CN107372612A

CN107372612A - 一种微生物制剂及其制备方法与在防治植物病害中的应用

Info

Publication number: CN107372612A
Application number: CN201710657717.7A
Authority: CN
Inventors: 王兵; 陈尚义; 耿艳丽; 殷淑超; 吕伟青; 高鹏鹏
Original assignee: BEIJING TAIKEMEI HI-TECH Co Ltd
Current assignee: BEIJING TAIKEMEI HI-TECH Co Ltd
Priority date: 2017-08-03
Filing date: 2017-08-03
Publication date: 2017-11-24

Abstract

本发明涉及微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种微生物制剂及其制备方法与应用。本发明提供了一种微生物制剂及其制备方法与应用，该微生物制剂采用胶冻样芽孢杆菌发酵制得，发酵的培养液中虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、氨基酸、碳水化合物和复合肥，从而使得该制剂不仅能够起到抑制有害菌的作用，本发明实施例对患有根腐病的玫瑰和枸杞，患有巴拿马病的香蕉进行喷施和根灌，结果表明，本发明提供的微生物菌剂能够对玫瑰和枸杞的根腐病起到良好的防治作用，其防效可达85.3％和69.0％对香蕉的枯萎病起到良好的防治作用，其防效可达85.0％。

Description

一种微生物制剂及其制备方法与在防治植物病害中的应用

技术领域

本发明涉及微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种微生物制剂及其制备方法与在防治植物病害中的应用。

背景技术

农药、化肥是现代农业必不可少的农用物资，在满足人们对粮食增长的需求的同时，也付出了高昂的生态环境及资源代价。如化肥和化学农药在土壤中具有化学固定作用，超量施用可以造成土壤板结、土壤酸性增加等不良后果，同时，必然导致地表及地下水污染的加重，我国地面水体多已受到氮、磷等营养物质的污染。大量施用化肥、农药还造成许多生物种群数量急剧减少，甚至灭绝，严重破坏了生态平衡，长期频繁使用化学农药可导致病菌、虫害出现抗药性，使化学农药本身的药效逐渐降低，为达到杀菌目的就需加大用药量。这样，不仅会提高农业成本，还使农药残留量激增，对人体健康十分不利，又严重污染环境。

香蕉枯萎病(Banana Wilt Disease)又名萎蔫病、巴拿马病，是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum.f sp.Cubense，FOC)侵染，透过分泌毒素而引发香蕉出现细胞程序性死亡，使维管束坏死，是一种毁灭性真菌病害，也是一种典型的土传病害。该病是目前香蕉产业的最大威胁，号称香蕉生产的“第一杀手”。由于病菌在土壤中潜伏了下来，用于灌溉的水体也感染了真菌，所以再种香蕉病害会更严重。近年来香蕉枯萎病在我国香蕉主产区持续暴发并造成严重损失，生产上主要依靠农业措施或化学农药进行防治。轮作等农业措施虽然效果较好，但成本高、耗时长，难以大面积推广普及。化学农药存在着防效差、污染环境、抑制有益微生物和诱导病菌抗药性等问题。采用抗病品种又存在育种周期长，所需人力和经费多而在生产中受到较大限制。

食用玫瑰标准目前有《食用玫瑰干花蕾》企业标准、《GBT 19696-2008地理标志产品平阴玫瑰》，前者规定了干花蕾中乐果和敌敌畏的检测限量，后者规定了在鲜花、鲜花蕾及干花蕾中六六六和滴滴涕的检测限量，《GB 4285-89农药安全使用标准》以及《GB/T 8321农药合理使用准则》中均未规定玫瑰花的农药使用安全标准。农户在实际养殖及培育玫瑰过程中大量使用灭菌剂，从而造成食用玫瑰花中农药残留污染问题，常见的农药主要为有机磷类，如甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲基对硫磷等。经常食用含有有机磷农药残留超标的食品会引起慢性中毒，这些农药长期残留在人体内会导致癌症、突变，孕妇孕育畸形胚胎。因此采用更加安全、无残留、不污染环境的生物灭菌剂是蔷薇属植物玫瑰未来培育养殖的方向。然而，目前市场中专门用于防治玫瑰病害的微生物菌剂却并不多见。

枸杞根腐病发生普遍，危害严重，因病死亡植株每年在3％～5％，给枸杞生产造成很大损失。目前防治枸杞根腐病主要用化学杀菌剂，不同菌剂对腐皮镰刀菌抑制作用最好的为45％代森钱水剂和40％灭病威胶悬剂。但这些农药如果残留在枸杞果实过量则会对食品的安全性产生不利影响。且过量的化学农药使用也会给生态环境造成破坏。

人们在逐渐认识上述问题后，微生物药肥应运而生。微生物药肥是以微生物的生命活动导致作物得到特定肥料效应和/或防治病虫害效应的一种微生物活体制品。微生物药肥中含有大量有益微生物，可以改善作物营养条件、固定氮素和活化土壤中一些无效态的营养元素，创造良好的土壤微生态环境来促进作物的生长，同时能够对植物的病虫害起到抑制作用。并且，微生物药肥对害虫天敌无害，对人畜无害，不污染环境。目前已经研制生产的微生物药肥尚存在许多不足之处。其配方不合理，加工方式大多采用成品菌剂与填料混合，缺少发酵代谢产物，严重影响了微生物肥料的功效。

因此，进一步研发适用于香蕉巴拿马病、玫瑰病害和枸杞根腐病的微生物菌剂十分必要。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种微生物制剂及其制备方法与在防治植物病害中的应用，该微生物制剂能够对植物病原菌起到良好的抑制作用，并对植物病害起到良好的防治作用。

本发明提供的微生物制剂，由菌种、虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、复合氨基酸、碳水化合物和复合肥制得；所述菌种包括胶冻样芽孢杆菌；

菌种、虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、氨基酸、碳水化合物、复合肥的质量比为(0.1～1)：(0.1～10)：(0.01～1)：(0.01～9)：(1～50)：(1～20)：(1～10)。

本发明选择胶冻样芽孢杆菌与其他细菌进行复配，配合虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、氨基酸、碳水化合物、复合肥进行发酵，所制得的生物制剂中存在大量的活菌。作为优选，本发明提供的微生物制剂中活菌数不低于1×10⁹个/mL～20×10⁹个/mL。优选的，微生物制剂中活菌数为1×10¹⁰个/mL。且，本发明提供的微生物制剂能够恢复土壤肥力并兼顾杀灭致病微生物，从而对植物病害起到良好的防治作用，同时有效调节土壤微生态组成、优化土壤营养成分、提高土壤的生物活性，能有效促进施用对象生长并提高品质。

所述菌种还包括枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、胶状溶杆菌和凝结溶杆菌；所述胶冻样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、胶状溶杆菌和凝结溶杆菌的数量比为(0.5～5)：(0.5～5)：(0.5～5)：(0.5～5)：(0.5～5)。

胶冻样芽胞杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)，对磷钾矿物有利用和分解能力，还具有固氮能力，且具有抑制植物病原菌的作用。本发明中采用的侧孢短芽孢杆菌菌株来自中国农业微生物菌种保藏管理中心，编号为ACCC No.01075。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，现有技术中常将其用于污水处理、水产养殖领域。研究表明，其能产生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对土壤致病菌抑制作用强。本发明中采用的枯草芽孢杆菌菌株来自中国农业微生物菌种保藏管理中心，编号为ACCC No.10242。

蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，现有技术中将其用于治疗肠炎、腹泻、肠功能紊乱。本发明中采用的蜡状芽孢杆菌菌株来自中国农业微生物菌种保藏管理中心，编号为ACCC No.01496。

胶状溶杆菌(Lysobacter gummosus Christensen and Cook)，本发明中采用的胶状溶杆菌来自中国林业微生物保藏管理中心，编号为CFCC No.10534。

凝结溶杆菌(Lysobacter concretionis)，本发明中采用的凝结溶杆菌来自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC No.10480。

一些实施例中，微生物制剂由以下质量份的原料制得：

胶冻样芽孢杆菌0.1份、虾粉10份、胶原蛋白0.01份、NaCl 9份、氨基酸1份、碳水化合物20份、复合肥1份。

一些实施例中，微生物制剂由以下质量份的原料制得：

胶冻样芽孢杆菌1份、蟹粉0.1份、胶原蛋白1份、NaCl 0.01份、氨基酸50份、碳水化合物1份、复合肥10份。

一些实施例中，微生物制剂由以下质量份的原料制得：

枯草芽孢杆菌2.0份、胶冻样芽胞杆菌0.5份、胶状溶杆菌1.0份、蟹粉0.5份、虾粉0.5份、胶原蛋白0.05份、NaCl 0.05份、氨基酸10份、碳水化合物20份、复合肥10份。

枯草芽孢杆菌0.5份、胶冻样芽胞杆菌0.5份、蜡状芽孢杆菌0.5份、胶状溶杆菌0.5份、凝结溶杆菌0.5份、蟹粉0.5份、虾粉0.5份、胶原蛋白0.05份、NaCl 0.05份、氨基酸10份、碳水化合物20份、复合肥10份。

枯草芽孢杆菌0.5份、胶冻样芽胞杆菌1.0份、蜡状芽孢杆菌0.5份、蟹粉0.5份、虾粉0.5份、胶原蛋白0.05份、NaCl 0.05份、氨基酸10份、碳水化合物20份、复合肥10份。

氨基酸(amino acid)是重要的营养物质，本发明所用复合氨基酸的主要成分为含甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等。其来源不限制，可以是动物或者植物酸解、碱解制得，也可以是微生物发酵制得。一些实施例中，氨基酸来自菜叶发酵物、大豆发酵物、大豆蛋白提取物或角蛋白提取物。一些具体实施例中，所述复合氨基酸中还包括硫酸锌和硼酸，其中每100g氨基酸中添加硫酸锌20g～40g和硼酸5g～20g。

碳水化合物(carbohydrate)为能量物质，本发明中，碳水化合物选自葡萄糖、果糖或蔗糖。

本发明中，复合肥中N、P、K的质量比为(10～20)：(10～20)：(10～20)。

其中N、P、K均为水溶性的组分存在，如：NO^3-、NH⁴⁺、PO^3-、PO₄ ^3-、HPO₄ ^2-、H₂PO₄ ^-、P₆O₁₈ ^6-、P₂O₇ ^4-、K⁺。

一些实施例中，复合肥氮磷钾的存在形式为NH₄NO₃/K₂HPO₄/KH₂PO₄，N/P/K＝15/15/15、N/P/K＝15/15/17或N/P/K＝15/15/20。

本发明对虾蟹壳的来源不限制，可以是江河湖海任意来源的富含几丁质的水生动物外壳，也可包含肉质，本发明中所述虾蟹壳为干燥品经粉碎后过20目～100目筛的细颗粒粉末。优选为虾壳粉、蟹壳粉或虾蟹粉。

本发明中，胶原蛋白为动物皮粉碎或提取的粉末，其中胶原的含量为30％～65％。一些实施例中，胶原蛋白为猪皮胶原蛋白。另一些实施例中，胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白。另一些实施例中，胶原蛋白为牛皮胶原蛋白。

本发明提供的微生物制剂的制备方法，包括：

步骤1：将菌种、虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠与水混合，进行第一发酵，制得培养液；

步骤2：氨基酸、碳水化合物、复合肥与培养液混合，进行第二发酵，制得微生物制剂。

本发明中，第一发酵的温度为25℃～35℃；时间为3天～5天；条件为鼓泡通气；第二发酵的温度为25℃～35℃；时间为3天～5天；条件为鼓泡通气。

一些实施例中，第一发酵的温度为28℃～32℃；时间为3天；条件为鼓泡通气；第二发酵的温度为28℃～32℃；时间为3天；条件为鼓泡通气。

发酵液pH维持在6.6～7.0。优选为7.0。

鼓气速率20L/min，溶氧量为20％。

本发明中，步骤1中与水混合后，菌种的质量分数为0.1‰～1‰；虾蟹壳的质量分数为0.1‰～10‰；胶原蛋白的质量分数为0.01‰～1‰；氯化钠的质量分数为0.01‰～9‰；

步骤2中与培养液混合后，氨基酸的质量分数为1‰～50‰；碳水化合物的质量分数为1‰～20‰；复合肥的质量分数为1‰～10‰。

步骤1中所述水为生活用水。

本发明提供的微生物菌剂可以单独作为微生物菌剂使用，也可进一步稀释或复配天然表面活性剂后制成微生物菌剂。本发明提供的微生物菌剂包括本发明提供的微生物制剂与表面活性剂。一些实施例中，微生物菌剂包括微生物制剂1份；表面活性剂0.001份～0.02份；水1份～10份。

在菌剂中添加表面活性剂，能够促进有效物质极大程度地扩散渗透到作物根部土壤周围，为其补充中微量元素，恢复土壤肥力并兼顾杀灭致病微生物。其中，无患子提取液中含有大量的皂苷，是纯天然非离子表面活性剂。皂角提取液中含有皂角活性剂，属非离子表面活性剂。甜菜碱为代谢的次生产物，是两性表面活性剂的主要类型。以这些天然提取物作为表面活性剂，能够进一步的减少化学表面活性剂对土壤造成的损伤。本发明实施例中，表面活性剂选自无患子提取液或甜菜碱。表面活性剂的加入还可以抑制真菌孢子移动与萌发作用。

本发明所述无患子提取液为经水提得到，其制备方法为：将无患子假种皮烘干粉碎，加水提取，60℃回流2小时，提取3次，过滤，将多次过滤后的提取液混合均匀后进行浓缩，获得浓缩后的所述无患子提取液。提取液与原料质量比为4:1。

本发明提供的微生物制剂在抑制植物病原菌、防治植物病害中的应用。

所述植物为香蕉、枸杞和玫瑰；所述植物病原菌为真菌性病原菌；所述植物病害为根腐病、巴拿马病。

一些实施例中，真菌性病原菌为尖孢镰刀菌和腐皮镰刀菌。

培养基中进行抑菌试验的结果表明，本发明提供的微生物菌剂对尖孢镰刀菌和腐皮镰刀菌起到良好的抑制作用，在含有微生物菌剂的培养基上，病原菌菌落直径皆有显著的缩小(p<0.05)。

本发明还提供了一种抑制植物病原菌和/或防治植物病害的方法，给予本发明提供的微生物菌剂。

一些实施例中，给予微生物菌剂的方式为喷施、涂抹、浸润、灌根。或者将微生物菌剂吸附于填充剂进行撒播。所述填充剂选自硅藻土、珍珠岩、赤玉土或泥炭土。

喷施的量为100L/亩～400L/亩；喷施间隔为7天～30天。

灌根的量为200L/亩～500L/亩，喷施间隔为7天～30天。

喷施、涂抹、浸润、灌根采用的剂型皆为由微生物制剂、表面活性剂和水组成。

本发明提供了一种微生物制剂及其制备方法与应用，该微生物制剂采用胶冻样芽孢杆菌发酵制得，发酵的培养液中虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、氨基酸、碳水化合物和复合肥，从而使得该制剂不仅能够起到抑制有害菌的作用，本发明实施例对患有根腐病的玫瑰和枸杞，患有巴拿马病的香蕉进行喷施和根灌，结果表明，本发明提供的微生物菌剂能够对玫瑰和枸杞的根腐病起到良好的防治作用，其防效可达85.3％和69.0％对香蕉的枯萎病起到良好的防治作用，其防效可达85.0％。

具体实施方式

本发明提供了一种微生物制剂及其制备方法与在防治植物病害中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材、仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

胶冻样芽孢杆菌0.1kg、虾粉10kg、胶原蛋白0.01kg、NaCl 9kg、氨基酸1kg、碳水化合物20kg、复合肥1kg。

其中，胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白；氨基酸为大豆蛋白提取复合氨基酸，每100g氨基酸添加硫酸锌20g、硼酸5g；碳水化合物为蔗糖、复合肥中N/P/K＝15/15/15。

水1000L，加入菌种、虾壳粉、胶原蛋白、NaCl鼓泡通气进行培养，培养温度保持在30℃，培养时间为3天；

在一次培养的基础上，加入氨基酸、碳水化合物、复合肥，继续鼓泡通气进行培养，培养温度保持在30℃，培养时间为4天，即得微生物制剂。

实施例2

胶冻样芽孢杆菌1kg、蟹粉0.1kg、胶原蛋白1kg、NaCl 0.01kg、氨基酸50kg、碳水化合物1kg、复合肥10kg。

其中，胶原蛋白为猪皮胶原蛋白，氨基酸为角蛋白提取复合氨基酸，每100g氨基酸添加硫酸锌40g、硼酸20g，碳水化合物为果糖、复合肥中N/P/K＝15/15/15。

水1000L，加入菌种、蟹粉、胶原蛋白、NaCl鼓泡通气进行培养，培养温度保持在28℃，培养时间为4天；

在一次培养的基础上，加入氨基酸、碳水化合物、复合肥，继续鼓泡通气进行培养，培养温度保持在32℃，培养时间为3天，即得微生物制剂。

实施例3

枯草芽孢杆菌2.0kg、胶冻样芽胞杆菌0.5kg、胶状溶杆菌1.0kg、蟹粉0.5kg、虾粉0.5kg、胶原蛋白0.05kg、NaCl 0.05kg、氨基酸10kg、碳水化合物20kg、复合肥10kg。

其中，胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白，氨基酸为菜叶发酵物，每100g氨基酸添加硫酸锌40g、硼酸5g，碳水化合物为蔗糖、复合肥中N/P/K＝15/15/15。

实施例4

枯草芽孢杆菌0.5kg、胶冻样芽胞杆菌0.5kg、蜡状芽孢杆菌0.5kg、胶状溶杆菌0.5kg、凝结溶杆菌0.5kg、蟹粉0.5kg、虾粉0.5kg、胶原蛋白0.05kg、NaCl 0.05kg、氨基酸10kg、碳水化合物20kg、复合肥10kg。

其中，胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白，氨基酸为菜叶发酵物，每100g氨基酸添加硫酸锌30g、硼酸12g，碳水化合物为葡萄糖、复合肥中N/P/K＝15/15/20。

水1000L，加入菌种、蟹粉、胶原蛋白、NaCl鼓泡通气进行培养，培养温度保持在32℃，培养时间为4天；

在一次培养的基础上，加入氨基酸、碳水化合物、复合肥，继续鼓泡通气进行培养，培养温度保持在28℃，培养时间为4天，即得微生物制剂。

实施例5

枯草芽孢杆菌0.5kg、胶冻样芽胞杆菌1.0kg、蜡状芽孢杆菌0.5kg、蟹粉0.5kg、虾粉0.5kg、胶原蛋白0.05kg、NaCl 0.05kg、氨基酸10kg、碳水化合物20kg、复合肥10kg。

其中，胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白，氨基酸为菜叶发酵物，每100g氨基酸添加硫酸锌20g、硼酸20g，碳水化合物为葡萄糖、复合肥中N/P/K＝15/15/20。

实施例6

各实施例制得生物制剂，经检测，菌种密度如表1：

表1各实施例菌种密度

	菌种密度(cfu/ml)
		实施例1	4.3×10¹¹
实施例2	1.7×10¹¹
		实施例3	1.6×10¹²
实施例4	5.2×10¹¹
		实施例5	2.3×10¹²

结果表明，本发明各实施例中提供的微生物制剂具有非常高的菌体密度。

实施例7

病原菌分别为尖孢镰刀菌悬液、胶孢炭疽菌，由CGMCC购得，用LB培养基(蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10g，蒸馏水1000ml)28℃、150rpm震荡培养2d，用无菌水稀释至10⁶cfu/ml，备用。

培养基为马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基和大豆酪蛋白琼脂(TSA)培养基。PDA培养基的组成为200g马铃薯、20g葡萄糖、20g琼脂、1L水、pH＝6.5。TSA培养基的组成为15g酪蛋白胰酶消化物，5g大豆粉木瓜蛋白酶消化物，5g氯化钠，15g琼脂，1L水，pH＝7.3。

试验方法为：

将实施例1～5中得到的微生物制剂，用无菌水稀释至其中芽孢杆菌的含量为1×10⁸cfu/ml，备用。

平板涂布：吸取经稀释的微生物制剂5μL，分别点接在PDA和TSA培养基中央，28℃培养48h后分别用胶孢镰刀菌悬液、蔷薇盘二孢菌、胶孢炭疽菌稀释液喷雾，28℃培养过夜，调查抑菌圈直径。每处理重复3次，取平均值。设点接清水的对照。

观察各皿中致病菌的生长情况，测定致病菌菌落直径，并计算各芽孢杆菌对致病菌的抑制率。结果如表2：

表2抑菌实验结果(菌落平均直径/mm)

结果显示，对照组均无抑菌圈，实验组所有抑菌圈均大于18mm，说明抑菌效果显著(p<0.05)，各实施例提供的微生物制剂皆表现出高度抑菌作用。其中，实施例3～5所得微生物制剂的抑菌效果显著优于实施例1和实施例2，说明胶冻样芽孢杆菌与其他细菌配合产生了增效协同作用，从而使对病原菌的抑制作用得到了显著提高(p<0.05)。

实施例8～12

配方如表3：

表3微生物菌剂组分

	微生物制剂	水	表面活性剂
				实施例8	实施例1制剂1kg	10kg	皂角提取液11g
实施例9	实施例2制剂1kg	1kg	甜菜碱1g
				实施例10	实施例3制剂1kg	5kg	无患子提取液15g
实施例11	实施例4制剂1kg	3kg	无患子提取液10g
				实施例12	实施例5制剂1kg	8kg	无患子提取液20g

微生物制剂稀释1～10倍后，与表面活性剂混合，制得微生物菌剂。

实施例13

检测实施例1～5和8～12的微生物菌剂防治玫瑰根腐病效果：

实验地点：孟州市温室大棚

花卉表面喷雾接种实施例1～5和8～12制得的微生物菌剂至水珠流动为止，置于培养箱中，25℃保湿24h。次日，用无菌牙签在根部扎1mm深的孔，接种6ml胶孢镰刀菌菌块(10⁵/ml)至伤口部位。接种后将花卉植株置于25℃，90％湿度，4天后观察发病百分比并测量病斑直径。试验设不接种病原菌和只接种病原菌对照处理组，每个处理组接种15棵植株。

防治效果(％)＝[(对照叶片病斑直径-处理叶片病斑直径)/对照叶片病斑直径]×100％

下表为各处理组光照培养箱防治根腐病效果：

表4微生物菌剂对根腐病的防效

处理	病斑大小(mm)	防效(％)
			清水对照	100	0.00
实施例1	30.7	69.30
			实施例2	24.3	75.70
实施例3	19.5	80.50
			实施例4	20.5	79.50
实施例5	18.7	81.30
			实施例8	20.3	79.70
实施例9	19.5	80.50
			实施例10	16.5	83.50
实施例11	14.7	85.30
			实施例12	15.3	84.70

结果表明，给予本发明提供的微生物菌剂能够防治根腐病。相对于给予实施例1～5提供的微生物制剂，给予实施例8～12提供的菌剂的效果更佳(p<0.05)，说明表面活性剂的添加对效果的提高起到了重要的作用。以多种菌共同发酵制备的菌剂的效果皆显著高于(p<0.05)单独使用胶冻样芽孢杆菌发酵制得的产品，说明菌种复配起到了良好的增效协同作用，从而对作物病害情况得到明显的防治作用。

实施例14

选取广东茂名一香蕉地作为实验地，检测实施例1～5和8～12的微生物微生物菌剂防治香蕉枯萎病的效果。

任意选取220株患病的香蕉树，随机分为11组，每组20株香蕉树。其中，10组作为实验组，分别灌根、喷洒叶面实施例1～5和8～12的微生物菌剂，另一组作为对照组，给予等量清水。

所述喷洒每15天喷一次，剂量为100L/亩。

所述灌根与喷洒同时进行，剂量为200L/亩。

如此进行4个月的巴拿马病防治实验，结果如下表所示：

防效＝减轻数量/给药前病株数

表5微生物药肥对巴拿马病防治效果

结果表明，给予本发明提供的微生物菌剂能够防治香蕉巴拿马病。相对于给予实施例1～5提供的微生物制剂，给予实施例8～12提供的菌剂的效果更佳(p<0.05)，说明表面活性剂的添加对效果的提高起到了重要的作用。以多种菌共同发酵制备的菌剂的效果皆显著高于(p<0.05)单独使用胶冻样芽孢杆菌发酵制得的产品，说明菌种复配起到了良好的增效协同作用，从而对香蕉巴拿马病得到明显的防治作用。

实施例15

检测实施例1～5和8～12的微生物药肥对枸杞根腐病的防治效果。

在宁夏中宁县选择严重度中等的病株，随机分为11组，每组宁夏枸杞100株，其中10组灌根给予实施例1～5和8～12制得的微生物药肥，另设灌根给予清水的对照组。

灌根剂量为500L/亩，灌根4 0天后调查防治效果，

防效＝(试验组恢复数-对照组恢复数)/对照组恢复数×100％

结果如下表：

表6微生物药肥对枸杞根腐病防效测定

处理	株数	恢复	防效
				清水对照	100	58	--
实施例1	100	92	58.6％
				实施例2	100	91	56.9％
实施例3	100	94	62.1％
				实施例4	100	95	63.8％
实施例5	100	95	63.8％
				实施例8	100	93	60.3％
实施例9	100	93	60.3％
				实施例10	100	97	67.2％
实施例11	100	98	69.0％
				实施例12	100	96	65.5％

结果表明，给予本发明提供的微生物菌剂能够防治枸杞根腐病。相对于给予实施例1～5提供的微生物制剂，给予实施例8～12提供的菌剂的效果更佳(p<0.05)，说明表面活性剂的添加对效果的提高起到了重要的作用。以多种菌共同发酵制备的菌剂的效果皆显著高于(p<0.05)单独使用胶冻样芽孢杆菌发酵制得的产品，说明菌种复配起到了良好的增效协同作用，从而对作物病害情况得到明显的防治作用。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种微生物制剂，其特征在于，由菌种、虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、复合氨基酸、碳水化合物和复合肥制得；

所述菌种包括胶冻样芽孢杆菌；

所述菌种、虾蟹壳、胶原蛋白、氯化钠、氨基酸、碳水化合物、复合肥的质量比为(0.1～1)：(0.1～10)：(0.01～1)：(0.01～9)：(1～50)：(1～20)：(1～10)。

2.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述菌种还包括枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、胶状溶杆菌和凝结溶杆菌；所述胶冻样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、胶状溶杆菌和凝结溶杆菌的数量比为(0.5～5)：(0.5～5)：(0.5～5)：(0.5～5)：(0.5～5)。

3.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述复合氨基酸中还包括硫酸锌和硼酸，其中每100g氨基酸中添加硫酸锌20g～40g和硼酸5g～20g。

4.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述碳水化合物选自葡萄糖、果糖或蔗糖。

5.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述复合肥中N、P、K的质量比为(10～20)：(10～20)：(10～20)。

6.权利要求1～5任一项所述的微生物制剂的制备方法，其特征在于，包括：

步骤2：复合氨基酸、碳水化合物、复合肥与所述培养液混合，进行第二发酵，制得微生物制剂；

所述第一发酵的温度为25℃～35℃；时间为3天～5天；条件为鼓泡通气；

所述第二发酵的温度为25℃～35℃；时间为3天～5天；条件为鼓泡通气。

7.权利要求1～5任一项所述的微生物制剂在抑制植物病原菌、防治植物病害中的应用。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物为玫瑰、枸杞或香蕉；所述植物病原菌为真菌性病原菌；所述植物病害为根腐病或巴拿马病。

9.一种微生物菌剂，其特征在于，包括以下体积份的：

权利要求1～5任一项所述的微生物制剂1份；

面活性剂0.001份～0.02份；

水1份～10份。

10.一种抑制植物病原菌和/或防治植物病害的方法，其特征在于，给予植物权利要求7所述的微生物菌剂；所述给予的剂量为100L/亩～500L/亩。