CN102864110B - 绛红褐链霉菌sp3菌株及其在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了绛红褐链霉菌SP3菌株，保藏编号为CGMCC NO.6383，分类命名为绛红褐链霉菌Streptomyces purpeofuscus。本发明筛选的生防菌绛红褐链霉菌SP3新菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对土传病害有特效，不仅能避免化学药物（农药、化肥）所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及的是一种绛红褐链霉菌SP3菌株及其在红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用。
背景技术
红豆杉是第四纪冰川孑遗植物，被称为植物王国里的“活化石”，因其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护。它是我国一级保护珍稀树种，是集药用、观赏、绿化、特种优质用材为一体的珍贵树种，其根、茎、叶可提取加工成全球紧俏的高新技术产品抗癌新药——紫杉醇。其体内提取的紫杉醇是目前世界上最好的抗癌药物之一，在资源植物中具有较突出的地位。由于天然红豆杉资源极其有限，且为国家保护的珍稀树种，所以人工种植红豆杉成为提取紫杉醇的主要来源。此外，红豆杉的树形美丽，果实成熟后红绿相映的颜色搭配令人陶醉，广泛应用于水土保持及园艺观赏林。房前屋后、道路两旁也适宜种植，是改善生态环境和建设秀美山川的优良树种。红豆杉在园林绿化、室内盆景方面也有十分广阔的发展前景。
红豆杉在生长过程中易发生根腐病，植株最直观的表现就是根茎腐烂。在南方红豆杉上，此病在植株根、茎上都有发生，属于软腐中的根腐和茎腐。地上部份是慢慢失水黄化枯死而不倒伏，也称为立枯。一般表现为霉状物，但在病部很难发现霉状物。主根病斑是水渍状小斑点，表面软腐；侧根发病后褐变而腐烂。红豆杉根腐病发生后，植物生长缓慢，易死亡，有关这方面研究都还尚少。因此，对于红豆杉根腐病的防治和促生方法也还处于发展探索当中，，一般以化学农药、化学肥料为主，但由于长时期施用化学农药（肥料）易污染环境，破坏生态。
发明内容
本发明的绛红褐链霉菌SP3菌株于2009年7月10日采用采用平板稀释法分离于四川洪雅县红豆杉根际经鉴定为绛红褐链霉菌，经抗菌谱研究，该菌对红豆杉根腐病菌( Pythium sp. )抑菌率达到100%，已经于2012年7月19日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.6383，分类命名为绛红褐链霉菌Streptomyces purpeofuscus。
本发明筛选的生防菌绛红褐链霉菌SP3新菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对土传病害有特效，不仅能避免化学药物（农药、化肥）所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
实施例1 绛红褐链霉菌SP3液体制剂的发酵：
①一级斜面种子：常规方法制作改良高氏一号斜面培养基（KNO31g，KH2PO40.5g，MgSO4.7H2O 0.5g， NaCl0.5g，Fe2(S04)3.7H2O0.01g，可溶性淀粉20g，琼脂17g，水1000ml），接种SP3后在26-28℃下培养48小时制成一级斜面种子。
②二级液体种子：改良高氏一号培养液[KNO31g，KH2PO40.5g，MgSO4.7H2O 0.5g， NaCl0.5g，Fe2(S04)3.7H2O 0.01g，可溶性淀粉20g，红豆杉根浸渍液1000ml（制备方法：10克红豆杉根在1000毫升水中煮沸30分钟，保持水量1000毫升，过滤去除根残渣为红豆杉根浸渍液），pH7.2～7.4]经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例（通氧控制）装瓶，在无菌状态接种SP3斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，温度26-28℃，初始pH值6.0，120r/min振荡培养36h，制成SP3二级液体种子。
③液体发酵：培养液（葡萄糖 5g、甘油 5g、黄豆饼粉 3g、蛋白胨5g、NaCl 2.5g、CaCO2 2g、蒸馏水 1000mL）经高压灭菌后，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例（通氧控制）装瓶，在无菌状态接种上述SP3二级液体种子，108cfu/mL孢子悬浮液接种量为1%（体积比），温度26-28℃，初始pH值7.0，140r/min振荡培养96h，制成SP3液体制剂。平板法测定SP3对红豆杉根腐病菌( Pythium sp. )抑菌率达到100%以上。
（2）制剂保存：瓶装制剂常温保存半年（1%甘油）或低温（4度）1年半不影响防治和促生效果。
（3）灌根方式施用：
①预防处理：未发病红豆杉用上述液体制剂200-600倍稀释度(体积比)沿根系幅面灌根，每株100毫升，每年春季施用一次，可防病促生（地径增加）。
②防治处理：发病红豆杉按10-200倍体积比稀释度沿根系幅面灌根及附近土壤淋灌，每株200毫升，春、夏各一次，连续三年，可治病促生（高生长）。
实施例2
试验于2009年3月起在四川农业大学林木种质圃进行，红豆杉生长期间进行常规管理，并定期轮换花盆的位置。试验土壤采自四川省雅安市大兴镇林木育种基地，采样深度为0～20 cm，砂壤土。土壤理化性质经测定为：土壤pH 7.1，有机质含量 10.43 g/kg，全氮含量 0.80 g/kg，全磷含量 0.34 g/kg，有效磷含量 4.50 mg/kg。样土风干后过1 mm筛，并与过1 mm筛的河沙以3：1（V:V）混合后用于盆栽试验。待红豆杉苗移栽成活后，分不同浓度沿根系幅面灌根上述液体菌剂100mL，重复6次，以每盆灌注培养液（不含菌）100 mL对照。每年生长停止后统计发病率和测定地径，结果见表1
表1 绛红褐链霉菌SP3 灌根方式生防和促生功能参数：红豆杉（盆栽）
| 制剂浓度 | 发病率% | 促生效果%（地径） |
| 原液 | 0 | 24 |
| 稀释10倍 | 0 | 20 |
| 稀释100倍 | 0 | 18 |
| 稀释200倍 | 0 | 17 |
| 稀释400倍 | 0 | 16 |
| 稀释600倍 | 0 | 15 |
| 稀释800倍 | 2 | 10 |
| 稀释1000倍 | 5 | 5 |
| 未处理 | 17 | -- |
试验于2009年3月在四川省雅安市大兴镇林木育种基地进行。红豆杉自然发病，三年生。土壤理化性质为：pH 7.1，有机质含量 10.43g/kg，全氮含量 0.80 g/kg，全磷含量 0.34 g/kg，有效磷含量4.50 mg/kg。发病红豆杉按10-200倍稀释度沿根系幅面灌根及附近土壤淋灌，每株200毫升，春、夏各一次，连续三年，以灌注培养液（不含菌）200 mL对照，结果见表2：
表2 绛 红褐链霉菌SP3灌根方式促生参数：红豆杉（大田林地）
| 制剂浓度 | 发病率% | 相对治疗效果% | 促生效果%（高生长） |
| 原液 | 12 | 88 | 15 |
| 稀释10倍 | 15 | 85 | 12 |
| 稀释100倍 | 17 | 83 | 8 |
| 稀释200倍 | 18 | 82 | 5 |
| 稀释400倍 | 50 | 50 | 4 |
| 稀释600倍 | 70 | 30 | 3 |
| 稀释800倍 | 88 | 12 | 0 |
| 稀释1000倍 | 95 | 5 | 0 |
| 对照（自然发病） | 100 | ------- | -------- |
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
Claims (2)
1.绛红褐链霉菌SP3菌株，保藏编号为CGMCC NO.6383，分类命名为绛红褐链霉菌（Streptomyces purpeofuscus）。
2.根据权利要求1所述的绛红褐链霉菌SP3菌株在防治红豆杉土传根病和红豆杉促生上的应用。
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| 张丽娜等.绛红褐链霉菌YSSPG3 的发酵条件及其发酵滤液对杂交竹梢枯病的防治作用.《植物保护学报》.2012,第39卷(第3期),摘要部分. |
| 张丽娜等.绛红褐链霉菌YSSPG3 的鉴定及其抗菌蛋白纯化.《植物病理学报》.2012,第42卷(第3期),摘要部分. |
| 张曼等.红豆杉内生放线菌的分离及活性菌株的筛选与鉴定.《食品与生物技术学报》.2012,第31卷(第5期),摘要部分. |
| 红豆杉内生放线菌的分离及活性菌株的筛选与鉴定;张曼等;《食品与生物技术学报》;20120531;第31卷(第5期);摘要部分 * |
| 绛红褐链霉菌YSSPG3 的发酵条件及其发酵滤液对杂交竹梢枯病的防治作用;张丽娜等;《植物保护学报》;20120630;第39卷(第3期);摘要部分 * |
| 绛红褐链霉菌YSSPG3 的鉴定及其抗菌蛋白纯化;张丽娜等;《植物病理学报》;20120630;第42卷(第3期);摘要部分 * |
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