CN103329938B - 一种农药组合物及其在防治藏红花球茎腐烂病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种农药组合物及其在防治藏红花球茎腐烂病中的应用。所述农药组合物的有效成分为碱式硫酸铜、代森锰锌和咯菌腈，所述碱式硫酸铜、代森锰锌、咯菌腈的质量比为（50~72）：（27.5~82.5）：（0.6~6.3）；本发明还提供了所述农药组合物在防治藏红花球茎腐烂病中的应用，该农药组合物对藏红花球茎腐烂病的防治效果良好，与单独使用碱式硫酸铜、代森锰锌或咯菌腈相比，防治效果有显著提高。

Description

一种农药组合物及其在防治藏红花球茎腐烂病中的应用

技术领域

本发明属于农药组合物领域，特别涉及一种农药组合物及其在防治藏红花球茎腐烂病中的应用。

背景技术

藏红花原产于南欧以及伊朗等地，在我国上海、浙江、江苏、山东、北京等地也有栽培。藏红花的柱头是其主要药用部分，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神之功效，可抑制肝炎病毒，提高免疫力，并具抗癌活性，被称为“植物黄金”。此外，藏红花还可作为珍贵的调味剂、天然色素、香料及染料使用。

由于农田生态途径的变化和植物病害抗药性增强，近年来藏红花球茎腐烂病已是藏红花生产上最严重的病害，在藏红花球茎储存期到第二年新球茎膨大期，球茎腐烂病发生都较严重，尤其是连作，病球率一般高达30%~70%。一般情况下，藏红花病球率在30%左右，当贮藏不当或当年梅雨发生期长，其病球率可高达50%以上，球茎一旦感病，几乎整个球茎全部发生腐烂，不能开花与繁殖，严重影响藏红花的产量、品质以及藏红花扩大再生产种球来源。

现有文献报道，依据病原菌的形态学特征鉴定表明，藏红花球茎腐烂病主要由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum SchLecbt)、炭疽菌（Anthracnose sp）引起，但随着新菌种的发现及菌种随着生态环境的协同进化，很多种属间的形态、生理生化特征趋于相似，仅依靠常规的形态学特征难以准确鉴别病原菌的种类。而目前用于防治藏红花球茎腐烂病的药剂主要是针对尖孢镰刀菌、炭疽菌而设计的，有多菌灵、百菌清、恶霉灵、敌克松及代森锰锌等，使用时均为单独用药，普遍存在杀菌具有局限性，用药量大、防治效果差等问题，不能有效缓解藏红花球茎腐烂病病情；特别是多菌灵、恶霉灵及敌克松为内吸性杀菌剂，大量频繁使用容易导致病原菌产生抗药性，导致防治效果逐年下降，同时大量频繁使用会造成防治成本过高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新型的农药组合物，并将其在防治藏红花球茎腐烂病中应用，以提高藏红花球茎腐烂病的防治效果。

本发明采用rDNA-ITS及16SRNA序列分析和传统的形态学研究相结合的方法对藏红花球茎腐烂病的病原菌进行了鉴定。从腐烂的球茎中分离纯化出11种细菌和真菌，通过回接鉴定法最后确定3种真菌，即尖孢镰刀菌 （Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici 4287）、木霉属真菌（Trichoderma reesei QM6a）、丛赤壳菌（Nectria sp.），以及3种细菌，即粘质沙雷菌（Serratiamarcescens subsp. sakuensis strain KRED）、悬钩子沙雷菌（Serratia rubidaea strain JCM1240）、杓兰欧文菌（Pectobacterium cypripedii strain DSM 3873），都具有明显的致病性。

在明确了藏红花球茎腐烂病病原菌的前提下，本发明将广谱性杀菌剂碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈进行复配，形成农药组合物。

波尔多液，其有效成分为碱式硫酸铜，是一种保护性杀菌剂，其杀菌范围广，毒性小（对人、畜基本无毒）、长期使用不产生抗药性，药效持久且价格低廉。代森锰锌，为保护性杀菌剂，其杀菌范围广、低毒、长期使用不易产生抗药性，其含有的锰、锌微量元素对作物有明显的促壮、增产作用，其中的锌元素不但可缓解植物缺锌的问题，而且可增强植物抵抗病害的能力，从而相对地起到杀菌作用。咯菌腈，为广谱触杀性杀菌剂，其药效持续期长，不易与其它杀菌剂发生交互抗性，通过抑制葡萄糖磷酰化的转移，从而抑制真菌菌丝体生长，最终导致病原菌死亡。

本发明所述农药组合物，其有效成分为碱式硫酸铜、代森锰锌和咯菌腈，所述碱式硫酸铜、代森锰锌、咯菌腈的质量比为（50~72）：（27.5~82.5）：（0.6~6.3）。

本发明所述农药组合物最简单的制备方法是将市售的有效成分为碱式硫酸铜的波尔多液、代森锰锌及咯菌腈按照上述质量配比进行混合即得。

上述农药组合物还能接受常用的农药助剂、分散剂、扩散剂、消泡剂、湿润剂、崩解剂、赋形剂等农药辅助成分，采用常规的农药制剂制备方法制备成满足不同使用需要或不同施用环境条件的不同农药组合物剂型，尤其是制备成悬浮乳剂或可湿性粉剂。

本发明还提供了一种所述农药组合物在防治藏红花球茎腐烂病中的应用；应用时，将所述农药组合物采用自来水或无菌水配制成农药组合物的水溶液使用，每100g农药组合物的水溶液中碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的总质量为0.08~0.15g。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明所述农药组合物为一种新型的农药组合物，对藏红花球茎储存期球茎腐烂病及田间栽培期球茎腐烂病的防效高达91.2%及88.3%，与现有用于防治藏红花球茎腐烂病的药剂相比，防治效果大幅度提高，可有效缓解藏红花球茎腐烂病病情。

2、本发明所述农药组合物中各有效成分间具有协同增效作用，与组成所述农药组合物的任一组分（单剂）相比，防治藏红花球茎腐烂病的效果显著提升（见实施例1、对比例1、实施例2、对比例2）。

3、本发明所述农药组合物，其有效成分均为接触性杀菌剂，该类杀菌剂不易引起抗药性，而且在实际应用时各有效成分的使用量小，一方面可减小抗药性的产生，另一方面可降低成本，减少对环境的污染。

4、田间试验表明本发明所述农药组合物未对藏红花产生药害现象，对藏红花的种植安全性高。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明所述农药组合物及其在防治藏红花球茎腐烂病中的应用作进一步说明。下述各实施例中，以波尔多液可湿性粉剂（有效成分为碱式硫酸铜，其含量为80wt%，由美国仙农有限公司生产）、75wt%代森锰锌可湿性粉剂（由上海沪联生物有限公司生产）、2.5wt%咯菌腈悬浮剂（由瑞士先正达作物保护有限公司生产）为原料。

实施例1：实验室抑菌实验

本实施例采用室内管碟法分别测定农药组合物对藏红花球茎腐烂病病原细菌（粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌）及真菌（尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌）的抑菌率。每100g农药组合物水溶液（或含农药组合物的PDA培养基）中，碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的量如表1所示。

表1  每100g含药PDA培养基或农药组合物水溶液中各有效成分的量

实验方法如下：

（1）藏红花球茎腐烂病病原细菌的抑菌实验

在超净工作台上配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂18 g，水 1000 mL，自然pH，121℃、高压蒸汽灭菌），然后在PDA培养基凝固前加入波尔多液可湿性粉剂、75wt%代森锰锌可湿性粉剂及2.5wt%咯菌腈悬浮剂并混合均匀，加入量为每100g含农药组合物的PDA培养基中碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的量如表1所示。

将粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌的菌种分别活化后，分别挑取适量单菌落菌体用无菌生理盐水配制成含菌量为10⁶CFU/mL的三种菌悬液备用。

实验组：用表1所述五种含农药组合物PDA培养基形成十五个实验组，每个实验组设置3个平行组，分别对粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌进行抑菌实验，各实验组均取15~20mL 相应的含农药组合物的PDA培养基平铺在直径为9cm的培养皿中，然后分别吸取150uL相应的菌悬液均匀涂布于所述含农药组合物的PDA培养基上，继后将涂覆菌悬液后的各培养皿放入恒温培养箱中，于28℃培养2天，培养时间届满后取出，数单菌落数，并计算抑菌率。

对照组：对照组为三个，分别对粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌进行抑菌实验，每个对照组设置3个平行组，对照组的培养基为不含药的PDA培养基，加入与农药组合物等重量的无菌水，其他条件及操作方法同实验组。

抑菌率=[(对照组菌落平均数-实验组菌落平均数)/对照组菌落平均数] ×100%

（2）藏红花球茎腐烂病病原真菌的抑菌实验

将波尔多液可湿性粉剂、75wt%代森锰锌可湿性粉剂及2.5wt%咯菌腈悬浮剂溶解于无菌水中即得组合物水溶液，每100g农药组合物的水溶液中，碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的量如表1所示。

在28℃的恒温培养箱中、PDA培养基上分别培养尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌三种真菌，待各真菌菌落生长至直径为5cm左右时，分别取出所述培养基，在超净工作台上用无菌打孔器分别在距各菌落边缘3~4mm处的同心圆上取直径d=6.0mm的菌饼。每种真菌制备18个菌饼。

实验组：用浓度如表1所述的五种农药组合物溶液形成十五个实验组，分别对尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌进行抑菌实验，每个实验组设置3个平行组。每个实验组的操作：取15~20mL PDA培养基平铺在直径为9cm的培养皿中，把菌饼翻面接种在所述培养皿的中心位置，使菌丝接触到PDA培养基，然后在菌饼的四周等距离对称放置4个牛津杯，向各牛津杯中分别注入0.1mL农药组合物水溶液，然后将前述接种了真菌菌种的培养皿放入恒温培养箱中，于28℃的培养5天，培养时间届满后取出，以十字交叉法测量菌落直径，计算抑菌率。

对照组：对照组为三个，分别对尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌进行抑菌实验，每个对照组设置3个平行组。各对照组的操作与实验组基本相同，与实验组不同之处是：向菌饼四周等距离对称放置的4个牛津杯中分别注入0.1mL无菌水。

菌落直径（mm）=菌落直径平均值-6.0

抑菌率=[(对照组菌落直径-实验组菌落直径)/对照组菌落直径] ×100%

各实验组、对照组对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率如表2所示。

表2  农药组合物对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率

对比例1

本对比例采用室内管碟法测定碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈单独对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率。实验方法与实施例1相同，每100g含单剂PDA培养基或者单剂水溶液中，碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的量如表3所示。实验结果如表4所示。

表3 每100g含单剂PDA培养基或单剂水溶液中各有效成分的量

表4  各有效成分单独对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率

实施例1和对比例1表明：本发明所述农药组合物对藏红花球茎腐烂病的致病菌的杀菌抑制效果明显优于三种有效成分单独作用时的杀菌抑制效果，并且农药组合物水溶液中各有效成分的量均远低于单独使用时各有效成分的量，而减少各有效成分的使用量一方面可延缓病原菌抗药性的产生，另一方面可降低成本，并减少对环境的污染。

实施例2：田间试验

参照中华人民共和国标准：农药田间药效试验准则（GB/T 17980.28-2000），在中国浙江省湖州市安吉县进行田间试验。

将波尔多液可湿性粉剂、75 wt%代森锰锌可湿性粉剂及2.5 wt%咯菌腈悬浮剂溶解在自来水中配制成五种农药组合物水溶液，每100 g农药组合物水溶液中，碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的量如表1所示。

（1）藏红花球茎储存期的防效

在藏红花球茎收获期随机选取质量为20 g且无病害的藏红花球茎180个，用表1所述五种农药组合物水溶液形成5个实验组，每个实验组设置3个平行组，用自来水形成一个对照组，所述对照组设置3个平行组，各实验组和对照组均对10个藏红花球茎进行处理。

实验组：将各实验组的藏红花球茎分别用相应的农药组合物水溶液浸泡15 min，然后室内摊晾上架，上架后采用常规管理至大田培育下种期之前，常规管理时注意通风，保持室内温度为23℃~28℃、相对湿度为70%~80%，7、8两个月遮光，从9月开始逐渐加大光照强度至1000~2000勒克斯，光照时间8h/d。

对照组：对照组用相同体积的自来水对藏红花球茎浸泡15min，其他条件及操作方法同实验组。

在下种前对各实验组和对照组的藏红花球茎进行逐株调查，球茎部分腐烂至完全腐烂留下空壳者均计为病球，统计病球数量，计算农药组合物和自来水对藏红花球茎室内储存期腐烂病防治效果。

（2）田间栽培期的防效

实验组：在大田培育下种期到来时，用表1所述五种农药组合物水溶液分别浸泡无病害的藏红花球茎若干，浸泡时间20 min，浸泡后及时下种。共设5个试验区，每个试验区面积为100m²，分别对五种农药组合物水溶液浸泡后的的藏红花球茎进行田间栽培实验。下种后在各试验区采用基本一致的田间栽培管理措施（种植密度行间距20cm，种植深度为2.5倍球茎高度，栽种后随即浇灌透水，及时松土除草，春天需保持土壤湿润，防止干旱，同时注意排水，以防止烂根烂球）。

对照组：对照组用自来水浸泡无病害的藏红花球茎若干，浸泡时间20min，浸泡后及时下种，栽培面积和田间栽培管理措施同实验组。

在下种生长满5个月时对各实验组和对照组采用对角线5点取样法每点抽取100株进行全株调查，将叶鞘基部为红褐色、叶尖或叶片发黄以及球茎腐烂者均记为病球，统计病球数量，计算农药组合物对藏红花田间栽培期球茎腐烂病的防治效果。

防效（%）=[（对照组平均病球率—处理组平均病球率）/ 对照组平均病球率] ×100%

本实施例的结果如表5所示。

表5 农药组合物对藏红花球茎储存期及田间栽培期球茎腐烂病的防治效果

由表5可知，藏红花球茎在经过农药组合物处理后，球茎储存期和田间栽培期的病球率均较对照组明显降低，说明本发明所述农药组合物对藏红花球茎腐烂病具有良好的防治效果，而且在田间栽培期并未见药害现象发生，表明所述农药组合物对藏红花的种植安全性高。

对比例2

本对比例同样参照中华人民共和国标准：农药田间药效试验准则（GB/T 17980.28-2000），在中国浙江省湖州市安吉县进行田间试验，测定碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈单独使用对藏红花球茎储存期及田间栽培期球茎腐烂病的防治效果。试验方法与实施例2相同，将波尔多液可湿性粉剂、75wt%代森锰锌可湿性粉剂及2.5wt%咯菌腈悬浮剂分别溶解在自来水中配制成各单剂水溶液，每100g单剂水溶液中，碱式硫酸铜、代森锰锌及咯菌腈的量如表6所示，试验结果如表7所示。

表6 每100g单剂水溶液中各有效成分的量

表7 单剂对藏红花球茎储存期及田间栽培期球茎腐烂病的防治效果

实施例2和对比例2表明：本发明所述农药组合物对藏红球茎储存期球茎腐烂病的防效为80.7%~91.2%，较单独使三种有效成分时的防效有很大提高；本发明所述农药组合物中各有效成分间具有协同增效作用，对藏红花田间栽培期球茎腐烂病的防效高达79.8%~88.3%，较单独使用三种有效成分时的防效有显著提高。

Claims (5)

1.一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药组合物，其特征在于其有效成分为碱式硫酸铜、代森锰锌和咯菌腈，所述碱式硫酸铜、代森锰锌、咯菌腈的质量比为(50～72)﹕(27.5～82.5)﹕(0.6～6.3)。

2.权利要求1所述农药组合物在防治藏红花球茎腐烂病中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于将所述农药组合物配制成水溶液使用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于每100g农药组合物的水溶液中碱式硫酸铜、代森锰锌和咯菌腈的总质量为0.08～0.15g。

5.根据权利要求3或4所述应用，其特征在于以自来水或无菌水为溶剂将农药组合物配制成水溶液。