CN103598483B

CN103598483B - 一种降低仔猪应激的微生物饲料添加剂及其制备方法

Info

Publication number: CN103598483B
Application number: CN201310601030.3A
Authority: CN
Inventors: 江瀚; 张玉辉
Original assignee: Jiang Han Biotechnology (shanghai) Co Ltd
Current assignee: Jiang Han Biotechnology (shanghai) Co Ltd
Priority date: 2013-11-22
Filing date: 2013-11-22
Publication date: 2016-04-13
Anticipated expiration: 2033-11-22
Also published as: CN103598483A

Abstract

本发明公开了一种降低仔猪应激的微生物饲料添加剂及其制备方法，具体由枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌与培养基、无菌水等原料进行发酵，然后将发酵液经过喷雾干燥与保护剂混合得到成品。本发明所述的制备方法具有生产制备简单，原料易得，生产成本低的特点；本发明所述的添加剂可以改善早期断奶仔猪的抗氧化功能，提高仔猪肝细胞的抗氧化能力，降低早期断奶及转群的仔猪应激反应，还能减少肠道呼吸道疾病，降低早期断奶仔猪的腹泻率，从而改善增加早期断奶仔猪日增重，改善饲料转化效率，综合提高仔猪抗应激能力。

Description

一种降低仔猪应激的微生物饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种微生物饲料添加剂，特别涉及一种可降低仔猪应激的微生物饲料添加剂及其制备方法。

背景技术

初生仔猪具有生长发育快、体温调节能力差、免疫力差、消化器官不发达、消化酶不健全、胃酸分泌不足等生理特点。在目前集约化养猪生产中，仔猪早期断奶是猪养殖中的关键技术之一。仔猪早期断奶能提高母猪的繁殖率，减少疾病由母体向仔猪的传播，并能提高生长期的生产性能和胴体品质。

目前国外养猪业发达国家已开始推广应用14日龄早期隔离断奶技术，以控制、净化传染病。早期断奶的仔猪的消化能力未健全，加上环境的改变和病原微生物等多种因素的影响，会引起仔猪的应激反应，应激是机体对各种非常刺激产生的全身非特异性应答反应的总和。应激时，仔猪的健康会受到一定的影响，常表现为不安、食欲不振、抗病力下降、发病率增加，甚至造成死亡，给养猪业造成了重大的损失。

早期断奶仔猪的应激反应称为“仔猪早期断奶综合征”，早期仔猪断奶应激比正常断奶仔猪应激更强烈，除了一般的症状外，还会导致免疫力和抵抗力急剧下降，使仔猪容易感染传染病和寄生虫病。

专利CN102987169A公开了一种断奶仔猪核苷酸饲料添加剂，所述的核苷酸包括腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP，各成份之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸＝0.8-1.3：0.3-0.8：1.1-1.5：0.7-1.4。本发明还公开了上述饲料添加剂的制备方法和应用。该发明通过加入核苷酸作为营养剂以缓解仔猪断奶的应激反应，但是该反应加入的核苷酸只能作为营养补充剂，无法从根本上减少仔猪应激反应的问题的出现。

专利CN103355545A公开了一种发酵型植物性断奶仔猪饲料添加剂，由组分A、组分B和组分C相互混合配置而成，其中所述的组分A是由辣木叶，杜仲，黄芪，党参，刺五加，金银花，甘草和蒲公英粉碎并发酵后制作而成；所述的组分B是由马齿苋、山楂和松针粉粉碎后混合配置而成；所述的组分C是由牛至草提取物和芦荟多糖混合配制而成。该发明使用了多种植物混合进行发酵之后加入到仔猪的饲料中，对于14日龄早期隔离断奶的仔猪而言，过多的混杂添加剂，可能会使仔猪的消化负担加重。

因此研发一种能降低14日龄早期隔离断奶仔猪应激反应的安全、有效、易制得的饲料添加剂是该领域技术人员亟待解决的新课题之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种增加仔猪抗应激能力，能显著提高仔猪健康的微生物饲料添加剂及制作方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种降低仔猪应激的微生物饲料添加剂的制备方法，具体步骤为：

步骤1，制备pH值为5.0-7.0的培养基；

步骤2，将菌种接种于步骤1中得到的培养基中，进行培养，当活菌总数达到25亿/ml浓度时得到复合菌液；

步骤3，将复合菌液干燥得菌粉，与保护剂混合，得到的成品中总活菌大于等于2×10¹⁰cfu/ml。

上述的步骤1中所述的培养基包括糖蜜、玉米淀粉、胰蛋白胨、豆粕、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾中至少三种的混合物以及余量的水。

上述的步骤1中所述的培养基中包含的组合物混合比例关系优选为：糖蜜2-5.5wt％、玉米淀粉1-4wt％、胰蛋白胨0.5-1wt％、豆粕0.5-2.5wt％、氯化钠0.1-0.3wt％、硫酸镁0.01-0.03wt％和磷酸二氢钾0.2-0.8wt％、用余量的水溶解制成。

上述的步骤1中所述的pH值优选为5.5-6.5，更优选为6.0。

上述的步骤1中的培养基在接种菌种前还包括进行灭菌处理，其中灭菌处理的温度范围优选为110-140℃，更优选为115℃-130℃，灭菌的时间优选为15-50min，更优选为15-30min。

上述的步骤1中培养基在接种菌种前还包括通气处理，其中通气的体积比优选为1：40，更优选为1：20。

上述的步骤2中所述的菌种的包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌或酿酒酵母菌中的至少两种的混合物。

上述的步骤2中所述的枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)优选为保藏编号ACCCNo.10619的菌种；植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)优选为保藏编号ACCCNo.11118的菌种；酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)优选为保藏编号ACCCNo.20065的菌种。

上述的步骤2中所述菌种的混合重量比例优选为枯草芽胞杆菌：植物乳杆菌：酿酒酵母＝(10-30)：(35-65)：(5-40)，更优选为枯草芽胞杆菌：植物乳杆菌：酿酒酵母＝(15-25)：(40-60)：(10-35)。

上述的步骤2中菌种与步骤1中得到的培养基按重量比例进行接种，其中菌种与培养基的混合重量比例优选为(2-20)：100，更优选为(5-10)：100。

上述的步骤2中菌种接种于培养基后培养的时间优选为12-60h，更优24-48h，最优选为36h。

上述的步骤2中菌种接种于培养基后培养的温度优选为20-35℃，更优选为25-32℃，最优选为30℃。

上述的步骤3中所述的保护剂包括葡萄糖、玉米淀粉，其中，葡萄糖与玉米淀粉混合重量比例优选为(30-100)：1，更优选为(50-100)：1。

上述的步骤3中所述的菌粉与保护剂的混合重量比例优选为(1-30)：1，更优选为(5-20)：1。混合后包装得到微生物制剂成品。

上述的步骤3中所述的干燥优选为喷雾干燥或冷冻干燥中的一种。

本发明的第二方面提供了一种降低仔猪应激的微生物饲料添加剂，其中所述的添加剂包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌或酿酒酵母菌中的至少两种的混合物，其混合重量比例优选为枯草芽胞杆菌：植物乳杆菌：酿酒酵母＝(10-30)：(35-65)：(5-40)，更优选为枯草芽胞杆菌：植物乳杆菌：酿酒酵母＝(15-25)：(40-60)：(10-35)。

本发明的第三方面提供了一种仔猪饲料，包括本发明第二个方面所述的任意一种饲料添加剂。

本发明第三个方面的一种优选实施例中，在所述仔猪饲料中，所述饲料添加剂重量比例为0.01-10％。

上述的饲料可以有效的降低仔猪，尤其是14日龄早期隔离断奶仔猪的应激反应。

使用微生物进行抗应激反应的原理是，微生物可以实现生物夺氧，从而促进有益厌氧微生物的生长繁殖，维持肠道生态平衡。加入微生物添加剂可以促使机体产生抗菌活性物质，增强免疫功能，提高仔猪的抗应激能力；有益菌促进仔猪肠道发育，增强消化酶的活性，提高采食量，提高日增重，降低料肉比。另外，有益微生物在肠道内合成维生素、氨基酸等多种营养物质，可以明显改善仔猪的外观，突显品种特征。

本发明所述的经由特定优化的有益菌发酵后，可以改善仔猪胃肠道的微生态环境，提高动物对饲料营养物质的消化和利用效率,对断奶仔猪的生长和饲料利用均有良好的促进作用。本发明可以减少仔猪血清蛋白含量，有利于提高仔猪对蛋白质和氨基酸的利用，有利于饲料氨基酸的平衡性吸收，使进入机体的各种氨基酸的组成与机体的需要更一致。有益菌进入肠道后可以增加仔猪小肠绒毛的高度和降低隐窝深度，有效清除应激产生的氧自由基，促进损伤组织细胞修复，刺激动物免疫系统，提高免疫力，减少发病率。

本发明所述的可降低仔猪应激的微生物饲料添加剂及其制备方法的有益效果或优点如下：

1、添加剂中含有大量的有益微生物，以及辅酶、SOD、金属硫蛋白等抗氧化物质，氨基酸、活性肽等生理代谢物质，能改善早期断奶仔猪抗氧化功能，提高仔猪肝细胞的抗氧化能力，降低断奶及转群的应激；

2、减少肠道呼吸道疾病，降低早期断奶仔猪腹泻率；

3、提高断奶仔猪的成活率和降低僵猪的比例；

4、增强早期断奶仔猪细胞免疫机能，提高早期断奶仔猪血液免疫球蛋白水平，增强仔猪的抵抗力；

5、可以有效提高仔猪对Zn、Cu的吸收利用率；

6、改善增加早期断奶仔猪日增重，改善饲料转化效率；

7、促进肠绒毛生长，建立稳定肠道系统；

8、生产制备简单，原料易得，生产成本低。

本发明还可以避免了抗生素产品的使用，同时也解决了早期断奶仔猪应激的问题，并能有效提高仔猪免疫功能，降低了发病率和死亡率，保障断奶仔猪的胃肠道健康，从而提高断奶仔猪的生产性能和养殖效益。

具体实施例

本发明中所述的应激反应，亦即“全身适应性综合症”的发生过程。应激反应的机制是十分复杂的，仔猪作为一个有机整体，当处于应激状态下，通过神经-内分泌系统，会引起仔猪肾上腺皮质激素、糖皮质激素的分泌量也明显增加，导致体内的分泌混乱，从而影响仔猪其他器官的状态。例如，糖皮质激素的异常增加可能会导致胃粘液粉笔减少，从而降低胃粘膜屏障功能，而肾上腺皮质激素分泌量的增加，会使胃肠道血管收缩，血供应量大大减少，使胃肠道平滑肌舒张蠕动变缓，机体整体消化机能减弱，引起消化不良。

断奶应激的原因主要有心理因素、环境因素和营养因素，最主要的是营养因素。断奶使仔猪的食物由母乳突变为非乳固体饲料，这是一个强应激刺激，仔猪机体的反应是：各种消化酶的活性降低易发生消化和呼吸系统疫病；饲料产生的抗原会引起肠道的免疫反应，造成肠绒毛损伤、萎缩，导致仔猪发生营养性腹泻，进而可能继发病原性腹泻。

在仔猪正常的肠道微生态区中时已专性厌氧菌(如类杆菌、双双歧杆菌等)为主。断奶后，原本随母乳摄入的杆菌减少，固体饲料中有大量的其他细菌和真菌，在断奶应激和饲料改变的作用下，体内的细菌和真菌有可能大量繁殖，从而破坏了乳酸杆菌的主导地位，从而影响了仔猪健康。因此引入适量的微生物菌种，可以有效的帮助断奶仔猪肠道菌群能在短期内过渡并维持在平衡状态。

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但不作为本发明的限定。

实施例一

本实施例所选用的菌种包括：

枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)为保藏编号ACCCNo.10619的菌种；

植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)为保藏编号ACCCNo.11118的菌种；

酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)为保藏编号ACCCNo.20065的菌种。

降低仔猪应激的微生物饲料添加剂的制备方法包括下列步骤：

第一步、将糖蜜4wt％、玉米淀粉3wt％、胰蛋白胨0.5wt％、豆粕1wt％、氯化钠0.1wt％、硫酸镁0.02wt％和磷酸二氢钾0.8wt％、用余量的水溶解制成pH为6.0的菌种培养基；

第二步：将菌种培养基培养基在115℃灭菌25分钟，先通气，通气的体积比为1：20，将菌种按照6：100的重量比例接种到第一步得到的菌种培养基中，所述菌种由枯草芽胞杆菌20重量份、植物乳杆菌60重量份、以及酿酒酵母20重量份组成；在30℃培养36小时，当活菌总数达到25亿/ml浓度时得到复合菌液；

第三步：将复合菌液经过喷雾干燥得到菌粉与保护剂混合，保护剂为葡萄糖与玉米淀粉混合重量比例为50：1，菌粉与保护剂的混合重量比例为15：1，包装得到微生物制剂成品，成品中总活菌大于等于2×10¹⁰cfu/ml。

实施例二

本实施例所选用的菌种包括：

枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)为保藏编号ACCCNo.10619的菌种；

植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)为保藏编号ACCCNo.11118的菌种；

酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)为保藏编号ACCCNo.20065的菌种。

降低仔猪应激的微生物饲料添加剂的制作方法包括下列步骤：

第一步、将糖蜜3.5wt％、玉米淀粉2wt％、胰蛋白胨0.75wt％、豆粕1.5wt％、氯化钠0.15wt％、硫酸镁0.05wt％和磷酸二氢钾0.8wt％、用余量的水溶解制成pH为6.0的菌种培养基；

第二步：将菌种培养基在120℃灭菌20分钟，先通气，通气比1：20(体积比)，将菌种按照8：100的重量比例接种到第一步得到的菌种培养基中，所述菌种由枯草芽胞杆菌20重量份、植物乳杆菌60重量份、以及酿酒酵母30重量份组成；在30℃培养36小时，当活菌总数达到25亿/ml浓度时得到复合菌液；

第三步：将复合菌液经过喷雾干燥得到菌粉与保护剂混合，保护剂为葡萄糖与玉米淀粉混合重量比例为80：1，菌粉与保护剂的混合重量比例为6：1，包装得到微生物制剂成品，成品中总活菌大于等于2×10¹⁰cfu/ml。

实施例三

本实施例所选用的菌种包括：

枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)为保藏编号ACCCNo.10619的菌种；

植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)为保藏编号ACCCNo.11118的菌种；

酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)为保藏编号ACCCNo.20065的菌种。

第一步、将糖蜜5.0wt％、玉米淀粉3.0wt％、胰蛋白胨0.5wt％、豆粕2.0wt％、氯化钠0.1wt％、硫酸镁0.02wt％和磷酸二氢钾0.8wt％、用余量的水溶解制成pH为6.5的菌种培养基；

第二步：将菌种培养基在120℃灭菌20分钟，先通气，通气的体积比为1：15，将菌种按照10：100的重量比例接种到第一步得到的菌种培养基中，所述菌种由枯草芽胞杆菌15重量份、植物乳杆菌50重量份、以及酿酒酵母35重量份组成；在30℃培养36小时，当活菌总数达到25亿/ml浓度时得到复合菌液；

第三步：将复合菌液经过喷雾干燥得到菌粉与保护剂混合，保护剂为葡萄糖与玉米淀粉混合重量比例为90：1，菌粉与保护剂的混合重量比例为10：1，包装得到微生物制剂成品，成品中总活菌大于等于2×10¹⁰cfu/ml。

测试指标及方法：

选取健康的初生仔猪，实验仔猪采用半开放猪舍饲养，自然通风，仔猪自由采食和饮水。

实验组共分为四组，每组设4个重复，每个重复10头仔猪。对照组喂食基础饲料(不含任何抗生素或添加剂)实验组1为基础饲料+1％本发明实施例1中制得的微生物饲料添加剂，实验组2为基础饲料+1％本发明实施例2中制得的微生物饲料添加剂，实验组3为基础饲料+1％本发明实施例3中制得的微生物饲料添加剂。

实验一：生产性能与腹泻频率测定

实验方法：

1、生产性能测定

准确记录各圈的试验猪的喂料量和余料量，计算每头仔猪各个生长阶段及全期的平均采食量(ADFI)；试验猪每周开始及结束固定时间以重复为单位空腹称重，记录阶段起始体重和末体重，从而计算每头仔猪各个生长阶段及全期的平均日增重(ADG)；然后根据ADFI与ADG的值计算耗料的增重比(F/G)。

2、腹泻频率

每天分别对各个重复的试验组进行粪便检测并记录评分。对试验组中腹泻的猪体进行标记，其计算公式为：腹泻频率(％)＝[(重复的试验组中腹泻仔猪头数×发病天数)/(仔猪头数×试验天数)]×100。

实验结果：如表1所示。

表1，本发明实施例与空白对照组生产性能、腹泻频率对比表

实验结果分析：由表1可以看出，在日采食量(ADFI)相当的前提下，实施例1、实施例2和实施例3试验组中日增重量(ADG)与对照组相比分别提高了3.95％、7.56％和7.11％。而实施例1、实施例2和实施例3试验组中料肉比(F/G)降低4.02％、6.90％、7.47％。腹泻率比对照组降低了23％、53.8％、53.6％。

实验二：血清激素指标测定

实验方法：生长激素GH、三碘甲腺原氨酸(T₃)、甲状腺素(T₄)、皮质醇(Cor)的含量测定采用放射免疫法进行测定。

实验结果：如表2所示。

表2，本发明实施例与空白对照组血清激素指标对比表

实验结果分析：

表2可以看出,在生长激素水平上，实施例1、实施例2和实施例3试验组与对照组相比分别提高了7.25％、11.59％和20.29％，实施例3试验组与对照组差异极显著(P<0.01)。实施例1、实施例2和实施例3试验组中三碘甲腺原氨酸水平与对照组相比分别提高了8.24％、4.71％和32.94，实施例3试验组比对照组差异性极显著。各实验组甲状腺素水平比对照组有所提高，但差异不明显。在皮质酮方面实施例1、实施例2和实施例3试验组与对照组相比分别降低了9.93％、25.88/11.46％，其中实施例2试验组与对照之间差异极显著水平。

实验三：免疫指标

实验方法：每个重复试验组中取其中3头接近平均体重的仔猪屠宰，取血样进行离心，取血清，测定免疫指标。采用全自动生化分析仪测定血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、补体C4。

实验结果：如表3所示。

表3，本发明实施例与空白对照组免疫指标对比表

指标	对照组	实施例1	实施例2	实施例3
					IgG	2.53±0.10	2.67±0.11	2.73±0.07	2.74±0.12
IgM	0.19±0.01^a	0.19±0.04^a	0.20±0.04^ab	0.21±0.02^b
					补体C4	0.02±0.005	0.01±0.005	0.02±0.004	0.01±0.006

实验结果分析：由表3可以看出，实施例1、实施例2和实施例3试验组中的IgG水平与对照组相比几乎没有变化。在IgM水平方面，实施例2试验组与对照组、实施例1试验组相比，各提高了5.26％，差异不显著，而实施例3试验组较对照组和实施例1试验组各提高了10.53％，差异显著。而各组补体C4水平几乎没有变化，差异不显著。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对该实用进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims

1.一种降低仔猪应激的微生物饲料添加剂的制备方法，具体步骤包括：

步骤1，制备pH值为5.0-7.0的培养基，所述培养基中包含的组合物的混合比例关系为：糖蜜2-5.5wt％、玉米淀粉1-4wt％、胰蛋白胨0.5-1wt％、豆粕0.5-2.5wt％、氯化钠0.1-0.3wt％、硫酸镁0.01-0.03wt％和磷酸二氢钾0.2-0.8wt％、用余量的水溶解制成；

步骤2，将菌种接种于步骤1中得到的培养基中，进行培养，当活菌总数达到25亿/ml浓度时得到菌液；所述菌种为枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母菌的混合物；所述菌种的混合重量比例为：枯草芽胞杆菌：植物乳杆菌：酿酒酵母＝(15-25)：(40-60)：(10-35)；所述菌种与培养基的混合重量比例为(5-10)：100；

步骤3，将菌液干燥得菌粉，与保护剂混合，得到的成品中总活菌大于等于2×10¹⁰cfu/ml；所述干燥为喷雾干燥或冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤1中培养基在接种菌种前还包括灭菌处理，其中灭菌处理的温度范围为110-140℃，灭菌时间范围为15-50min。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤1中培养基在接种菌种前还包括通气处理，其中通气的体积比为1：40。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2中菌种接种于培养基后培养的时间范围为12-60h，培养温度范围为20-35℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤3中所述的保护剂包括葡萄糖、玉米淀粉，葡萄糖与玉米淀粉混合重量比例为(30-100)：1。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤3中所述的菌粉与保护剂的混合重量比例为(1-30)：1。

7.一种采用权利要求1-6中任意一项所述的方法制备的仔猪微生物饲料添加剂，其特征在于，包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌，其混合重量比例为枯草芽胞杆菌：植物乳杆菌：酿酒酵母＝(15-25)：(40-60)：(10-35)。