CN109907074A - 一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物及其在蚜虫防治中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物及其在蚜虫防治中的应用，属于植物保护技术领域；刀孢蜡蚧菌的编号HFLp006，2018年9月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为16368；杀虫药组合物中苦参碱与刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L‑6.25mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL‑1.5×10⁷个孢子/mL；本发明首次将刀孢蜡蚧菌和苦参碱复配成杀虫药组合物并应用到烟蚜的防治中，数据表明刀孢蜡蚧菌和苦参碱复配成的杀虫组合物对烟蚜的防治具有协同增效的作用，且所述的苦参碱的终浓度为1.57mg/L和所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为1.0×10⁷个孢子/mL时上述杀虫药组合物对烟蚜的抑制作用最明显。

Description

一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物及其在蚜虫防 治中的应用

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，具体地说，涉及一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物及其在蚜虫防治中的应用。

背景技术

烟蚜(Myzus persicae)，又称为桃蚜，属于同翅目(Homoptera)，蚜科(Aphididae)。成蚜和若蚜喜欢密集在烟草叶背面或者嫩叶处，刺吸汁液危害，严重时可造成烟叶卷缩、枯死等。除危害烟草外，还危害十字花科蔬菜、茄科、桃、杏等。烟蚜为世界性害虫之一，已经产生了严重的抗药性。有翅蚜可以传播黄瓜花叶病毒等病毒，可以孤雌生殖，并且具有世代重叠现象。以上多种原因导致现在烟蚜数量巨大。

植物源农药是从植物中提取出来的生物活性物质，大部分都是新型杀虫剂，具有广谱性，对很多农林害虫具有良好的杀虫效果；植物源农药一般具有胃毒、触杀、趋避、拒食作用，同时对人、畜安全，农药残留低残效期短，且不易产生抗药性，植物源农药的诸多优点，促进了其快速发展。苦参碱(Sophocarpidine)是从苦参中提取的一种物质，具有触杀、趋避、胃毒的作用，是一种新型的杀虫生物农药，0.5％浓度的苦参碱水剂具有广谱性，对鳞翅目、同翅目、鞘翅目害虫均具有较好的杀虫效果，且不易产生抗药性。

目前烟蚜防治剂受作物安全性所限，单独使用一种烟蚜防治剂单剂不能完全有效地控制烟蚜的发生；而烟蚜防治剂之间的复配既能解决农药单剂毒性大、效果差的问题，又投入少、研发周期短，并且不同农药之间的交互使用能够延缓作用物抗药性的产生，具有较为理想的使用效果，因此不同作用机理之间农药的复配是目前农药领域的研究热点。现有技术中并没刀孢蜡蚧菌和苦参碱复配的相关报道。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有的烟蚜防治剂尚无有效与苦参碱的复配成杀虫药组合物的问题，本发明提供一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物及其在蚜虫防治中的应用，它可以有效抑制烟蚜。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物，刀孢蜡蚧菌(Lecanicilliumpsalloitae)的编号HFLp0 06，2018年9月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为16368。

优选地，所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L-6.25mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL-1.5×10⁷个孢子/mL。

优选地，所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L-3.13mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL-1.5×10⁷个孢子/mL。

优选地，所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L-1.57mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL-1.5×10⁷个孢子/mL。

优选地，所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为1.57mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为1.0×10⁷个孢子/mL。

一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物在蚜虫防治中的应用。

优选地，所述的杀虫药组合物的剂型是药学上可接受的剂型。

优选地，所述的蚜虫为烟芽(Myzus persicae)。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明首次将刀孢蜡蚧菌和苦参碱复配成杀虫药组合物并应用到烟蚜的防治中；数据表明，刀孢蜡蚧菌(编号为HFLp006)和苦参碱复配成的杀虫组合物对烟蚜的防治具有协同增效的作用，且所述的苦参碱的终浓度为1.57mg/L和所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为1.0×10⁷个孢子/mL时上述杀虫药组合物对烟蚜的抑制作用最明显。

具体实施方式

实施例1

供试材料：

(1)供试药剂

0.5％苦参碱，剂型：水剂AS，生产商：北京三浦百草绿色植物制剂有限公司。

(2)供试菌株

所述的刀孢蜡蚧菌(Lecanicillium psalloitae)的编号HFLp006，2018年9月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为16368。

(3)供试昆虫

烟蚜，无翅成蚜。于2017年6月采自贵州省贵阳市开阳县马场烟叶站试验基地，在安徽农业大学植物保护学院昆虫生态饲养室内用云烟202烟苗人工饲养7代以上，挑选大小一致，活力较强的无翅蚜虫作为供试虫。

(4)供试作物

品种为云烟87的烟草，种源来自中国农业科学院烟草研究所，于安徽农业大学植物保护学院智能人工气候培养室内培养至旺长期。

测定方法：

(1)苦参碱对烟蚜的室内毒力测定

将苦参碱依次稀释如表1所示，以纯水处理为对照。从烟草上挑选出大小基本一致、健康的无翅成蚜，采用点滴法用昆虫针的针尾将稀释后的苦参碱点滴在无翅成蚜的前胸背板，每个浓度设置3个重复，每个重复点滴30头无翅成蚜，同时设置纯水处理的对照，将上述处理后的无翅成蚜放在直径为9cm底部铺有润湿滤纸的培养皿中，并在培养皿中放一小块甘蓝叶片饲喂无翅成蚜，培养皿用保鲜膜封口并用针刺上多个通气孔，用大头笔标记供试药剂及其浓度，将培养皿放于常温下培养。处理后分别在4h和24h时分别观察无翅成蚜死亡情况，用毛笔触碰其虫体不动视为死亡，并记下处理和对照死亡情况。

(2)刀孢蜡蚧菌对烟蚜的室内毒力测定

将供试菌株(刀孢蜡蚧菌)配制成0.5×10⁷个孢子/mL、1.0×10⁷个孢子/mL、1.5×10⁷个孢子/mL的菌悬液，用以侵染大小基本一致、健康的无翅成蚜，用昆虫针的针尾将菌悬液点滴在无翅成蚜的前胸背板，每种菌株做3个重复，每个重复点滴30头无翅成蚜，同时用质量浓度为0.05％的土温-80作为对照，将处理后的无翅成蚜放在铺有润湿滤纸的培养皿中，培养皿中放进一小块甘蓝叶片饲喂无翅成蚜，用保鲜膜封口并用针刺上多个通气孔，用大头笔标记供试药剂、浓度及供试菌株，将培养皿放于温度为25℃左右，湿度为80％以上的环境中。处理后之后每间隔24h观察一次，持续观察一周，记录死虫数，观察期间应适量加纯水使滤纸保湿。无翅成蚜的死亡判断同上述实验。

(3)苦参碱对刀孢蜡蚧菌菌落生长的影响

将苦参碱稀释成两个不同的浓度药液各1000mL，倒入配制好的1000mL SDAY培养基中，振荡摇匀后苦参碱稀释成3.13mg/L和6.25mg/L，每个浓度设置3个重复，并设置一组对照(采用纯水作为对照组)。无菌操作台上倒平板，待平板冷却后，用接菌环接菌在平板中央，标记好后密封，在恒温箱中密封培养。每间隔24h观察一次，大约有黄豆粒大小的时候开始测量，每隔24h测量一次，持续测量12天。

结果与分析：

用上述各处理观察得到的死虫数计算各处理的死亡：

所有数据在DPS数据处理软件上完成，死亡率、校正死亡率、毒力回归方程、LC₅₀、LT₅₀、95％置信区间及培养性状(菌落直径)等数值。

(1)苦参碱对烟蚜的室内毒力测定结果

表1苦参碱对烟蚜的校正死亡率测定

采用点滴法对烟蚜进行实验，苦参碱对烟蚜的无翅成虫的毒力测定如表1所示，不同浓度苦参碱对无翅成蚜均有一定的毒力，且在相同时间内随着杀虫剂浓度的升高，其死亡率逐渐升高。

表2苦参碱对烟蚜室内毒力测定相关参数

由表2可以得到，用药4h后，苦参碱LC₅₀为24.8327mg/L，LC₉₀为94.6931mg/L。用药24h后，苦参碱对无翅成蚜的毒力最高，LC₅₀为6.1175mg/L，LC₉₀为18.9551mg/L。苦参碱在24h的相对毒力指数比4h明显增高，二者相差4.14倍。

(2)刀孢蜡蚧菌对烟蚜的室内毒力测定结果

表3刀孢蜡蚧菌对烟蚜的校正死亡率测定

采用点滴法对烟蚜进行实验，刀孢蜡蚧菌对烟蚜的无翅成虫的毒力测定如表3所示，不同浓度的刀孢蜡蚧菌对无翅成蚜均有一定的毒力，且其随着时间的推移而毒力显著加强；其中当刀孢蜡蚧菌浓度为1.0×10⁷个孢子/mL时，其校正死亡率相对于低浓度组(刀孢蜡蚧菌浓度为0.5×10⁷个孢子/mL时)有显著提升。

表4刀孢蜡蚧菌对烟蚜室内毒力测定相关参数

从表4可以看出，当刀孢蜡蚧菌的浓度为1.0×10⁷个孢子/mL时，刀孢蜡蚧菌对无翅成蚜的测定结果如下，LT₅₀为5.0871d，LT₉₀为10.3704d。

(3)苦参碱对刀孢蜡蚧菌菌落生长的影响结果

表5苦参碱对刀孢蜡蚧菌菌落生长的影响结果

从表5可以看出，随着浓度的增加苦参碱对刀孢蜡蚧菌有不同程度的抑制作用，第3天分析得出，苦参碱(浓度为3.13mg/L、6.25mg/L、0.00mg/L)作用下刀孢蜡蚧菌的菌落直径分别为0.90±0.09cm、0.60±0.05cm、1.09±0.05cm，第7天同样可以看出，苦参碱(浓度为 3.13mg/L、6.25mg/L、0.00mg/L)作用下刀孢蜡蚧菌的菌落直径分别为1.83±0.17cm、1.54 ±0.05cm、2.05±0.00cm，表明苦参碱在浓度为3.13mg/L和0.00mg/L时对刀孢蜡蚧菌生长几乎没有影响，因此苦参碱和刀孢蜡蚧菌结合使用能带来更好的效果。

(4)刀孢蜡蚧菌和苦参碱协同对烟蚜的室内毒力测定结果

由于本发明中生物农药(刀孢蜡蚧菌)以单位体积内的孢子数作为施用浓度单位(个孢子/mL)，而植物源农药苦参碱以单位体积内的质量数作为施用浓度单位(mg/L)，因此无法对组合物的LC₅₀值进行计算。因此，本发明采用Colby公式来评价刀孢蜡蚧菌和苦参碱的协同效应。刀孢蜡蚧菌、苦参碱单剂和刀孢蜡蚧菌+苦参碱混剂对烟蚜的室内毒力测定分别参照上述实施例1“测定方法”记载内容，相应的单剂和混剂的测定方法进行。由于昆虫针的针尾每次点药量基本一致，因此实际上通过浓度直观地反映了施用剂量。另外，需要说明的是：通过上述实验可以发现，相对于刀孢蜡蚧菌而言，苦参碱具有速效性，为了配合生物农药刀孢蜡蚧菌的作用规律，将测定的时间设定为5天，并使用了较低的苦参碱浓度。

Colby公式计算方法如下：

EE＝x+y-x·y/100其中，x表示用剂量a的杀虫活性成分A与未经处理的对照组相比的死亡率％；y表示用剂量b的杀虫活性成分B与未经处理的对照组相比的死亡率％；EE表示合用剂量a+b的杀虫活性成分A和B进行处理后的理论有效性。

如果实际有效性(E)超过理论(计算)的有效性(EE)，则混合物显示协同作用。

实验结果如表6所示：

表6刀孢蜡蚧菌和苦参碱协同对烟蚜的室内毒力测定

通过表6可以看出，苦参碱和刀孢蜡蚧菌在不同浓度梯度进行复配的情况下，均取得了增效的效果，其中浓度为1.57mg/L的苦参碱与浓度为1.0×10⁷个孢子/mL的刀孢蜡蚧菌的协同作用下对无翅成蚜有较强的毒力，综合考虑下选择浓度为1.57mg/L的苦参碱与浓度为1.0 ×10⁷个孢子/mL的刀孢蜡蚧菌联用的杀虫药组合物用于蚜虫的防治。

以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。

Claims (8)

1.一种刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物，其特征在于：所述的刀孢蜡蚧菌的编号HFLp006，2018年9月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为16368。

2.根据权利要求1所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物，其特征在于：所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L-6.25mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL-1.5×10⁷个孢子/mL。

3.根据权利要求2所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物，其特征在于：所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L-3.13mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL-1.5×10⁷个孢子/mL。

4.根据权利要求3所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物，其特征在于：所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为0.39mg/L-1.57mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为0.5×10⁷个孢子/mL-1.5×10⁷个孢子/mL。

5.根据权利要求4所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物，其特征在于：所述的苦参碱与所述的刀孢蜡蚧菌的用量比按照如下的条件进行：所述的苦参碱的终浓度为1.57mg/L，所述的刀孢蜡蚧菌的浓度为1.0×10⁷个孢子/mL。

6.一种如权利要求1-5任意一项所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物在蚜虫防治中的应用。

7.根据权利要求6所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物在蚜虫防治中的应用，其特征在于：所述的杀虫药组合物的剂型是药学上可接受的剂型。

8.根据权利要求6所述的刀孢蜡蚧菌和苦参碱联用的杀虫药组合物在蚜虫防治中的应用，其特征在于：所述的蚜虫为烟蚜(Myzus persicae)。