CN105340601A - 一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用 - Google Patents

一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用，包括：采用输液法将微生物促香剂输入产沉香植物，至获得沉香；其中，所述微生物促香剂中含有微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液，所述微生物包含真菌、细菌和放线菌等，真菌优选为硬孔菌属、拟层孔菌属、可可毛色二孢属、镰刀菌属、拟盘多毛孢属、头孢菌属、霉属、腐木菌属或小球壳菌属中的一种或多种。本发明提供的技术方案处理简单，利用微生物促香剂结合通体香结香技术诱导产沉香植物生产沉香，结香快，结香效率高，能充分利用白木且中间不腐朽。本发明还提供了一种利用所述基于微生物输液法的沉香诱导方法所获得的沉香、点状香、点线状香制备的沉香珠子。

Description

一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用
技术领域
本发明涉及生物农业技术领域，具体涉及一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用、一种沉香珠子。
背景技术
沉香为瑞香科(Thymelaeaceae)产沉香(Aquilaria)植物含有树脂的木材，沉香的形成非常特殊，健康的白木香不能产生沉香类物质，只有受到物理伤害、化学伤害及真菌侵染等外界的伤害后才诱导结香。质量高的沉香需要几年甚至几十年方能形成。由于天然沉香形成的特殊性及结香周期长，所以结香技术成为研究的热点。
因此，寻找一种基于微生物输液法的沉香诱导方法，对沉香的形成及产业化有着重要的意义。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用、以及一种沉香珠子。本发明提供的技术方案处理简单，利用微生物诱导剂结合本发明人的通体香结香技术输液法，诱导产沉香植物生产沉香。
第一方面，本发明提供了一种基于微生物输液法的沉香诱导方法，包括如下步骤:
采用输液法将微生物促香剂输入产沉香植物，至获得沉香。
如本发明所述的“产沉香植物”包括但不限于沉香属(Aquilaria)、拟沉香属(Gyrinops)或其他诱导型植物，优选为沉香属植物。
进一步优选地，所述沉香属植物包括但不限于马来沉香(Aquilariamalaccensis)、越南沉香(Aquilariacrassna)或白木香(Aquilariasinensis)。
更进一步优选地，所述白木香(Aquilariasinensis)的树龄优选为5或6年以上的白木香。
如本发明所述的，所述的“输液法”为行业内常规输菌液操作，本领域技术人员可以理解的，所述的“输液法”为将液态的微生物促香剂通过钻孔、切口、凿槽等方式输入产沉香植物，优选为通体香结香的输液法；所述的“通体香结香的输液法”包括但不限于专利申请号201010104119.5中提到的输液法或《沉香结香方法的历史记载、现代研究及通体结香技术》中提到的“通体香结香法”，区别在于本发明的“输液法”将现有的“通体香结香的输液法”采用的沉香促香剂(比如植物激素、铁盐或钠盐等化学试剂)替换为本发明的微生物促香剂。
本发明一个实施方式中，所述输液法为：在产沉香植物树干和/或分枝上钻孔、切口或凿槽，采用输液装置连通装有菌液的容器和设置好的孔洞、切口或凹槽，将菌液输入产沉香植物。
如本发明第一方面所述的，输液装置可含或不含压力推送部件。不含压力推送部件时，本发明技术方案可利用植物蒸腾作用将菌液疏导至植物茎干、枝条、根等各器官。含有压力推送部件时，本发明技术方案在利用植物蒸腾作用的基础上，可加快推送菌液疏导速度。
优选地，所述的在产沉香植物树干和/或分枝上钻孔的方式为：在树干和/或分枝上分多段打孔，每隔40cm-200cm打1个或多个孔，打孔方向为垂直或倾斜打孔，打孔的数量根据树的高度和直径设置。造孔深度优选设置为不大于树的半径或直径的2/3，比如设置为2cm-8cm深。孔径优选为0.5-1cm。
更优选地，所述每隔40cm-200cm打多个孔的方式为：在树干和/或分枝的同一高度绕树干同时打多个孔，优选2-6个输液孔，更优选在树干同一高度绕树干打4-6个孔，分枝则在同一位高度绕树干打1-2个孔。
如本发明第一方面所述的，还包括但不限于同时联合使用行业内其他常规的对产沉香植物进行处理，以促进结香；包括但不限于采用《沉香结香方法的历史记载、现代研究及通体结香技术》中提到的任一种结香方法(黄俊卿等，中国中药杂志，第38卷第3期，2013,2)。
本发明一个实施方式中，所述获得的沉香包括点状和/或点线状沉香。
如本发明所述的，所述“点状沉香”和“点线状沉香”是同一种香不同切面的不同形态；比如，树干横截面呈现点状分布的“点状香”，而树干纵切面呈线状分布的“线状香”；若车成珠子，则呈现“点线状沉香”。“点状香”或“点线状香”区别于树干横截面出现的结香面，为沉香和白木的镶嵌物。
本领域技术人员可以理解的是，典型的“点状和/或点线状沉香”是树干、分枝、树根横截面呈现点状分布和纵切面呈线状分布的结香。
本发明一个优选实施方式中，所述点状和/或点线状沉香的香线填充在导管上、木射线上和/或木间韧皮部。
本发明一个实施方式中，所述微生物促香剂中含有微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液，其中，所述微生物包括细菌、真菌、放线菌中的至少一种；所述的真菌优选为硬孔菌属、拟层孔菌属、可可毛色二孢属、镰刀菌属、拟盘多毛孢属、头孢菌属、霉属、腐木菌属或小球壳菌属中的一种或多种。
优选地，所述硬孔菌属优选为采用硬孔菌。
优选地，所述拟层孔菌属优选为采用拟层孔菌。
优选地，所述可可毛色二孢属优选为采用可可毛色二孢。
优选地，所述镰刀菌属优选为采用镰刀菌。
优选地，所述拟盘多毛孢属优选为采用拟盘多毛孢菌。
优选地，所述头孢菌属优选为采用头孢菌。
优选地，所述霉属优选为采用木霉菌。
优选地，所述腐木菌属优选为采用腐木菌。
优选地，所述小球壳菌属优选为采用小球壳菌。
进一步优选地，所述拟层孔菌(Fomitopsissp.)，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为:CGMCCNO.7802。
进一步优选地，所述可可毛色二孢(Lasiodiplodiatheobromae)，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为:CGMCCNO.9591。
说明：该保藏编号为CGMCCNO.9591的可可毛色二孢的相关保藏信息如下：
保藏日期：2014年09月09日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏编号：CGMCCNO.9591；分类命名：Lasiodiplodiatheobromae。
进一步优选地，所述硬孔菌(Rigidoporusvinctus)，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为:CGMCCNO.9594。
进一步优选地，所述拟盘多毛孢(Pestalotiopsisvirgatula)，来自促进沉香形成真菌ASAF05的分离、筛选和鉴定文献中所述(促进沉香形成真菌ASAF05的分离、筛选和鉴定，《中国药学杂志》，2014,Vol.49，陈旭玉等)。
进一步优选地，所述木霉菌(Trichodermaerinaceum)，为中国医学科学院药用植物研究所海南分所生物技术研究室分离。
如本发明所述的，“所述微生物促香剂中含有微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液”中，所述“微生物”为微生物菌株、菌丝、菌株发酵液、菌株发酵液浓缩制剂中的至少一种。为便于运输、存储和产业化应用，在所述的微生物菌株、菌丝、菌株发酵液、菌株发酵液浓缩制剂和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液中，加入药学上可接受的赋形剂或载体，可制备成各种剂型，比如溶液剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、膏剂中的至少一种。可以理解的是，在具体应用时，各种剂型的微生物促香剂可以加水溶解制备成膏状或溶液，便于输液、刷涂、喷涂；比如，采用输液法时，将各剂型加水制备成溶液即可。
本发明一个实施方式中，所述的微生物促香剂的剂型为微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液的溶液剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、膏剂中的至少一种，进一步优选为菌丝胶囊剂、颗粒剂或菌液的溶液剂或注射剂。
如本发明所述的，本发明采用的微生物促香剂还可以包含行业内其他常用的沉香促香剂中的一种或多种。
在本发明一个实施例中，所述微生物促香剂中还包括通体结香法采用的沉香诱导剂，优选为植物激素，比如茉莉酸甲酯、乙烯利、生长素中的一种或多种。
在本发明一个实施例中，每个输液孔对应所述获得的沉香的长度有20cm-200cm(优选为20-100cm)。
在本发明一个实施例中，所获沉香包含点状和/或点线状沉香。
采用本发明的方法，不仅获得沉香，还能获得一定长度的点状或点线状沉香。
第二方面，本发明提供了一种沉香，为采用如第一方面所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法获得的沉香。
第三方面，本发明提供了一种沉香珠子，为采用如第一方面所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法获得的沉香所制备。
第四方面，本发明提供了如第一方面所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法获得的沉香在制备工艺品中的应用。
如本发明所述的，所述工艺品包括但不限于笔筒、串珠、烟灰缸、木头雕刻摆件等行业常规工艺品。
本发明提供的技术方案的有益效果：
为解决上述问题，本发明提供的技术方案处理简单，利用微生物促香剂结合通体香结香技术诱导产沉香植物生产沉香，具有结香快，结香效率高，能充分利用白木且中间不腐朽。
附图说明
图1-4分别为本发明实施例1-3提供的硬孔菌、拟层孔菌、可可毛色二孢在输液6个月后，白木香的结香效果；
图5为本发明实施例1提供的点状香车的沉香珠子；
图6为本发明实施例1-3提供的白木香结香的薄层鉴定结果。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
实施例1
硬孔菌(R.vinctus)ASAF02(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏号为(CGMCCNO.9594)促进结香效果验证
将硬孔菌(R.vinctus)ASAF02菌株培养3-15天,得到菌株发酵液，根据树的大小按不同的剂量接种白木香促进结香，具体接种方法如下：
1、输液材料的获得：硬孔菌(R.vinctus)ASAF02菌株用液体培养基培养获得菌液。
2、输液方法：以白木香(A.sinensis(Lour.)Gilg)为输液对象种，输液方法为：通体结香技术的输液法(每棵树可设置1个或多个输液孔，本实施例中设置2个输液孔(如图1所示)，在本发明其他实施例中，可以为1-4个任意数量的输液孔)：在6年树龄的白木香上，自根部到地上50cm-1m处部位钻洞，洞深至3-5cm，孔径约1cm，然后将菌液代谢物通过输液装置利用植物的蒸腾作用疏导至植物茎干、枝条、根等各器官，每次输液200-500mL。
在本发明其他实施例，可每个50至200cm设置一个输液孔，促使整个植株内部结香。
结香6个月后观察，结果表明，上述输液方式可以使白木香结香；结果如图2所示，图2-a上排，从左至右分别为：输液口上端(输液口，1cm处，2cm处，3cm处，4cm处，15cm处，40cm处)的结香图；图2-a下排，从左至右分别为：输液口下端(1cm处，2cm处，3cm处，4cm处，5cm，15cm处，40cm处)的结香图，输液口至上下端各3cm处的区域出现沉香，点状香在上下端持续出现的长度各达40-50cm长。
多次实验结果显示：硬孔菌采用输菌液法6个月可以结香且结香距离长，中间不腐朽，中间不腐朽部分即获得点线状香，除了在输液孔上下有3cm-10cm的腐朽外，一个输液孔即可获得长度80cm-100cm中间不腐朽的点状香。
为进一步说明本发明的有益效果，本实施例还提供了另一棵白木香树的结香实施例：接种方法为：输菌液法(每棵树分段设置多段打孔，每段打孔设置2个输液孔，)：在6年树龄的白木香上，自根部到地上40cm-60处部位钻洞，洞深至2-8cm，孔径约1-2cm，然后分别将菌液代谢物通过输液装置利用植物的蒸腾作用疏导至植物茎干、枝条、根等各器官，每次输液200-500mL，促使整个植株内部结香；效果如图2-b、c、d所示。
在图2-b中，从左至右分别为：输液口上端(1cm处，2cm处，3cm处，4cm处，5cm处，6cm处，15cm处，40cm处)的结香图；2-c中，从左至右分别为：输液口下端(1cm处，2cm处，3cm处，4cm处，15cm处，40cm处)的结香图；2-d为输液法获得的点线状香(上端15cm处)
多次实验结果显示：硬孔菌采用输菌液法6个月可以结香并且结香距离比较长中间不腐朽，中间不腐烂部分获得点状香距离比较长，且点状香出现的距离为所钻孔洞至上、下端约15-50cm的区域；1个输液孔即可获得80cm-100cm的点状香。
不难看出，本发明提供的输菌液法可充分利用木质部的中间白木，该方法利用微生物的持续伤害可以对木质部进行全面、充分的利用，将白木损失将至最低，并获得最大范围的结香范围和尽可能长的结香距离。
实施例2
拟层孔菌(Fomitopsismeliae)，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为:CGMCCNO.7802。
将拟层孔菌(F.meliae)菌株培养3-15d,得到菌液2；参照实施例1，根据树的大小按不同的剂量、采用微生物输液法接种白木香促进结香。
结果表明，上述接种方式可以使白木香结香。结香6个月后观察，结果表明，上述接种方式均可以使白木香结香；结果如图3所示，从左至右分别为：输液口上端(及上端1cm处，2cm处，3cm处，15cm，50cm处)的结香图；输液口至输液口的上下端各10cm处的区域出现沉香，输液口上下端各10-50cm处的区域都是沉香和白木的镶嵌物，即点状香或者点线状香。
多次实验结果显示：拟层孔菌采用输菌液法6个月可以结香，并且结香距离比较长，中间不腐朽，获得点状香距离比较长，1个输液孔中间会有3cm-10cm的腐烂面周围会有线香，另外可获得长度60cm-80cm中间不腐朽的点状香。
实施例3
可可毛色二孢(Lasiodiplodiatheobromae)，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为:CGMCCNO.9591。
将可可毛色二孢(Lasiodiplodiatheobromae)菌株培养3-15d,得到菌丝1、菌液2；参照实施例1，根据树的大小按不同的剂量、采用通体结香技术的输液法接种白木香促进结香。
结果表明，上述接种方式可以使白木香结香。
结香6个月后观察，结果表明，上述接种方式均可以使白木香结香；结果如图4所示，4-a中，从左至右分别为：输液口上端(输液孔上端切口处，2cm处，5cm处，10cm处)的结香图；4-b中，从左至右分别为：输液口下端(输液口下端切口处，2cm处，5cm处，10cm处)的结香图；输液口上下端各1cm-3cm处的出现沉香，点状沉香出现在输液口上下端各10-20cm处的区域。
多次实验结果显示：可可毛色二孢采用输菌液法6个月可以结香并且结香距离相对硬孔菌和层孔菌略短，1个输液孔中间除了输液孔上下各有1cm-3cm的腐朽外，其余至少可获得10cm-20cm中间不腐朽的点状香。
效果实施例
为进一步说明本发明的有益效果；本发明将实施例1获得的点状沉香车成珠子，如图5所示，左1，2，3为点状沉香珠子，右1为未接香白木对照。
为更进一步说明本发明的有益效果；本发明将实施例1-3获得的结香6个月的白木香分别砍下，剖香，然后进行薄层鉴定。具体方法为：分别取沉香样品粉末1g置于具塞三角瓶中，加甲醇25ml，超声处理60min，过滤，滤液定容至25ml，作为供试品溶液。取6,7-二甲氧基-2(2-苯乙基)色酮加甲醇配制成每毫升含0.05mg6,7-二甲氧基-2(2-苯乙基)色酮的色酮对照品溶液。吸取供试品溶液、对照药材溶液和色酮对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(v﹕v＝10﹕1)为展开剂，展开两次，取出晾干，置紫外光灯(254nm和365nm)下检视，拍照。
薄层鉴定结果如图6所示。6-a、b和c分别为硬孔菌、色二孢菌、拟层孔菌获得沉香的薄层鉴定结果。在图6-a、b和c中的ST、SY分别表示：色酮对照，输液法获得的沉香色酮，
结果进一步验证了本发明实施例1-3的结香方法均可获得沉香。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，采用输液法将微生物促香剂输入产沉香植物，至获得沉香。
2.如权利要求1所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，所述产沉香植物为沉香属植物、拟沉香属植物或其他诱导型植物。
3.如权利要求1所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，所述微生物促香剂中含有微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液，其中，所述微生物包括细菌、真菌、放线菌中的至少一种；所述的真菌优选为硬孔菌属、拟层孔菌属、可可毛色二孢属、镰刀菌属、拟盘多毛孢属、头孢菌属、霉属、腐木菌属或小球壳菌属中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，所述的微生物促香剂的剂型为微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液的溶液剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、膏剂中的至少一种，进一步优选为菌丝胶囊剂、颗粒剂或菌液的溶液剂或注射剂。
5.如权利要求1所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，所述输液法为：在产沉香植物树干和/或分枝上钻孔、切口或凿槽，采用输液装置连通装有微生物促香剂的容器和设置好的孔洞、切口或凹槽，将微生物促香剂输入产沉香植物。
6.如权利要求5所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，在产沉香植物树干和/或分枝上钻孔的方式为：在树干和/或分枝上分多段打孔，每隔40cm-200cm打1个或多个孔，打孔方向为垂直或倾斜打孔。
7.如权利要求6所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法，其特征在于，每隔40cm-200cm打多个孔的方式为：在树干和/或分枝的同一高度绕树干同时打多个孔，优选2-6个输液孔，更优选在树干同一高度绕树干打4-6个孔，分枝则在同一位高度绕树干打1-2个孔。
8.一种沉香，其特征在于，为采用如权利要求1所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法获得的沉香。
9.一种沉香珠子，其特征在于，为采用如权利要求1所述的基于微生物输液法的沉香诱导方法获得的沉香所制备。
10.如权利要求1所述的基于输液法的沉香诱导方法获得的沉香在制备工艺品中的应用。
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