CN105384787B - 一种从柑橘小果、皮中提取橙皮苷和新橙皮苷的方法 - Google Patents
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Abstract
一种从柑橘小果、皮中提取橙皮苷和新橙皮苷的方法，柑橘皮和枳实小果经干燥、粉碎，按2:1的比例混合、渗漉提取。药渣用碱液提取，酸调提取液、沉淀、洗涤，用70%乙醇溶解，重结晶后得到橙皮苷产品。取渗漉液过强酸性苯乙烯型阳离子柱层析、水洗、进大孔树脂；水洗、30%低碳醇洗涤、70%低碳醇洗涤，取洗脱液浓缩，用5.0%（NH4）2SO4/NaCl助析，得粗晶，再重结晶，得到新橙皮苷产品。产品中橙皮苷含量可达98.0%，收率达4.0%以上；新橙皮苷含量可达88.0%，收率达2.2%以上。所述结晶和重结晶，温度要控制在5‑10℃以下。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取领域，尤其是一种从柑橘小果、皮中提取黄酮的方法。
背景技术
柑橘是芸香科柑橘属重要的植物，主要是利用其果肉而很少对小果和果皮进行综合利用。橙皮苷（Hesperidin）是柑橘果皮中的天然黄酮类化合物，采用碱浸酸析法从脐橙中提取出的橙皮苷纯度为80.3%，得率为1.55%。新橙皮苷（Neohesperidin）是由橙皮素与新橙皮糖形成的糖苷，目前提取新橙皮苷的方法包括超声辅助提取法、索氏提取法、和水浴回流提取法。辛弗林（Synephrine）是枳实生物碱类物质的主要成分，辛弗林的含量随着柑橘果实的成熟而减少，因此一般选取未成熟的果实即落果来作为提取原料；辛弗林的提取方法有加热回流法、超声提取法和微波提取法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种高效从枳实小果和柑橘皮混合物中同时提取分离橙皮苷、新橙皮苷的方法，将柑橘皮和枳实小果干燥、粉碎，按2:1比例混合后，用水渗漉提取；然后取药渣进行橙皮苷提取，橙皮苷含量可达98%以上，收率为4.0%以上；取渗漉液进行新橙皮苷提取，得到新橙皮苷提取物含量达88%以上，收率为2.2%以上。为了解决该技术问题，本专利具体实施步骤如下：
一、柑橘皮、苦橙枳实小果前处理
收集柑橘皮、干燥、粉碎，过筛，备用；收集枳实小果干燥、粉碎，过筛，备用。将柑橘皮粉和枳实小果粉按质量比2:1比例混合，置于提取罐中，按料液比1：（10-30）的比例，用0-30%的乙醇水溶液进行渗漉提取，控制温度40-45℃，渗漉提取10-12h；过滤；然后往滤液中添加0.01-0.1%的果胶酶，50℃下搅拌30min，然后将温度调到70℃，处理15-30min，将果胶酶杀灭；然后过滤，将药渣和滤液分离；药渣用于橙皮苷提取，滤液用于新橙皮苷提取。
所述过筛的筛网为10目、或者60目、或者100目；
所述渗漉提取可以进行3次。
二、橙皮苷提取、分离、纯化
将上述药渣用pH值为10.0-11.0碱液浸泡，进行提取；所得提取液用HCl调至pH值为2.0-3.0，放置，沉淀；将沉淀用水洗涤至中性，以料液比1:(50-60)g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0-11.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0-5.0，在15℃以下静置12h重结晶；重结晶后的晶体即为橙皮苷产品。该产品中橙皮苷含量可达98.0%，橙皮苷收率为4.0%以上。
所述碱液为NaOH或者Ca（OH）2。
所述结晶和重结晶，温度要控制在5-10℃，以确保橙皮苷收率和纯度。
三、新橙皮苷提取、分离、纯化
取步骤一所述的滤液过强酸性苯乙烯型阳离子柱，收集离子柱流出液，然后用水洗。将离子柱流出液和水洗液混合，进大孔吸附树脂，经水洗后，先用30%低碳醇洗涤，再用70%低碳醇洗脱，将洗脱液浓缩，在5-10℃以下放置，用（NH4）2SO4/NaCl助析，得新橙皮苷粗品；将新橙皮苷粗品用水洗涤至中性，以料液比1:（50-60）g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0-11.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0，在5-10℃以下静置12h重结晶；析出类白色针状晶体；抽滤，烘干，得新橙皮苷；用HPLC检测，该产品中新橙皮苷含量可达88.0%以上，橙皮苷收率为2.2%以上。
所述强酸性苯乙烯型阳离子柱优选001×7阳离子柱；
所述大孔吸附树脂优选D101；
所述结晶和重结晶，温度要控制在5-10℃以下，以确保新橙皮苷收率和纯度。
所述的渗漉、提取、酶解、过滤、层析吸附、洗脱、结晶都为已知技术。
本发明具有下列优点和特性：
1、将枳实小果和柑橘皮按2:1比例混合进行渗漉提取，提取后的药渣中提取橙皮苷，滤液中提取新橙皮苷，实现了橙皮苷、新橙皮苷同步综合提取，枳实小果和柑橘皮资源得到综合利用。
2、组合技术新颖。
通过本技术方案，将枳实小果、柑橘皮粉碎物按质量比2:1比例混合，按料液比渗漉提取后，从药渣中提取橙皮苷，从滤液中提取新橙皮苷，得到橙皮苷含量可达98.0%以上，收率为4.0%以上；得到新橙皮苷提取物含量可达88%以上，新橙皮苷收率为2.2%以上。尤其是橙皮苷和新橙皮苷提取同步提取，是利用渗漉滤液，新橙皮苷采用先阳离子层析柱，再D101大孔树脂柱，然后采用30%低碳醇洗涤，再用70%低碳醇洗涤，取洗液浓缩，用（NH4）2SO4/NaCl助析，得粗晶；将粗晶用甲醇溶解，经重结晶得到产品。所有结晶和重结晶步骤都是在15℃以下进行。这些技术特征组合在一起，橙皮苷和新橙皮苷提取物在含量和收率2个指标上产生了意想不到的效果。这些结果是技术组合方案种各技术特点互相支持、共同作用才实现的，已知技术没有报道，也没有该组合技术方案的技术启示，不是简单的叠加，具有突出的实质性特点和显著的进步。
具体实施方式
以下所述实例详细地说明了本发明。
实施例1
前处理
将苦橙第三次生理落果的枳实小果作为提取原料，干燥，用高速多功能粉碎机粉碎，取粉碎物过10目的筛，备用。将苦橙皮干燥，粉碎，过10目筛，备用。准确称取枳实小果粉碎物25.0g和苦橙皮粉碎物25.0g置于烧杯中，加入500mL30%乙醇水溶液，放入水浴锅中44℃下浸泡水浴提取10h，过滤，得提取液。往提取液中加入0.5g果胶酶处理，50℃下搅拌30min，然后将水浴锅调至70℃，处理30min，将果胶酶充分灭活。待其冷却后在纱布辅助下，用双层滤纸抽滤，得滤液和滤渣，滤渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷。
橙皮苷提取
取上述滤渣100g，加2000ml的水，30℃下边搅拌边加入1.75gCa(OH)2，搅拌0.5h后过滤，取滤液加稀盐酸调体系pH为3.0，控制温度在在15℃以下静置12h；析出粗晶体；抽滤，烘干得橙皮苷粗品。以料液比1:60g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0，在30℃以下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0，在15℃以下静置12h重结晶；重结晶后，过滤、烘干，得橙皮苷晶体，橙皮苷的得率为6.06%，纯度为98.15%。
新橙皮苷提取
取前处理滤液过D101大孔吸附树脂柱，水洗，依次用30%乙醇和70%乙醇梯度洗脱。收集70%醇洗脱液，浓缩成浸膏。往浸膏中加5%质量分数的硫酸铵固体，边加热边搅拌，沸腾后停止加热，冷却；在15℃以下析晶12h，得新橙皮苷粗品。
将新橙皮苷粗品用水洗涤至中性，以料液比1:50g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为3.0，在15℃以下静置12h，进行重结晶，析出类白色针状晶体；抽滤，烘干，得新橙皮苷；经HPLC测得纯度为90.07%，新橙皮苷得率2.06%。
实施例2
前处理
将苦橙第三次生理落果的枳实小果作为提取原料，干燥，用高速多功能粉碎机粉碎，取粉碎物过100目的筛，备用；将苦橙皮干燥，粉碎，过100目筛，备用。准确称取枳实小果粉碎物50.0g和苦橙皮粉碎物50.0g置于烧杯中，加入1000mL50%乙醇水溶液，搅拌均匀后，放入水浴锅中40℃下浸泡水浴提取12h，过滤。往提取液中加入0.15g果胶酶处理，50℃下搅拌30min，然后将水浴锅调至70℃，处理20min。待其冷却后线用纱布粗滤，再用双层滤纸抽滤，得滤液和滤渣。将滤渣在重复提取2次，合并滤液；滤渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷及辛弗林。
橙皮苷提取
取上述滤渣100g，用碱提酸沉法提取；加料液比1:30g/mL的水3000ml，30℃下边搅拌边加入9.2gCa(OH)2，搅拌0.5h后过滤，取滤液加适量稀盐酸调体系pH为2.0，静置12h；析晶，抽滤，烘干得橙皮苷粗品。以料液比1:60g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为5.0，静置12h重结晶；重结晶后，过滤，烘干，称重，得橙皮苷纯品，纯度为98.16%，得率为4.14%。
新橙皮苷提取
取前处理合并后的滤液过D101大孔吸附树脂柱，水洗，依次用30%乙醇和70%乙醇梯度洗脱。收集70%醇洗脱液，浓缩成浸膏。往浸膏中加5%质量分数的硫酸铵固体，边加热边搅拌，沸腾后停止加热，冷却，在15℃以下析晶12h，得新橙皮苷粗品。将新橙皮苷粗品置于洁净干燥的烧杯中，以料液比1:60g/mL的比例往烧杯中加入甲醇，搅匀；用稀NaOH溶液调体系pH为11.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为2.0，在15℃以下静置12h，进行重结晶；抽滤，烘干，得新橙皮苷；经HPLC测得纯度为88.15%，新橙皮苷得率2.28%。
Claims (3)
1.一种从柑橘小果、皮中提取橙皮苷和新橙皮苷的方法，其特征在于：采用如下工艺步骤：
A前处理
以苦橙皮和苦橙第三次生理落果的枳实小果为原料，经干燥、粉碎，过筛，按质量比例为2:1的比例，称取苦橙皮粉碎物和枳实小果粉碎物，用0-30%乙醇水溶液，按照质量料液比1：（10-30），在40-45℃进行渗漉提取10-12h，得到药渣和提取液；按0.01%-0.1%的比例添加入果胶酶，40-50℃下搅拌30min，然后调温度至70℃，处理15-30min；然后过滤，得到滤液；药渣可重复提取3次；得到的药渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷；
B 橙皮苷提取
用pH值为10.0-11.0 的NaOH溶液，按照料液比为1:（5-10）的比例浸泡药渣，进行提取；
所得提取液用HCl调至pH值为2.0-3.0，在15℃以下放置，沉淀；
将沉淀物用水洗至中性，再用70%乙醇溶解，在5-10℃以下放置，重结晶；重结晶后的晶体即为橙皮苷产品；
C 新橙皮苷提取、分离、纯化
取步骤A所述滤液过强酸性苯乙烯型阳离子柱，然后用水洗，收集流出液和水洗液；
将离子柱流出液和水洗液混合，进D101大孔吸附树脂；经水洗后，先用30%乙醇洗脱，再用70%乙醇梯度洗脱，收集70%乙醇洗脱液；
将70%乙醇洗液浓缩，在5-10℃以下放置，用5.0%的（NH4）2SO4助析，得新橙皮苷粗品；
将新橙皮苷粗品用水洗涤至中性，以料液比1:（50-60）g/mL加入甲醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0-11.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为2.0-3.0，在5-10℃以下静置，重结晶；析出类白色针状晶体；抽滤，烘干，得到新橙皮苷。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤A所述过筛，筛网的目数为10目或者60目或者100目。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤C所述强酸性苯乙烯型阳离子柱为001×7阳离子柱。
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