CN105520933A - 含笑内酯二甲基胺的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了含笑内酯二甲基胺(ACT001)在制备治疗肝纤维化的药物中的应用。本发明提供的ACT001可以逆转及抑制机体的肝纤维化水平、抑制肝脏内成纤维细胞过度增生、改善肝脏供血和促进肝细胞的再生以及降低肝脏的炎症效应，对肝纤维化有较好的治疗效果。

Description

含笑内酯二甲基胺的应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体而言，涉及一种含笑内酯二甲基胺的应用。

背景技术

含笑内酯二甲基胺是含香内酯的衍生物，是由天然提取物小白菊内酯为原料制取而来，在本文中将其简称为ACT001。小白菊内酯是从草本类植物艾菊中纯化出的一种倍半萜烯内酯化合物，具有抗炎、抗肿瘤、抗血小板聚集等特征。通过抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)、IL-12及环氧化酶-2(COX-2)等的表达而具有抗炎作用；通过抑制NF-кB的活化以及磷酸化来促进癌细胞的凋亡，同时抑制L-8、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrothfactor,VEGF)的产生，起到抗肿瘤的作用；关于ACT001目前的研究主要是用于治疗皮肤感染、偏头痛、风湿病以及治疗肿瘤等疾病。研究表明ACT001及小白菊内酯是具有抗炎、抗肿瘤、抗血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞的增殖、抑制破骨细胞的活性等特征。

肝纤维化在临床上表现为乏力、食欲减退、肝肿大、黄疸，严重的肝纤维化可导致肝硬化、肝衰竭，最终导致死亡。肝纤维化的特征是肝小叶内出现桥接坏死甚至多小叶坏死，肝小叶内成纤维细胞增生，取代了坏死肝细胞的位置，肝细胞受到有害物质刺激引起肝细胞死亡，处于肝血窦的毛细血管壁周围的成纤维细胞就会逐渐的迁移到坏死肝细胞坏死造成空缺的位置，当大量没有肝脏解毒功能的纤维细胞代替坏死的肝细胞原来的位置，填补因为肝细胞坏死造成的肝部空缺，就会造成肝肺纤维化。纤维细胞不能代替肝细胞进行解毒等功能，造成有害物质在肝部不能及时代谢，进而会对肝细胞造成损伤，形成一个恶性循环。

到目前为止，ACT001在肝纤维化中的应用尚无明确报道。由肝纤维化导致的肝病是高发性疾病，由于肝纤维化是由持续性的肝损伤导致的，因此一旦发生肝纤维化，难以治愈，则会对人类健康造成的很大的危害。

与肝纤维化有关的细胞因子有转化生长因子(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)、表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)、血小板衍生生长因子(plateletderivedgrowthfactor，PDGF)、胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactors，IGF-1)、白细胞介素(interleukin，IL)、结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactorα，TNF-α)基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)等。肝纤维化的特征是肝小叶内出现桥接坏死甚至多小叶坏死，肝小叶内成纤维细胞增生，取代了坏死肝细胞的位置，因此抑制成纤维细胞生长是研制抗纤维化药物的重要环节。

慢性肝炎患者(包括乙、丙、丁型)几乎都有肝纤维化现象，而纤维化是造成肝功能异常和影响肝病预后的重要因素，也是慢性肝炎发展至肝硬化和门脉高压的必经阶段。如果能阻止或逆转肝纤维化，则会使大多数慢性肝炎得到控制，从而预防和减少肝硬化的发生。肝纤维化的治疗目前并没有特效药物。临床上主要采用抗炎药、抗纤维化药物、抗病毒药物、肝移植等措施进行治疗，常用的药物包括秋水仙碱、汉防己甲素、复方丹参制剂、干扰素、核苷类药物等。目前我国已有拉米夫定(LAM)、阿德福韦酯(ADV)、恩替卡韦(ETV)和替比夫定(LdT)这4种核苷类药物被批准用于抗乙肝病毒治疗。核苷类药物以及其他用于治疗肝纤维化的药只有长期治疗才可能实现持久应答，并且容易出现耐药性。临床上有些用于治疗肝纤维化的药物的药效还存在不同程度上的争议。肝纤维化疾病维护严重、病死率高、临床治疗措施匮乏，因此在深入了解其发病机制的基础上开发新型的治疗肝纤维化的药物迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供含笑内酯二甲基胺在制备治疗肝纤维化药物中的应用。

本发明提供了含笑内酯二甲基胺在制备治疗肝纤维化的药物中的应用，其中，所述含笑内酯二甲基胺的分子结构式为：

在上述应用中，包括：含笑内酯二甲基胺在制备逆转及抑制机体的肝纤维化水平、抑制肝脏内成纤维组织过度增生、改善肝脏供血和促进肝细胞的再生以及降低肝脏的炎症效应的药物中的应用。

在上述应用中，治疗肝纤维化的药物包含：含笑内酯二甲基胺、含笑内酯二甲基胺在药学上可接受的盐、酯或它们的组合以及辅料。

在上述应用中，治疗肝纤维化的药物的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。

在上述应用中，治疗肝纤维化的药物的给药方式包括口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。

本发明提供的治疗肝纤维化药物的优势在于：ACT001可以逆转及抑制机体的肝纤维化水平、抑制肝脏内成纤维细胞过度增生、改善肝脏供血和促进肝细胞的再生、降低肝脏的炎症效应，对肝纤维化有很好的治疗效果。此外，该药物患者不仅容易接受，且价格低廉、来源广泛、容易获取，还便于了解患者对药物的反应。此外，含笑内酯二甲基胺(ACT001)将改变已有治疗肝纤维化药物的市场格局，成为一种可长期服用，且有效抑制肝纤维化、改善肝功能状况的临床药物。

本发明所使用的ACT001为ACT001富马酸盐，白色粉末，由天津尚德药缘科技股份有限公司提供，批号：20131112，ACT001富马酸盐的化学结构式为：

附图说明

图1是正常小鼠肝组织切片图；

图2是小鼠肝纤维化建模第三周小鼠肝组织切片效果图；

图3A是ACT001给药后第二周小鼠肝组织外部形态图；

图3B是ACT001给药后第二周小鼠肝组织外部形态立体显微镜下效果图；

图3C是ACT001给药后第二周小鼠肝组织切片效果图；

图4A是ACT001给药后第三周小鼠肝组织外部形态图；

图4B是ACT001给药后第三周小鼠肝组织外部形态立体显微镜下效果图；以及

图4C是ACT001给药后第三周小鼠组织切片效果图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明所用的试验材料及其来源包括：

(1)小鼠

昆明小鼠(雄性)：由中国人民解放军军事医学科学院试验动物中心和北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

动物到达后，由专人接收动物于双走廊屏障环境小鼠饲养室2内，填写《试验动物接收记录表》(BG-017-V00)，接收时对动物大体情况进行观察，并随机抽取动物进行称重，确保试验动物与引进标准基本吻合。实验动物使用许可证号：SYXK(津)2012-0003。

(2)供试品

ACT001：白色粉末，购自天津尚德药缘科技股份有限公司，批号20131112。供试品保存：4℃

四氯化碳：无色液体，购自北京百灵威科技有限公司，生产厂家：百灵威科技有限公司,品牌：Amethyst，CAS:56-23-5，货号199398，MDL：

MFCD00000785，纯度：99.5％。

食用油品牌：金龙鱼。

(3)细胞系：NIH-3T3(小鼠胚胎成纤维细胞系)：购自南京凯基生物科技发展有限公司；

(3)所用药物及试剂的配制方法包括：

a)ACT001溶液的配制：称取ACT001粉末1g，溶于100mL的0.9％生理盐水溶液中，配制成10mg/mL溶液，待其充分溶解后，用0.22μm滤器过滤除菌后使用，每次使用时现用现配。溶液的配制及使用均应在无菌生物安全柜中操作。

b)10％福尔马林固定液的配置:将100ml的福尔马林与900ml的纯净水混匀。

c)CCL₄-食用油混合液的配置:将40ml的CCl₄加入到60ml的食用油中，搅拌均匀后，用0.22μm的滤膜抽滤，溶液的配置及抽滤均应在无菌生物安全柜中操作。

d)0.9％生理盐水溶液的配置：将0.9g的NaCl溶解到100mL无菌水中，用0.22μm的滤膜抽滤，溶液的配置及抽滤均应在无菌生物安全柜中操作。

实施例1小鼠肝纤维化模型的建立和ACT001药效学检测

实验方法及步骤：

1.小鼠肝纤维化模型的建立及给药治疗

1.1小鼠肝纤维化模型的建立

将36只小鼠随机分为三组：正常组、对照组(模型不给药组)、ACT001组，每组12只。正常组每只每次背部皮下注射0.15ml的生理盐水；对照组(模型不给药组)以及ACT001组每只每次背部皮下注射0.15ml的含40％的CCl₄的CCl₄-食用油混悬液；每周注射两次。

1.2肝纤维化小鼠的给药治疗

在建模后第三周，给予小鼠药物治疗，正常组以及对照组每次用0.1ml的0.9％的生理盐水灌胃，ACT001组每次用0.1ml的ACT001溶液灌胃。每2天一次。

1.3小鼠肝纤维化的病理检测

在建模的第三周、给药后第二周、给药后第三周，分别从正常组、模型不给药组、ACT001组每组取四只小鼠，断颈处死，取其肝，经10％福尔马林固定两天后，用流水冲洗掉肝组织表面的固定液，用病理组织脱水机对小鼠肝组织进行脱水处理，经石蜡进行包埋，对包埋组织进行切片，经H.E染色，盖片，在显微镜下观察肝组织的变化。

实验结果及结果评价

1)建模评价

参考图1和图2，图1是正常小鼠肝组织切片图；图2是小鼠肝纤维化建模第三周小鼠肝组织切片效果图。如图1及图2所示，显微镜下观察建模第三周后的肝组织切片：与健康正常小鼠相比，注射CCl₄-食用油混悬液后，小鼠的肝明显受到损伤，纤维组织增生严重，出现明显的肝纤维化的症状。

2)ACT001组药效学评价

参考图3A，3B，3C，图3A是ACT001给药后第二周小鼠肝组织外部形态图；图3B是ACT001给药后第二周小鼠肝组织外部形态立体显微镜下效果图；图3C是ACT001给药后第二周小鼠肝组织切片效果图。如图3A，3B，3C所示：建模后与正常组相比，模型组的肝体积明显变大，肝色苍白，表面有明显的颗粒状假小叶的突起；对照组(模型不给药组)的肝小叶结构已经明显破坏，明显出现肝假小叶。从图3A及图3B可以看出，建模后给药ACT001二周后，与建模不给药组相比，给药ACT001组的肝纤维化程度明显改善，肝细胞损伤程度明显降低，肝细胞坏死组织减少，炎性症状明显减轻，肝细胞纤维化现象明显改善。肝小叶结构从表面已经看不出有损伤，肝表面无突起，形态与正常对照组相当，同时肝脏表面更加平滑，肝脏供血更加丰富，肝脏更加红润。表明ACT001可以改善机体的肝纤维化水平，同时对肝脏的供血也有一定得改善。

从图3C中可以看出，给药ACT001组的肝脏切片，肝脏坏死区域减少，肝脏纤维化水平明显减弱，肝脏纤维组织减少，正常肝组织再生。因此，ACT001还能够改善肝脏供血和促进肝细胞的再生。

接下来，参考图4A，4B，4C，图4A是ACT001给药后第三周小鼠肝组织外部形态图；图4B是ACT001给药后第三周小鼠肝组织外部形态立体显微镜下效果图；图4C是ACT001给药后第三周小鼠组织切片效果图。如图4A，4B，4C所示建模后给药ACT001第三周，与肝纤维化模型不给药组相比，给药ACT001组无纤维化现象，仅有少数肝细胞仍处于损伤状态，肝表面平滑，与正常组相当。可见，ACT001能够抑制及逆转机体的肝纤维化水平。同时从图4C中可以看出，肝纤维化模型组，肝组织大量坏死，同时可以看到坏死区有炎性细胞浸润，用ACT001处理后，肝脏组织趋于正常，同时未发现炎性细胞浸润，表明ACT001在一定程度上可以抑制肝脏的炎症效应。

以上实施例表明ACT001对肝纤维化有很好的治疗效果，可以逆转及抑制机体的肝纤维化水平、抑制肝脏内成纤维细胞的过渡增生、改善肝脏供血、促进肝细胞再生以及降低肝脏的炎症效应。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.含笑内酯二甲基胺在制备治疗肝纤维化的药物中的应用，其中，所述含笑内酯二甲基胺的分子结构式为：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括：所述含笑内酯二甲基胺在制备逆转及抑制机体的肝纤维化水平、抑制肝脏内成纤维组织过度增生、改善肝脏供血和促进肝细胞的再生以及降低肝脏的炎症效应的药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗肝纤维化的药物包含所述含笑内酯二甲基胺、所述含笑内酯二甲基胺在药学上可接受的盐、酯或它们的组合以及辅料。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述治疗肝纤维化的药物的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述治疗肝纤维化的药物的给药方式包括口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。