CN110507712A - 一种外用治疗关节炎的白头翁提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种外用治疗关节炎的白头翁提取物及其制备方法，包括以下关键步骤：将干燥的白头翁药材粉碎过筛，按比例加入一定浓度乙醇溶液后，转移至加压提取器中，保温保压提取一定时间；待提取完全后，将提取液直接滴加到适量去离子水中，并快速搅拌，至有沉淀析出，分离沉淀，烘干即得白头翁提取物。本发明采用加压‑反溶剂法提取并纯化白头翁提取物，得到的白头翁提取物，皂苷类成分含量大于50％，提取物粒径在220nm左右，外用具有良好的透皮吸收性能，相比于传统提取方法制备的白头翁提取物具有透皮率高，抗炎镇痛作用强的特点。本发明为白头翁用于关节炎的治疗提供了一种新的安全性高的给药途径。
Description
技术领域：
本发明属于中药提取物制备领域，具体说涉及一种外用治疗关节炎的白头翁提取物及其制备方法。
背景技术：
关节炎是发生在关节及周围组织，由炎症、退化、创伤等诸多因素引起的炎性疾病的统称，发病机制不明确。临床表现为红肿、疼痛、关节功能障碍、关节畸形等，严重影响患者的生活质量。关节炎可发生在各年龄段人群中，其中50岁以上人群中发病率约为50％左右，而65岁以上人群中90％女性和80％男性患关节炎。有关资料显示，关节炎在我国的总发病率约为13％，截止2015年我国至少有1亿关节炎患者在遭受病痛的折磨，在美国，超过5200万人患有不同形式的关节炎，每年约有600亿美元花费在关节炎的治疗上。
关节炎发病原因不明，且有病程长，难治愈的特点。因此对于关节炎的治疗多以缓解症状为主，且需长期用药。目前治疗关节炎的主要药物是糖皮质激素类药物和解热镇痛抗炎药，而这两类药物长期使用副作用大、毒性高，致使病人用药依从性差，影响病情控制。因此安全性较高的中药受到越来越多的关注。
白头翁为传统中药，味苦，无毒；也有记载其味甘、苦，有小毒。临床报道可用于治疗症瘕积聚，逐血，愈金疮，祛风暖腰，疗血衄疝肿，并疗百节骨疼痛等症。其中的“祛风暖腰，疗百节骨疼痛”等作用与现代对关节炎治疗原理相同，说明白头翁这味药材可用于关节炎等类似疾病的治疗。但目前只是在民间有使用白头翁鲜品捣碎外敷于患处以缓解关节炎病症的经验报道，且同时有在用药局部产生红肿，有灼烧感和痛感，起水泡等不适症状产生。有研究认为白头翁素及原白头翁素是白头翁鲜品中治疗关节炎的主要成分，如“白头翁素在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用”的专利申请，但白头翁素及原白头翁素对皮肤、黏膜有强烈的刺激作用，是导致鲜品使用产生“红肿、烧灼感、起水泡”等毒副作用的主要原因，因此白头翁鲜品不适合于关节炎的治疗。人们研究了白头翁药材中的另一种主要成分—皂苷治疗关节炎的作用。如文献“白头翁皂抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡”和“白头翁皂苷对佐剂性关节炎大鼠FZD8表达的影响”，从药理学角度证实了其抗关节炎作用。但这些研究采用口服的方式给药，尚未见以白头翁皂苷提取物为活性成分外用治疗关节炎的研究。总所周知，关节炎的治疗需要长期大剂量用药来缓解症状，而长期大量服用药物，即使是中药，对胃肠道也会产生不良刺激，因此治疗关节炎，采用外敷给药方式具有药物直达患处，不刺激胃肠道，可长期用药等优势，但对于大多数药物成分来说，皮肤是一道难以跨越的屏障，药效成分很难在炎症部位达到治疗浓度，因此外用制剂治疗关节炎需要解决的首要问题是增加药物的透皮吸收率。
发明内容：
为了克服现有临床上治疗关节炎存在的不足，本发明的目的在于提供一种白头翁提取物，具体说是一种能缓解关节炎症状，具抗炎消肿止痛作用的外用治疗关节炎的白头翁提取物及其制备方法。所制备的白头翁提取物具有以下特点：其一，对皮肤无刺激；其二，外用具有良好的透皮吸收性能，能增强其在炎症部位的治疗作用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
首先将干燥的白头翁药材粉碎过40目筛，按照1:10-30的比例加入20-60％乙醇溶液浸泡30min；
然后转移至加压提取器中，加压至0.2-0.5MPa，温度控制在80-130℃，保温保压，提取20-60min；
待提取完全后，将提取液通过取样管直接滴加到适量去离子水中，并快速搅拌。其中，去离子水作为反溶剂，温度为0-40℃，提取液与去离子水比例为1:3-7，搅拌速度为100-1000r/min。
搅拌至有沉淀析出，停止搅拌，得到的悬浊液静置，然后分离沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，烘干呈干粉状，即得白头翁提取物。
与已有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明提供了一种可外用治疗关节炎的白头翁提取物，改变了白头翁提取物常规给药方式，为白头翁用于关节炎的治疗提供了一种新的安全性高的给药途径。本发明提取纯化操作一步完成，操作工艺简单，不使用有机溶剂，生产成本低，并且对环境无污染；提取物中有效成分纯度高，皂苷类成分含量大于50％，不含白头翁素和原白头翁素，对皮肤无刺激；提取物平均粒径在220nm左右，易于透皮吸收直达炎症病灶部位。
一、白头翁提取物粒径考察
采用ZS90马尔文激光粒度仪测定样品粒径。
白头翁提取物以干粉状态存在，在最优条件下制备得到的白头翁提取物平均粒径为218.6nm。
二、白头翁提取物透皮性能考察
采用Franz透皮扩散装置，进行白头翁提取物体外透皮吸收实验。固定下部装置，取脱毛后去掉皮下脂肪和粘结组织的大鼠腹皮，表皮一侧面向上，剪去多余皮肤，将提取物加适量去离子水搅拌成糊状，紧密覆盖于大鼠表皮上，盖上上部装置。恒温水浴箱设置为37℃，电磁搅拌器恒速(300r/min)搅拌，分别于1，2，4，6，8，10，12，24h时取样，每次用针管抽取接受液5mL，并立即补充37℃生理盐水5mL。抽取的接受液经显色处理在470nm处测定吸光度值。
实验结果显示，采用专利方法制备的白头翁提取物的累积透过量在初始阶段显著高于采用传统方法提取的白头翁提取物的透过量，到12小时后专利方法制备的白头翁提取物累积释放量为传统方法的2.6倍，24小时后仍达到2.1倍。较高的累积释放量意味着药物可在炎症部位快速达到有效治疗浓度。
三、白头翁提取物对皮肤刺激性实验
将20只清洁级SD健康大鼠分为2组，分别为完整皮肤组和破损皮肤组。将白头翁提取物加入适量生理盐水调成糊状粘附在完整皮肤组和破损皮肤组大鼠背部左侧，相应的大鼠背部右侧涂抹生理盐水作为空白，通过自身两侧皮肤进行对照。每日给药1次，连续给药7d，去除残留药物后24、48和72h观察并记录背部皮肤情况。
结果显示经多次皮肤刺激性，在24、48和72h内白头翁提取物对大鼠正常完整皮肤和破损皮肤均没有刺激性。破损皮肤组显示给药4d已全部结痂，并有部分结痂开始脱落，给药6d，大部分结痂已脱落，去除药物后72h已基本全部恢复；完整皮肤组大鼠背部皮肤没有出现红斑、水肿等皮肤反应。该实验表明白头翁提取物对大鼠正常完整皮肤和破损皮肤均没有刺激性。
四、白头翁提取物外用治疗关节炎的药效评价
1.对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用
将40只清洁级SD健康大鼠分为4组，分别为模型对照组、阳性对照组(扶他林软膏)、给药组-1(专利方法制备的提取物)、给药组-2(传统方法制备的提取物)。各组大鼠右后足垫皮内注射0.1mL CFA(完全弗氏佐剂)进行造模，造模后第4d开始给药，将生理盐水加适量淀粉调成糊状涂抹于模型对照组大鼠的造模部位，阳性对照组直接涂抹扶他林软膏，白头翁提取物加生理盐水调成糊状涂抹于给药组造模部位，各组给药后用保鲜膜包裹给药部位，避免药物脱落。1次/d，连续至39d。每天测定关节厚度。按下式计算足肿胀抑制率(％)：
足肿胀抑制率(％)＝(模型对照组足掌厚度－给药组足掌厚度)/模型对照组足掌厚度×100％
表1.白头翁提取物对佐剂性关节炎大鼠足肿胀抑制率的影响(n＝10)
关节肿胀抑制率结果如表1。采用不同方法制备得到的白头翁提取物都表现出抑制佐剂型关节炎大鼠足肿胀作用，说明二者均有较好的抗关节炎作用。并且从d9开始，给药组1对大鼠足肿胀抑制率高于给药组2，从d14开始，二者对大鼠足肿胀抑制率表现出具有统计学意义的差异性，这说明采用本专利方法制备的白头翁提取物具有更好的抗关节炎作用。
2.白头翁提取物镇痛作用考察
采用热板法测定白头翁提取物对小鼠的镇痛作用。照常规方法测定各小鼠的痛阈值，选取合格的雌性小鼠40只，随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组(扶他林组)、给药组-1(专利方法制备的白头翁提取物)、给药组-2(传统方法制备的白头翁提取物)。实验前24h，用脱毛膏给各组小鼠腹部脱毛。阳性对照组涂抹扶他林软膏；将不同方法制备的白头翁提取物加适量粘合剂用生理盐水调制成稀糊状，分别涂抹于给药组小鼠腹部脱毛区和四足掌，并用吹风机吹干，每只小鼠药量约0.1g；空白对照组涂抹同法制备的淀粉糊，并用吹风机吹干。在给药30，45，60，90，120min分别测定小鼠痛阈值，如超过60s小鼠仍无反应，痛阈以60s计算。并求出痛阈提高百分率，痛阈提高百分率为负值按0计算。
按下式计算痛阈提高率(％)：痛阈提高百分率(％)＝(给药后各时间点痛阈值－给药前痛阈值)/给药前痛阈值×100％
表2白头翁提取物对热板法致小鼠疼痛的影响(n＝10)
注：与空白对照组比较，bP<0.01。
热板法镇痛试验结果见表2，不同方法制备的白头翁提取物在给药后0.5、1、2和4h均能非常显著提高小鼠的痛阈值(bP<0.01)，特别是给药组1几乎与阳性对照组具有同样的提高小鼠痛阈值作用，并且对疼痛的抑制作用可持续4h以上。
五、白头翁提取物中皂苷类成分含量
采用分光光度法测定提取物中皂苷成分含量。取标准品或供试品适量，加溶剂溶解，移取适量于10mL离心管中，挥干溶剂。加入5％的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，再加入0.8mL的高氯酸，在60℃水浴中加热15min，取出并迅速用冷流水冷却，加入5mL冰醋酸，摇匀，在470nm处测定吸光度。根据标准曲线A＝14.08702C+0.06486(R2＝0.9993)计算提取物中皂苷含量。
表3五批样品中皂苷类成分含量
最优条件下制备的5批白头翁提取物中皂苷类成分含量最低为52.48％，平均值为53.56％，其含量均大于50％。
附图说明：
图1白头翁提取物干粉平均粒径。
图2白头翁提取物体外累积透皮吸收量。
具体实施方式：
下面结合实施例，进一步详细的描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。任何符合本权利要求书或说明书描述，符合与本文所公开的原理和新颖性、创造性特点的方法、工艺、产品，均落入本发明的保护范围之内。
实施例1：
首先将干燥的白头翁药材粉碎过40目筛，按照1:10的比例加入50％乙醇溶液浸泡30min；
然后转移至加压提取器中，用空气压缩机加压至0.5MPa，温度控制在110℃，保温保压，提取40min；
待提取完全后，将提取液通过取样管取出，直接滴加入到适量去离子水中，并快速搅拌。其中，去离子水作为反溶剂，温度为20℃，提取液与去离子水比例为1:3，搅拌速度为900r/min。
搅拌至有沉淀析出，停止搅拌，得到悬浊液，静置，然后分离沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，烘干呈干粉状，即得白头翁提取物。
实施例2：
首先将干燥的白头翁药材粉碎过40目筛，按照1:30的比例加入20％乙醇溶液浸泡30min；
然后转移至加压提取器中，用空气压缩机加压至0.4MPa，温度控制在100℃，保温保压，提取50min；
待提取完全后，将提取液通过取样管取出，直接滴加入到适量去离子水中，并快速搅拌。其中，去离子水作为反溶剂，温度为30℃，提取液与去离子水比例为1:7，搅拌速度为900r/min。
搅拌至有沉淀析出，停止搅拌，得到悬浊液，静置，然后分离沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，烘干呈干粉状，即得白头翁提取物。
实施例3
首先将干燥的白头翁药材粉碎过40目筛，按照1:20的比例加入40％乙醇溶液浸泡30min；
然后转移至加压提取器中，用空气压缩机加压至0.4MPa，温度控制在120℃，保温保压，提取30min；
待提取完全后，将提取液通过取样管取出，直接滴加入到适量去离子水中，并快速搅拌。其中，去离子水作为反溶剂，温度为10℃，提取液与去离子水比例为1:3，搅拌速度为1000r/min。
搅拌至有沉淀析出，停止搅拌，得到悬浊液，静置，然后分离沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，烘干呈干粉状，即得白头翁提取物。
实施例4
首先将干燥的白头翁药材粉碎过40目筛，按照1:30的比例加入60％乙醇溶液浸泡30min；
然后转移至加压提取器中，用空气压缩机加压至0.5MPa，温度控制在110℃，保温保压，提取20min；
待提取完全后，将提取液通过取样管取出，直接滴加入到适量去离子水中，并快速搅拌。其中，去离子水作为反溶剂，温度为0℃，提取液与去离子水比例为1:5，搅拌速度为500r/min。
搅拌至有沉淀析出，停止搅拌，得到悬浊液，静置，然后分离沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，烘干呈干粉状，即得白头翁提取物。
实施例5
首先将干燥的白头翁药材粉碎过40目筛，按照1:20的比例加入40％乙醇溶液浸泡30min；
然后转移至加压提取器中，用空气压缩机加压至0.4MPa，温度控制在90℃，保温保压，提取50min；
待提取完全后，将提取液通过取样管取出，直接滴加入到适量去离子水中，并快速搅拌。其中，去离子水作为反溶剂，温度为10℃，提取液与去离子水比例为1:3，搅拌速度为900r/min。
搅拌至有沉淀析出，停止搅拌，得到悬浊液，静置，然后分离沉淀，用去离子水洗涤沉淀三次，烘干呈干粉状，即得白头翁提取物。
Claims (7)
1.一种外用治疗关节炎的白头翁提取物，其特征在于，皂苷类成分含量大于50％，提取物平均粒径在220nm左右。
2.如权利要求1所述一种外用治疗关节炎的白头翁提取物，其制备方法关键在于以下工艺步骤：将干燥的白头翁药材粉碎过筛，按比例加入一定浓度乙醇溶液后，转移至加压提取器中，保温保压提取一定时间。待提取完全后，将提取液加入到适量去离子水中，并快速搅拌，至有沉淀析出，停止搅拌，分离沉淀，烘干即得白头翁提取物。
3.如权利要求2所述一种外用治疗关节炎的白头翁提取物的制备方法，其特征在于，药材与提取液的质量比为1:10–30，所述一定浓度乙醇的浓度范围在20-60％。
4.如权利要求2所述一种外用治疗关节炎的白头翁提取物的制备方法，其特征在于，提取压力0.2-0.5MPa，提取温度控制在80-130℃，提取时间20-60min。
5.如权利要求2所述一种外用治疗关节炎的白头翁提取物的制备方法，其特征在于，提取液通过取样管取出，直接滴加到适量去离子水中，并快速搅拌。
6.如权利要求5所述一种外用治疗关节炎的白头翁提取物的制备方法，其特征在于，去离子水作为反溶剂，温度为0-40℃，提取液与去离子水比例为1:3-7。
7.如权利要求5所述一种外用治疗关节炎的白头翁提取物的制备方法，其特征在于，快速搅拌的搅拌速度为100-1000r/min。
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|---|---|---|---|---|
| CN114931597A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-23 | 扬州市食品药品检验检测中心 | 基于抗炎活性的一种白头翁提取物的制备方法 |
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| CN101766572A (zh) * | 2010-02-04 | 2010-07-07 | 东北林业大学 | 一种水溶性甘草酸粉体的常压反溶剂制备方法 |
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