CN101671641B - 防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株at31 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31，属于植物保护技术领域。AT31菌株在PDA培养液37℃180rpm振荡培养20～24小时，然后6000rpm离心10min，其菌剂成品中活菌总浓度为1×109～1×1010cfu/ml，稀释100倍后在蔬菜幼苗移栽时灌根使用，或者经过堆肥制成微生物肥料在幼苗移栽前一周使用，对番茄、丝瓜、黄瓜等蔬菜根结线虫病的防效在58～82％。该菌剂稀释100倍对水稻茎基部进行喷雾处理，对水稻纹枯病的防效为64.71％，增产22.33％。同时该菌剂还可以兼治蔬菜青枯病、疫病，改善土壤板结现象。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31，属于植物保护技术领域，专用于蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的无公害防治。
二、背景技术
由根结线虫(Meloidogyne spp.)侵染引起的蔬菜根结线虫病是国内外最为严重的植物病害之一，可为害黄瓜、冬瓜、西瓜、丝瓜、番茄、辣椒、茄子、马铃薯、莴苣、菠菜、胡萝卜、白菜、豆科蔬菜等大多数蔬菜。由植物寄生线虫侵袭寄生引起的植物病害，受害植物可因侵入线虫吸收体内营养而影响正常的生长发育；线虫代谢过程中的分泌物还会刺激寄主植物的细胞和组织，导致植株畸形，使农产品减产和质量下降；此外，还可以通过线虫危害，加剧其它病害的发生，尤其是保护地蔬菜，致使寄主常年减产15-25％，有时达70％以上，严重地制约了大棚蔬菜、果树、花卉等作物的生产和出口创汇，有的甚至到了无法种植的地步。据估计，我国农作物的生产每年因根结线虫的为害而遭受的经济损失达数亿元以上。
根结线虫病害属于土传病害，防治十分困难。目前，人们主要采取有机磷类化学杀线虫剂、选种抗病作物品种、实施轮作、建立无病种苗基地和对进出口农作物进行严格的检疫来控制根结线虫病害的发生。化学杀线虫剂虽防效显著，但其选择性差，破坏农作物的生态环境；不易降解，高残留，对人畜极不安全；破坏土壤结构，造成土壤沙化；抗药性问题日益突出。
水稻纹枯病是由土壤真菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kuhn)引起的一类严重制约水稻生产的全球性水稻病害，是我国水稻三大主要病害之一。由于纹枯病菌腐生能力强，寄主范围广，尤其是随着水稻优质品种的推广和高肥密植技术的应用，该病危害日趋严重，每年都会给水稻生产造成一定损失，发病严重的区域水稻可减产50％。直接威胁水稻的稳产高产。水稻不同品种间对纹枯病的抗性虽有一定的差异，但至今尚未发现免疫和高抗品种。
我国防治水稻纹枯病主要依靠抗生素类农药井冈霉素，品种单一，加之该药已使用多年，当季使用次数过多，用药量大，极易诱导抗药性产生或有的已产生抗药性，同时，也使农业成本增加。
综上所述，开发新的、更为高效和安全的微生物杀菌剂控制蔬菜根结线虫病、水稻纹枯病的发生是提高社会生产总量的需要，同时更是农业安全可持续发展的需要，符号社会发展需求。现有技术中按照本实验室的菌体保藏液专利(公开专利号CN1358838，公开日：2002年7月17日)方法，菌体可室温保存2～3年。
三、发明内容
技术问题：针对现有技术中没有对蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病有较高防效的生防制剂的现状，提供开发一种防治蔬菜根结线虫病害和水稻纹枯病的单一生防菌菌株及其菌剂，该菌剂对这两种重要土传病害的防效均在50％以上，并且有增产功能。
技术方案
防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31，为蜡状芽孢杆菌属(Bacillus cereus)，2009年6月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3128。
生防菌株AT31用于制备生防菌剂的方法为：
将上述生防菌株AT31在PDA培养液30℃180rpm振荡培养20～24h，然后6000rpm离心10min，取AT31湿菌与菌体保藏液(专利号ZL02112559.7，公开专利号CN1358838)，按质量体积比为1∶40配成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×109～1×1010cfu/ml。菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液，还含有浓度为0.001mol/L的Tween20(非离子型表面活性剂)。
上述生防菌剂在防治温室蔬菜根结线虫病方面的应用方法为，每亩3升AT31菌株制剂在作物移栽前做成堆肥使用，或者每亩6升AT31菌株制剂，稀释100倍后在移栽时灌根使用。在水稻纹枯病方面的应用方法为每亩用AT31菌株制剂3升，稀释10倍后对水稻茎基部进行喷雾处理。
有益效果
本发明的优点和积极效果表现在：本发明是专门针对蔬菜根结线虫病、青枯病、疫病和水稻纹枯病等土传病害开发的生防制剂。由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于蔬菜的无公害生产，农民可以不用或减少其他防治蔬菜根结线虫病化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于蔬菜的出口。同时，该菌剂还有增产功能，可为农民增加收入。
温室实验表明：该菌制剂能显著降低根结线虫的侵入，并兼有促进番茄生长的作用。该菌剂可以稀释100倍后在幼苗移栽时灌根使用，或者经过堆肥制成微生物肥料在幼苗移栽前一周使用，对黄瓜、丝瓜、番茄等蔬菜根结线虫病的防效在58～75％，增产在30％以上，对番茄的防效在74.31％，增产43.35％(表1)。
利用AT31生防菌剂对水稻茎基部进行喷雾处理，对水稻纹枯病的温室防效在60％以上，增产20％以上(表2)。
该菌剂用湿菌与本实验室的菌体保藏液(属本实验室已授权专利，专利号ZL02112559.7，公开专利号CN1358838，公开日：2002年7月17日)按1∶40(g/ml)配成菌剂，可室温保存2～3年。菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液，还含有浓度为0.001mol/L的Tween20(非离子型表面活性剂)。
四具体实施方式
1、AT31生防菌剂的制备
本发明涉及一种防治温室蔬菜根结线虫病、青枯病、疫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31，为蜡状芽孢杆菌属(Bacillus cereus)，2009年6月18日寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3128。由南京紫金山森林土壤中分离得到。
将上述生防菌株AT31在PDA培养液30℃180rpm振荡培养20～24h，然后6000rpm离心10min，取AT31湿菌与菌体保藏液(专利号ZL02112559.7，公开专利号CN1358838)，按质量体积比为1∶40配成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×109～1×1010cfu/ml，保存备用。菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液，还含有浓度为0.001mol/L的Tween20(非离子型表面活性剂)。
2、温室盆钵试验检测AT31生防菌剂对根结线虫病的防效
移栽2天后，用40ml生防菌AT31(107CFU·ml-1)灌根处理番茄苗48钵；灌根处理2天后，将6ml(100条/ml)线虫悬浮液稀释滴注到番茄的根部，处理24钵。不用生防菌AT31进行灌根处理，直接接种线虫悬浮液稀6ml(100条/ml)的作为对照处理(24钵)。在温度25～28℃，相对湿度40％，光照12h/12h条件下，培养8周后调查病级数，计算病害严重度和防效。对仅用生防菌AT31处理的番茄苗，8周后拔出，用水轻洗根系，分别测根长、茎长和干物质重量。
按照Luc(1990)提出的病级标准记录病级数，病害严重度和防效的计算公式如下：
防效＝对照病害严重度-处理病害严重度×100％
增产效果的计算公式如下：
在移栽8周后的调查结果显示，生防菌剂AT31对番茄根结线虫病的防效高达74.31％；与对照相比，经AT31处理后番茄增产43.35％。
表1温室中生防菌剂AT31对番茄根结线虫病的生防效果及促生作用
3、温室试验检测AT31生防菌剂对水稻纹枯病的防效
水稻拔节期进行纹枯病温室试验。每桶4穴水稻，每桶接种水稻纹枯病菌接种体10g于水稻茎基部，套袋保湿24h后，AT31生防制剂稀释100倍后对水稻茎基部进行喷雾处理(500ml/36穴)，保湿2天以利于发病。温室温度28-30℃，湿度85％-99％。AT31生防菌剂处理水稻茎基部21天后调查病情并统计防效。水稻收获后计算增产率。
防效调查：水稻长至扬花前期，搁田调查水稻纹枯病情。调查方法采用双行直线取样法，每处理取10点，每点查5穴，调查病穴数，病穴病斑高度级别。
病穴病斑高度的分级方法：
0级：整穴不发病；
1级：一穴中少数植株发病或多数植株病斑在稻株1/4以上。
2级：多数病株病斑在1/4-1/2之间；
3级：多数病株病斑在1/2-3/4之间；
4级：多数病株病斑在3/4以上；
5级：多数病株发病枯死。
病害严重度与防效计算公式同“温室盆钵试验检测AT31生防菌剂对根结线虫病的防效”。
生长指标测定：调查病害严重度的同时调查各处理植株的根长、茎长、湿重、干重。水稻收割时分处理统计产量。
结果显示，AT31生防菌剂对水稻纹枯病的温室防效在64.71％以上；生防菌剂AT31有明显的促进水稻生长能力，增产率达22.33％。
表2AT31生防菌制剂施用后对水稻纹枯病的防治及促生效果
4、温室试验检测AT31生防菌剂对蔬菜青枯病、疫病的防效
辣椒苗移栽2天后，用AT31生防制剂稀释100倍后进行灌根处理，灌根5天后接病原菌。30d后统计病情指数，计算防效。
温室试验结果显示AT31生防菌剂对蔬菜青枯病、疫病也有较好的防治效果，防效均高于50％。同时该菌剂还可以改善土壤板结现象。
Claims (4)
1.一种防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31，为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，于2009年6月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3128。
2.用权利要求1所述防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31制备的生防菌剂。
3.用权利要求1所述防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31制备生防菌剂的方法，其特征在于：
将权利要求1所述防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病的生防菌株AT31在PDA培养液30℃180rpm振荡培养20～24h，然后6000rpm离心10min，取AT31湿菌与菌体保藏液按质量体积比为1∶40配成菌剂，菌剂成品中活菌总浓度为1×109～1×1010cfu/ml，菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液，还含有浓度为0.001mol/L的Tween 20。
4.权利要求2或3所述生防菌剂在防治温室蔬菜根结线虫病和水稻纹枯病方面的应用。
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Assignee: Xinyi Zhongkai Agrochemical Co.,Ltd. Assignor: Nanjing Agricultural University Contract record no.: 2012320000146 Denomination of invention: Bio-controlling bacterial strain AT31 for preventing and curing greenhouse vegetable root knot nematode disease and rice sheath blight disease Granted publication date: 20110511 License type: Exclusive License Open date: 20100317 Record date: 20120229 |
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