CN102669427B - 一种蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备与应用。本发明的蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂为蛹草拟青霉PaecilomycesmilitarisLiangsp.nov.的发酵产物。本发明还进一步公开了蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂为的制备与应用。本发明的饲料添加剂制备工艺流程简单，原料廉价易得，含有丰富的腺苷、虫草酸和多糖，虽然在配合饲料中添加量极微，但效果十分显著：它可以提高饲料的利用率；改善饲料的适口性；促进畜禽生长发育；改善饲料畜禽产品的品质；合理利用饲料资源，该饲料添加剂还能通过增强动物的免疫调节提高成活率，降低饲养成本。

Description

一种蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用。

背景技术

我国畜禽养殖生产中疫病较多，为了控制细菌感染，饲料添加剂中一般都加有大量抗菌药物；为了促进畜禽产品的生长育肥，饲养户在生产过程中经常添加激素类药物，违规滥用药物的现象极为普遍。畜禽产品中农药、兽药普遍严重超标，由此引发的一系列事件不胜枚举。另外兽药生产不规范现象也很严重，兽药制剂中不注明有效成分、随意扩大实用范围的现象极为普遍，容易导致错误用药、重复用药，增加药残量。

当畜禽食入食物中某些有毒物质，就会抑制某些畜禽的生产性能，严重的还会导致畜禽的发病或者是死亡。长期使用抗菌药易引起耐药性及二重感染，并加重动物体内的药物残留量，不利于疾病的治疗，同时还会影响某些疫苗的接种效果，使畜禽的生产性能下降，经济效益减少。由于我国的畜禽产品的兽药添加剂残留比较严重，已经给我国的养殖业发展带来巨大的经济损失。

同时为适应国际、国内市场对绿色食品的需求，充分利用我国丰富的植物与微生物资源，开发“绿色”饲料添加剂产业，促进安全动物生产系统的构建十分重要…。近年来，抗生素的应用已引起巨大的争议。鉴于抗生素的负面效应以及人们对食品安全的日益关注，一些有效克服抗生素弊端，具有促生长作用的替代品被开发出来，并在猪、禽、反刍动物饲料中得到了一定的应用。在饲料中添加酸化剂、益生素、寡糖、酶制剂、中草药等可提高动物日增重、降低料肉比，减少猪禽腹泻及应激的发生、增强机体免疫力等。

绿色饲料添加剂应具备以下特征：①能提高饲料利用率，促进动物的生长；能增强机体免疫功能，预防动物疾病；能提高动物生产性能和产品质量。②长期使用不产生毒副作用，动物产品中无药物和有害物质残留，对人类健康无危害，动物的排泄物对环境不构成潜在污染危害。③理化性质和生物活性稳定，能有效地进入胃肠道发挥作用，不影响饲料适口性。④与其他饲料添加剂合用，不发生或很少发生配伍禁忌，细菌对其不易产生抗药性。研究和开发绿色饲料添加剂，是振兴我国饲料工业、发展绿色养殖的需要，也是突破“绿色壁垒”、占领国际市场的需要。

蛹草拟青霉是一种名贵的虫生真菌，具有很高的药用价值。科研人员发现从天然蛹虫草分离获得的真菌发酵得到的蛹草拟青霉在有效成分、药理活性与临床作用等方面与冬虫夏草有很大的相似性。蛹草拟青霉中除了含有虫草多糖之外，还有氨基酸、微量元素、虫草酸和麦角甾醇、核苷类、维生素类等物质，具有广泛的药理活性，其活性涉及到了免疫系统、心脑血管系统、神经系统、呼吸系统、肝脏和肾脏功能等各方面。

在国内外市场上，尚未见到利用蛹草拟青霉做饲料添加剂的相关产品。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用。

首先，本发明公开了一种蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂，为蛹草拟青霉(Paecilomycesmilitaris Liang sp.nov.)的发酵产物。

所述蛹草拟青霉的发酵产物为将蛹草拟青霉菌株先斜面培养，再种子液培养，而后接种固体培养基发酵培养后采收获得的培养物。

所述固体培养基包括下列重量份的原料：

小麦        30～45；

玉米粉      5～10；

蚕蛹粉      0.5～5；

H₂O         45-60。

所述蛹草拟青霉为广布种。

本发明还进一步公开了所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，包括下列步骤：

a.斜面菌种制备：将蛹草拟青霉菌株接种到斜面培养基上，20～25℃下，培养10～15天；所述斜面培养基为PSA培养基或PDA培养基。

b.摇瓶种子液的制备：从斜面上刮取菌丝接种到PDB培养基或PSB培养基为基础的三角瓶液体培养基中，20～25℃下，140～160rpm，培养3～5天即可制得蛹草拟青霉摇瓶种子液；

c.发酵罐种子液的制备：将摇瓶种子液按5％-10％体积比例接种到以PDB培养基或PSB发酵罐培养基中，20～25℃下，搅拌速率140～160rpm，通气25vvm，培养3～5天即得蛹草拟青霉种子液；

d.采收培养物。

e.脱水干燥。采收后的鲜培养物采用冷冻干燥法或烘烤法(40～45℃)脱水干燥。

f.粉碎。将冷冻干燥、烘干的培养物，粉碎，后即得成品。

本发明的蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂可用于制备动物饲料或其他多组分的动物饲料添加剂。所述动物可以是猪、兔、肉鸡、蛋鸡、肉鸭、鹅、山羊、奶牛、肉牛以及水产动物。一般该添加剂在动物饲料中的添加量为动物饲料总重量的2％-6％。本发明的饲料添加剂的作用包括但不限于下述方面：增强食欲，加快饲料养分消化、吸收，消除畜禽挑食、厌食，明显提高日增重和饲料转化率。

本发明的蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂生产方法适合工业化生产，不受时间地点的限制，可根据市场的需求增加或缩减生产规模。本发明工艺简单、工艺稳定、易调控、成功率高；采用本发明方法生产投资少，占地少、无三废问题，适合大中型企业采用。其产品是一种功能性饲料添加剂，可广泛应用于猪、兔、肉鸡、蛋鸡、肉鸭、鹅、山羊、奶牛、肉牛以及水产动物。作用有但不限于下述方面：增强食欲，加快饲料养分消化、吸收，消除畜禽挑食、厌食，明显提高日增重和饲料转化率。

本发明方法生产的蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂具有独特的先进性：一、所用菌种为传统名贵中药蛹虫草，属卫生部公布的新资源食品名单，符合绿色饲料添加剂安全、有效的特征。应用于饲料添加剂目前尚无产品面市。二、饲料添加剂成品所用培养物包括固体培养的菌丝体和少量孢子、培养基基质，资源利用率最大，生产过程无污染，达到生产效益和社会效益最佳。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步描述，应理解实例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1：蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的生产

(1)斜面菌种制备：将土豆煮熟，过滤去渣后，加入蔗糖、定容，加入琼脂融化，分装进试管，在0.1Mpa压力下，121℃，灭菌0.5h，放气完毕，趁热摆放成斜面自然冷却。无菌条件下将蛹草拟青霉接到斜面试管，放入20℃培养箱，培养15天。

(2)摇瓶种子液的制备：先将土豆煮熟，过滤去渣后，加入蔗糖、定容、封口灭菌的过程。灭菌条件：在0.1Mpa压力下，121℃，灭菌0.5h。灭菌完毕，将培养基冷却，无菌条件下将斜面种孢子接进摇瓶培养基中，将接种的摇瓶置入摇床振荡培养。培养条件：140r/min，20℃℃，培养5天。

(3)发酵罐种子液的制备：将摇瓶种子液按5％体积比例接种到PSB发酵罐培养基中，20℃下，搅拌速率140rpm，通气25vvm，培养5天即得蝉拟青霉种子液；

(4)固体培养

a.固相培养基的制备(按重量份)：将洗净、浸泡吸水充足的小麦与玉米粉、蚕蛹粉和水充分混合。

小麦：30

玉米粉：10

蚕蛹粉：5

水：55

b.固相培养基分装。将充分混合的固相培养基按一定的质量装入培养容器，盖好盖子。

c.固相培养基灭菌。将装好固相培养基的培养容器放置灭菌锅内高压灭菌。灭菌条件：在110℃，灭菌1.5h。

d.栽培种的制作。装好固相培养基的培养容器灭菌后移置缓冲室内，冷却，将种子罐内种子液按5％接种量接到固体发酵培养基中。

e.发菌管理。将接了菌种的栽培容器移至培养室培养。发菌室温度控制为18℃～23℃，空气相对湿度60％～70％，菌丝体向固相培养基生长直至长满料面。

f.采收。静置封闭式培养15天，将培养物挖出。

g.脱水干燥。采收后的鲜培养物烘烤法(45℃)脱水干燥。

h.粉碎。将烘干的培养物，粉碎后即得成品。

实施例2：蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的生产

(1)斜面菌种制备：同实施例1。

(2)种子液的制备：同实施例1。

(3)固体培养

a.固相培养基的制备：将洗净、浸泡吸水充足的小麦与玉米粉、蚕蛹粉和水充分混合。

小麦：38

玉米粉：7.5

蚕蛹粉：3

水：51.5

b.固相培养基分装、灭菌、栽培种的制作、发菌管理、采收、脱水干燥及粉碎均同实施例1。

实施例3：蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的生产

(1)斜面菌种制备：同实施例1。

(2)种子液的制备：同实施例1。

(3)固体培养

a.固相培养基的制备：将洗净、浸泡吸水充足的小麦与玉米粉、蚕蛹粉和水充分混合。

小麦：45

玉米粉：5

蚕蛹粉：1

水：49

b.固相培养基分装、灭菌、栽培种的制作、发菌管理、采收、脱水干燥及粉碎均同实施例1。

实施例4蛹虫草饲料添加剂对肉鸡喂养试验

1材料与方法

1.1试验鸡选择及分组

选择2日肉鸡90只随机分成2组，每组30只，I组饲喂蛹虫草饲料添加剂，II组饲喂基础食料做对照组

1.2试试验动物日粮组成与营养

将实施例2制备的饲料添加剂按照2％的比例添加到基础日粮(粉碎的颗粒料)中并搅拌混匀，经测定变异系数小于8％，空白试验组仅喂养颗粒料粉碎的粉料。

1.3试验时间

试验期为35天。

1.4样品的采集

体重：3日龄在饲喂前称初生重。以后每周末称重一次，晨空腹时逐群称量每一组鸡的体重。

采食量：每天回收剩料，计算每周各组饲料消耗。

养殖期每组随机取肉鸡9只，每个重复3只，末羽下静脉采血，参照试剂盒方法分析血液生化指标。屠宰后，取肉样进行分析。

1.5测试指标及测试方法

日增重＝(期末重-期初重)/饲养周期

料肉比＝期末耗料总量/期末增重总量

2试验结果

2.1各组全期增重效果及料肉比

表1饲料添加剂对肉鸡生产性能的影响

表1结果可以看出，在整个养殖周期内试验组的肉鸡日增重明显。

肉鸡样本期末重与对照组相比，肉鸡活体重提高了9.24％。

从全期耗料量来看，试验组肉鸡的耗料量相对最低，料重比仅为1.81，与对照组相比，料重比降低了5.24％。

2.2各组肉鸡肌肉品质

表2各组肉鸡肌肉品质指标

肉鸡肌肉品质分析结果如表4示，结果表明，试验组对肉鸡的品质产生了一定影响。试验组的PH值与空白组相比有所提高；滴水损失比空白组降低明显，试验组的嫩度与空白组相比也有显著增加，经统计分析差异达显著水平(P＜0.05)。

如采用实施例1和3的饲料添加剂替换实施2的饲料添加剂，其效果与采用实施例2的饲料添加剂相比无显著差异。

结论：嫩度是满足人们口感的一个指标。而滴水损失跟肉的嫩度有很大的相关，滴水损失越低，肉质越嫩。以上研究表明，蛹虫草饲料添加剂可明显增加肉鸡体重，提高鸡肉的嫩度。

Claims (7)

1.一种蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂，为蛹草拟青霉Paecilomyces militaris Liang sp.nov.的发酵产物，所述蛹草拟青霉的发酵产物为将蛹草拟青霉菌株先斜面培养，再种子液培养，而后接种固体培养基发酵培养后采收获得的培养物，所述固体培养基包括下列重量份的原料： 

所述培养物包括固体培养的菌丝体、少量孢子和培养基基质。 

2.如权利要求1所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂，其特征在于，所述蛹草拟青霉为广布种。 

3.如权利要求1所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，包括下列步骤： 

a.斜面菌种制备：将蛹草拟青霉菌株接种到斜面培养基上，20～25℃下，培养10～15天； 

b.种子液的制备：从斜面上刮取菌丝接种到PDB培养基或PSB培养基中，20～25℃下，140～160rpm，培养3～5天即得蛹草拟青霉种子液； 

c.发酵罐种子液的制备：将摇瓶种子液按5%-10%体积比例接种到PDB培养基或PSB发酵罐培养基中，20～25℃下，搅拌速率140～160rpm，通气培养3～5天即得蛹草拟青 

霉种子液； 

d.将步骤c中制得的蛹草拟青霉种子液按重量百分比为5%～10%接入灭菌后的固相培养基中，在温度为18～23℃，湿度为50～90%的条件下，静置封闭式培养10～15天； 

e.采收培养物； 

f.脱水干燥； 

g.粉碎后即得成品。 

4.如权利要求3所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述蛹草拟青霉为广布种。 

5.如权利要求1-2任一权利要求所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂用于制备动物饲料的用途。 

6.如权利要求5所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的用途，其特征在于，所述动物饲料为猪、兔、肉鸡、蛋鸡、肉鸭、鹅、山羊、奶牛、肉牛或水产动物的饲料。 

7.如权利要求5所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂的用途，其特征在于，所述蛹草拟青霉发酵物饲料添加剂在动物饲料中的添加量为动物饲料总重量的2%-6%。