CN104789509A - 一株杜仲内生短小芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株杜仲内生短小芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，本发明所述的杜仲内生细菌是从杜仲植物活体中采用内生细菌微生物分离技术分离获得的，经微生物分类学鉴定，命名为短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)，该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期：2015年1月30日，保藏登记号CGMCC NO.10470。本发明最显著的特征是该菌株能够对植物病原真菌有明显的抑制作用，公布了上述短小芽孢杆菌DZBT01在防治小麦纹枯病中的应用和在促进小麦生长中的应用。本发明的短小芽孢杆菌DZBT01为杜仲植物内生细菌，培养条件简单、容易保存，是农业上重要的微生物资源。

Description

一株杜仲内生短小芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于植物保护领域，尤其涉及一种短小芽孢杆菌及其在防治植物病害中的应用。
背景技术
化学农药作为防治有害生物的一种有效手段，曾在病虫害综合防治，保证农林等作物稳产、高产等方面起到了重要作用。但是长期过分依赖化学农药，特别是一些残效期长和毒性大的农药使用，以及一些地区对化学农药的不合理使用，导致化学农药在使用中产生了环境污染，人畜中毒，农药残留等问题。目前，化学防治的危害逐步被人们所认识，研制安全、高效、低毒、低残留的新型生物农药成为农药研究领域的新热点。
植物内生细菌(Endophytic bacteria)是一类其生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物的各组织和器官内部，并不引起植物组织产生明显病害症状的微生物。植物内生细菌普遍存在于植物体内，构成了植物体内的微生态系统，与宿主植物协同进化，形成了互惠共生的关系。由于植物内生细菌在植物体内有稳定的生存空间，且能产生与宿主植物代谢相同或相似的生理活性物质，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗逆、抗虫、抗病的能力，促进宿主植物的生长发育，且具有安全、无残留、不在人畜体内积累、防治效果专一等优点，为新型生物农药和农药先导化合物的研究和应用提供了美好的前景。当前，围绕植物内生细菌或其代谢产物控制植物病害已成为研究的热点，已有多项研究表明植物内生细菌或其代谢产物在植物病害防治中发挥着重要的作用。如Hinton等人将玉米内生阴沟杆菌(Enterobacter cloacae)作为种子保护剂，能有效防治玉米病害。田宏先等人分离的马铃薯组织内生细菌(Bacillus megatherium)对马铃薯环腐病有较好的田间防治及增产作用。何红等人在辣椒中分离的内生枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，能分泌出环脂抗菌多肽，该物质对植物炭疽病菌和番茄青枯病菌等多种植物病原真菌和病原细菌有较强的抑制作用。
短小芽孢杆菌((Bacillus pumilus sp.)是自然界中广泛存在的非致病细菌，对人无害，不污染环境，生理特性丰富多样，是土壤和植物微生态优势种群之一，可以产生丰富的具有潜在植物病害防治价值的抗菌物质，是植物病害生防微生物的重要组成部分(肖爱萍等,2003；Akhtar M,2008)。
本发明从杜仲植物体内分离到一株生防内生细菌短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)，并对该菌株进行了植物病原真菌的抑菌作用、防治小麦纹枯病害及促进小麦植株生长等方面研究。该发明为微生物农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种广谱高效抑制植物病原真菌生长的短小芽孢杆菌。
本发明还要解决的一个技术问题是提供上述短小芽孢杆菌的用途。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
广谱高效抑制植物病原真菌生长的短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilusDZBT01)，是一种从杜仲植物根部筛选获得的对多种植物病原真菌具有抑菌作用的生防细菌菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号是CGMCC NO.10470，保藏日期：2015年1月30日。
短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落圆形，暗白色，不透明，边缘整齐，中间有褶皱，为革兰氏阳性菌，菌体短杆状，周生鞭毛，好氧。生理生化特性：可以利用葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇产酸，接触酶阳性，v-p反应阳性，可以水解酪素，不水解酪氨酸，不水解淀粉。16S rDNA基因序列已提交Genbank，登记号KM087337。将所测16S rDNA序列通过BLAST比对，能在Genbank中找到同源性非常高的相近菌株序列，与DZBT01菌株相似度最高的是Bacillus pumilus.MTCC B6033，ITS序列同源性达到100％。以ITS序列为基础构建的系统发育树，短小芽孢杆菌DZBT01与Bacilluspumilus.MTCC B6033同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近，采用MEGA4.1软件，邻位连接法显示短小芽孢杆菌DZBT01与相关种的ITS rDNA系统发育树，进行了1000次的相似度重复计算，图中发育树节点只显示Bootstrap值大于50％数值。
本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)对小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces gramini)、玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、玉米茎基腐病菌(Fusarium moniliforme)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)具有明显的抑制作用，能够高效地抑制植物病原真菌的生长。
上述短小芽孢杆菌能够高效防治苗期小麦纹枯病。
上述短小芽孢杆菌对苗期小麦植株生长具有明显的促生作用。
有益效果：
(1)短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)为杜仲内生细菌，对供试的五种植物病害真菌具有较强的抑制生长作用，具有拮抗植物内生细菌的重要特点，如对植物病原菌的作用方式多样化；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用，尤其对多种供试植物病原真菌的生长具有较好的抑制效果。
(2)短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01的菌落图片(在牛肉膏蛋白胨培养基上)。
图2为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01同源性的系统发育树图。
图3为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01对小麦纹枯病菌菌丝生长的抑制作用。
图4为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01对小麦全蚀病菌菌丝生长的抑制作用。
图5为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01对玉米纹枯病菌菌丝生长的抑制作用。
图6为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01对玉米茎基腐病菌菌丝生长的抑制作用。
图7为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01对棉花枯萎病菌菌丝生长的抑制作用。
图8为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01的培养液对小麦出苗率的影响。
图9为本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01的培养液对小麦纹枯病的防治效果。
保藏事项
本发明所述的短小芽孢杆菌Bacillus pumilus DZBT01已于2015年1月30日提交于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号是CGMCC NO.10470，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。
实施例1：短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)的获得
本发明于2013年10月在安徽省合肥市安徽农业大学校园内采集杜仲植物的根部组织，具体的分离纯化操作步骤如下：
(1)采集健康杜仲植物的根部组织；
(2)所述康杜仲植物根部组织的表面消毒与无菌检测：将步骤(1)采集的根依次在浓度75％的酒精中浸泡1min、在浓度1％的次氯酸钠溶液中浸泡1-2min；将浸泡过的根用无菌水冲洗3次，阴干，得到消毒后的根。采用梯度稀释法，将消毒后的根定量称取1g，加入0.01mol/L PBS缓冲液定容至10mL，研磨至浆状，得到10-1稀释倍数的样品悬浮液，随后用无菌移液管吸取1.0mL10-1稀释倍数的样品悬浮液，加入9mL 0.01mol/L PBS缓冲液，即得到10-2稀释倍数的样品悬浮液，依次类推，按10n进行系列稀释，分别得到10-3、10-4稀释倍数的样品悬浮液，分别吸取10-3、10-4稀释倍数的样品悬浮液100uL溶液涂布于第一块牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上，37℃恒温培养，培养24h；
将另一部分消毒后的根组织进行无菌检测：采用组织印迹法，将消毒后的根组织置于第二块牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上轻轻滚动2min，接着移去根组织，在温度37℃恒温培养，培养24h，无杂菌长出即说明消毒后的根组织表面无菌；
(3)杜仲组织内生细菌的分离培养：当步骤(2)的第一块牛肉膏蛋白胨培养基平板上长出菌落时，采用划线法，挑取细菌单菌落接着于第三块牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上，温度37℃恒温培养，培养24h，长出完整菌落，即为杜仲内生细菌；获得的杜仲内生细菌经过鉴定该细菌为短小芽孢杆菌，代号为DZBT01，命名为Bacillus pumilus DZBT01，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落圆形，暗白色，不透明，边缘整齐，中间有褶皱，如图1所示，斜面保存备用；
所述短小芽孢杆菌DZBT01 16S rDNA基因序列(短小芽孢杆菌DZBT0116SrDNA基因由1501个bp组成)如下所示。将所测16S rDNA序列通过BLAST比对，发现与DZBT01菌株同源性非常高的相近菌株是Bacillus pumilus.MTCCB6033，ITS序列同源性达到100％。，16S rDNA基因序列已提交Genbank，登记号KM087337。以ITS序列为基础构建的系统发育树，短小芽孢杆菌DZBT01与Bacillus pumilus.MTCC B6033同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近，采用MEGA4.1软件，邻位连接法显示短小芽孢杆菌DZBT01与相关种的ITS rDNA系统发育树，进行了1000次的相似度重复计算，结果如图2所示。
所述0.01mol/L PBS缓冲液配方为：8g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠、0.24g磷酸二氢钾、蒸馏水1L，pH 7.4；第一块牛肉膏蛋白胨固体培养基配方、第二块牛肉膏蛋白胨固体培养基配方和第三块牛肉膏蛋白胨固体培养基配方均为：10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钠、15g琼脂，蒸馏水1L、pH 7.2；使用前牛肉膏蛋白胨固体培养基在温度121℃、压力0.1MPa下灭菌20min。
短小芽孢杆菌DZBT01 16S rDNA基因序列如序列表SEQ ID NO.1所示。
实施例2：短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)对五种植物病原真菌的抑菌作用
(1)短小芽孢杆菌DZBT01的培养
将杜仲内生细菌短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)接至牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基活化，置于37℃恒温培养箱恒温培养24h。
所述牛肉膏蛋白胨固体培养基配方为：10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钠、15g琼脂、蒸馏水1L。使用前牛肉膏蛋白胨固体培养基在温度121℃、压力0.1MPa下灭菌20min，放冷之后备用。
(2)植物病原真菌的培养
取小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomycesgramini)、玉米茎基腐病菌(Fusarium moniliforme)、棉花枯萎病菌(Fusariumoxysporum f.sp.vasinfectum)四种植物病原真菌的斜面培养物，分别接种到马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基平板上活化，在28℃恒温培养箱培养5天，取玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)接种到马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基平板上活化，在28℃恒温培养箱培养2天，待用。
本发明所有实施例的马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基配方均为：去皮马铃薯200g(洗净去皮,200g马铃薯切成小块，加水煮沸20～30分钟，八层纱布过滤，取汁液备用)，葡萄糖20g，琼脂粉15g，水1000mL，pH值自然，使用前在温度121℃、压力0.1MPa下灭菌20min。
(3)平板对峙法测定短小芽孢杆菌DZBT01抗菌活性
用内径为6mm的打孔器分别在已经培养了对应天数的植物病原真菌的马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基上打孔，将打孔获得的菌饼分别置于未培养任何微生物的空白马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基距培养皿(直径90mm)上，位置为距离培养皿中心位置25mm处，植物病原真菌小麦纹枯病菌、小麦全蚀病菌、玉米茎基腐病菌、棉花枯萎病菌28℃恒温培养2天，植物病原真菌玉米纹枯病菌28℃恒温培养1天，然后在培养皿(直径90mm)的中央中心位置接种杜仲内生细菌短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)，植物病原真菌小麦纹枯病菌、小麦全蚀病菌、玉米茎基腐病菌、棉花枯萎病菌的对峙培养平板28℃恒温培养5天，植物病原真菌玉米纹枯病菌的对峙培养平板28℃恒温培养3天，以培养皿(直径90mm)的中央位置接种无菌培养液代替短小芽孢杆菌DZBT01(Bacilluspumilus DZBT01)作为对照。短小芽孢杆菌DZBT01与植物病原真菌小麦纹枯病菌、小麦全蚀病菌、玉米纹枯病菌、玉米茎基腐病菌、棉花枯萎病菌的对峙培养形态特征如图3、图4、图5、图6、图7和图8所示。
无菌培养液配方为：10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠、蒸馏水1L，pH7.2-7.4，使用前在温度121℃、压力0.1MPa下灭菌20min。
待对照中植物病原真菌长至培养皿的中央中心位置时测量病原真菌菌落半径，即对照组病原真菌半径；接种杜仲内生细菌短小芽孢杆菌DZBT01(Bacilluspumilus DZBT01)的培养皿中，测量病原真菌菌落半径，即处理组病原真菌半径。内生细菌短小芽孢杆菌DZBT01对病原真菌的拮抗性用拮抗指数来表示：
拮抗指数(％)＝[(对照组病原真菌半径—处理组病原真菌半径)/对照组病原真菌半径]×100％
试验结果见表1，短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)对供试的五种植物病原真菌(即小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces gramini)、玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、玉米茎基腐病菌(Fusarium moniliforme)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum))具有显著的抑菌作用。
表1 本发明所述的短小芽孢杆菌DZBT01对五种植物病原微生物的抗菌结果
实施例3：短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)对温室盆栽小麦纹枯病的防治情况
将小麦种子(扬麦158)依次用1％的次氯酸钠表面消毒10min，用无菌水冲洗3-5遍，然后置于铺有无菌湿滤纸的培养皿内，于25℃的恒温培养箱内催芽，待种子萌发后备用。麦田土混入适量的细沙，干热灭菌即获得灭菌麦田土，备用。将在麦粒沙培养基上培养好的小麦纹枯病菌与灭菌麦田土按1:5(W/V)的比例混合均匀，装入盆钵(高16cm，上口径13cm，下口径6cm)中。将表面消毒已催芽的麦粒浸种于短小芽孢杆菌DZBT01培养液中(培养液含菌量为1.0×108CFU/mL)，5h后播种，且每盆浇灌20mL短小芽孢杆菌DZBT01培养液，于20℃温室中培养，12h光照，12h黑暗。
麦粒沙培养基按如下方法制备：取麦粒1000mL，干沙子500mL，葡萄糖20g。麦粒用水浸泡12h后煮沸并保持沸腾1h，然后将其与干沙子和葡萄糖拌匀，置于121℃，0.11MPa灭菌锅中灭菌1h，放冷之后备用。
共设5个处理：
①自然对照处理组：将催过芽的麦粒播种于灭菌麦田土中；
②短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组
将表面消毒已催芽的麦粒浸种于短小芽孢杆菌DZBT01培养液中(含菌量为1.0×108CFU/mL)，5h后播种，且每盆处理浇灌20mL短小芽孢杆菌DZBT01培养液。
③小麦纹枯病菌处理组
将在麦粒沙培养基上培养好的小麦纹枯病菌与灭菌麦田土按1:5(W/V)的比例混合均匀，然后将催过芽的麦粒播种于其中。
④小麦纹枯病菌和短小芽孢杆菌DZBT01培养液的混合处理组
首先将在麦粒沙培养基上培养好的小麦纹枯病菌与灭菌麦田土按1:5(W/V)的比例混合均匀，然后将浸种于短小芽孢杆菌DZBT01培养液(含菌量为1.0×108CFU/mL)5h的麦粒播种，最后每盆浇灌20mL短小芽孢杆菌DZBT01培养液。⑤小麦纹枯病菌和75％多菌灵可湿性粉剂混合处理组
将在麦粒沙培养基上培养好的小麦纹枯病菌与灭菌麦田土按1:5(W/V)的比例混合均匀，然后将经过75％多菌灵可湿性粉剂拌种处理的麦粒播种于其中，75％多菌灵可湿性粉剂用药量为种子重的0.3％。
短小芽孢杆菌DZBT01培养液按如下方法制备：
短小芽孢杆菌DZBT01的液体培养的培养基制备：10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠、蒸馏水1L，pH7.2，使用前在温度121℃、压力0.1MPa下灭菌20min冷却之后备用。
短小芽孢杆菌DZBT01的培养条件：短小芽孢杆菌DZBT01接种到短小芽孢杆菌DZBT01的液体培养的培养基中，37℃，摇床转速160转/分，培养8h，得到的液体培养液即为含有短小芽孢杆菌DZBT01的混合液。
每处理重复20盆，每盆6粒。播种1周后待自然对照组小麦出苗完全，开始统计各处理的小麦出苗率，结果如图8所示，经短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理的小麦出苗率与自然对照组中小麦的出苗率一致，均为100％，此外，经短小芽孢杆菌DZBT01培养液和小麦纹枯病菌混合处理的小麦出苗率为71.5％，明显高于经小麦纹枯病菌单独处理的小麦出苗率46.2％，与经75％多菌灵可湿性粉剂和小麦纹枯病菌混合处理的小麦出苗率(73.25％)比较接近，说明短小芽孢杆菌DZBT01培养液的引入能够在很大程度上减轻小麦纹枯病菌对小麦出苗率的影响，对小麦纹枯病菌有一定的抑制作用。播种21d后调查苗期小麦植株纹枯病的发病情况，短小芽孢杆菌DZBT01培养液对小麦纹枯病的防治效果见表2和图9(A从左往右依次为小麦纹枯病菌和短小芽孢杆菌DZBT01培养液的混合处理组、自然对照组和小麦纹枯病菌处理组等三种处理组的生长状况；B从左往右依次为小麦纹枯病菌和短小芽孢杆菌DZBT01培养液的混合处理组、自然对照组和小麦纹枯病菌处理组等三种处理组的发病情况)，小麦苗期引入短小芽孢杆菌DZBT01培养液能降低小麦纹枯病的发病率，减少小麦纹枯病对小麦的危害。
表2 短小芽孢杆菌DZBT01培养液对苗期小麦纹枯病发病情况的影响
注：表中所列数据均是5个重复的平均值；利用邓肯氏新复极差法分析比较5种处理对苗期小麦纹枯病发病情况的影响是否有所差异，其中P＝0.05(p值是结果可信水平的一个指标，具有总体代表性的犯错概率，p＝0.05提醒样本群体中各样本之间的关联度有5％的可能是由于偶然性因素造成的)；表格中同列中数值的角标(小写英文字母)表示在P＝0.05条件下5种处理之间对苗期小麦纹枯病发病情况影响的差异显著水平，其中，同列中数值的角标(小写英文字母)相同说明处理组之间对苗期小麦纹枯病发病情况影响的差异不显著，同列中数值的角标(小写英文字母)不同说明处理组之间对苗期小麦纹枯病发病情况影响的差异显著。以表1中5种处理对苗期小麦纹枯病病情指数的影响为例，“短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组”和“自然对照组”两组数值的角标均为”c，说明在P＝0.05条件下，“短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组”和“自然对照组”相同，均不会对苗期小麦纹枯病病情指数产生影响；“小麦纹枯病菌处理组”、“小麦纹枯病菌+短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组”、“小麦纹枯病菌+75％多菌灵处理”3种处理的数值角标分别为“a”、“b”、“b”，和“自然对照组”组的数值角标“c”有所不同，说明在P＝0.05条件下，这3种处理方式与“自然对照组”相比，对苗期小麦纹枯病病情指数的影响均较为显著，其中数值角标记为“a”的“小麦纹枯病菌处理组”与“小麦纹枯病菌+短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组”、“小麦纹枯病菌+75％多菌灵处理”这两种处理相比，对苗期小麦纹枯病病情指数的影响更为显著，明显加重小麦纹枯病的病害发生，而数值角标均记为“b”的“小麦纹枯病菌+短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组”、“小麦纹枯病菌+75％多菌灵处理”这两种处理之间对苗期小麦纹枯病病情指数的影响差异不显著，但和“自然对照组”相比，也能加重小麦纹枯病的病害发生。
实施例4：短小芽孢杆菌DZBT01(Bacillus pumilus DZBT01)对盆栽小麦植株生长30天的促生长情况
将小麦种子(扬麦158)依次用1％的次氯酸钠表面消毒10min，用无菌水冲洗3-5遍，然后置于铺有无菌湿滤纸的培养皿内，于25℃的恒温培养箱内催芽，待种子萌发后，将其浸种于短小芽孢杆菌DZBT01培养液中(培养液含菌量为1.0×108CFU/mL)，5h后播种于盆钵(高16cm，上口径13cm，下口径6cm)中，且每盆处理浇灌20mL短小芽孢杆菌DZBT01培养液，以无菌培养液浸泡种子为对照，于20℃温室中培养，12h光照，12h黑暗。30天后测量以及称重地下部分根长、地下部分鲜重、地上部分株高、地上部分鲜重，结果如表3所示。与对照(接种无菌培养液)相比，接种短小芽孢杆菌DZBT01培养液能够显著的促进小麦植株的生长(表3)。
短小芽孢杆菌DZBT01培养液按如下方法制备：将10g蛋白胨、5g酵母提取物和5g氯化钠溶于蒸馏水1L中，调节pH7.2-7.4，121℃、压力0.1MPa下灭菌20min备用。短小芽孢杆菌DZBT01的培养条件：37℃，摇床转速160转/分，10小时。
无菌培养液按如下方法制备：将10g蛋白胨、5g酵母提取物和5g氯化钠溶于蒸馏水1L中，调节pH7.2-7.4，121℃、压力0.1MPa下灭菌20min备用。
表3 短小芽孢杆菌DZBT01培养液对苗期小麦植株生长情况的影响
注：表中所列数据均是5个重复的平均值；利用邓肯氏新复极差法分析比较短小芽孢杆菌DZBT01培养液和无菌培养液(对照)两种处理对苗期小麦植株生长的影响是否有所差异，其中P＝0.05(p值是结果可信水平的一个指标，具有总体代表性的犯错概率，p＝0.05提醒样本群体中各样本之间的关联度有5％的可能是由于偶然性造成的)；表格中同列中数值的角标(小写英文字母)表示在P＝0.05条件下短小芽孢杆菌DZBT01培养液和无菌培养液(对照)两种处理之间的差异显著水平，其中，同列中短小芽孢杆菌DZBT01培养液处理组的数值角标以字母“a”表示，无菌培养液(对照)处理组的数值角标以字母“b”表示，说明在P＝0.05条件下，短小芽孢杆菌DZBT01培养液与无菌培养液(对照)相比，对苗期小麦植株生长的影响更为显著，短小芽孢杆菌DZBT01培养液能明显促进苗期小麦植株生长。

Claims (10)

1.一种抗植物病原真菌的细菌，分类命名为短小芽孢杆菌Bacillus pumilusDZBT01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年1月30日，保藏编号是CGMCC NO.10470。
2.根据权利要求1所述的一种细菌，其特征为所述细菌的16S rDNA基因序列如序列表SEQ ID NO.1所示。
3.一种防治小麦纹枯病的培养液，其特征在于该培养液为权利要求1所述的短小芽孢杆菌Bacillus pumilus DZBT01经过液体培养获得。
4.根据权利要求3所述的一种防治小麦纹枯病的培养液，其特征在于所述的液体培养的方法如下：将短小芽孢杆菌Bacillus pumilus DZBT01接种于液体培养基中，培养基的pH为7.2-7.4，培养温度为37℃，培养的摇床转速为160转/分，培养8小时，收集含菌体的培养液即得到防治小麦纹枯病的培养液。
5.根据权利要求4所述的一种防治小麦纹枯病的培养液，其特征在于所述液体培养基配方为：10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠、蒸馏水1L，pH7.2-7.4。
6.权利要求1或2所述的短小芽孢杆菌在抑制植物病原真菌中的应用。
7.根据权利要求6所述的短小芽孢杆菌在抑制植物病原真菌中的应用，其特征为所述病原真菌为小麦纹枯病菌、小麦全蚀病菌、玉米纹枯病菌、玉米茎基腐病菌、棉花枯萎病菌。
8.权利要求1或2所述的短小芽孢杆菌在防治苗期小麦纹枯病中的应用。
9.权利要求1或2所述的短小芽孢杆菌在促进苗期小麦植株生长中的应用。
10.权利要求3-5任意一项所述的培养液在防治苗期小麦纹枯病或者促进苗期小麦植株生长中的应用。
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