CN105384732A

CN105384732A - 一种抑制水稻细菌性条斑病菌生长的化合物

Info

Publication number: CN105384732A
Application number: CN201510722685.5A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-10-31
Filing date: 2015-10-31
Publication date: 2016-03-09

Abstract

本发明发现对水稻细菌性条斑病菌具有抑菌和杀菌活性的化合物。其水稻细菌性条斑病菌的最小抑菌浓度MIC值为32μg/mL，最小杀菌浓度MBC值为128μg/mL。

Description

一种抑制水稻细菌性条斑病菌生长的化合物

技术领域

本发明涉及化合物的新用途，阐明药物化学结构与细菌的生物活性之间的关系，更具体的说，是探索化合物对水稻细菌性条斑病菌的抑菌和杀菌活性。

背景技术

在1918年Reinking首先报道了菲律宾水稻上发生细菌性条斑病，后来陆续在东南亚地区澳大利亚及非洲一些地区有见报道，目前在我国南方稻区危害严重。

水稻细菌性条斑病，简称水稻细条病，是一种主要发生于我国南方的病害。在我国，于20世纪50年代在广东省首先发现该病害。方中达等将该病与白叶枯病区分开来，确认为一种新的细菌性病害，属黄单胞杆菌。水稻受水稻细条病菌侵染后，叶片变黄甚至枯死，空秕粒增多，千粒重降低。一般年份，可减产10%~20%；在气候条件适宜时，该病容易发生流行，产量损失高达40%。1983年将水稻细条病列入国内调运植物检疫对象。

水稻细条病在发病初期表现为在叶脉间出现像是被水浸透的细小线型病斑，一般为深绿色，随着侵染时间的发展，逐渐转变为浅黄色和灰白相间，病斑变大，但发病严重时可使叶片完全变褐，导致叶片死亡。在潮湿条件下，可以在叶片表面观察到黄色液滴，里面包含大量的细条病菌细胞。在高湿条件下，易发病，遭遇暴雨或大风叶片产生伤口，会流行。一般糯稻比梗稻、籼稻感病，杂交稻比常规稻发病严重，品种间抗性差异显著。偏施有机肥、氮肥或灌水过深都可以加重病害。病菌主要依附在病稻种、稻草和自生稻上越冬，成为主要初侵染源。病菌主要从气孔或伤口侵入，借风、雨、露等传播。在无病区主要通过带菌种子传入。晚稻在孕穗、抽穗阶段发病严重。发病轻的田块减产10%左右，重病田减产20~30%，特重病田可达60%以上。

水稻细条病主要分布于亚洲的热带和亚热带地区。在国外，自1957年以来，东南亚、南亚和西非的一些国家和地区相继发现了细条病。在我国主要分布于华南、华中和西南等地区。稻种的南繁、病区调种及大面积推广杂交水稻致使该病蔓延扩散，最北己达北纬29.5°左右，即在我国的8个稻作区中的华南双季稻作区、华中单双混栽稻作区、西南高原稻作区中广泛流行，并上升为水稻的主要病害之一。

发明内容

本发明采用体外抗菌试验，研究化合物对水稻细菌性条斑病菌的生物活性。

本发明的具体技术方案如下：

本发明的创新点是发现化合物对水稻细菌性条斑病菌有良好的抑菌和杀菌活性，并测量得到其最小抑菌浓度MIC值和最小杀菌浓度MBC值，属于首次公开。

所述化合物结构特征如下式所示：

具体实施方式

下面结合具体实施实例，进一步详细地说明本发明。应理解下面实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明范围。

实施实例1

测量最小抑菌浓度MIC值。

（1）营养肉汤的配制：取营养肉汤30g加1000mL蒸馏水即得。使用前121℃高压蒸汽灭菌20min待用。

（2）营养琼脂固体培养基的配制：取营养琼脂45g加1000mL蒸馏水即得。使用前121℃高压蒸汽灭菌20min待用。

（3）菌株的培养：操作于超净工作台上进行。吸取已灭菌的液体培养基l0mL，放在已灭菌的试管中，然后用接菌环挑取一个菌落，加到液体培养基中，放于培养箱内培养，细菌培养24h，培养温度为28℃。

（4）菌液配制及计数：将培养后的菌液，釆用10倍稀释法用液体培养基稀释，并用血球计数板在显微镜上初步观察计数，然后将菌液用液体培养基稀释，作为加入供试品中的菌液。细菌采用平板计数法进行计数，将以上菌液用无菌生理盐水再稀释100倍，取50μL，均匀涂于已铺有固体培养基的平皿中，培养24h，培养温度为28℃。培养后，单个活细菌生长形成一个菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。

计算公式为：菌液浓度=n×20×100cfu/mL

（5）药品溶液的配制：称取化合物，加入灭菌生理盐水，摇勾，得均匀溶液，备用。存放于4℃冰箱保存待用。

（6）最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）的测定：采用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度MIC（MinimalInhibitoryConcentration）。MIC为最小抑菌浓度，即药物与一定浓度的菌液作用后，能够抑制可见菌生长的最低浓度。

采用二倍稀释法将药液用无菌生理盐水将药液稀释系列浓度，0.5、1、2、4、8、16、32、64、128和256μg/mL，在96孔板上1~10行，每孔加100μL不同浓度的药液和100μL菌液，使最终菌液浓度为1~5×10⁵cfu/mL，第11行以无菌生理盐水加菌液作为阳性对照，第12行以不加菌液的无菌生理盐水为阴性对照，混匀后于28℃培养24h，以肉眼观察药物最低浓度管中无细菌生长者为该试验药物的MIC，每个实验重复三次。

测得最小抑菌浓度MIC值为32μg/mL。

实施实例2

测量最小杀菌浓度MBC值。

（4）菌液配制及计数：将培养后的菌液，釆用10倍稀释法用液体培养基稀释，并用血球计数板在显微镜上初步观察计数，然后将菌液用液体培养基稀释，作为加入供试品中的菌液。细菌采用平板计数法进行计数，将以上菌液用无菌生理盐水再稀释100倍，取50μL，均匀涂于已铺有固体培养基的平皿中，培养24h，培养温度为28℃。培养后，单个活细菌生长形成一个菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数；计算公式为：菌液浓度=n×20×100cfu/mL。

（6）最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）的测定：采用微量肉汤稀释法测定最小杀菌浓度MBC（MinimalBactericidalConcentration）。在MIC基础上，从每管吸取10μL溶液，点于固体培养基上，继续按MIC培养条件下培养，以完全杀灭细菌的最低浓度为最小杀菌浓度（菌落数小于等于5）。

采用二倍稀释法将药液用无菌生理盐水将药液稀释系列浓度，0.5、1、2、4、8、16、32、64、128和256μg/mL，在96孔板上1~10行，每孔加100μL不同浓度的药液和100μL菌液，使最终菌液浓度为1~5×10⁵cfu/mL，第11行以无菌生理盐水加菌液作为阳性对照，第12行以不加菌液的无菌生理盐水为阴性对照，混匀后于28℃培养24h，以肉眼观察药物最低浓度管中无细菌生长者为该试验药物的MIC。将上述未见生长细菌的各孔中的肉汤取10μL接种于营养琼脂平板上，做好标记，于28℃培养24h，以仍无细菌生长的管内药物浓度记为该药的MBC，每个实验重复三次。

测得最小杀菌浓度MBC值为128μg/mL。

Claims

1.一种抑制水稻细菌性条斑病菌生长的化合物，其特征在于：

（1）结构特征如下式所示：

（2）其可作为水稻细菌性条斑病菌的抑制剂和杀菌剂；

（3）其对水稻细菌性条斑病菌的最小抑菌浓度MIC值为32μg/mL；

（4）其对水稻细菌性条斑病菌的最小杀菌浓度MBC值为128μg/mL。