-乙酸乙酯1∶1和己烷-乙酸乙酯80∶20)分离以获得0.26g橙色晶体状纯净产物(68％)。m.p.130-132℃，IRvmax(KBr)：3437.13，1743.91，1656.48，1615.31cm-1。1HNMRδ(CDCl3)：8.47(1H，d，J 2.01Hz)，8.16(1H，dd，J 8.53和2.01Hz)，7.67(1H，d，J 8.03Hz)，7.38(2H，m)，7.28(2H，m)，7.10(1H，d，J 8.54Hz)，6.23(1H，d，J 10.03Hz)，5.97(1H，s)，5.08(1H，d，J 17.57Hz)，4.94(1H，d，J 17.56Hz)，4.42(1H，s)，3.45(2H，t，J 6.52)，2.79(2H，t，J 8.03Hz)，2.68-0.91(泼尼松包膜，19H)，1.75(6H，s，2×CH3)。13C NMRδ(CDCl3)：204.92(C，C-20，C＝O)，186.44(C，C-3，C＝O)，172.37(C，C-22，C＝O)，170.68(C，C-13，C＝O)，160.45(C，C-5)，157.25(C，C-10’)，156.79(CH，C-1)，149.14(C，C-2′)，147.61(C，C-7′)，139.99(C，C-1′)，131.23(CH，C-6′)，131.00(CH，C-12′)，130.05(CH，C-4′)，127.02(CH，C-2)，126.93(CH，C-5′)，123.74(CH，C-8′)，121.64(CH，C-4)，117.77(CH，C-11′)，115.16(CH，C-3′)，113.18(C，C-9′)，106.57(C，C-14′)，89.18(C，C-17)，69.54(CH，C-11)，67.77(CH2，C-21)，54.92(CH，C-9)，50.88(CH，C-14)，47.14(C，C-13)，43.86(C，C-10)，38.85(CH2，C-12)，35.89(CH2，C-23)，33.75(CH2，C-6)，33.61(CH2，C-7)，31.62(CH2，C-16)，30.78(CH，C-8)，26.93(CH3，C-15′和C-16′)，25.42(CH2，C-24)，23.45(CH2，C-15)，16.35(CH3，C-19)，14.81(CH3，C-18)。
图示11
Figure GSB00000036637000401
i)DCC，DMAP，MeOH在DCM中3小时，室温；ii)Pd/C，H2在乙酸乙酯中2小时，室温；iii)HCl，NaNO2，30分钟，-5℃；iv)乙酸钠(AcONa)，NH4OH，室温，1小时；v)；NaOH2N，(乙醇)EtOH，24h，室温；vi)DIAD，Ph3P在超干THF中24小时
2-硝基苯乙酸甲酯
向2-硝基苯乙酸(5g，0.0276mol)的DCM(50mL)溶液中加入DMAP(1当量，3.37g)，接着加入DCC(1当量，5.63g)并最后加入甲醇(5当量，5.58mL)。反应混合物搅拌2-3小时，TLC显示反应完成。在此之后，反应物过滤除去生成的DCU，滤液用0.1N HCl(2×25mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×25mL)和水(2×25mL)冲洗，用硫酸钠干燥，减压下除去溶剂。粗产物酯通过快速柱色谱(DCM∶EA 60∶40)纯化，得到黄色油状产物4.8g(90％)：1H-NMR(400MHz，CDCl3)，δ：7.94(1H，d，J 8Hz)，7.4(1H，t，J 7.2Hz)，7.3(1H，t，J 7.6Hz)，7.25(1H，d，J 7.6Hz)，3.89(2H，s)，3.59(3H，s)。13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ：170.3(C＝O，C-8)，148.2(C-1)，133.0(C-4)，132.8(C-3)，129.2(C-2)，128.0(C-5)，124.5(C-6)，51.4(C-9)，38.8(C-7)。
2-氨基苯乙酸甲酯
2-硝基苯乙酸甲酯(1g，5.13mmol)溶解于20mL EA中并将0.3g 10％Pd/C悬浮于该溶液中，反应混合物在室温下保持在氢气氛中。2小时后通过TLC分析(DCM∶EA 60∶40)反应完成，过滤除去10％Pd/C，减压下除去溶剂，获得无色油0.67g(67％)。
2-(4-羟基-苯基偶氮)-苯乙酸甲酯
2-氨基苯乙酸甲酯(3g，0.018mol)与浓缩的HCl(9mL)溶于水(40mL)中，并将溶液在冰/丙酮浴中冷却至-5℃，然后逐滴加入亚硝酸钠(1.32g，0.019mol)的1mL水溶液。在此时生成重氮盐，溶液变成淡黄色。加入一勺脲中和过量的亚硝酸钠(氧化剂)，5分钟之后将重氮盐溶液逐滴加入到溶于水(40mL)的苯酚(1.68g，0.018mol)、乙酸钠(2.88g，0.036mol)和氨水的-5℃的溶液中。加完之后，加入冰乙酸(当量，5mL)，过滤反应混合物。滤饼溶解于EA中并用硫酸钠干燥，减压下除去溶剂，用快速色谱法(DCM 100mL，DCM∶EA80∶20)纯化以获得2.7g产物(56％)：m.p.158-160℃，IRvmax(KBr)：3221.84(OH)，1695.48(C＝O)cm-1。1H-NMR(400MHz，丙酮)δ：9.14(1H，s)，7.86(2H，d，J 8.50Hz)，7.72(1H，d，J 8Hz)，7.45(3H，m，J 7.52Hz)，7.03(2H，d，J 8.50Hz)，4.16(2H，s)，3.62(3H，s)。13C-NMR(400MHz，丙酮)δ：204.91(C＝O，丙酮)，171.22(C＝O，C-8)，160.29(C，C-4′)，149.64(c，C-2)，146.20(C，C-1′)，134.13(CH，C-6)，131.13(CH，C-5)，129.97(C，C-1)，127.42(CH，C-4)，124.65(CH，C-3，C-6′，C-2′)，115.38(CH，C-5′)，114.73(CH，C-3′)，50.65(CH3，C-9)，36.41(CH2，C-7)，28.52(丙酮，CH3)。
2-(4-羟基-苯基偶氮)-苯乙酸
在氮气氛下将该酯(0.266g，1mmol)溶解于10mL乙醇中并将2N NaOH(2mL)加入混合物中，避光搅拌过夜。反应混合物倾入1N HCl溶液中并用EA萃取。有机相用水和盐水冲洗并用硫酸镁干燥。减压下除去溶剂，产物用EA：正己烷重结晶而得到橙色晶体状产物0.2g(70％)：m.p.138-140℃，IRvmax(KBr)：3280.04(OH)，1721.07(C＝O)，1655.90(C＝O)cm-1。1H-NMR(400MHz，丙酮)δ：10.71(1H，s)，9.13(1H，s)，7.88(2H，d，J 8.52Hz)，7.71(1H，d，J 7.52Hz)，7.45(3H，m，J 8.04Hz)，7.01(2H，d，J 8.52Hz)，4.16(2H，s)。13C-NMR(400MHz，丙酮)δ：204.92(C＝O，丙酮)，171.65(C＝O，C-8)，160.20(C，C-4′)，149.73(C，C-2)，134.49(C，C-1′)，131.18(CH，C-5)，129.91(CH，C-6，C-1)，127.28(CH，C-4)，124.69(CH，C-3，C-6′，C-2′)，115.32，(CH，C-5′)114.63(CH，C-3′)，36.23(CH2，C-7)，28.51(丙酮，CH3)。[2-(4-羟基-苯基偶氮)-苯基]乙酸2-(11，17-二羟基-10，13-二甲基-3氧代-2，3，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十四氢-lH-环戊[a]菲-17-基)-2-氧代-乙基酯苯酚偶氮前药
将偶氮载体(0.5g，0.0019mol，)加入到氢化可的松(0.34g，0.0009mol，)和三苯基膦(0.74g，0.0028mol)的超干THF溶液中，在氮气氛下升温至40℃，12分钟内逐滴加入95％的偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(0.57g，0.0028mol)并剧烈搅拌。混合物在40℃下搅拌1小时，反应保持在氮气氛下室温过夜。减压下除去挥发物质以获得橙色油状产物。采用快速柱色谱二氯甲烷∶乙酸乙酯(50∶50)纯化，在该柱色谱分离之后除去三苯基膦氧化物，需要己烷(200mL)进行第二次快速柱色谱分离，用己烷∶乙酸乙酯(70∶30)洗脱获得橙色晶体状偶氮前药0.23g(42％)：m.p.122-124℃，IRvmax(KBr)：3437.13(OH)，1721.07(C＝O)，1655.90(C＝O)cm-1。1H-NMR(400MHz，丙酮)δ：7.76(2H，d，J 8.53Hz)，7.65(1H，d，J 7.03)，7.33(3H，m)，6.85(2H，d，J 8.53Hz)，5.59(1H，s)，4.90(1H，d，J 17.57Hz)，4.74(1H，d，J 17.06Hz)，4.18(2H，s)，2.60-0.77(氢化可的松包膜，24H)。
分子内内酰胺化动力学研究
类固醇在体内从前药释放取决于偶氮还原酶活性的氨基类固醇产物的环化。通过HPLC随着可的松的变化测定剩余化合物而监控37℃下各种pH的水溶液中可的松A和B的氨基衍生物环化速率。
从剩余的酯的自然对数对应时间描点作图而获得消失的一级速率常数。计算出半衰期(T1/2＝0.693/kabs)。计算出前药A的半衰期为2.2小时；计算出前药B的半衰期为1.4小时。
生物学研究
物料和方法
泼尼松和DSS都购自Sigma-Aldrich laboratories。
BALB/c系小鼠来自Bioresources Unit(Trinity College Dublin)。
小鼠在正压下于单个通风过滤笼子中进行饲养。食物和水任意供应。所有动物试验都遵循Irish Department of Health and Children regulations并获准于Trinity College Bioresources ethical review board而进行实施。
统计分析
所有体内试验采用每组6只小鼠实施。组之间的差异通过学生t检验进行分析。结肠炎得分通过秩和检验(Mann Whitney检验)进行分析。P值＜0.05就被认为设显著性的。关于DIA，C/B和T/B MPO的结果表示为平均±S.E。
验证性肠病样本小鼠的制备
DSS(35-50,000kDa；MP Biomedicals，OH)溶解于小鼠的饮水中。新制DSS溶液每两天提供一次。BALB/c小鼠暴露于5％DSS 6天。每天检查小鼠的发病率并记录体重。通过减重、便血，以及一旦解剖根据结肠长度，确定结肠炎的诱发。排泄物的出血采用Hemdetect隐含血液检测试剂盒(Dipro，Austria)进行检测。
为了度量结肠炎的诱发，基于先前的DSS诱发结肠炎研究(Cooper 1993)测定疾病活动指数(DAI)。基于对每只小鼠每日体重损失、隐含出血和便样一致性/腹泻计算DAI。对每个参数给出1-4级评分，最大DAI得分12。得分0，无体重损失、正常大便，无出血；得分1，1％-3％减重；得分2，3％-6％减重，大便疏松，大便中血迹可见；得分3，6％-9％减重；得分4，＜9％减重，腹泻，大出血。大便疏松定义为大便形式一经处理易于变成膏状。腹泻定义为无大便形成。大出血定义为肛门周围皮毛上有新鲜血迹。
结肠组织学
解剖时，测定结肠的长度，并在10％甲醛-盐水中固定1cm的结肠段。H&E-染色段基于由现有研究(Siegmund 2001)修改的评分系统进行分级。组织学评分按照盲法(blind fashion)进行。炎症性细胞渗透和组织损伤的综合得分如下确定：细胞渗透：得分0，在LP中偶见发炎细胞；1，在腺管基部处LP中渗透显著增加；2，发炎性渗透的汇集扩展到粘膜；3，透壁扩展的渗透。组织损伤：得分0，无粘膜损伤；1，大面积的腺管部分(高达50％)损失；2，大面积的部分到整个50％-100％腺管损失，上皮细胞完整；3，大面积整个腺管损失且上壁细胞消失。
药效
重量为18-22g的DSS诱发结肠炎小鼠容许5％DSS水，向结肠炎小鼠口服给药100μL泼尼松前药2的1％溶液和聚氧乙烯醚和乙醇在水中的悬浮液(相当于5mg泼尼松/kg小鼠体重)，每日2次(每12小时一次)。泼尼松和前药治疗后6日，通过颈部错位宰杀小鼠。远端结肠段和胸腺移出并冲洗而除去结肠内容物。
测定1cm远端(末梢，distal)结肠和胸腺的鲜重而获得远端结肠重和胸腺重对体重的比率(分别为C/B和T/B)。结肠样品的损伤按照“物料和方法”中的描述进行评分。远端段通过液氮冷冻保持在-80℃直至进行髓过氧物酶活性(MPO)分析。
结论
抗炎效用通过比较健康小鼠、未治疗小鼠、泼尼松治疗小鼠和前药治疗小鼠之间的远端结肠长度进行研究。IBD导致结肠缩短。因此结肠组织上观察到的抗炎作用影响的损伤越小，远端结肠长度就缩短越小。
系统副作用通过比较健康小鼠、未治疗小鼠、泼尼松治疗小鼠和前药治疗小鼠之间的胸腺重和体重比率(Hideki Yano 2002)进行研究，这是因为这样一个事实，即在血液流中类固醇的浓度增加会引起胸腺活性受到抑制而由此降低其重量。
如图13所示，由以5mg/kg剂量治疗的DSS-诱发结肠炎小鼠的结肠段的DAI得分数据曲线图，出血和减重得分的主观评价相载体对照组中的阈值增加，但是并未出现在治疗组中。
如图14所示，由以5mg/kg剂量治疗的DSS-诱发结肠炎小鼠的结肠长度的数据曲线图，前药2组结肠长度显著地比PRED(P＜0.0243)组更长。(P值是相对载体组结肠长度差异的学生t检验。)
如图15所示，由健康小鼠(未治疗)和以5mg/kg剂量治疗的DSS-诱发结肠炎小鼠的胸腺-体重比率的数据曲线图，PRED组胸腺：BW比率相对于未治疗小鼠(P＜0.05)显著降低。在前药治疗组中平均胸腺重与未治疗小鼠未见显著不同。
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遍及本申请引述的所有文献的全部公开内容都结合于本文中作为参考。
对于本领域的那些技术人员而言，应该理解到，对于上述的实施方式能够作出变化而不背离本发明在本文中描述的广义发明概念。因此，应该理解到，本发明并不限于所公开的具体实施方式和方面，而预想涵盖所有的隶属于附加权利要求所定义的本发明精神和范围内的修改。除非本文中另外指出或上下文明显另外相矛盾，上述的组成部分以其所有可能的变型的任何组合涵盖于本发明中。

Claims (48)

1.一种通式Ia的化合物：
Figure FSB00000036636900011
或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或多个立体异构体的混合物形式，
其中：
A是氢或是含羟基药物的残基；
Z选自由-C(O)-，-S(O)-，-OC(O)-，-OC(O)NR13-S-C(O)-，-SC(O)NR13-，-C(O)NR13-，-NR13C(O)NR13-，-OS(O)-，-OS(O)2-，-S(O)2NH-和-OPO(OH)-组成的组；
R1，R2，R5和R6每一个都独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个都是取代的或未取代的；
R3和R4每一个独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个都是取代的或未取代的；
R11选自由氢，羟基，(C1-3)烷氧基和-C(O)OR10组成的组；
R9和R12每一个独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，-SO3R13，-PO3R13，(C1-3)烷氧基组成的组，烷基，环烷基，芳基和杂芳基的每一个都是取代的或未取代的；
或如果R11和R12在苯环中邻位取代，一起形成可选取代的杂环的环；
R10是氢或(C1-3)烷基；
每一个R13独立地是氢或(C1-3)烷基，以及
a、b和c的每一个独立地是0，1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R11和R12一起形成可选取代的杂环的环。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R11和R12一起形成丙酮化物基-4-酮(acetonidyl-4-one)。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R11是-C(O)O-R10，而R12和R10的每一个都是氢。
5.一种通式I的化合物：
Figure FSB00000036636900021
或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或立体异构体的混合物形式，
其中：
A是氢或是含羟基药物的残基；
R1，R2，R5和R6每一个独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个都是取代的或未取代的；
R3和R4每一个独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；
R7是氢或(C1-3)烷基；
R8是氢或是(C1-3)烷基；
R9选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；以及
a、b和c每一个独立地是0，1或2。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R7和R8是氢，而c为1或2。
7.根据权利要求5或6所述的化合物，其中a和b都为0，而c为1或2。
8.根据权利要求5至7任一项所述的化合物，其中R9是氢。
9.根据权利要求5至8任一项所述的化合物，其中R7和R8是氢，R9是氢，而a和b都为0。
10.根据权利要求1至9任一项所述的化合物，其中所述含羟基药物选自由抗炎药，抗癌药，显影剂，疫苗，抗原，抗感染药，肽，反义分子和蛋白组成的组。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中所述含羟基药物是抗炎药。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中所述抗炎药是类固醇。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中所述类固醇选自由氢化可的松，地塞米松，分别在21-、11-和17-位酯化的布地缩松，以及氢化泼尼松组成的组。
14.根据权利要求10所述的化合物，其中所述含羟基药物选自由硝基咪唑类药，喹啉类药如萘啶酸，氟喹啉酮，环丙沙星，左氧氟沙星，胺基糖甙，丁胺卡那霉素，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龙霉素，链霉素，托普霉素和阿泊拉霉素，甲酰四氢叶酸，拓扑替康，依立替康，氨甲叶酸，贝伐单抗，西妥昔单抗，帕尼单抗和英夫利西单抗组成的组。
15.一种通式II的化合物：
或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或立体异构体的混合物形式，
其中：
A是氢或是含羟基药物的残基；
R1，R2，R5和R6每一个独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；
R3和R4每一个独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一股是取代的或未取代的；
R7是氢或(C1-3)烷基；
R8是氢或(C1-3)烷基；
a、b和c每一个独立地是0，1或2。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中R7和R8是氢，而c为1或2。
17.根据权利要求15或16所述的化合物，其中a和b都为0，而c为1或2。
18.根据权利要求15至17任一项所述的化合物，其中R7和R8是氢，而a和b都为0。
19.根据权利要求15至18任一项所述的化合物，其中所述含羟基药物选自由抗炎药，抗癌药，显影剂；疫苗，抗原，抗感染药，肽，反义分子和蛋白组成的组。
20.根据权利要求19所述的化合物，其中所述含羟基药物是抗炎药。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中所述抗炎药是类固醇。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中所述类固醇选自由氢化可的松，地塞米松，分别在21-、11-和17-位酯化的布地缩松，以及泼尼松组成的组。
23.根据权利要求19所述的化合物，其中所述含羟基药物选自由硝基咪唑类药，喹啉类药，氟喹啉酮类药，胺基糖甙，丁胺卡那霉素，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龙霉素，链霉素，托普霉素，阿泊拉霉素，甲酰四氢叶酸，拓扑替康，依立替康，氨甲叶酸，贝伐单抗，西妥昔单抗，帕尼单抗和英夫利西单抗组成的组。
24.一种通式III的化合物：
Figure FSB00000036636900051
或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或立体异构体的混合物形式，
其中：
A是氢或是含羟基药物的残基；
R5和R6每一个独立地是氢，或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一个是取代的或未取代的；
R7是氢或(C1-3)烷基；
R8是氢或(C1-3)烷基。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中R5和R6是氢。
26.根据权利要求24所述的化合物，其中R5，R6，R7和R8每一个都是氢。
27.根据权利要求24至26任一项所述的化合物，其中所述含羟基药物选自由抗炎药，抗癌药，显影剂，疫苗，抗原，抗感染药，肽，反义分子和蛋白组成的组。
28.根据权利要求27所述的化合物，其中所述含羟基药物是抗炎药。
29.根据权利要求28所述的化合物，其中所述抗炎药是类固醇。
30.根据权利要求29所述的化合物，其中所述类固醇选自由氢化可的松，地塞米松，分别在21-、11-和17-位酯化的布地缩松，以及泼尼松组成的组。
31.根据权利要求27所述的化合物，其中A选自由硝基咪唑类药，喹啉类药，氟喹啉酮类药，胺基糖甙，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龙霉素，链霉素，托普霉素和阿泊拉霉素，甲酰四氢叶酸，拓扑替康，依立替康，氨甲叶酸，贝伐单抗，西妥昔单抗，帕尼单抗和英夫利西单抗组成的组。
32.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下化合物组成的组：
Figure FSB00000036636900061
33.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下化合物组成的组：
Figure FSB00000036636900071
34.一种药物组合物，包括治疗有效剂量的权利要求1至33中任一项所述的化合物和药用赋形剂。
35.一种用于降低患者NFκB DNA-结合活性的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效剂量的根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述治疗有效剂量有效降低、缓解或治疗发炎性肠疾病(IBD)。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述治疗有效剂量有效降低、缓解或治疗溃疡性结肠炎或克隆氏病。
38.一种治疗发炎性肠疾病(IBD)的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物。
39.一种治疗克隆氏病或溃疡性结肠炎的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所给药的化合物或组合物的所述用量有效的维持缓解。
41.根据权利要求40所述的方法，其中给药了5ASA-5ASA。
42.一种降低、缓解或治疗溃疡性结肠炎的方法，包括给药治疗有效剂量的5ASA-类固醇，其中类固醇是氢化可的松，地塞米松，分别在21-、11-和17-位酯化的布地缩松，或泼尼松。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述类固醇是泼尼松。
44.一种治疗胶原性结肠炎，淋巴细胞性结肠炎，缺血性结肠炎，改道性结肠炎，贝塞氏综合症，感染性结肠炎，或未定型性结肠炎的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物。
45.一种治疗阿米巴病，难辨梭菌感染，伪膜性结肠炎，憩室炎，肠胃炎，肠胃癌，或肠易激综合症(IBS)的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效剂量的根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物。
46.一种用于治疗或缓解哺乳动物中发炎性病症的方法，所述方法包括向结肠递送治疗有效剂量的COX2抑制剂，其中所述COX2抑制剂是根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物的含羟基药物的残基。
47.一种用于治疗哺乳动物中胃肠癌的方法，所述方法包括向结肠递送治疗有效剂量的COX2抑制剂，其中所述COX2抑制剂是根据权利要求1至33中任一项所述的化合物或组合物的含羟基药物的残基。
48.一种通式Ia的化合物：
Figure FSB00000036636900091
或其药学上可接受的盐，可选地以单个立体异构体或立体异构体的混合物形式，
其中：
A是氢或是含羟基药物的残基；
Z选自由-OC(O)-，-OC(O)NR13-，-S-C(O)-，-SC(O)NR13-，-C(O)NR13-，-NR13C(O)NR13-，-OS(O)-，-OS(O)2-，-S(O)2NH-和-OPO(OH)-组成的组；
R1，R2，R5和R6每一个独立地是氢或每一个独立地选自由(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一是取代的或未取代的；
R3和R4每一个独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，(C1-3)烷氧基，芳氧基和杂芳氧基组成的组，其中每一是取代的或未取代的；
R11选自由氢，羟基，(C1-3)烷氧基和-C(O)OR10组成的组；
R9和R12每一个独立地选自由氢，(C1-3)烷基，(C3-10)环烷基，(C3-10)环烷基(C1-3)烷基，芳基，芳基(C1-3)烷基，杂芳基，杂芳基(C1-3)烷基，氨基，氰基，卤素，羟基，-SO3R13，-PO3R13，(C1-3)烷氧基组成的组，烷基，环烷基，芳基和杂芳基每一个是取代的或未取代的；
或R11和R12在苯环上邻位取代时，一起形成可选取代的杂环的环；
R10是氢或(C1-3)烷基；
每一个R13独立地是氢或(C1-3)烷基，以及
a、b和c每一个独立地是0，1或2。
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