CN105434450A

CN105434450A - 蜚蠊糖苷及其药物组合物和其在制药和保健品中的应用

Info

Publication number: CN105434450A
Application number: CN201410660733.8A
Authority: CN
Inventors: 程永现; 耿福能; 杨勇勋; 罗奇; 马秀英
Original assignee: SICHUAN GOOD DOCTOR PANXI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SICHUAN GOOD DOCTOR PANXI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-11-19
Filing date: 2014-11-19
Publication date: 2016-03-30
Anticipated expiration: 2034-11-19

Abstract

化合物蜚蠊糖苷A-C及其药物组合物,以及它们在制备治疗溃疡和烧烫伤药物或保健品中的应用。溃疡和烧烫伤较为普遍，美洲大蠊临床用于各种溃疡和烧烫伤有良效。从中分离鉴定三个二氢异香豆素糖苷，命名为蜚蠊糖苷A、B和C，它们均可促进人真皮成纤维细胞胶原分泌，提示其对胶原分泌缺乏性疾病如各种溃疡和烧烫伤的治疗作用。

Description

蜚蠊糖苷及其药物组合物和其在制药和保健品中的应用

技术领域：

本发明属于药物技术和保健品领域，具体涉及化合物蜚蠊糖苷A-C及其药物组合物,以及它们在制备治疗溃疡和烧烫伤药物或保健品中的应用。

背景技术：

溃疡是皮肤或黏膜表面组织的缺损、溃烂，其表面常覆盖有脓液、坏死组织或痂皮，愈后遗有瘢痕。溃疡成因较多，可由感染、外伤、结节或肿瘤的破溃等所致，常合并慢性感染，可能经久不愈，如胃溃疡、十二指肠溃疡、口腔溃疡、糖尿病足病等。皮肤创伤如烧烫伤属于生活中常见的意外伤害。已有研究表明，溃疡和烧烫伤难愈是和局部组织胶原减少或分泌不足相关，因此刺激胶原生成将有助于溃疡和烧伤愈合(Yao,D.G.；Zhang,X.F.Chin.J.Aesthetic Med.2014,23,507-511；Zhang,L.B.；Li,J.N.；Sun,Y.Chin.J.Experiment.Surg.2011,28,1445-1447.)。但遗憾的是部分溃疡如胃溃疡、口腔溃疡、糖尿病足病等疾病尚缺乏特效的药物。

美洲大蠊(Periplaneta americana)又叫蟑螂，在我国白族、彝族是一味治疗烧烫伤较好的虫类药，以美洲大蠊开发的“康复新液”在临床上治疗各种溃疡和皮肤创伤效果显著，但其中的药效成分一直不明确。现有技术中未见有本发明涉及的化合物及其它们促进胶原产生作用的相关报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供具有促进成人真皮成纤维细胞胶原产生作用的化合物蜚蠊糖苷A–C，该类化合物在制备治疗各种溃疡和/或烧烫伤药物或保健品中的应用，以及以其为有效成分的治疗各种溃疡或烧烫伤的药物组合物，它们的制备方法。

本发明的上述目的是由下述的技术方案加以实现的：

下述结构式所示的蜚蠊糖苷A-C，

本发明同时提供制备所述的蜚蠊糖苷A-C的方法，取美洲大蠊，粉碎，用95％乙醇室温浸泡提取，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次，合并萃取液，分别减压浓缩得相应萃取物，经硅胶柱层析，100:0，99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6，93:7，92:8，90:10，85:15，80:20，60:30的氯仿-甲醇系统梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份500mL收集得7个合并组份；组份6经Sephadex LH-20(MeOH)柱层析得30个亚组份，其中第21个亚组份经Sephadex LH-20(MeOH/CHCl₃,3:2)柱层析得4个亚组份Fr21A-Fr21D；组份Fr21C经RP-18柱层析(MeOH/H₂O(30％–70％)得亚组份Fr21C1-Fr21C4，其中Fr21C1经半制备HPLC(25％50％MeOH，30min)获得三个峰，分别为化合物蜚蠊糖苷A、B和C。

治疗溃疡或烧伤的药物组合物，含有治疗有效量的所述的化合物蜚蠊糖苷A-C和药学上可接受的载体。

所述的化合物蜚蠊糖苷A-C在制备治疗溃疡或烧伤的药物中的应用。

所述的化合物蜚蠊糖苷A-C在制备治疗溃疡或烧伤的保健品中的应用。

所述的药物组合物在制备治疗溃疡或烧伤的药物中的应用。

所述的药物组合物在制备治疗溃疡或烧伤的保健食品中的应用。

本发明化合物可以单独直接应用或组合应用，也可以与其它药物包括植物提取物组成复方的形式使用，可以使用不同的药用辅料，制成多种固体制剂和液体制剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注射两种形式给药。使用量可根据给药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。根据本发明的启示对本发明进行的简单改进都应属于本发明的范围。

实施例1：

化合物蜚蠊糖苷A-C的分离纯化：美洲大蠊(Periplanetaamericana)20kg，粉碎，用95％乙醇室温浸泡提取(2次×100L×1周)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次，合并萃取液，分别减压浓缩得相应萃取物。乙酸乙酯萃取物(320g)经硅胶柱层析(硅胶200-300目,3kg)，氯仿-甲醇系统梯度洗脱(100:0，99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6，93:7，92:8，90:10，85:15，80:20，60:30)，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份500mL收集)得7个合并组份。组份6(20.2g)经Sephadex LH-20(MeOH)柱层析得30个亚组份，其中第21个亚组份(2.2g)经Sephadex LH-20(MeOH/CHCl₃,3:2)柱层析得4个亚组份Fr21A-Fr21D。组份Fr21C600mg)经RP-18柱层析(MeOH/H₂O(30％–70％)得亚组份Fr21C1-Fr21C4，其中Fr21C1(210mg)经半制备HPLC(25％50％MeOH，30min)获得三个峰，分别为化合物1(4.3mg),2(3.9mg)和3(2.0mg)。

化合物蜚蠊糖苷A-C的结构确证：

化合物蜚蠊糖苷A-C的结构式如下所示：

化合物蜚蠊糖苷A(1)、B(2)、C(3)的结构鉴定数据为：

表1.化合物1-3核磁数据

Periplanoside A(1):Colorless needle(MeOH/H₂O,1:1)；[α]^23.5-93.5(c 0.17,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)309(3.51),267(4.06),219(3.32),195(3.97)nm；¹H(CD₃OD,600MHz)and ¹³C NMR(CD₃OD,150MHz)data,see Table 1；ESIMS m/z 369[M-H]^-；HREIMS m/z 370.1267[M]⁺(calcd for C₁₇H₂₂O₉,370.1264).

Periplanoside B(2):Light brown gum；[α]^23.4-71.2(c 0.13,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)307(3.50),265(3.92),219(4.29)nm；¹H(CD₃OD,600MHz)and ¹³C NMR(CD₃OD,150MHz)data,see Table 1；ESIMS m/z 399[M-H]^-,HREIMS:m/z 400.1372[M]⁺(calcd forC₁₈H₂₄O₁₀,400.1369).

Periplanoside C(3):White powder；[α]^23.5-96.9(c 0.34,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)306(3.47),264(3.85),219(4.21)nm；¹H(CD₃OD,600MHz)and ¹³C NMR(CD₃OD,150MHz)data,see Table 1；ESIMS m/z 399[M-H]^-；HREIMS m/z 400.1376[M]⁺(calcd forC₁₈H₂₄O₁₀,400.1369).

实施例2化合物A(1)、B(2)、C(3)中的任一种，按常规方法将配制0.5％卡波姆940溶液、5％羧甲基纤维丝钠溶液和0.2％聚丙烯酸钠溶液，使其充分溶胀制成胶液；称取聚乙烯醇适量，加少量水，加热至70℃使溶解；将胶液、甘油加入其中，在50℃搅拌30分钟左右即得。

粉碎、过筛、混合、加温软化、加主药混合制成药膏，再加温软化涂布于背衬，加衬垫裁切即可制成巴布及剂。

实施例3：

实施例1化合物A(1)、B(2)、C(3)中的任一种，按常规方法配以熔封即得粉针剂。

实施例4：

实施例1化合物A(1)、B(2)、C(3)中的任一种，按常规方法配以各种药用辅料制成片剂：

使用实施例1中化合物中的任一种作为药物活性成分，使用几种赋形剂(包括填充剂、崩解剂和润滑剂。填充剂为甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉、糊精中的至少一种。崩解剂为羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的至少一种。润滑剂为滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶中的至少一种。)作为制备组合药物片剂的辅料成分，按照一定比例配比制成每片含有药物成分1-100mg的片剂。

实施例5：

实施例1化合物A(1)、B(2)、C(3)中的任一种按常规方法配以各种药用辅料制成胶囊剂：

含有实施例1中化合物中的任一种作为有效成分的药物组合胶囊制剂的制备：使用实施例1中化合物A(1)、B(2)、C(3)中的任一种作为药物活性成分，使用赋形剂(包括填充剂、崩解剂和润滑剂。填充剂为甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉、糊精中的至少一种。崩解剂为羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的至少一种。润滑剂为滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶中的至少一种。)作为制备组合药物胶囊剂的辅料成分，按照一定比例配比制成每粒胶囊中含有化合物成分1-100mg的胶囊剂。

实施例6：

取实施例1的方法制得的化合物蜚蠊糖苷A(1)、B(2)、C(3)中任一种1份，20份聚合度为300的醋酸乙烯酯树脂，2份邻苯二甲酸丁酯，3份巴西棕蜡和20份麦芽糖，在捏机中于50℃混合3分钟，再加入50份砂糖，1份薄荷，混炼均匀后在50℃恒温下，从挤出机中挤出口香糖，切割成规定厚度。

实施例7：

本发明化合物及其与药用辅料组成的药物组合物的治疗溃疡或烧烫伤的药理作用。

原理：胶原蛋白是动物体内最丰富的蛋白，机体一旦缺乏胶原蛋白，就会形成创面难愈合现象。因此筛选能够促进胶原蛋白分泌的天然产物对于创面修复具有意义。

细胞：成人真皮纤维原细胞(human dermal fibroblasts-adult,HDFa)来自玫琳凯公司。

试剂：DMEM(高糖)培养基、PBS、Hank平衡盐溶液(hank'sbalanced salt solution,HBSS)、青链霉素和胎牛血清(FBS)购自Hyclone公司；0.25％胰酶(含EDTA)购自Gibico公司；阳性对照转移生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)购自Peprotech公司；胶原蛋白ELISA试剂盒购自TaKaRa公司；MTS试剂购自Promega公司。

实验方法：12孔细胞培养板上，将HDFa细胞与30μM的待测药物溶液混合，设置不含药物的空白对照和TGF-β阳性对照。37℃，5％CO₂培养3天，收取细胞培养上清，存于-80℃；加入MTS，采用MTS比色法检测490nm的OD值；按胶原蛋白ELISA试剂盒中提供的方法检测胶原蛋白的分泌，上清以1:100倍稀释，酶标仪测定OD值，检测波长为450nm。计算得到胶原蛋白分泌增加率。

胶原蛋白分泌增加率(％)＝(实验孔OD_450nm/细胞存活率/空白孔OD_450nm-1)×100％

实验结果：

表2样品对HDFa胶原蛋白分泌的促进作用

从上表可以看出，化合物1-3在30μM浓度时均能促进胶原分泌，尤其以化合物2为最，同时本研究过程中未发现化合物1-3的细胞毒性。由于本发明涉及的胶原分泌促进作用与创面修复密切相关，因此本发明结果提示其涉及的化合物在溃疡和烧烫伤疾病中具有重要价值。

Claims

1.下述结构式所示的蜚蠊糖苷A-C，

2.制备权利要求1所述的蜚蠊糖苷A−C的方法，取美洲大蠊，粉碎，用95%乙醇室温浸泡提取，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次，合并萃取液，分别减压浓缩得相应萃取物，经硅胶柱层析，100:0，99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6，93:7，92:8，90:10，85:15，80:20，60:30的氯仿-甲醇系统梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份500 mL收集得7个合并组份；组份6经Sephadex LH-20（MeOH）柱层析得30个亚组份，其中第21个亚组份经Sephadex LH-20（MeOH/CHCl₃, 3:2）柱层析得4个亚组份Fr21A−Fr21D；组份Fr21C经RP-18柱层析（MeOH/H₂O (30%–70%)得亚组份Fr21C1−Fr21C4，其中Fr21C1经半制备HPLC (25%50% MeOH，30 min)获得三个峰，分别为化合物蜚蠊糖苷A、B和C。

3.治疗溃疡或烧伤的药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物蜚蠊糖苷A-C和药学上可接受的载体。

4.权利要求1所述的化合物蜚蠊糖苷A-C在制备治疗溃疡或烧伤的药物中的应用。

5.权利要求1所述的化合物蜚蠊糖苷A-C在制备治疗溃疡或烧伤的保健品中的应用。

6.权利要求3所述的药物组合物在制备治疗溃疡或烧伤的药物中的应用。

7.权利要求3所述的药物组合物在制备治疗溃疡或烧伤的保健食品中的应用。