CN105331549B - 一株富铁产朊假丝酵母菌株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株富铁产朊假丝酵母菌株，该菌株为产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4‑0021，已于2015年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 2015611。本发明还公开了该产朊假丝酵母在制备富铁酵母产品中的应用。本发明的产朊假丝酵母菌株具有高浓度无机铁耐受性，在进行高生物量发酵的同时还具有较高转铁富铁能力。发酵生产富铁产品的原料来源广泛，而且酵母中有机铁含量高，其用于饲料添加安全无毒，对预防仔猪贫血及促生长作用均极明显，且改善了母猪的繁殖性能，提高了母猪初乳中铁含量，通过给母猪补铁间接给仔猪补铁，既避免仔猪应激，又利于环境保护。

Description

一株富铁产朊假丝酵母菌株及其应用

技术领域

本发明涉及一株富铁产朊假丝酵母菌株及其应用，属于微生物发酵工业技术领域。

背景技术

铁是人和动物维持生命和发育的必需营养物质，是构成血红素、肌红蛋白、细胞色素等的重要成分，参与体内氧的运送和组织呼吸过程以及一系列新陈代谢反应，并具有增强免疫的功能。膳食中铁的缺乏会引起贫血，免疫功能低下，并诱发多种疾病，例如贫血性心脏病、舌炎、口角炎及各种感染性疾病和癌症等。仔猪贫血症也是由于缺铁引起的一种以血红蛋白含量降低、红细胞数减少、皮肤粘膜苍白及生长受阻为特征的疾病，是严重危害周龄哺乳仔猪的一种微量元素缺乏症。

微量元素铁一般以无机盐形态补充，但由于铁离子对粘膜的刺激、胃肠道副作用较大且吸收率低等原因限制了其使用。研究低毒高效补铁剂一直是开发的方向。利用生物转化法，将无机状态的铁转化成有机状态的铁，可以提高生物体对铁的利用率，是开发新型铁源，提高铁的利用率的主要措施。

近年来，用微生物、特别是用酵母菌为载体富集人及动物所必需的微量元素以求有机形态、制造成本较低廉而富有多种营养的微量元素产品已引起人们的关注。富铁酵母是以酵母为载体，将无机铁转化为有机铁的发酵产品。已有实验表明，富铁酵母具有较高的生物利用率。食用富铁酵母安全性好，除含有高含量高吸收率的铁元素外，还可提供相当数量的蛋白、必需氨基酸及丰富的维生素、甘露寡糖及一些重要的营养辅助因子等。以高铁食用酵母作为强化食品及饲料的铁源是预防铁缺乏和缺铁性贫血的一项行之有效的措施。

现有的富铁酵母产品多是由随机得到的酵母菌种进行发酵生产富铁酵母，对酵母菌种缺少系统的筛选和育种过程。因此，酵母菌种的遗传稳定性差，不同酵母菌种对铁的抗性和富集效果差异较大，产品缺乏稳定性，不利于实现工业化生产。

产朊假丝酵母又名食用圆酵母，其蛋白质和维生素B的含量都比啤酒酵母高，在培养基中无需加入任何生长因子即可生长。目前，对于产朊假丝酵母的研究主要集中于其富硒、富含活性肽和乙硫氨酸抗性等方面，而对于产朊假丝酵母的富铁特性尚未见报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一株富铁产朊假丝酵母菌株及其应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一株富铁产朊假丝酵母菌株，其为产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021，已于2015年10月16日保藏于位于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 2015611。

上述产朊假丝酵母BLCC4-0021在生产富铁酵母产品中的应用也是本发明保护的范围。

本发明的另一目的是提供一种富铁酵母产品，其活性成分为上述产朊假丝酵母BLCC4-0021或其发酵产物。

本发明中所述的发酵产物是指以产朊假丝酵母为载体，将无机铁转化为有机铁的发酵产品，即富铁酵母。

上述富铁酵母产品中，所述产朊假丝酵母BLCC4-0021的发酵产物按照如下方法制备：在含无机铁的发酵培养基中发酵上述产朊假丝酵母BLCC4-0021，得到发酵产物。

所述含无机铁的发酵培养基中的无机铁选自硫酸亚铁、硝酸铁、三氯化铁、硫酸铁铵或硫酸铁；优选为硫酸亚铁。

所述无机铁在所述含无机铁的发酵培养基中的浓度为400-1200μg/mL；优选为400μg/mL。

上述方法中，发酵的温度为23～28℃，发酵的时间为20～24h，发酵培养基的初始pH为4.0～6.0。

上述方法中，在所述发酵前，还包括如下步骤：

将产朊假丝酵母BLCC4-0021的斜面种子接种在灭菌后的种子培养基中，在28-32℃摇床(180rpm)振荡培养14-18h，得到液体种子液。

所述种子培养基的组成为：酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，KH₂PO₄2g，蒸馏水1000mL。

上述的富铁酵母产品在作为饲料添加剂和/或食品营养强化剂中的应用也是本发明的保护范围。

本发明的第三个目的是提供一种预防保育猪缺铁性贫血的微生态制剂。

该微生态制剂是由产朊假丝酵母BLCC4-0021的发酵产物8-12份、硫酸亚铁8-12份、氯化钴0.04-0.08份、硫酸铜0.6-1.0份、VB₁₂0.2-0.4份、Vc 8-12份、柠檬酸8-12份、载体55-65份和乳酸菌复配而成；

复配后的微生态制剂中，乳酸菌的活菌数大于或等于10⁸cfu/g。

所述载体为玉米淀粉和石粉中的任一种或二者的混合物。

优选的，所述乳酸菌为植物乳杆菌LP(Lactobacillus plantarum)，已于2010年06月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC M 2010150；记载在申请人的另一项专利“一株可用于生物防腐保鲜的乳酸菌及其应用”(CN 101914475 B)中。

优选的，所述微生态制剂由产朊假丝酵母BLCC4-0021的发酵产物10份、硫酸亚铁10份、氯化钴0.06份、硫酸铜0.8份、VB₁₂0.3份、Vc 10份、柠檬酸10份、载体60份和乳酸菌复配而成；

复配后的微生态制剂中，乳酸菌的活菌数为5×10⁸cfu/g。

载体为玉米淀粉和石粉的混合物，淀粉和石粉的质量比为7:3。

本发明的有益效果：

(1)本发明利用紫外诱变的方法选育出一株新的产朊假丝酵母BLCC4-0021，该菌株具有高浓度无机铁耐受性，在进行高生物量发酵的同时还具有较高的转铁富铁能力，该菌株为高效富铁的酵母菌株，可以用来制备富铁酵母产品。

(2)本发明的菌株发酵生产富铁产品的原料来源广泛、操作简便、发酵周期短，而且酵母中有机铁含量高，其对于饲料添加方面，安全无毒，对预防仔猪贫血及促生长作用均极明显，且改善了母猪的繁殖性能，提高了母猪初乳中铁含量，通过给母猪补铁间接给仔猪补铁，既避免仔猪应激，又利于环境保护。

附图说明

图1：富铁产朊假丝酵母生长曲线；

图2：铁富集曲线；

图3：各试验组仔猪照片。

具体实施方式

结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

实施例1：菌株的紫外诱变筛选

1材料与方法

1.1试验设备：UV2000分光光度计、离心机、超净工作台、恒温培养箱、振荡培养箱等。

1.2试验材料

1.2.1菌种

产朊假丝酵母(Candida utilis)，山东宝来利来生物工程股份有限公司生物研究院保藏。

1.2.2试剂

硫酸亚铁、盐酸羟胺、邻二氮菲、醋酸钠，均是分析纯。

1.2.3培养基配方

斜面保存培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，KH₂PO₄2g，琼脂15g，蒸馏水1000mL。

种子培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，KH₂PO₄2g，蒸馏水1000mL。

液体发酵培养基：同种子培养基。

1.3方法

1.3.1菌株的紫外诱变

将待诱变菌株-产朊假丝酵母培养至对数生长期，5000r/min离心5min，去上清液，菌体用无菌水再次离心洗涤，将菌体加入到含有玻璃珠的15mL无菌生理盐水中振荡20min，然后用无菌生理盐水稀释至10⁸cfu/mL，将2mL稀释的菌液加至无菌平皿中，放入无菌磁力搅拌子，再将平皿放在操作台紫外灯下照射20s、40s、60s，照射后吸取菌体进行逐级稀释，并涂平板进行培养，挑取长得快、菌落大的进行斜面保存。

1.3.2菌株的培养方法

采用上述种子培养基先将各试验菌株活化后接入液体发酵培养基培养，液体发酵培养基中加入800μg/mL硫酸亚铁(以铁计)，28℃摇床发酵24h，测定生物量及酵母细胞中的铁含量。酵母细胞中铁含量的测定采用邻二氮菲比色法。

2结果与讨论

2.1菌株筛选

产朊假丝酵母经过紫外线诱变，再经过纯化和摇瓶发酵后，4株诱变菌株的生物量都比出发菌株(编号CK)有所提高，但菌株间富铁能力有一定差异，结果见表1。其中，C-21菌株酵母细胞中的铁含量及铁转化率均较出发菌株有明显提高。根据高铁含量、高富集率的原则，选择C-21号菌株为试验用菌株，命名为产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021。

表1 菌种筛选结果

2.2产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021的遗传稳定性

将产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021连续斜面传代10次，并将每一代分别接种一环于液体发酵培养基中，液体发酵培养基中加入800μg/mL硫酸亚铁(以铁计)，28℃摇床发酵24h，测定生物量及酵母细胞中的铁含量。同时以1代的产朊假丝酵母(Candidautilis)BLCC4-0021作对照，结果见表2。

表2 产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-00211～10代生物量及细胞中的铁含量

由表2可以看出，产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021经过斜面传代10次后，这10代的生物量和酵母细胞中铁含量均保持在较高水平，说明该菌株是一株非常理想的富铁酵母产品生产用菌株。

将上述获得的产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021于2015年10月16日保藏于位于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2015611。

实施例2：菌株发酵条件的优化

1材料与方法

1.1材料

菌种：经紫外诱变筛选得到的产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021。

试剂：硫酸亚铁、硝酸铁、三氯化铁、硫酸铁、硫酸铁铵、盐酸羟胺、邻二氮菲、醋酸钠、硝酸、高氯酸，均是分析纯。

液体发酵培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，KH₂PO₄2g，蒸馏水1000mL。

1.2方法

比较不同铁源、接种量、培养时间、发酵初始pH值、不同加铁时间、通气量对富铁酵母生物量及铁含量的影响，确定合适的发酵条件。

1.2.1不同铁源对比试验

在液体发酵培养基中分别添加5种不同的铁源，即硫酸亚铁、硝酸铁、三氯化铁、硫酸铁、硫酸铁铵，使其铁离子浓度为800μg/mL，培养基初始pH值5.0，121℃灭菌30min，当温度降至28℃接种，接种量为4％，每500mL三角瓶装液量为50mL，于28℃、200rpm摇床培养24h结束。

1.2.2接种量的确定

选取温度28℃，培养基中的Fe²⁺浓度800μg/mL，摇床转速200rpm，培养时间24h，做不同接种量的单因素试验。

1.2.3不同培养温度试验

在培养基中的Fe²⁺浓度800μg/mL，其他培养条件相同的条件下，分别在23℃、28℃、30℃、32℃下培养该酵母菌24h，测定酵母生物量和酵母细胞内铁含量。

1.2.4通气量(装液量)试验

每500mL三角瓶装液量分别为25mL、50mL、75mL、100mL、125mL，培养基中的Fe²⁺浓度为800μg/mL，初始pH值为5.0，接种量为2％，培养24h，测定酵母生物量及酵母细胞中铁的含量。

1.2.5不同加铁时间的影响

在其他条件相同的情况下，分别在发酵0h、18h、24h往培养基中加入硫酸亚铁至浓度为800μg/mL，培养28h后测定酵母生物量及酵母细胞中铁的含量。

1.2.6发酵培养基初始pH的确定

采用上述液体发酵培养基，加入硫酸亚铁，Fe²⁺浓度为800μg/mL，初始pH值分别调为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，每500mL三角瓶装液量在50mL，接种量为2％，培养24h，测定其生物量和酵母细胞内的铁含量。

2结果与讨论

2.1产朊假丝酵母对不同铁源的转化结果

产朊假丝酵母对不同铁源的转化结果见表3。

表3 产朊假丝酵母对不同铁源的转化结果

由表3可见，产朊假丝酵母对不同铁源的转化能力有很大的不同，而以硫酸亚铁的铁含量最高，故试验确定硫酸亚铁作为酵母富铁用铁源。

2.2接种量对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果

接种量对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果见表4.

表4 接种量对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响

从表4可见，接种量对铁酵母的生物量和酵母细胞中的铁含量有一定影响，生物量以接种量6％最高，而酵母细胞内铁含量以接种量2％最高，经比较各组数值后确定其最适接种量为2％。

2.3培养温度对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果

培养温度对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果见表5。

表5 培养温度对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响

由表5可见，发酵温度对富铁酵母细胞内铁含量有较大影响。产朊假丝酵母在23℃发酵时，酵母细胞内铁含量最高，在28℃发酵时生物量最高，故可以将发酵温度控制在23℃～28℃。2.4通气量对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果

本试验利用不同的装液量模拟溶解氧条件的影响。通气量对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞内铁含量的影响结果见表6。

表6 通气量对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响

由表6知，在500mL三角瓶中，装液量大(低溶氧)有利于菌株对铁的吸收，而装液量小(高溶氧)对菌株生物量的提高比较明显。综上，在500mL三角瓶中，装液量在50～75mL时酵母细胞中铁含量较高。

2.5不同加铁时间对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果

不同加铁时间对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响见表7。

表7 不同加铁时间对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响

由表7知，不同加铁时间对酵母细胞中的铁含量影响很大。产朊假丝酵母的生物量随加铁时间的延迟略有增加，但酵母细胞中的铁含量随加铁时间的延迟而大大降低，故在发酵初始时加铁为宜。

2.6发酵培养基初始pH对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果

发酵培养基初始pH对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果见表8。

表8 发酵培养基初始pH对产朊假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响。

由表8可见，初始pH对产朊假丝酵母的生长和富铁能力有较大影响。当初始pH 5.0时生物量较高，其细胞内铁含量最高。因此，发酵初始pH应控制在5.0左右为宜。

3小结

产朊假丝酵母菌株BLCC4-0021具有较好的富集铁与转化铁的能力，其生产的富铁酵母可作为食品强化剂和饲料添加剂的铁源，在工业化生产上具有一定的开发和应用价值。经对其发酵条件优化试验筛选出其适宜发酵条件为500mL三角瓶装量50～75mL，发酵温度23～28℃，接种量为2％，发酵培养基最适初始pH为5.0，发酵用铁源为硫酸亚铁。利用产朊假丝酵母制备富铁酵母的条件初步优化结果为发酵罐大生产奠定了基础。

实施例3：产朊假丝酵母对铁的耐受性

1材料与方法

1.1材料

菌种：经紫外诱变筛选得到的产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021。

试剂：硫酸亚铁、盐酸羟胺、邻二氮菲、醋酸钠、硝酸、高氯酸，均是分析纯。

液体发酵培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，KH₂PO₄2g，蒸馏水1000mL。

1.2方法

在液体发酵培养基中添加不同浓度的硫酸亚铁，使其Fe²⁺浓度分别为0μg/mL、400μg/mL、800μg/mL、1200μg/mL、1600μg/mL、2000μg/mL，于30℃、200rpm摇床培养24h结束。

2结果

产朊假丝酵母对铁的耐受性结果见表9。

表9 产朊假丝酵母对铁的耐受性结果

从表9各浓度组的酵母生物量可以看出，随着培养基中Fe²⁺浓度的增加，酵母细胞中的铁含量逐渐上升，但是酵母细胞生物量及铁的转化率并没有呈现递增现象。在Fe²⁺浓度0～800μg/mL范围内，随着Fe²⁺浓度的增加，酵母生物量并没有呈下降趋势，说明在该浓度范围内的铁离子并不影响酵母细胞的生长；Fe²⁺浓度从1200μg/mL开始，酵母生物量随Fe²⁺浓度增加而迅速减少，说明高浓度的Fe²⁺对酵母细胞的生长有明显的抑制作用，而铁的转化率则随着培养基中Fe²⁺浓度的增加而呈下降趋势。从富铁酵母产品工业生产的角度综合考虑，培养基中的Fe²⁺添加量以400μg/mL较优。

实施例4小型发酵罐发酵试验

1仪器设备

实验室7L机械搅拌发酵罐、电热恒温摇床、离心机、分光光度计、电热板、通风橱。

2材料与方法

2.1材料

菌种：紫外诱变得到的产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021。

液体发酵培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，KH₂PO₄2g，蒸馏水1000mL。2.2方法

采用筛选出的产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021，在实验室7升机械搅拌发酵罐中进行发酵。发酵罐装量为5L，采用上述液体发酵培养基，发酵温度28℃，2％接种量，发酵培养基初始pH为5.0，培养基中加入Fe²⁺浓度400μg/mL的硫酸亚铁。试验中每2h取样一次，测定生物量和酵母细胞中的铁含量(表10)，绘制富铁酵母生长曲线(图1)及铁富集曲线(图2)。

表10 产朊假丝酵母小罐发酵数据

由表10、图1和图2可以看出，发酵罐生产富铁酵母，其生物量和酵母细胞中的铁含量在24h达到最大，为14.53g/L和24976μg/g，铁的富集量达到36290μg/100mL，发酵时间以24h左右为宜。

综上，产朊假丝酵母(Candida utilis)BLCC4-0021制备富铁酵母产品的生产工艺为：

实施例5产朊假丝酵母在预防保育猪缺铁性贫血上的应用

1材料与方法

1.1材料

产朊假丝酵母BLCC4-0021、硫酸亚铁、氯化钴、维生素B₁₂、硫酸铜、维生素C、柠檬酸、植物乳杆菌LP、玉米淀粉及石粉等。维生素C购自上海易蒙斯化工科技有限公司，其他成分均为山东宝来利来生物工程股份有限公司提供。

试验动物：妊娠母猪由山东宝来利来巴夫巴夫农业科技有限公司提供。

其它：血清铁、总铁结合力、铁蛋白、转铁蛋白测定试剂盒。

1.2方法

1.2.1预防保育猪缺铁性贫血的微生态制剂

产品A：产朊假丝酵母BLCC4-0021的发酵产物(富铁酵母)20份，氯化钴0.06份，硫酸铜0.8份，VB₁₂0.3份，Vc 10份，柠檬酸10份，植物乳杆菌LP 5×10⁸cfu/g，载体60份；载体为玉米淀粉和石粉的混合物，淀粉和石粉的质量比为7:3。

产品B：产朊假丝酵母BLCC4-0021的发酵产物(富铁酵母)10份，硫酸亚铁10份，氯化钴0.06份，硫酸铜0.8份，VB₁₂0.3份，Vc 10份，柠檬酸10份，植物乳杆菌LP 5×10⁸cfu/g，载体60份；载体为玉米淀粉和石粉的混合物，淀粉和石粉的质量比为7:3。

产品C：硫酸亚铁20份，氯化钴0.06份，硫酸铜0.8份，VB₁₂0.3份，Vc 10份，柠檬酸10份，植物乳杆菌LP 5×10⁸cfu/g，载体60份；载体为玉米淀粉和石粉的混合物，淀粉和石粉的质量比为7:3。

1.2.2试验设计

选择品种、分娩日期、胎次相近的黑猪和白猪20头(妊娠后第12周的母猪)，随机分为4组，每组5个重复，分别饲喂不同饲粮(如表11)。比较添加补铁产品A、B、C后对母猪及仔猪生长性能和体内铁贮的影响。正式试验期2个月。

表11 复合补铁微生态制剂对仔猪缺铁性贫血的影响试验分组

妊娠母猪采用自配料，预混料使用的是六和的SB54粉料，基础饲料配方为(％，W/W)：玉米63，豆粕13，麸皮20，预混料4。母猪进行限量饲喂，自由饮水，每天早晚各喂2次。试验母猪的饲养管理与免疫程序按正常操作规程进行。

本饲养试验在山东宝来利来巴夫巴夫农业科技有限公司宁阳猪场进行。

1.2.3仔猪表观现象的观察

观察出生仔猪的脐带血色和血量、仔猪初生及哺乳期的皮毛色泽及精神状态。

1.2.4样本采集及检测方法

①生产性能测定

准确记录母猪产活仔数、死胎数、仔猪平均出生个体重、28日龄仔猪头数及均重等。于产后28d对仔猪进行称重，计算平均日增重。

②母猪初乳中铁含量的测定

在分娩当天采集母猪的乳汁(初乳)。分别从前、中、后3个乳头采集乳样后混合，每头采集10mL，样品采集后-20℃保存。采用试剂盒测定初乳中铁、铁蛋白(SF)、转铁蛋白(SFI)、总铁结合力(TIBC)的含量。

③血常规指标的测定

采集母猪分娩当天和仔猪28日龄时的血液。于母猪分娩当天空腹绑定采血及仔猪出生28日龄时固定采血。每头母猪耳缘静脉或耳根部静脉采血2mL，每窝仔猪选取3头仔猪，固定后，与前腔静脉采血2mL。采血后立即置于血浆抗凝管中保存，及时送至山东农业大学测定血红蛋白(Hb)、红细胞数(RBC)。

④血清学指标的测定

采集母猪分娩当天和仔猪28日龄时的血液。于母猪分娩当天空腹绑定采血及仔猪出生28日龄时固定采血。每头母猪耳缘静脉或耳根部静脉采血10mL，每窝仔猪选取3头仔猪，固定后，与前腔静脉采血2mL。血液静置15min，采用离心机进行(4000r/min)离心10min，血清分装于EP管中，于-20℃冷冻保存。采用试剂盒测定血红蛋白(Hb)、红细胞数(RBC)、血清铁、血清总铁结合力(TIBC)、血清铁蛋白(SF)、血清转铁蛋白(SFI)的含量。

2结果与讨论

2.1各试验组仔猪表观现象

由图3观察到，与对照组相比，3个试验组仔猪脐带血管丰富、血量充足、血色鲜红，皮肤红润、毛皮光滑有光泽，食欲增加，生长发育较快，且出生仔猪腹泻情况明显改善，即抵抗外界各种不良刺激特别是低温刺激的能力强。

2.2在母猪饲粮中添加不同的铁源对母猪繁殖性能及仔猪生长性能的影响

表12 在母猪饲粮中添加不同的铁源对母猪繁殖性能及仔猪生长性能的影响

由表12可以看出，在母猪饲粮中添加不同的铁源对新生窝产活仔数、28日龄仔猪均重、28日龄日增重有一定的影响，试验组A、B的28日龄断奶均重以及日增重均显著高于对照组CK，分别高出对照组7.13％、14.39％和16.13％、14.84％。与试验组C相比，试验组A和B也有明显的提高。

2.3不同铁源对仔猪体内铁贮的影响

表13 在母猪饲粮中添加不同铁源对仔猪体内铁贮的影响结果

由表13可以看出，血清铁的含量三个试验组基本上都高于对照组，且试验组A、B、C组分别比对照组提高了66.7％、24.1％、23.87％；SF、SFI的含量与对照组差异不显著；TIBC的含量均低于对照组，综合来看，试验组A、B的效果明显优于CK组。

2.4不同铁源对母猪体内铁贮的影响

表14 在母猪饲粮中添加不同铁源对母猪体内铁贮的影响结果

由表14可以看出，母猪饲粮中添加不同的铁源，试验组A、B、C初乳中的铁含量明显高于对照组CK，分别比对照组CK提高了49.25％、42.75％和22.58％；试验组A、B初乳中铁蛋白SF的含量分别比对照组提高了53.82％、87.90％，且3个试验组初乳中的转铁蛋白SFI的含量也均高于对照组。

2.5不同铁源对母猪体内血红蛋白和红细胞数的影响

表15 在母猪饲粮中添加不同铁源对母猪体内血红蛋白和红细胞数的影响

由表15可以看出，在母猪饲粮中添加不同的铁源，试验组A、B母猪体内红细胞数和血红蛋白分别比对照组提高了15.30％、21.12％和38.21％、34.33％。

3小结

妊娠母猪基础日粮中添加不同的补铁试验产品，均可不同程度提高母猪及仔猪生长性能和体内铁贮状况。特别是在基础日粮中添加富铁酵母微生态产品后，可以明显改善母猪繁殖性能和仔猪生长性能，提高仔猪体内铁贮状况，显著提高母猪血红蛋白、红细胞数和初乳铁，性能优于添加硫酸亚铁产品。表明我们选育的这株富铁酵母菌株在预防保育猪缺铁性贫血方面性能优异，应用前景广阔。综合考虑生产性能及产品的生产成本，我们选择将产品B作为预防保育猪缺铁性贫血的微生态制剂。

该预防保育猪缺铁性贫血的微生态制剂的主要分成为：产朊假丝酵母发酵产物(W/W)、硫酸亚铁、氯化钴、硫酸铜、VB₁₂、Vc、柠檬酸、植物乳杆菌LP等；载体为玉米淀粉和石粉的混合物，淀粉和石粉的质量比为7:3。本发明中该产品为粉末状，应用时将该产品按1‰～1.5‰比例添加进母猪饲料中，并充分混合均匀。从母猪妊娠14周开始使用，一直到仔猪断奶结束，使用周期为60d。

Claims (1)

1.一种预防保育猪缺铁性贫血的微生态制剂，其特征在于，该微生态制剂由产朊假丝酵母BLCC4-0021的发酵产物10份、硫酸亚铁10份、氯化钴0.06份、硫酸铜0.8份、VB₁₂ 0.3份、Vc 10份、柠檬酸10份、载体60份和乳酸菌复配而成；

所述产朊假丝酵母BLCC4-0021，已于2015年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 2015611；

所述乳酸菌为植物乳杆菌LP(Lactobacillus plantarum)，已于2010年06月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC M 2010150；

复配后的微生态制剂中，乳酸菌的活菌数为5×10⁸cfu/g；

所述载体为玉米淀粉和石粉的混合物，淀粉和石粉的质量比为7:3。