CN103039739A

CN103039739A - 虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用

Info

Publication number: CN103039739A
Application number: CN2012105567283A
Authority: CN
Inventors: 郑永标; 林岗; 黄建忠; 黄杨
Original assignee: Fujian Normal University
Current assignee: Fujian Normal University
Priority date: 2012-12-20
Filing date: 2012-12-20
Publication date: 2013-04-17

Abstract

本发明涉及一种虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，属于饲料技术领域。所述虫生真菌液体发酵菌丝体为中华被毛孢（Hirsutella sinensis）液体发酵菌丝体、古尼拟青霉（Paecilomyces gunnii）液体发酵菌丝体或蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris）液体发酵菌丝体。用以提高南美白对虾成活率、增重率和饲料利用率等生长指标及增强免疫力。本发明可提高南美白对虾的成活率、增重率和饲料利用率等生长指标，并提高免疫力。

Description

虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用

技术领域

本发明涉及一种虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，属于饲料技术领域。

背景技术

虫草，指麦角菌科真菌在多种鳞翅目昆虫蛹及幼虫的子座及幼虫尸体生长的复合体，目前已发现四百多种的虫草，如冬虫夏草、亚香棒虫草、凉山虫草、新疆虫草、分枝虫草、藿克虫草、蛹虫草等。天然虫草含有各种各样的生物活性物质含有丰富的虫草酸、不饱和脂肪酸、维生素B12、麦角甾醇、六碳糖醇、生物碱等。据实验研究表明，天然虫草具有调节免疫系统功能、抗肿瘤作用、抗疲劳、抗病毒、调节中枢神经系统功能等多种药用功效。天然野生虫草资源有限，由于过度挖掘，虫草生长的生态环境受到严重破坏。目前，完整的虫草人工栽培技术尚未成熟，使虫草资源的开发利用受到制约。近年来，利用工业发酵技术，将虫草菌进行液体或固体发酵培养，实验表明其发酵产物不但在食品和医药上有很好的应用价值，而且在畜禽养殖上也有应用前景。魏建忠等人（2005）用3株虫草无性型菌株（P2、P5、P6）分别进行固体和液体发酵培养，将得到的6种虫草菌丝体饲料添加剂（合肥迈可罗生物工程有限公司提供）进行饲喂试验，结果表明虫草添加剂对鸡体增重和饲料转化率有明显提高，其中用液体培养的P2和P5菌株浓度为0.2％时效果最佳，与对照组相比增重分别提高11.O4％、11.56％，差异显著。陈安徽等人（2007）将一种虫草无性型菌株P5深层液体发酵菌丝体作为饲料添加剂，在日粮中添加0.25%的虫草饲料添加剂不仅可显著提高肉仔鸡胸肌和腿肌中蛋白质和氨基酸的总含量，并且可显著提高肉仔鸡肌肉中人体必需氨基酸和风味氨基酸的含量，还可以显著降低胸肌和腿肌中粗脂肪的含量。刘惠莉等（2008）利用虫草激活强化免疫饲料添加剂对猪进行饲喂试验，试验结果表明虫草强化饲料添加剂具有免疫增强作用，与特异性疫苗联合免疫可提高机体对疫苗的免疫应答，产生免疫抗体水平高于未使用添加剂组，添加虫草强化饲料添加剂组口蹄疫免疫抗体水平显著高于对照组，而且抗体持续期较长，在1个月后，抗体水平仍非常理想，与对照比较，试验组获得更为理想的免疫效果。

对虾养殖是高度集约化的养殖模式，现有的饲料存在营养不均衡，抗生素滥用等问题，养殖病害严重，药物残留导致水产品质量安全问题。开发高效、无残留、无公害的对虾饲料添加剂成为对虾养殖业持续健康发展的迫切需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，以提高南美白对虾成活率、增重率和饲料利用率等生长指标及增强免疫力。

本发明提供的虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，所述虫生真菌液体发酵菌丝体为中华被毛孢（Hirsutella sinensis）液体发酵菌丝体、古尼拟青霉（Paecilomyces gunnii）液体发酵菌丝体或蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris）液体发酵菌丝体。

所述虫生真菌液体发酵菌丝体的制备如下：

1）中华被毛孢液体发酵菌丝体的制备：中华国被毛孢菌种活化后，接种于液体培养基中，于温度为17℃±3，进行摇床或发酵罐培养一定时间，收集菌丝体，干燥后制成干粉。

2）古尼拟青霉液体发酵菌丝体的制备：古尼拟青霉菌种活化后，接种于液体培养基，于温度为23℃－30℃，进行摇床或发酵罐培养一定时间，收集菌丝体，干燥后制成干粉。

3）蛹草拟青霉的液体发酵菌丝体的制备：蛹草拟青霉菌种活化后，接种于液体培养基，于温度为23℃－30℃，进行摇床或发酵罐培养一定时间，收集菌丝体，干燥后制成干粉。

所述液体培养基的配方：2000－300 g/L马铃薯浸汁，葡萄糖10－40 g/L，蛋白胨1－20 g/L，酵母膏0－10 g/L，水1L,121℃高温灭菌。

本发明提供了将上述3种虫生真菌液体发酵菌丝体干粉作为南美白对虾饲料添加剂的方法：添加量为基础对虾饲料的1－10 %，可提高南美白对虾的成活率、增重率和饲料利用率等生长指标，并提高免疫力。

具体实施方式

实施例１

3种虫生真菌液体发酵菌丝体干粉的制备：

1）中华被毛孢液体发酵菌丝体干粉的制备：中国被毛孢（Hirsutellasinensis）（冬虫夏草子囊孢子萌发及其无性型观察，贵州农业科学，2003，31(1):3-5.）菌种活化后，接种于装有150 mL液体培养基(配方：200 g/L马铃薯浸汁，葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L)的10瓶三角瓶中（250 mL）中，于温度为17℃，转速为170 rpm的恒温摇床培养24 d。离心收集菌丝体，于55℃烘干，制成菌丝体干粉。

2）古尼拟青霉液体发酵菌丝体干粉的制备：古尼拟青霉（Paecilomyces gunnii）(古尼拟青霉液体发酵液有机粗提物产量的研究，生物技术，2012，22(1)：88-89）菌种活化后，接种于装有150mL液体培养基（200 g/L马铃薯，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L）的10瓶三角瓶中（250 mL），于温度28 ℃, 转速230 rpm，摇瓶培养7 d，制备一级种子液。取5 mL一级种子液接种到装有150 mL液体培养基（200 g/L的马铃薯浸汁，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L）的35瓶三角瓶中（250 mL），于相同培养条件培养7d，制备二级种子液。将35瓶二级种子液接种到装有120 L液体培养基（200 g/L的马铃薯浸汁，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L）的发酵罐（200 L）中液体发酵培养，温度控制28±0.5 ℃。发酵前期（0-76 h）通气量为0.7 vvm，发酵后期（76-100 h）通气量0.53 vvm。发酵前期（0-76 h）搅拌速度为180 rpm，发酵后期（76-100 h）搅拌速度150 rpm。发酵培养100 h后，用管式离心机，进行菌液离心分离，菌丝体于55 ℃烘干，并制成菌丝体干粉。

3）蛹草拟青霉液体发酵菌丝体干粉的制备：将活化后的蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris）（蛹草拟青霉有机代谢产物的合成特点及生理作用，福建师范大学学报(自然科学版)，2012，28（4）：111－114）菌块在无菌条件下接种到装有150mL马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基(配方：200 g/L马铃薯浸汁，葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L)的20瓶三角瓶（250mL）中，然后将其放置摇床振荡培养，转速为230 r/min，28 ℃恒温培养5 d,制成种子液3 L。将3 L蛹草拟青霉种子液接种到50 L发酵罐，发酵罐装30 L马铃薯葡萄糖蛋白胨培养基（配方：200 g/L马铃薯的浸汁，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L)，28 ℃,通气量10-15 L/min，压力0.1 MPa下发酵培养3 d，管式离心机，进行菌液离心分离，菌丝体于55 ℃烘干，并制成菌丝体干粉。

实施例2

采用过滤循环水系统进行南美白对虾养殖实验，每个养殖水箱的规格为50×80 cm。设3个实验组和一个对照组，每组设3个重复(每个养殖水箱为1个重复)，投放100尾南美白对虾（已在大池生长30天、平均体重为0.23g左右）。3个实验组分别投喂添加5%中华被毛孢、古尼拟青霉和蛹草拟青霉液体发酵菌丝体干粉的基础饲料（由福建大昌生物科技实业有限公司提供，主要成分为粗蛋白41 %、粗脂肪5%、粗纤维4%、粗灰分16%），对照组投喂基础饲料。日投饵率增加10%，分上午和下午投喂2次。每天中午用过滤循环水机循环2-4 h，净化水质，每周换一半水桶内的水。实验期间水温在24.5－28.9 ℃之间，24 h充气。经过30天养殖，分别测定各组每个重复的对虾重量、体长、出肉率、成活率和饲料系数（表1）。结果表明，在基础饲料中添加5%中华被毛孢、古尼拟青霉和蛹草拟青霉液体发酵菌丝体干粉的实验组对虾各生长指标比对照组显著改善。饲料中添加中华被毛孢菌丝粉的实验组对虾的增长率、出肉率、成活率和饲料系数显著改善；饲料中添加古尼拟青霉菌丝粉的实验组对虾的增重率、增长率、成活率和饲料利用率显著提高；添加蛹草拟青霉菌丝粉的实验组对虾的增长率、出肉率和饲料利用率也显著提高。

表1 虫生真菌液体发酵菌丝体作为饲料添加剂对南美白对虾生长的影响

Figure 2012105567283100002DEST_PATH_IMAGE002

注：表中数据为三重复的平均值，同一行中具不同字母表示差异显著（p<0.05）

实施例3

选择健康、大小均匀的南美白对虾（已生长60天，平均体重为0.74 g左右），设3个实验组和一个对照组，每组设置3个重复，每组放虾100尾，分别养于50×80 cm水箱内。对照组投喂基础饲料（由福建大昌生物科技实业有限公司提供），实验组分别投喂在基础饲料中添加5%的中华被毛孢、古尼拟青霉和蛹草拟青霉液体发酵菌丝体干粉。日投饵率增加10 %，分上午和下午2次投喂。每天中午用过滤循环水机循环2-4 h，净化水质，每周换一半水桶内的水。实验期间水温24.5－28.9 ℃，24 h充气。饲养25 d后，测定各实验组和对照组对虾血清中的溶菌酶和酚氧化酶活性，肝胰腺的过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性以及肌肉中的丙二醛含量（表2），结果表明实验组对虾的非特异性免疫能力显著增强。

表2实验组与对照组对虾各器官组织的非特异性免疫指标比较

Figure 2012105567283100002DEST_PATH_IMAGE004

Claims

1.虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，其特征在于：所述虫生真菌液体发酵菌丝体为中华被毛孢（Hirsutella sinensis）液体发酵菌丝体、古尼拟青霉（Paecilomyces gunnii）液体发酵菌丝体或蛹草拟青霉（Paecilomyces militaris）液体发酵菌丝体。

2.根据权利要求1所述的虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，其特征在于，所述虫生真菌液体发酵菌丝体的制备如下：

1）中华被毛孢液体发酵菌丝体的制备：中华国被毛孢菌种活化后，接种于液体培养基中，于温度为17℃±3，进行摇床或发酵罐培养一定时间，收集菌丝体，干燥后制成干粉；

2）古尼拟青霉液体发酵菌丝体的制备：古尼拟青霉菌种活化后，接种于液体培养基，于温度为23℃－30℃，进行摇床或发酵罐培养一定时间，收集菌丝体，干燥后制成干粉；

3.根据权利要求1所述的虫生真菌液体发酵菌丝体作为对虾饲料添加剂的应用，其特征在于，所述液体培养基的配方：2000－300 g/L马铃薯浸汁，葡萄糖10－40 g/L，蛋白胨1－20 g/L，酵母膏0－10 g/L，水1L,121℃高温灭菌。