CN104642402A - 一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药及其制备和使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药及其制备和使用方法，由苦参、华南云实和洋常春藤配制而成，将苦参、华南云实和洋常春藤晒干后切成颗粒进行筛选，用有机溶剂进行回流提取，再进行稀释得到提取农药水溶液，然后在藏红花的幼苗期、开花期，对藏红花的叶、球茎进行多次喷洒，即可有效治疗藏红花球茎腐烂病情。本发明提取农药对藏红花球茎腐烂病的防效高达92.7％及92.4％，可有效缓解藏红花球茎腐烂病病情，而且本发明提取农药从天然植物中提取，对藏红花不存在农药残留问题，因此可以减少对环境的污染，安全性高，且成本低。

Description

一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药及其制备和使用方法

技术领域

本发明涉及植物病害防治领域，具体是一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药及其制备和使用方法。

背景技术

藏红花原产于南欧以及伊朗等地，在我国上海、浙江、江苏、山东、北京等地也有栽培。藏红花的柱头是其主要药用部分，具有活血化疲、凉血解毒、解郁安神之功效，可抑制肝炎病毒，提高免疫力，并具抗癌活性，被称为“植物黄金”。此外，藏红花还可作为珍贵的调味剂、天然色素、香料及染料使用。

由于农田生态途径的变化和植物病害抗药性增强，近年来藏红花球茎腐烂病已是藏红花生产上最严重的病害，在藏红花球茎储存期到第二年新球茎膨大期，球茎腐烂病发生都较严重，尤其是连作，病球率一般高达30～70%。一般情况下，藏红花病球率在30%左右，当贮藏不当或当年梅雨发生期长，其病球率可高达50%以上，球茎一旦感病，几乎整个球茎全部发生腐烂，不能开花与繁殖，严重影响藏红花的产量、品质以及藏红花扩大再生产种球来源。

现有文献报道，依据病原菌的形态学特征鉴定表明，藏红花球茎腐烂病主要由尖孢镰刀菌、炭疽菌引起，但随着新菌种的发现及菌种随着生态环境的协同进化，很多种属间的形态、生理生化特征趋于相似，仅依靠常规的形态学特征难以准确鉴别病原菌的种类。而目前用于防治藏红花球茎腐烂病的药剂主要是针对尖孢镰刀菌、炭疽菌而设计的，有多菌灵、百菌清、恶霉灵、敌克松及代森锰锌等，这些化学农药普遍存在杀菌具有局限性，用药量大、防治效果差等问题，不能有效缓解藏红花球茎腐烂病病情；而且人量频繁使用容易导致病原菌产生抗药性，导致防治效果逐年下降，同时大量频繁使用会造成防治成本过高，对环境也产生极大的危害，造成了环境污染和生态环境的日趋破坏。

苦参，豆科苦参属的植物，其根中含有多种生物碱、多种黄酮类化合物以及三萜皂甙及醌类化合物。这些化合物不仅对座疮杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等病菌有一只作用，而且对一些生物病菌也有很好的抑制作用，是一种低毒、低残留、环保型农药。

华南云实，豆科云实属的植物，含有大量的二萜和高异黄酮等化合物，其根、茎及果实可做药用，有发表散寒、活血通经、解毒杀虫之效，而且还具有消毒灭菌的作用。

洋常春藤，又名常春藤、长春藤，属五加科，果实、种子和叶子均有毒，含有大量的皂碱体，对部分真菌具有很好的抑制作用。

本发明的发明人经过大量的实验发现，苦参、华南云实和洋常春藤的共同提取物对藏红花球茎腐烂有很好的抑制作用，对于藏红花的培养基生产具有积极意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药及其制备和使用方法，以提高藏红花球茎腐烂病的防治效果，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明采用rDNA-ITS及16SRNA序列分析和传统的形态学研究相结合的方法对藏红花球茎腐烂病的病原菌进行了鉴定。从腐烂的球茎中分离纯化出11种细菌和真菌，通过回接鉴定法最后确定3种真菌，即尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌，以及3种细菌，即粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌，都具有明显的致病性。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药，由以下重量份的原料药材配制而成：苦参10～20份、华南云实20～40份、洋常春藤20～40份。

一种用于藏红花球茎腐烂病的农药的制备方法，具体制备步骤如下：（1）将苦参、华南云实和洋常春藤晒干后切成颗粒，并过50～70目筛；（2）按照料液比1：（6～8）g/ml加入体积分数为95％的乙醇并混合均匀；（3）将混合物在78～82℃下回流两次，合并滤液得提取液；（4）在提取液中加入助剂和水进行稀释得到水溶液。

作为本发明进一步的方案：步骤（4）中的助剂为抗冻剂、乳化剂、分散剂中的至少一种。

作为本发明再进一步的方案：步骤（4）中提取液的稀释浓度为400～500ppm。

一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药的使用方法，首先，在藏红花的幼苗期至开花期，对藏红花的的叶和茎喷施至少一次提取农药水溶液；其次，在藏红花的开花期，对藏红花的叶和球茎喷施至少两次提取农药水溶液；最后，在藏红花的球茎发育期，对藏红花的叶和球茎喷施至少五次提取农药水溶液，即可防治藏红花球茎腐烂病。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明提取农药对藏红花球茎储存期球茎腐烂病及田间栽培期球茎腐烂病的防效高达92.7％及92.4％，与现有用于防治藏红花球茎腐烂病的化学药剂相比，防治效果大幅度提高，可有效缓解藏红花球茎腐烂病病情；

2、本发明提取农药从天然植物中提取，对藏红花不存在农药残留问题，因此可以减少对环境的污染，安全性高，且成本低。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药，由以下重量份的原料药材配制而成：苦参10份、华南云实20份、洋常春藤20份。

用于藏红花球茎腐烂病的农药的制备方法，具体制备步骤如下：（1）将苦参、华南云实和洋常春藤晒干后切成颗粒，并过60目筛；（2）按照料液比1：6g/ml加入体积分数为95％的乙醇并混合均匀；（3）将混合物在80℃下回流两次，合并滤液得提取液；（4）在提取液中加入助剂和水进行稀释得到浓度为500ppm水溶液，其中，助剂为抗冻剂和分散剂。

实施例2

一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药，由以下重量份的原料药材配制而成：苦参20份、华南云实20份、洋常春藤20份。

用于藏红花球茎腐烂病的农药的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：（1）将苦参、华南云实和洋常春藤晒干后切成颗粒，并过60目筛；（2）按照料液比1：8g/ml加入体积分数为95％的乙醇并混合均匀；（3）将混合物在80℃下回流两次，合并滤液得提取液；（4）在提取液中加入助剂和水进行稀释得到浓度为500ppm水溶液，其中助剂为抗冻剂、乳化剂和分散剂。

其中，抗冻剂是甘油、丙二醇、乙二醇、氯化钠、氯化钙、山梨醇中的至少一种。 

其中，乳化剂可以采用非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂中的至少一种，非离子表面活性剂是脂肪酸聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚、蓖麻油环氧乙烷加成物及其衍生物等中的至少一种；阴离子表面活性剂为十二烷基苯磺酸钙、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯中的至少一种。

其中，分散剂是十二烷基硫酸钠、甲基戊醇、纤维素衍生物、聚丙烯酰胺、脂肪酸聚乙二醇酯中的至少一种。

用于防治藏红花球茎腐烂病的农药的使用方法，首先，在藏红花的幼苗期至开花期，对藏红花的的叶和茎喷施至少一次提取农药水溶液；其次，在藏红花的开花期，对藏红花的叶和球茎喷施至少两次提取农药水溶液；最后，在藏红花的球茎发育期，对藏红花的叶和球茎喷施至少五次提取农药水溶液，即可防治藏红花球茎腐烂病。

实施例3：实验室抑菌试验

本实施例采用室内管碟法分别测定提取农药水溶液对藏红花球茎腐烂病病原细菌(粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌)及真菌(尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌)的抑菌率。

（1）藏红花球茎腐烂病病原细菌的抑菌实验

在超净工作台上配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，水1000mL，自然pH，121℃、高压蒸汽灭菌)，然后在PDA培养基凝固前加入浓度为500ppm提取农药水溶液并混合均匀；将粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌的菌种分别活化后，分别挑取适量单菌落菌体用无菌生理盐水配制成含菌量为10⁶CFU/mL的三种菌悬液备用。

实验组：将PDA培养基形成3实验组，每个实验组设置3个平行组，分别对粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌进行抑菌实验，各实验组均取20mL相应的含提取农药水溶液的PDA培养基平铺在直径为9cm的培养皿中，然后分别吸取150uL相应的菌悬液均匀涂布于在PDA培养基上，继后将涂覆菌悬液后的各培养皿放入恒温培养箱中，于28℃培养2天，培养时间届满后取出，数单菌落数，并计算抑菌率。

对照组：对照组为三个，分别对粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、杓兰欧文菌进行抑菌实验，每个对照组设置3个平行组，对照组的培养基为不含提取农药水溶液的PDA培养基，加入与提取农药水溶液等重量的无菌水，其他条件及操作方法同实验组。

抑菌率=[(对照组菌落平均数-实验组菌落平均数)/对照组菌落平均数]×l00%

（1）藏红花球茎腐烂病病原真菌的抑菌实验

在28℃的恒温培养箱中、PDA培养基上分别培养尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌三种真菌，待各真菌菌落生长至直径为5cm左右时，分别取出所述培养基，在超净工作台上用无菌打孔器分别在距各菌落边缘3～4mm处的同心圆上取直径d=6.0mm的菌饼，每种真菌制备18个菌饼。

实验组：用500ppm的提取农药水溶液形成三个实验组，分别对尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌进行抑菌实验，每个实验组设置3个平行组。

每个实验组的操作：取20mL PDA培养基平铺在直径为9cm的培养皿中，把菌饼翻面接种在培养皿的中心位置，使菌丝接触到PDA培养基，然后在菌饼的四周等距离对称放置4个牛津杯，向各牛津杯中分别注入0. 1mL提取农药水溶液，然后将前述接种了真菌菌种的培养皿放入恒温培养箱中，于28℃的培养5天，培养时间届满后取出，以十字交叉法测量菌落直径，计算抑菌率。

对照组：对照组为三个，分别对尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌进行抑菌实验，每个对照组设置3个平行组，各对照组的操作与实验组基木相同，与实验组不同之处是:向菌饼四周等距离对称放置的4个牛津杯中分别注入0.1mL无菌水。

菌落直径(mm)=菌落直径平均值-6.0

抑菌率=[(对照组菌落直径一实验组菌落直径)/对照组菌落直径]×100%

各实验组、对照组对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率如表1所示。

表1  提取农药水溶液对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率

上述实施例表明：本发明提取农药水溶液对藏红花球茎腐烂病的致病菌的杀菌抑制效果具有明显作用，而且对粘质沙雷菌、杓兰欧文菌和木霉属真菌的抑制效果明显高于对悬钩子沙雷菌、尖孢镰刀菌和丛赤壳菌的抑制效果。

实施例4：田间试验

参照中华人民共和国标准：农药田间药效试验准则（GB/T 17980.28-2000），在中国西藏省山南地区桑日县进行田间试验。

（1）藏红花球茎储存期的防效

在藏红花球茎收获期随机选取质量为20 g且无病害的藏红花球茎180个，用浓度为500ppm的提取农药水溶液形成3个实验组，每个实验组设置3个平行组，用自来水形成一个对照组，对照组设置3个平行组，各实验组和对照组均对10个藏红花球茎进行处理。

实验组：将各实验组的藏红花球茎分别用提取农药水溶液浸泡15 min，然后室内摊晾上架，上架后采用常规管理至大田培育下种期之前，常规管理时注意通风，保持室内温度为23℃～28℃、相对湿度为70%～80%，7、8两个月遮光，从9月开始逐渐加大光照强度至1000~2000勒克斯，光照时间8h/d。

对照组：对照组用相同体积的自来水对藏红花球茎浸泡15min，其他条件及操作方法同实验组。

在下种前对各实验组和对照组的藏红花球茎进行逐株调查，球茎部分腐烂至完全腐烂留下空壳者均计为病球，统计病球数量，计算提取农药水溶液和自来水对藏红花球茎室内储存期腐烂病防治效果。

（2）田间栽培期的防效

实验组：在大田培育下种期到来时，用提取农药水溶液浸泡无病害的藏红花球茎若干，浸泡时间20 min，浸泡后及时下种；共设3个试验区，每个试验区面积为100m²，对浸泡后的藏红花球茎进行田间栽培实验。下种后在各试验区采用基本一致的田间栽培管理措施（种植密度行间距20cm，种植深度为2.5倍球茎高度，栽种后随即浇灌透水，及时松土除草，春天需保持土壤湿润，防止干旱，同时注意排水，以防止烂根烂球）。

对照组：对照组用自来水浸泡无病害的藏红花球茎若干，浸泡时间20 min，浸泡后及时下种，栽培面积和田间栽培管理措施同实验组。

在下种生长满3个月和4个月时对各实验组和对照组喷洒四次浓度为500ppm的提取农药水溶液，喷洒药液的时间间隔相等，在第五个月时对各实验组和对照组采用对角线5点取样法每点抽取100株进行全株调查，将叶鞘基部为红褐色、叶尖或叶片发黄以及球茎腐烂者均记为病球，统计病球数量，计算提取农药水溶液对藏红花田间栽培期球茎腐烂病的防治效果。

防效（%）=[（对照组平均病球率-处理组平均病球率）/对照组平均病球率] ×100%

本实施例的结果如表2所示。

表2 提取农药水溶液对藏红花球茎储存期及田间栽培期球茎腐烂病的防治效果

由表2可知，藏红花球茎在经过提取农药水溶液处理后，球茎储存期和田间栽培期的病球率均较对照组明显降低，说明本发明提取农药对藏红花球茎腐烂病具有良好的防治效果，由于该提取农药从天然原料药中提取，因此对藏红花物任何化学危害，种植安全性高。

Claims (5)

1.一种用于藏红花球茎腐烂病的农药，其特征在于，由以下重量份的原料药材配制而成：苦参10～20份、华南云实20～40份、洋常春藤20～40份。

2.一种如权利要求1所述的用于藏红花球茎腐烂病的农药的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：（1）将苦参、华南云实和洋常春藤晒干后切成颗粒，并过50～70目筛；（2）按照料液比1：（6～8）g/ml加入体积分数为95％的乙醇并混合均匀；（3）将混合物在78～82℃下回流两次，合并滤液得提取液；（4）在提取液中加入助剂和水进行稀释得到水溶液。

3.根据权利要求2所述的用于藏红花球茎腐烂病的农药的制备方法，其特征在于，步骤（4）中的助剂为抗冻剂、乳化剂、分散剂中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的用于藏红花球茎腐烂病的农药的制备方法，其特征在于，步骤（4）中提取液的稀释浓度为400～500ppm。

5.一种如权利要求2或4所述的用于防治藏红花球茎腐烂病的农药的使用方法，其特征在于，首先，在藏红花的幼苗期至开花期，对藏红花的的叶和茎喷施至少一次提取农药水溶液；其次，在藏红花的开花期，对藏红花的叶和球茎喷施至少两次提取农药水溶液；最后，在藏红花的球茎发育期，对藏红花的叶和球茎喷施至少五次提取农药水溶液，即可防治藏红花球茎腐烂病。