CN108159218B - 一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物及其制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物及其制剂的制备方法,属于中药制药技术领域。将由半夏、陈皮、茯苓、甘草组成的二陈汤按中医古方剂量配比,加水煎煮、过滤,减压浓缩煎煮液,向煎煮浓缩液中加入乙醇,将乙醇沉淀物溶解后透析,将透析内液减压浓缩后真空干燥,得具有抗肿瘤活性的二陈提取物。通过本发明,该提取物得率高,其多糖含量高于75%,其抗肿瘤活性优于二陈汤水煎剂。将二陈提取物加入赋型剂后制成具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂,与二陈汤传统水煎剂相比,由二陈提取物加入赋型剂后制成的制剂其不但抗肿瘤效果好,而且服用方便,增加了患者的依从性,可广泛使用。该发明工艺简便易行,适合工业化大生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物及其制剂的制备方法,属中药制药技术领域。
背景技术
二陈汤源于宋代《大平惠民和剂局方》,由半夏、陈皮、茯苓、甘草四味中药组成,是中医祛湿化痰治法的经典名古方。方中半夏为君,善能燥湿化痰,且能降逆和胃、散结消痞;陈皮为臣,理气行滞,燥湿祛痰,使气顺痰消;佐以茯苓渗湿健脾,以杜生痰之源;以甘草为佐使药,调和药性而兼健脾润肺解毒和中。基于中医“百病皆为痰作祟”、“怪病皆由痰生”的病机理论,中医临床将二陈汤广泛用于治疗各种痰湿及疑难病证,包括恶性肿瘤。本课题组临床采用以二陈汤为主的中药复方防治恶性肿瘤及其转移,取得了显著疗效。实验研究也显示该方水煎剂对小鼠移植性肿瘤具有抑制作用。研究结果还表明,二陈汤中含有丰富的多糖。体内外实验结果皆显示,二陈多糖对恶性肿瘤的抑制作用优于相当剂量的二陈水煎剂。提示,二陈汤发挥抗肿瘤效应的有效部位可能是二陈多糖,或是以二陈多糖为主的组合物。
现有中药汤剂容积与服用量大、口感不佳、不便于携带,并没有以二陈多糖为主要成分的、具有抗肿瘤活性的二陈提取物及其制剂。本发明在前期研究的基础上,以多糖含量和抗肿瘤药理活性为验证指标,摸索、优化二陈提取物的制备工艺以及二陈提取物制剂的制备方法,为将中医名古方二陈汤开发为服用方便的抗肿瘤中药现代剂型奠定基础。该发明技术对继承和发展中医药理论以及指导临床相关合理应用具有重大意义。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有的缺陷,提供一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物及其制剂的制备方法。
本发明的目的是这样实现的,一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物的制备方法,其特征是,包括以下步骤:
(1)按30:30:18:9 质量比将半夏、陈皮、茯苓、甘草加入煎煮锅中,用85-90℃热水煎煮,煎煮2-3 次, 每次0.5-1h,半夏、陈皮、茯苓、甘草构成的料与热水的料液比为1:8-12(W/V),得到煎煮液;
(2)将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.15-1.30的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,直至乙醇在乙醇与浓缩液的混合溶液中的终浓度为60%-80%,然后将乙醇与浓缩液的混合溶液静置2-4h后倾去上清、离心,得到沉淀物;
(3)将沉淀物用蒸馏水溶解、过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.10-1.15(具体为,将水溶液减压浓缩至比重为1.10-1.15),然后将水溶液置于截留分子量为6000-8000的透析袋中,常规透析12-24h,将透析内水溶液减压浓缩后真空干燥,得到具有抗肿瘤活性的二陈提取物。
一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂的制备方法,其特征是,包括以下步骤:
(1)按30:30:18:9 质量比将半夏、陈皮、茯苓、甘草加入煎煮锅中,用85-90℃热水煎煮,煎煮2-3 次, 每次0.5-1h,半夏、陈皮、茯苓、甘草构成的料与热水的料液比为1:8-12(W/V),得到煎煮液;
(2)将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.15-1.30的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,直至乙醇在乙醇与浓缩液的混合溶液中的终浓度为60%-80%,然后将乙醇与浓缩液的混合溶液静置2-4h后倾去上清、离心,得到沉淀物;
(3)将沉淀物用蒸馏水溶解、过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.10-1.15(具体为,将水溶液减压浓缩至比重为1.10-1.15),然后将水溶液置于截留分子量为6000-8000的透析袋中,常规透析12-24h,将透析内水溶液减压浓缩后真空干燥,得到具有抗肿瘤活性的二陈提取物;
(4)将具有抗肿瘤活性的二陈提取物粉碎后加入赋型剂拌匀,得到二陈提取物、赋型剂组成的混合物,然后将混合物装入空心胶囊,得到具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂。
所述步骤(4)中,二陈提取物粉碎后按1:1-2加入赋型剂拌匀。
本发明技术具有科学性、实用性和可行性,具有抗肿瘤活性的二陈提取物的制备方法,包括的步骤为:(1)将半夏、陈皮、茯苓、甘草按30:30:18:9质量比混合后于85-90℃热水煎煮,每次0.5-1h,h表示是小时,共煎煮2-3 次,料液比为1:8-12(W/V);(2)将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.15-1.30;向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,乙醇终浓度为60%-80%,静置2-4h后倾去上清,离心,得沉淀物;(3)将沉淀物用蒸馏水溶解,过滤,弃去不溶物,调整水溶液的比重为1.10-1.15,置于截留分子量为6000-8000的透析袋中,常规透析12-24h,将透析内液减压浓缩后真空干燥,得具有抗肿瘤活性的二陈提取物。在具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂的制备方法上,将二陈提取物粉碎后按1:1-2加入赋型剂,拌匀后装入空心胶囊,制成具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂。
通过本发明,涉及的由半夏、陈皮、茯苓、甘草组成的二陈汤各味中药用量配比按中医古方剂量,煎煮水温设置为85-90℃,使该提取物得率高且多糖含量高于75%。将该乙醇沉淀物的水溶液进行透析,去除了单糖和其他小分子杂质,使其不但多糖含量高且抗肿瘤活性优于二陈汤水煎剂。与二陈汤传统水煎剂相比,由二陈提取物加入赋型剂后制成的制剂其不但抗肿瘤效果好,而且服用方便,增加了患者的依从性,可广泛使用。该发明工艺简便易行,适合工业化大生产。
实验结果:
1.提取物的得率
二陈提取物的得率高于12.5%,其干粉色淡,无味。
2.多糖含量测定
采用苯酚硫酸法测定多糖含量。该方法为本课题组的常用方法,具体如下:精密称取无水葡萄糖标准品适量,用蒸馏水配成1mg/ml 的葡萄糖标准液,再进一步稀释为不同浓度。精密量取浓度为30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml、150μg/ml、180μg/ml 的葡萄糖标准溶液0.5ml 于6 支10ml 具塞试管中,加入50mg/ml 的重蒸酚溶液1ml,混合均匀后,加入5ml 浓硫酸,混合均匀,沸水浴15min,冷水浴30min。用紫外分光光度计于490nm 处测定吸光度,对葡萄糖溶液浓度和吸光度进行线性回归,建立回归方程。取二陈提取物干粉制成水溶液供试品,取该供试品溶液0.5ml,按上述操作方法测吸光度值,代入回归方程计算出多糖含量。结果显示,二陈提取物的多糖含量为75%-78%。
3.抗肿瘤活性测定
取ICR小鼠,建立肉瘤180(S180)移植瘤模型,除正常对照组外,每只小鼠于右腋窝皮下常规接种适量肿瘤细胞悬液,24h后,随机分为荷瘤对照组、阳性对照组及二陈汤水煎剂和二陈提取物高、中、低剂量组。每组小鼠10只。正常对照组和荷瘤对照组灌胃生理盐水;阳性对照组以0.025g/kg剂量灌胃5-氟尿嘧啶(5-Fu);二陈汤水煎剂(按传统方法制备)高、中、低剂量组分别按12、8及4g/kg灌胃给药,二陈提取物的剂量基于得率按相当于生药的剂量灌胃给药,高、中、低剂量组分别按1.5、1及0.5g/kg,皆每天1次。连续给药10天后剥离瘤块,称取瘤质量,按以下公式计算肿瘤抑制率:
抑制率=(对照组瘤质量-实验组瘤质量)/对照组瘤质量×100%
实验结果显示,二陈汤水煎剂高、中、低剂量组和二陈提取物高、中、低剂量组以及5-Fu组的肿瘤抑制率分别为25.89%、18.31%、12.05%、31.36%、23.27%、16.62%、40.06%。可以看出,在本课题组同一实验条件下,二陈提取物高、中、低剂量组的肿瘤抑制率皆高于相应的等剂量二陈汤组。
对市场实施可能性和经济效益预测分析:
本发明针对中药汤剂容积与服用量大、口感不佳、不便于携带和长期服用等缺点,提供一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物及其制剂的制备方法,该制剂抗肿瘤效果好,制备工艺简便经济,同时增加患者用药的依从性,在病情需要的前提下,长期服用二陈多糖提取物制剂具有了可能性,必将带来巨大的经济效益和社会效益。
具体实施方式
以下对本发明作进一步的说明。
实施例1
将半夏30 kg、陈皮30kg、茯苓18 kg和甘草9 kg混合后加入煎煮锅内,按为1∶8(W/ V) 料液比加水煎煮,温度为85℃,每次1h,共煎煮2 次。将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.15的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,乙醇终浓度为60%,静置4h后倾去上清、离心,得沉淀物。将沉淀物用蒸馏水溶解、过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.10,然后将水溶液置于截留分子量为8000的透析袋中常规透析12h,将透析内液(水溶液)减压浓缩后真空干燥,得具有抗肿瘤活性的二陈提取物。将二陈提取物粉碎后按1:1加入赋型剂,拌匀后装入空心胶囊,制成具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂。
实施例2
将半夏15 kg、陈皮15kg、茯苓9 kg和甘草4.5 kg混合后加入煎煮锅内,按为1∶10(W / V) 料液比加水煎煮,温度为88℃,每次0.5h,共煎煮3 次。将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.20的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,乙醇终浓度为70%,静置3h后倾去上清,离心,得沉淀物。将沉淀物用蒸馏水溶解,过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.12,然后将水溶液置于截留分子量为7000的透析袋中常规透析18h,将透析内液(水溶液)减压浓缩后真空干燥,得具有抗肿瘤活性的二陈提取物。将二陈提取物粉碎后按1:1.5加入赋型剂,拌匀后装入空心胶囊,制成具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂。
实施例3
将半夏7.5 kg、陈皮7.5kg、茯苓4.5 kg和甘草2.25 kg混合后加入煎煮锅内,按为1∶12(W / V) 料液比加水煎煮,温度为90℃,每次1h,共煎煮2次。将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.30的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,乙醇终浓度为80%,静置2h后倾去上清,离心,得沉淀物。将沉淀物用蒸馏水溶解,过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.15,然后将水溶液置于截留分子量为6000的透析袋中常规透析24h,将透析内液(水溶液)减压浓缩后真空干燥,得具有抗肿瘤活性的二陈提取物。将二陈提取物粉碎后按1:2加入赋型剂,拌匀后装入空心胶囊,制成具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂。
Claims (3)
1.一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物的制备方法,其特征是,包括以下步骤:
(1)按30:30:18:9 质量比将半夏、陈皮、茯苓、甘草加入煎煮锅中,用85-90℃热水煎煮,煎煮2-3 次, 每次0.5-1h,半夏、陈皮、茯苓、甘草构成的料与热水的料液比为1:8-12(W/V),得到煎煮液;
(2)将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.15-1.30的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,直至乙醇在乙醇与浓缩液的混合溶液中的终浓度为60%-80%,然后将乙醇与浓缩液的混合溶液静置2-4h后倾去上清、离心,得到沉淀物;
(3)将沉淀物用蒸馏水溶解、过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.10-1.15,然后将水溶液置于截留分子量为6000-8000的透析袋中,常规透析12-24h,将透析内水溶液减压浓缩后真空干燥,得到具有抗肿瘤活性的二陈提取物。
2.一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂的制备方法,其特征是,包括以下步骤:
(1)按30:30:18:9 质量比将半夏、陈皮、茯苓、甘草加入煎煮锅中,用85-90℃热水煎煮,煎煮2-3 次, 每次0.5-1h,半夏、陈皮、茯苓、甘草构成的料与热水的料液比为1:8-12(W/V),得到煎煮液;
(2)将煎煮液过滤后减压浓缩至比重为1.15-1.30的浓缩液,向浓缩液中缓慢加入乙醇并快速搅拌,直至乙醇在乙醇与浓缩液的混合溶液中的终浓度为60%-80%,然后将乙醇与浓缩液的混合溶液静置2-4h后倾去上清、离心,得到沉淀物;
(3)将沉淀物用蒸馏水溶解、过滤,弃去不溶物,得到沉淀物用蒸馏水溶解后的水溶液,调整水溶液的比重为1.10-1.15,然后将水溶液置于截留分子量为6000-8000的透析袋中,常规透析12-24h,将透析内水溶液减压浓缩后真空干燥,得到具有抗肿瘤活性的二陈提取物;
(4)将具有抗肿瘤活性的二陈提取物粉碎后加入赋型剂拌匀,得到二陈提取物、赋型剂组成的混合物,然后将混合物装入空心胶囊,得到具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂。
3.根据权利要求2所述的一种具有抗肿瘤活性的二陈提取物制剂的制备方法,其特征是,所述步骤(4)中,二陈提取物粉碎后按1:1-2加入赋型剂拌匀。
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