CN105520844A - 白及多糖与丹皮酚组合物产品及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种白及多糖与丹皮酚组合物产品，干燥过后的白及经用蒸馏水热提取、加入中性蛋白酶水解蛋白、过滤、减压浓缩，然后用柱吸附、将洗脱液浓缩，减压浓缩，制得白及水溶性多糖纯品，其多糖含量在99％以上。并将白及多糖与丙烯酸合成白及凝胶，再将白及凝胶、白及多糖与丹皮酚加入水中，超声波和小肽作用下加速溶解后，混合冷冻至干后应用于保健品或药物中。

Description

白及多糖与丹皮酚组合物产品及其应用

所属技术领域：

本发明涉及一种白及多糖与丹皮酚组合物产品及其在镇静抗炎药物中的应用，属于天然药物应用的技术领域。

背景技术

丹皮酚是从牡丹花根皮中提取出来的一种中药成分，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。具有镇静、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血压等作用，在日化方面，丹皮酚能抑制细胞内O₂ ^-自由基产生，能使皮肤增白，将皮肤中沉积色素还原退色，消淤化斑；同时也具有消炎、消肿止痛、抗过敏、抗病毒等作用。对色斑、肌肉痛、皮肤瘙痒、牛皮癣、带状疮疹、湿疹具有较好的治疗和保健效果，此外，在牙膏、含漱液、牙粉、牙痛水中有较好的作用。

白及假鳞茎是常用中药，止血收敛、消肿生肌功效好。入药内服主治肺结核咯血、支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症；外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等。近年来研究发现，白及假鳞茎中的白及胶是主要药效部位，其主要成分是葡甘聚糖等水溶性多糖。白及胶的理化性质与阿拉伯胶、西黄蓍胶类似，但黏性特殊。

白及止血效果确切可靠，与所含大量白及胶有关。白及胶成膜具有较强粘附力，敷于动物的出血点或面，可立刻与创面融合而难以剥离，而且仅仅是接触伤口的一面溶融，这样就可迅速止血和防止感染。实验证明，白及提取物具有缩短凝血时间、抑制肌体对纤维素溶解的作用，可迅速形成人工血栓，对外伤止血或内脏出血临床治疗均有较好疗效，安全且无任何副作用。

古医学著作记载白及“封填破损，痈肿可消。”。现代药理学实验证实，白及胶对受损伤组织有显著保护作用，能够对抗某些药物(如雷公藤)的毒性，因而与毒性药物配伍可降低药物毒副作用。研究表明，白及对胃、十二指肠等粘膜的保护治疗作用，机理是刺激粘膜细胞合成和分泌释放内源性前列腺素(PG)，不仅仅是机械性保护作用，该研究成果为中医药治疗各类溃疡病提供了重要的基础理论依据。显微观察伤口愈合时间，发现白及胶能显著增加创面渗出多核性白细胞、单核性白细胞和纤维细胞的数量，显著加快伤口愈合速度。采用皮肤器官培养法(浮游法)培养SD小鼠皮片，发现白及处理组的角质形成细胞游走比对照组的显著地快而长，培养出皮片的时间与游走长度呈正相关，反映白及胶直接参与受损组织细胞的修复和代谢过程。

白及胶目前广泛用于胃、食道、十二指肠等消化道溃疡，鼻腔、口腔等呼吸道粘膜溃疡，子宫、阴道等妇科疾病的粘膜溃疡，以及皮肤损伤、疮疡、烧烫伤等临床治疗，总有效率在90％以上，有些病例类型的治愈有效率高达100％，而且治愈效果受到年龄大小、病程长短、个体差异及不同职业等因素的影响较小。

白及胶属于分子量较小的天然聚合物，但无抗原性、无致热原性，与动物机体组织较好地相容，并可被缓慢地降解吸收。医药工作者利用白及胶的优良性能来修补破损组织，使某些外科疾病治疗无须手术也能解决。例如，朱志安等将白及胶与经过特殊处理的脱钙骨制成复合性生物颅骨材料，用于修复颅骨缺损，在相容性、可塑性、自由定型性，以及消毒硬化性方面均取得非常满意效果。对某些溃疡穿孔、吻合术后的痰管病例，运用口服白及胶或白及粉治疗，均有较好的填充修复作用。

白及胶黏度特性优异，堪比阿拉伯胶、黄耆胶，可作为食品、化妆品领域的增稠剂、悬浮剂、保湿剂和助乳化剂，还可作为良好的赋形剂、散剂、膜剂、凝胶剂的基质材料。白及胶、白及生物碱，以及白及其他活性成分，在抑制肿瘤细胞增生、延缓皮肤衰老，以及增稠、悬浮、保湿、助乳化和赋型等方面具有广泛市场前景，目前相关研究文献都很多。

公开号为CN101342188的中国专利公开了一种白及多糖在制备增强造血功能的药物中的应用，所述应用包括：白及多糖在制备增强造血功能的药物中的应用、在制备升高白细胞的药物中的应用、制备升高造血干细胞的药物中的应用、制备升高红细胞和血小板的药物中的应用和制备治疗贫血的药物中的应用。

公开号为CN101249274的中国专利公开了一种促进伤口愈合的白及多糖水凝胶的制备及其应用，水凝胶由醛基化的白及多糖、交联剂与去离子纯水组成，聚合物的质量百分比为3-25％。本发明水凝胶的特点是，具有良好的消炎作用，良好的透气性，良好的保湿作用以及吸收创伤分泌物的功能，在动物模型中显著提高了创伤愈合的速度，作为一种理想的医用外科愈伤药具有广阔的应用前景。

公开号为CN101380281的中国专利公开了一种丹皮酚白及多糖包合物及其制备工艺和应用，该包合物中两种成分的重量百分比例为：白及多糖70％-95％，丹皮酚5％-30％。该包合物可作为化妆品添加剂，加入相关化妆品产品后对皮肤祛斑增白、延缓皮肤衰老、润肤保湿，抗菌消炎等都具有显著作用。

以上文献资料表明，利用白及中性多糖虽能有效防止药用活性成份流失，但在制备过程中并未采用能阻止转化其它物质的措施，丹皮酚等活性成份损失严重。

发明内容

针对目前丹皮酚等活性成份在药物制备过程中易损失现象，通过减少与氧气的接触时间和降低药物生产过程中的温度，因此，本发明第一个目的是提供一种白及多糖与丹皮酚配伍具有明显祛斑美白、抗炎保湿作用的中药材复配方和制备方法。

在一个实施方案中，白及多糖和丹皮酚组合物产品是由各原料成份以以下重量份组成：白及多糖20～50份加入5～20倍重量的冷水溶解，加入人表皮生长因子(hEGF)水解产物5～25份和白及凝胶10～25份，再加入丹皮酚5～20份，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量降低到20％以下，采用充氮气密封保存备用。

在一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：白及多糖30～40份加入5～20倍重量的冷水，加入人表皮生长因子(hEGF)水解产物10～20份和白及凝胶10～25份，再加入丹皮酚10～15份，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量降低到20％以下，采用充氮气密封保存备用。

在另一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：白及多糖35份加入5～20倍重量的冷水，加入人表皮生长因子(hEGF)水解产物10份和白及凝胶20份，再加入丹皮酚15份，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量降低到20％以下，采用充氮气密封保存备用。

其中，所述人表皮生长因子(hEGF)水解产物是指重组人表皮生长因子(hEGF)在蛋白酶作用下水解，每10克重组人表皮生长因子加入5～10倍重量的水溶解，再加入5～20U的蛋白酶，水解时间10～20min，加热至80-90℃，保温10～30min后，5000rpm离心10～20min，取上清液，加入两至六倍体积的乙醚，静置后5000rpm离心10～20min，得沉淀干燥后即可。

上述所用蛋白酶为木瓜蛋白酶或胰蛋白酶，直接从市场购买，要求木瓜蛋白酶活性≥5U/mL。

在一个具体实施方案中，其中所述人表皮生长因子(hEGF)，直接从市场购买，要求蛋白纯度≥90％，从广州恩轲肽医药科技有限公司购买。

在另一个具体实施方案中，其中所述丹皮酚，直接从市场购买，要求丹皮酚含量≥99％，该产品的有效成份含量为99.5％。

本发明第二个目的是提供一种白及多糖的制备方法，并将它用于祛斑美白、抗皱保湿产品中，步骤包括：

(1)粉碎干燥白及，加入石油醚搅拌10～30min后，静置1～3小时分层去除含有石油醚的上层溶液，得沉淀Ⅰ。

(2)向沉淀Ⅰ中加入80-90％乙醇水溶液，搅拌提取30～80min后，静置50～140min，分层去除含有乙醇的上层溶液，得沉淀Ⅱ。

(3)向沉淀Ⅱ中加入一定量的水，搅拌加热至70-85℃，保温30～80min后，5000rpm离心10～20min，得上清液，去沉淀。

(4)将上清液在50-65℃下减压浓缩至一定体积，再加入95％乙醇至终浓度达到75％以上，醇沉10-20h，进行过滤，得滤渣即为白及多糖。

在一个实施方案中，步骤(1)中所述石油醚是采用90～120℃沸程规格的石油醚，其体积L与白及重量kg比为2～4：1。

在一个实施方案中，步骤(2)中所述80-90％乙醇水溶液的体积L与白及重量kg比为2～5：1。

在一个实施方案中，步骤(3)中所述加入水量的体积L与白及重量kg比为2～6：1。

在一个实施方案中，步骤(4)中所述一定体积是指原有体积的1/10-1/40。

在一个实施方案中，步骤(4)中所述过滤：膜孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤一次。

上述制备的产品可以直接用于各种祛斑美白、抗皱保湿材料中，也可以添加到其它祛斑美白、抗皱保湿辅料中，还可直接用于化妆品中保水材料和除皱方面的应用。

本发明第三个目的是提供一种白及凝胶的制备方法，并将它用于祛斑美白、抗皱保湿产品中，步骤包括：

(a)取精制白及多糖20～45份加入3～10倍重量的水，加入丙烯酸5～10份搅拌混合10～30min后，得混合物；

(b)再向混合物中加入10％过硫酸铵和TEMED，快速混合后室温下放置1～3小时，再加入一定量的水搅拌后5000～10000rpm离心，去上清液，重复一次，得沉淀Ⅵ；

(c)将沉淀Ⅵ放置在真空干燥机中室温进行缓慢干燥得干燥物，即为白及凝胶。

在一个实施方案中，步骤(b)中所述10％过硫酸铵的体积μL与混合物的体积mL比为20～50：100；TEMED(四甲基乙二胺)的体积μL与混合物的体积mL比为10～50：100；所述加入水的量mL与混合物的体积mL比为20～50：10。

10％过硫酸铵的配制方法为称取10g过硫酸铵，用水溶解后，定容至100ml。

上述白及多糖和丹皮酚组合物产品或白及多糖或白及凝胶都可以直接用于各种患者伤口的止血、皮肤愈合等材料中，也可直接用于化妆品中保水材料等方面的应用，也可以用于抑制各种病原菌等医用材料中。

技术效果：

1、利用超声处理技术，加速丹皮酚进入白及多糖和白及凝胶分子内部，缩短与氧气接触的时间，降低丹皮酚的损耗。

2、通过去除白及酚类物质，防止产品保存和使用过程中变色现象产生，同时利用白及中淀粉水解成糊精，降低产品中白及的使用量。

3、通过真空干燥脱水技术，充分利用淀粉水解形成的糊精以包裹丹皮酚，使更多的丹皮酚滞留在多糖分子中，增加丹皮酚的功能，另外白及多糖本身具有多方面的调理作用，副作用小，能显著抑制病菌生长，促进伤口快速愈合作用。

4、利用人表皮生长因子水解形成的小肽产物促进丹皮酚溶解度，也有利于促进祛斑美白、抗皱保湿产品的表皮修复作用，比人表皮生长因子更容易吸收。

5、将重组的人表皮生长因子进行水解，不需要将表达的人表皮生长因子恢复其活性，降低其生产成本，有利于解决该产品的保质问题，因为直接添加人表皮生长因子要防止其失去蛋白活性。

具体实施方式

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。

实施例1：白及多糖的制备方法

粉碎干燥白及100kg，直接加入200L的石油醚搅拌20min后，静置1小时分层去除含有石油醚的上层溶液，得沉淀Ⅰ；向沉淀Ⅰ中加入250L的85％乙醇水溶液，搅拌提取70min后，静置60min，分层去除含有乙醇的上层溶液，得沉淀Ⅱ。向沉淀Ⅱ中加入300L水，搅拌加热至85℃，保温30min后，5000rpm离心15min，得上清液，去沉淀。将上清液在50-65℃下减压浓缩至原有体积的1/15，再加入95％乙醇至终浓度达到75％以上，醇沉15h，进行0.22μm的陶瓷膜过滤一次得滤渣即为白及多糖产品。经蒽酮—浓硫酸法测定，产品中可溶性糖含量在98.5％。

实施例2：人表皮生长因子(hEGF)水解产物制备

重组人表皮生长因子(hEGF)是一种小肽，由53个氨基酸残基组成，重组人表皮生长因子(从广州恩轲肽医药科技有限公司购买)在木瓜蛋白酶作用下水解，10g重组人表皮生长因子加入60g的水溶解，再加入1mL木瓜蛋白酶(规格为10U/mL，从长沙湘资生物科技有限公司购买)混合，水解时间20min，加热至90℃，保温10min后，5000rpm离心15min，取上清液，加入两至六倍体积的乙醚，静置后5000rpm离心15min，得沉淀干燥后即为小肽产物。

实施例3：白及凝胶的制备方法

称取精制白及多糖30克，加入120克的水，加入6克丙烯酸搅拌混合10～30min后，得混合物120mL左右。再向混合物中加入10％过硫酸铵25μL和TEMED25μL，快速混合后室温下放置2小时，再加入300mL的水搅拌后8000rpm离心，去上清液，再向沉淀中加入300mL的水搅拌后8000rpm离心，得沉淀Ⅵ。将沉淀Ⅵ放置在真空干燥机中室温进行缓慢干燥得干燥物，即为白及凝胶35克。

实施例4：白及多糖与丹皮酚组合物产品的制备方法

称取白及多糖产品350克加入200mL的冷水，加入人表皮生长因子(hEGF)水解产物100克，白及凝胶20克，再加入丹皮酚150克，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量为15％，得690g，采用充氮气密封保存备用。称取1g样品，采用100％甲醇提取丹皮酚，检测设备为Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为HypersilODS(150mm×4.6mm，5μ)，检测条件∶流动相为60％甲醇水溶液、检测波长为274nm、流速1.0mL/min、柱温25℃、进样量为20μL，检测丹皮酚样品的含量为20.55％，丹皮酚损失率为5.47％。

实施例5：白及多糖与丹皮酚组合物产品的制备方法

称取白及多糖300克加入200mL的冷水，加入人表皮生长因子(hEGF)水解产物100克，白及凝胶20克，再加入丹皮酚150克，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量为17％，得650g，采用充氮气密封保存备用。按实验例2中测定丹皮酚含量的方法，检测丹皮酚样品的含量为21.08％，丹皮酚损失率为8.65％。

对比实施例1

按CN101380281A提供的方法进行制备，取丹皮酚100g，用200mL的无水乙醇溶解，逐滴加入恒温40℃的8L，5wt％白及多糖水溶液中，300rpm搅拌5h，冷却至室温，冷冻干燥，得白色粉末状物，用白色粉末状物2倍体积的石油醚洗涤，离心弃上清，沉淀冷冻干燥，使其含水量为14％，得粉末状物370g，即为产品，收得率为73.01％，按实验例2中测定丹皮酚含量的方法，检测丹皮酚样品的含量为19.72％，丹皮酚的损失率为27.04％。

实施例6：各种产品对酪氨酸酶活性的抑制作用

将各种样品5g室温放置一段时间后，加入到酪氨酸酶溶液中测定酪氨酸酶的活性，并计算出对酪氨酸酶活性抑制率(％)，见表1。

表1白及多糖对酪氨酸酶活性的抑制作用

Claims (10)

1.一种白及多糖和丹皮酚组合物产品，是由各原料成份以以下重量份组成：白及多糖20～50份加入5～20倍重量的冷水溶解，加入人表皮生长因子水解产物5～25份和白及凝胶10～25份，再加入丹皮酚5～20份，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量降低到20％以下，采用充氮气密封保存备用。

2.权利要求1的白及多糖和丹皮酚组合物产品，其中各原料成份以以下重量份组成：白及多糖30～40份加入5～20倍重量的冷水，加入人表皮生长因子水解产物10～20份和白及凝胶10～25份，再加入丹皮酚10～15份，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量降低到20％以下，采用充氮气密封保存备用。

3.权利要求1的白及多糖和丹皮酚组合物产品，其中各原料成份以以下重量份组成：白及多糖35份加入5～20倍重量的冷水，加入人表皮生长因子水解产物10份和白及凝胶20份，再加入丹皮酚15份，超声波加速溶解后混合，真空干燥使其含水量降低到20％以下，采用充氮气密封保存备用。

4.权利要求1-3的白及多糖的制备方法，其具体步骤包括：

(1)粉碎干燥白及，加入石油醚搅拌10～30min后，静置1～3小时分层去除含有石油醚的上层溶液，得沉淀Ⅰ。

(2)向沉淀Ⅰ中加入80-90％乙醇水溶液，搅拌提取30～80min后，静置50～140min，分层去除含有乙醇的上层溶液，得沉淀Ⅱ。

(3)向沉淀Ⅱ中加入一定量的水，搅拌加热至70-85℃，保温30～80min后，5000rpm离心10～20min，得上清液，去沉淀。

(4)将上清液在50-65℃下减压浓缩至一定体积，再加入95％乙醇至终浓度达到75％以上，醇沉10-20h，进行过滤，得滤渣即为白及多糖。

5.权利要求4的方法，步骤(1)中所述石油醚是采用90～120℃沸程规格的石油醚，其体积L与白及重量kg比为2～4：1。

6.权利要求4的方法，步骤(2)中所述80-90％乙醇水溶液的体积L与白及重量kg比为2～5：1。

7.权利要求1-3的人表皮生长因子水解产物的制备方法，其具体步骤包括：每10克重组人表皮生长因子加入5～10倍重量的水溶解，再加入5～20U的蛋白酶，水解时间10～20min，加热至80-90℃，保温10～30min后，5000rpm离心10～20min，取上清液，加入两至六倍体积的乙醚，静置后5000rpm离心10～20min，得沉淀干燥后即可。

8.权利要求1-3的白及凝胶的制备方法，其具体步骤包括：

(a)取精制白及多糖20～45份加入3～10倍重量的水，加入丙烯酸5～10份搅拌混合10～30min后，得混合物；

(b)再向混合物中加入10％过硫酸铵和TEMED，快速混合后室温下放置1～3小时，再加入一定量的水搅拌后5000～10000rpm离心，去上清液，重复一次，得沉淀Ⅵ；

(c)将沉淀Ⅵ放置在真空干燥机中室温进行缓慢干燥得干燥物，即为白及凝胶。

9.权利要求8的方法，步骤(b)中所述10％过硫酸铵的体积μL与混合物的体积mL比为20～50：100；TEMED的体积μL与混合物的体积mL比为10～50：100；所述加入水的量mL与混合物的体积mL比为20～50：10。

10.权利要求1-9的方法，所制备的产品直接应用于各种祛斑美白、抗炎保湿材料中，也可以添加到其它祛斑美白、抗炎保湿辅料中，还可直接用于化妆品中保水材料和除皱方面的应用。